Sunteți pe pagina 1din 25

mdulo de prevencin y control de la propagacin microbiana equipo 1

MODELOS ANIMALES DE INFECCIN: HUMANOS VOLUNTARIOS


Utilizadas en muchas enfermedades infecciosas. Consideraciones ticas (fcilmente tratables o vacunas). Transmisin del VIH madre-hijo (AZT). Estudios de tica.

Para la mayor parte de estudios de enfermedades infecciosas, los animales son los modelos de opcin. Desde el tiempo de Koch y Pasteur, roedores de laboratorio han sido los modelos el ms extensamente usados para la investigacin de enfermedad infeccin porque ellos son pequeos y as ms fcilmente son almacenados.

Por ejemplo, la Salmonella entrica serovar Typhimurium causa diarrea en humanos, causa enfermedades sistmicas en el ratn causada por S.enterica serovar Thyphi. Los ejemplos son hurones como un modelo para lceras gstricas causadas por Helicobacter, conejillos de Indias como modelos para la tuberculosis, armadillos para la lepra, chichillas la otitis . Los ratones son genticamente defectuosos en la habolidad para producir clulas B. Y las clulas T, por lo que los ratones son ms susceptibles un infeccin.

Otros modelos tiles de animal tienen recientemente importancia para estudiar procesos de infeccin y respuesta inmune. Animales Gnotobioticos son criados en entornos estriles y no tienen bacterias. Por consiguiente, ellos tienen el tejido mucoso subdesarrollado y ninguna inmunidad parcial debido a la exposicin previa. Desafortunadamente, ellos son muy caros de comprar y mantener. Los animales "patgeno libre son los animales que son criados en un entorno sin un patgeno particular, pero de otra manera son expuestos a otros microbios.

Consideraciones ticas
Los experimentos que implican animales tambin implican numerosas publicaciones ticas. Deben haber motivos realmente convincentes para realizar estos experimentos. Los animales de experimentacion deben ser diseados para probar las hiptesis crticas que pueden proporcionar la informacin til de una enfermedad bacteriana estudiada, incluso si resultados obtenidos son negativos.

PROTOCOLO
El protocolo debe contener la informacin extensa sobre la opcin del modelo de animal para ser usado,el numero de animales que se requirieron y los resultados estadsticamente significativos. Finalmente, estos protocolos deben ser repasados y renovados cada ao.

VALORES DE LD50 E ID50


LD50 es una medida mas haya de la infeccin que conducir a la muerte del hospedero (dosis letal) al 50% ID50 valor de dosis infecciosa , # de bacterias necesarias para infectar el 50% de los animales expuestos.

Nmero de animales infectados (o que se convierten en moribundos) en comparacin con el nmero de bacterias en el inculo (dosis) se sigmoidal, no lineal

Los valores de DL50 y DI50 han probado ser medidas tiles de letalidad y inefectividad, pero tienen algunas limitaciones importantes. Estos parmetros reflejan el efecto acumulativo de los muchos pasos implicados en la colonizacin y en la produccin de los sntomas. por lo tanto, carecen de un cierto nivel de sensibilidad, y el fracaso de una mutacin en un gen bacteriano para aumentar el valor de DL50 o ID50 no siempre significara que esta no afecte a algunos determinantes de la virulencia

Limitaciones
Se usa un gran numero de animales Cuando se quiere determinar un factor de virulencia en particular es necesario eliminar los otros Se inyecta gran cant. de bacterias 109 para el estudio de patgenos atenuados (dificil ver la virulencia)

Medidas que sern determinadas en un estudio


Numero de das Modelo animal Dosis administrada Animales utilizados Animales moribundos transcurridos los das Si ocurre o no la infeccin Establecer medidas en relacin a la virulencia

Son estndar de la bsqueda de la virulencia bacteriana pero forman un sistema complejo difcil de controlar

El cultivo de clulas se utilizan para controlar la interaccin husped bacteriana. Se observan por microscopia o fluorescencia Por lo tanto s mas fcil y ms reproducible

Se observan medio definidos, condiciones reproducibles, No. Limitado de clulas

+ Los cultivos 1 son de clulas que no son derivados de tumores y se pueden obtener de tejidos de animales ejemplo: macrfagos. + Las clulas inmovilizadas proviene de tumores mediante fusin de clulas primarias con una clula tumoral. + Aquellas clulas que no estn reguladas para el crecimiento en cultivo conduce a la acumulacin de mutaciones, reordenamientos del gen, duplicaciones de genes.

Para llevar a cabo la transicin de clulas diferenciadas no se dividen a una celda n la cual se dividirn rpidamente entonces las clulas del cultivo deben de ser despojados de muchas de sus propiedades que les hizo estar en el tipo de clulas 1. CONSECUENCIA Bacterias y patgenos virales que son altamente especficos para un determinado factor que causa una infeccin en un animal intacto son con frecuencia capaces de invadir las clulas en cultivo derivadas a partir de tejido que normalmente no infectan. Estas diferencias en la expresin gnica puede ser corregido: 1.- medida por la adicin de crecimiento, estimulantes u hormonas para el medio de cultivo. 2.- Proporcionando una matriz artificial (tambin denominada sustrato) para que las clulas crezcan.

Es que la mayora de las clulas cultivadas pierden su forma normal y la distribucin de la superficie antgenos. Las clulas de un animal intacto suelen ser polarizado, es decir las diferentes regiones de la membrana de la superficie celular estn expuestos a diferentes ambientes. Las clulas de cultivo de tejidos que se cultivan como monocapas nonconfluent generalmente es necesario para proporcionar una sustituto de la matriz extracelular y proporcionar hormonas para obtener una monocapa polarizada en la cultura. Las superficies reales mucosa estn cubiertas de moco y baados en soluciones que son difciles de imitar en un sistema in vitro.

Se utiliza con frecuencia para distinguir entre los mutantes que son defectuosas en el adjunto-desarrollo y son los que son defectuosos en la invasin de la gentamicina se realiza un ensayo de proteccin. 1.-Una monocapa de clulas de mamferos, se incuban las clulas bacterianas a una multiplicidad de ciertas infecciones (MOI), que se define como el nmero de entrada bacterias por clulas de mamferos, en el pozo de una cultura placa. 2.-Despus de la incubacin por un perodo de tiempo para permiten la invasin vinculante y que se produzca.

PRIMER SET.- proporciona el nmero total de bacterias (UFC) que una a las clulas.

Set

SEGUNDO SET.- se proporciona el nmero de bacterias adheridas (UFC), las clulas infectadas de mamferos se lavan varias veces con solucin tampn para eliminar cualquier microorganismo. La proporcin de clulas UFC asociadas al total de UFC al final de la experimento se define como la frecuencia de adherencia.

TERCER SET.- conjunto de pozos se lava como describio anteriormente para eliminar las bacterias no adherentes, y medio de cultivo fresco que contiene el antibitico gengentamicina se aade a cada pocillo.

Ensayo de gentamicina ha demostrado que la invasin vara considerablemente dependiendo de la cepa de C. jejuni, as como las lneas celulares humanas, que se utiliza, el nmero de bacterias en el inculo (MOI), y otras condiciones de ensayo.

Microscopia de fluorescencia

Se utiliza para detectar protenas u otras molculas especficas en una clula. Para lograrlo se puede acoplar la molcula fluorescente a otra molcula capaz de reconocer al componente que interesa visualizar, o emplear molculas fluorescentes que directamente tengan afinidad con determinados componentes celulares. Se pueden combinar distintos compuestos fluorescentes para detectar distintas molculas en la misma muestra.

Microscopia de fluorescencia

Modelos de cultivos de rganos

Modelos de cultivos de rganos


Preservar y mantener sus propiedades fisiolgicas, metablicas y genticas. Aprovechar la maquinaria celular para estudios sobre metabolismo, regulacin gnica y fisiologa. Varios tipos de clulas presentes, incluyendo algunas del sistema inmune.

Desventajas del medio de cultivo de rganos:


El cultivo de rganos puede empezar a deteriorarse en cuestin de horas o das, por lo que es difcil hacer experimentos a largo plazo. La oferta limitada de cultivos de rganos de donantes.