DETERMINAREA PATULINEI DIN SUCUL DE MERE, PRIN

CROMATOGRAFIE LICHIDA DE ÎNALTĂ PERFORMANŢĂ

|| !

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 PATULINA, MICOTOXINĂ CU RISC PENTRU SĂNĂTATEA CONSUMATORILOR

Micotoxinele sunt produşi metabolici ai fungilor, care sunt capabili să producă efecte
toxice acute sau cronice (cancerigene, mutagene, teratogene) asupra animalelor şi asupra
oamenilor.
r 
este o micotoxină produsă în special de mucegaiurile r
    "
r
   #

" r
    $ % " 
 
 $ 
"
cu efecte toxice asupra organismului uman şi animal.
r 
este stabilă, în special, în produsele procesate din mere: suc de mere, suc
concentrat de mere, nectar de mere, nectar de fructe (care are ca ingredient şi sucul de
mere), piure de mere, compot de mere etc.

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 Fermentaţia alcoolică distruge patulina şi, prin urmare, produsele fermentate,
cum sunt cidrul de mere şi cidrul de pere, nu conţin patulină.
Patulina a fost descoperită în produsele fermentate cărora li s-a adăugat suc de
mere contaminat cu patulină, după fermentare.
Patulina este relativ termostabilă, în mod special, la pH acid. Tratamentele la
temperaturi înalte (150mC) duc la o reducere cu 20 % a concentraţiei de patulină.
Procesarea termică nu este suficientă pentru a asigura obţinerea unui produs liber
de patulină.
Patulina apare în principal în fructele mucegăite. În anumite situaţii, dezoltarea în
interior a mucegaiurilor are drept cauze atacul insectelor sau altor invadări ale
ţesuturilor sănătoase, determinând apariţia patulinei în fruct, care la exterior apare
ca fiind neafectat.

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 Din punct de vedere chimic,  
este o furopiranonă, cu masa moleculară
154, stabilă în mediu acid, dar instabilă în mediu alcalin. Se prezintă sub formă de
cristale incolore, rombiforme sau prismatice, cu punct de topire de 110,5mC, cu
maxim de absorţie la 276 nm, în soluţie alcoolică

FORMULA STRUCTURALĂ A PATULINEI

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Pentru evaluarea riscurilor pe care le prezintă patulina asupra organismului, au

fost întreprinse studii, pe o perioadă de peste cincizeci de ani.

    determinate de consumul unor produse contaminate cu patulină,

pot fi: agitaţie, convulsii, dispnee, congestie pulmonară, edem, ulceraţii, hemoragie
intestinală, degenerarea celulelor epiteliale, inflamaţie gastrointestinală, stare de
vomă.
Consumul frecvent al unor produse contaminate cu patulină, peste limitele maxim
admise, poate determina în timp, următoarele efecte asupra organismului uman:
- %
  # "
-&   # "
- 


$"
-  
"
-
 
'

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Limitele maxim admise pentru conţinutul în patulină al unor alimente

(Ordin nr. 530/20076
Nr. Produs Nivel maxim al
crt. patulinei (ppb)
1. Suc de fructe şi nectar de fructe, în special suc de mere şi sucurile
de fructe utilizate ca ingrediente pentru alte băuturi 50
2. Suc de fructe concentrat după reconstituire, conform 50
specificaţiilor producătorului
3. Băuturi spirtoase, cidru şi alte băuturi fermentate derivate din 50
mere sau conţinând suc de mere
4. Produse solide din mere, inclusiv compot de mere şi piure de mere, 25
destinate consumului direct
5. Suc de mere şi produse solide din mere, inclusiv compot de mere şi 10
piure de mere pentru sugari şi copii de vârstă mică
Alte alimente pentru copii altele decât cele pe bază de cereale
procesate

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Specialiştii din cadrul 

    

  
 , au elaborat şi validat
o metodă de determinare a patulinei din sucul de mere, prin lichid cromatografie de
înaltă performanţă.

r
     : Extracţia în acetonitril a patulinei din proba de analizat şi
purificarea extractului obţinut, utilizând coloane C.U. Patulin (MycoSep®228).
Eluatul obţinut este evaporat până la sec şi reconstituit. Patulina este separată pe
coloană cromatografică C18 - )-
   (cromatograf lichide de înaltă
performanţă Thermo - Finnigan), eluată în fază mobilă şi detectată la o lungime de
undă de 276 nm, utilizând un detector UV-VIS cu şir de diode ,,DIODE ARRAY´.

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

r


 


   

 
  

r 

 




 










r
 










 
 
   


   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Metoda de prelevare a probelor pentru controlul oficial al nivelurilor de patulină în

anumite alimente este prezentată în Anexa IV a  

  $
 . 



/  
   $

 / 
 

/ 
 
   

 0 .

 0" aprobată prin Ordinul 530/2007.

r    0 trebuie să fie reprezentativă pentru lotul supus analizei şi trebuie să

cântărească cel puţin 1 kg.

r  
  trebuie să aibă masă similară. Masa unei   
 
trebuie să fie de cel puţin 100 grame, rezultând o  0   0 de cel puţin 1 kg.

Abaterea de la această regulă trebuie să fie consemnată în procesul verbal de

prelevareM

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

|



 # /  
 

, se realizează în acetonitril

Probe de suc de mere Omogenizare suc de mere cu solvent

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

ã'r %   #   

0 se realizează utilizănd coloane
C.U. Patulin (MycoSep®228).

Coloanele C.U. Patulin conţin umplutură, formată din: cărbune, celită, răşini
schimbătoare de ioni. La trecerea prin această coloană, patulina este separată de
alţi compuşi care o însoţesc în extractM

Coloane C.U. Patulin (MycoSep®228) Extract de patulină purificat

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

[ $    #   

0 %   „

Se realizează cu ajutorul unui bloc de încălzire cu sistem de concentrare a probei în

atmosferă de azot.

Evaporarea extractului de patulină purificat

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Ñ /  
 
    %  & 1
0
% 
/0
S-a utilizat un cromatograf Thermo Finnigan cu detector UV-VIS cu şir de diode
,,DIODE ARRAY´.

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

Curba de calibrare Spectru al patulinei

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
 |r( (!( |"
r!| !) * +r|,+

În intervalul de concentraţii 10 ȝg/l ± 400 ȝg/l,     este 89,64%.

În cazul metodei propuse pt. determinarea patulinei prin lichid cromatografie de înaltă
performanţă, limita de detecţie (LOD) este 3,71 µg/l, iar limita de cuantificare (LOQ)
este 7,42 µg/l.

Metoda prezentată pt. determinarea patulinei din sucul de mere prin cromatografie
de lichide de înaltă performanţă este acreditată de RENARM

   | 

 
 |
 
  
   

  


  
i