TEHNICI

HISTOLOGICE
• Scopul tehnicilor histologice este de
prelucrare a tesuturilor in vederea examinarii
microscopice.
• Prezervarea arhitecturii microscopice a tesuturilor

Obtinerea preparatului microscopic final

presupune parcurgerea mai multor etape:
• Recoltare
• Fixarea
• Înregistrarea probelor
• Examinarea macroscopică
• Includerea ţesutului
• Secţionarea
• Colorarea
• Montarea
Fixarea
• Proces fizic prin care se ingheata procesele
biochimice, pastrandu-se forma celulei si
volumul molecular.

• Scopul fixarii:
• Conservarea tesutului impotriva putrefactiei
• Prevenirea pierderii de constituienti
• Marirea rezistentei tesuturilor
• Distruge microorganismele si extrage
enzimele autolitice

• Fixatori chimici (formol, alcool metilic, acid

osmic)
• Fixatori fizici (aer, caldura)

• Durata fixarii: 1-3 zile

Formolul
Înregistrarea Pieselor
Examinarea macroscopică
RCPA - Breast tumour resection
RCPA - Breast tumour resection
Examinarea macroscopică
Examinarea macroscopică
Marcarea cu tus a marginilor unei piese chirurgicale

Principles of gross pathology - Libre Pathology

PROCESAREA
Procesor tisular:

• Tip Carusel
 • Procesor tisular tip liniar automat

• Deshidratare progresiva in concentratii crescande de alcool etilic

• Clarificare – indepartarea solutiei de deshidratare cu o substanţă miscibilă cu mediul de
includere (parafina) – hidrocarburi aromate (xilen, toluen)
 Includerea specimenelor în parafină

• Procesul este foarte important, deoarece ţesutul trebuie orientat în mod adecvat în blocul de
parafină.
Includerea specimenelor
Secţionarea cu microtomul
Pescuirea secţiunilor din baia de apă
Lamă cu secţiune din blocul de parafină necolorată
Suport pentru lame cu secţiuni necolorate
în cuptor
Colorarea
• Deparafinarea
• Ţesuturile ce conţin parafină nu pot fi colorate.
• Pentru a îndepărta ceara din ţesut şi a permite coloranţilor solubili
în apă să penetreze ţesuturile sunt parcurse invers etapele
procesului de includere.
• agenţi de clarificare: xilenul şi toluenul.

• Hidratarea ţesutului după îndepărtarea parafinei se face tot cu ajutorul

alcoolurilor ca şi deshidratarea numai că, de data aceasta, alcoolurile
din bateria de hidratare au concentraţie descrescătoare de la 100% la
70%. Ultima etapă presupune hidratarea cu apă de la robinet.

• Colorarea propriu-zisă

• Montarea lamelei din plastic/sticla previne deteriorarea tesutului

Decalcificarea
• Unele ţesuturi conţin depozite de calciu care nu permit secţionarea adecvată
atunci când sunt incluse în parafină, datorită densităţilor diferite ale calciului şi
parafinei.
• Acizi minerali, acizi organici, EDTA, electroliza
• Acizi minerali tari (acidul azotic sau clorhidric) sunt folosiţi pentru osul de tip
cortical, îndepărtând rapid mari cantităţi de calciu.
• modifică morfologia celulară, nefiind recomandaţi pentru ţesuturi delicate,
cum ar fi măduva osoasă.
• Acizii organici (acidul acetic şi acidul formic) sunt mai potrivite pentru măduva
osoasă, deoarece nu acţionează la fel de dur. Aceştia acţionează încet pe osul
compact cortical. Acidul formic în concentraţie de 10% este, per ansamblu, cel mai
bun decalcifiant.
• EDTA poate îndepărta calciul şi este blând (nu este un acid), dar nu penetrează
bine ţesuturile, acţionează încet şi este scump în cantităţi mari.
• Electroliza a fost încercată experimental când calciul trebuia îndepărtat cu minime
modificări la nivelul ţesutului.
• Aceasta acţionează încet, nefiind adecvată pentru folosire zilnică, de rutină
 EXAMENUL EXTEMPORANEU

-Metoda rapida de diagnostic in decursul

interventiilor chirurgicale
-Timp de lucru 15-20 min.
- Se realizeaza la Criostat

1. Fasonarea fragmentului de analizat - 3-5mm grosime

2. Fragmentul de analizat se depune pe port-obiect pe care
se picură mediu de inglobare (gel) special pt. Criostat
3. Inghetare 3-4 min.
4. Port-obiectul cu fragmentul de analizat se prinde in
dispozitivul Criostatului, se degroseaza si se sectioneaza
la 5-6 micromi cu ajutorul cutitului foarte ascutit
5. Sectiunea obtinuta se recolteaza cu ajutorul placutei
de plexiglas anti-rol direct pe lama
6. Se coloreaza lama HE sau albastru de toluidina
7. Se monteaza utilizind mediu de montare.
Tăierea unei secţiuni la gheaţă
 EXAMENUL EXTEMPORANEU
Colorații Uzuale

• ALBASTRU DE TOLUIDINA
Rezultate :
• -nucleii-albastru
• -citoplasma- albastru
• -stroma -albastru (metacromazie)

• HEMATOXILINA-EOZINA
Rezultate:
• - nucleii - albastru
• - citoplasma - roz
Microscopul optic
Principiu de funcţionare: Oculare

Lentilele se găsesc în
oculare (1) şi obiective (3) Obiective

Mărirea se poate schimba

Vize
cu ajutorul revolverului (2)
Sursa
de
Imaginea se focalizează cu lumină
ajutorul macrovizei (4) şi
microvizei (5)
• Când se examinează un preparat la microscop, nu se
începe niciodată cu obiectivul cu puterea de mărire cea
mai mare (40x), ci cu cel de 4x sau 10x.

• Se focalizează imaginea cu ajutorul macrovizei, iar pentru

observarea detaliilor celulare, se trece la obiectivul de 40x,
în acest caz utilizându-se numai microviza pentru fixarea
imaginii.
http://histologyolm.stevegallik.org/node/
MICROSCOPIA ELECTRONICA
pentru aspectele ultrastructurale ale diferentierii
DETALIU AL STRUCTURII NUCLEARE
(TEM * 25000)
MN- membrana nucleara
C- cromatina nucleara
N-nucleol

TEM * 20000 Plasmocit:

N = nucleu-cromatina in “spita de roata”
MN = membrana nucleului
M = mitocondrie
R = ribozomi
RR = reticul endoplasmatic rugos
G = aparat Golgi