Sunteți pe pagina 1din 18

CITOGENETICA

Citogenetica uman modern a ap rut abia dup 1956 cnd Tjio i Levan au stabilit c num rul corect, diploid de cromozomi ai speciei umane este de 46. Tot ei au fost aceia care au descris principalele 46. caractere morfologice ale cromozomilor umani. umani. Ca urmare a mbun t irii tehnicilor de lucru a devenit posibil nu numai num rarea cromozomilor ci i studierea tr s turilor morfologice ale fiec rui cromozom n parte. In felul acesta s-a putut parte. stabili cauza sindroamelor de trisomie 21, 13 i 18 precum i a 21, sindroamelor Turner i Klinefelter. Klinefelter. In anul 1970 au ap rut tehnicile de bandare cromozomial datorit lucr rilor de pionierat ale lui Cassperson i colab. care au colab. demonstrat c prin colorare cu quinacrin i examinare n UV se ob ine o diferen iere longitudinal a cromozomilor sub forma unei succesiuni de benzi clare i ntunecate. Modelul de bandare este ntunecate. caracteristic pentru fiecare pereche de cromozomi omologi n parte. parte.

CROMOZOMII UMANI STRUCTURA SI NUMAR

Celulele tinere (inainte de faza de replicare a ADN) de in o singur macromolecul de ADN bicatenar, formnd cromozomii monocromatidici. Dup faza S de replicare a ADN, cromozomii devin bicromatidici, posednd dou macromolecule de ADN bicatenar. Cele dou cromatide ale unui cromozom dispuse aproape paralel, sunt reunite in regiunea centromerului, regiune denumit i constric ie primar .

Centromerul mparte cromozomul n dou : bra ul lung (q) i bra ul scurt (p). i are o pozitie variabila dar constant pentru acela i cromozom. In func ie de pozi ia centromerului cromozomii pot fi:
 metacentrici cnd centromerul este localizat median iar cele dou bra e sunt de lungimi aproape egale;  submetacentrici cnd centromerul este plasat nafara regiunii mediane iar unul din bra e este mai lung dect cel lalt  acrocentrici cnd centromerul este plasat foarte aproape de unul din capete i cromozomul apare format din dou bra e inegale dintre care unul foarte lung i altul foarte scurt.

Extremitatea fiec rui cromozom poart numele de telomer. Telomerele joac un rol esen ial n men inerea stabilit ii i integrit ii cromozomilor. La om, acestea sunt formate din mai multe secven e TTAGGG, repetate n tandem, care sunt men inute de enzime denumite telomeraze. Se apreciaz c reducerea nivelului telomerazelor asociat cu sc derea num rului de secven e TTAGGG joac un rol important n procesele de mb trnire i moarte celular . Nucleul fiec rei celule somatice con ine dou seturi de cromozomi, fiecare mo tenit de la un p rinte. Membrii unei perechi de cromozomi sunt numi i cromozomi omologi. Materialul din care sunt forma i cromozomii, ADN histonice, poart numele de cromatin . i proteine

Gradul de condensare colorare a cromozomilor nu se realizeaz uniform. Acest lucru se observ mai ales n profaz i teleofaz . Ca urmare se apreciaz c cromatina prezint dou st ri func ionale alternative i reversibile: eucromatina i heterocromatina.

La om, nucleul celulelor normale con ine 46 de cromozomi mp r i i n perechi, existnd astfel 22 de perechi de autosomi i o singur pereche de cromozomi de sex XX la femeie i XY la b rbat.
 Celulele somatice sunt denumite diploide con innd to i cei 46 de cromozomi.  game ii (ovulul i spermatozoidul) sunt haploizi con innd doar 23 de cromozomi.

La femeie fiecare ovul poart cte un cromozom X, pe cnd la b rbat spermatozoidul poate purta ori X ori Y. Sansa ca un spermatozoid ce poart cromozomul X sau Y s fecundeze un ovul este aproximativ egal , a a cum i num rul de produ i de concep ie de sex masculin i feminin este aproximativ egal. In realitate, se nasc mai mul i copii de sex masculin ca i cei de sex feminin de i n timpul copil riei i maturit ii sex ratio-ul ajunge 1:1

METODE DE ANALIZA CROMOZOMIALA


Cu unele mbun t iri, metodele folosite de Tjio i Levan sunt folosite i ast zi n aproape toate laboratoarele de citogenetic n scopul realiz rii unei analize a constitu iei cromozomiale a unui individ. In acest sens se realizeaz cariotipul, adic aranjarea sistematic standardizat a cromozomilor unei celule, fotografia i la microscop n timpul metafazei mitozei. Prin tehnicile de bandare de-a lungul cromozomilor apare o succesiune de benzi transversale. Aceast alternant de benzi clare cu benzi ntunecate este identic la cromozomii omologi si diferit pentru cromozomii apar innd diferitelor perechi de cromozomi omologi.

ANALIZA CROMOZOMIALA
In vederea realiz rii cariotipului cromozomii trebuie mai nti identifica i cu precizie i aranja i n perechi. Caracterizarea morfologic a cromosmilor metafazici are la baz o serie de criterii stabilite de ISCN-International System for Human Cytogenetic Nomenclature.
 1.Lungimea relativ a unui cromozom este reprezentat de raportul dintre lungimea cromozomului(reprezentat de suma lungimii bra elor (p+q) i lungimea total a unui set haploid de cromozomi(22 de autosomi +X).  2. Indicele centromeric este definit prin raportul dintre bra ul scurt (p) i lungimea total a cromozomului. IC=p/(p+q)  3. Raportul bra elor este reprezentat de dimensiunea bra ului lung (q) raportat la dimensiunea bra ului scurt (p). B=q/p La cromozomii metacentrici raportul este de 1.0-1.7, la cei submetacentrici 1.73.0, la subtelocentrici 3.0-7.0 iar la cei acrocentrici 7.0-.

 4.Existen a sateli ilor. Sateli ii sunt prezen i la cromozomii acrocentrici i sunt reprezenta i de mase mici de cromatin . Ei se g sesc la extremitatea terminal a bra elor scurte a cromozomilor de care sunt separa i prin constric ii secundare  5.Constric ii secundare. Termenul de constric ie primar poate fi considerat sinonim cu cel de centromer. Unii cromozomi prezint ns constric ii i n alte regiuni ale bra elor, denumite constric ii secundare.  6.Replicarea asincron a cromozomilor. Eviden ierea replic rii asincrone a cromozomilor umani n cadrul perioadei S a ciclului celular a fost posibil n urma administr rii de H3 timidin i urm rirea ncorpor rii acesteia n cromozomi n func ie de momentul replic rii. Metoda a permis deferen ierea cromozomilor din grupele B, D i E. De asemenea, s-a pus n eviden replicarea tardiv a unuia din cei doi cromozomi X la femei.  7.Modelul de benzi cromozomiale se refer diferen iale ale cromozomilor. la ob inerea unor colora ii

Tehnica SKY

HIBRIDIZARE FLUORESCENTA IN SITU (FISH)


Metodele noi de diagnostic combin tehnicile citogenetice conven ionale cu cele de inginerie genetic molecular . Tehnica FISH se bazeaz pe capacitatea unei por iuni de ADN monocatenar de a se lega de o secven complementar care poate fi localizat oriunde pe o plac metafazic . Spre deosebire de alte metode folosite n analiza cromozomilor tehnica FISH poate s fie aplicat i celulelor aflate n interfaz . In aceast tehnic proba de ADN este conjugat cu nucleotide modificate care dup hibridizare cu ADN provenit de la pacient permite regiunii unde a avut loc hibridizarea s devin vizibil n lumin UV. Aceast tehnic este larg folosit ast zi n scopul diagnostic rii clinice i datorit faptului c rezultatele se ob in foarte rapid.

POLIMORFISMUL CROMOZOMILOR UMANI


Studiile au ar tat c anumite regiuni ale cromozomilor prezint varia ii ale dimensiunii sau ale afinit ii fa de coloran i. Intruct acest polimorfism nu are o expresie fenotipic deci nu exercit nici o influen asupra fenotipului, diferen ele structurale men ionate sunt considerate variante normale. Variabilitatea cromozomial implic regiunile constric iilor secundare, por iunea distal a cromozomului Y i sateli ii. Benzile C i Q pot prezenta varia ii ale lungimii n cadrul diferitelor grupe de cromozomi, fiind caracteristice pentru fiecare individ n parte. Cromozomii 1, 9, 16 au benzi care variaz att n lungime ct i n localizarea lor n regiunea centromeric i a constric iilor secundare. Cromozomul Y are o band heterocromatic foarte ngust la nivelul centromerului, pentru care diferen ele de lungime de la un cromozom la altul sunt dificil de raportat. Segmentul distal al bra ului q poate ns varia considerabil n lungime.

Au fost semnalate urm toarele tipuri de variante cromozomiale:  Constric ie secundar alungit la cromozomii 1, 9, 16. Se consider constric ia secundar ca fiind alungit atunci cnd are o lungime cel pu in dubl fa de lungimea constric iei secundare a cromozomului omolog.  Bra ul p alungit la cromozomii acrocentrici. Bra ul p se consider alungit atunci cnd este egal sau mai lung dect bra ul scurt al unui cromozom din perechea 18.  Sateli i proeminen i. Sunt defini i astfel cnd sunt mai mari dect bra ul scurt de la acela i cromozom.  Sateli i dubli se remarc prin colorare doi sateli i n tandem.  Cromozom y mare sau mic. Cromozomul Y este considerat mare atunci cnd Y/F>1,00 i mic atunci cnd raportul este de sub 0,7.  Prezen a sateli ilor pe bra ul scurt al cromozomului 17 (17ps). Aceast variant se ntlne te foarte rar, semnalndu-se n cteva cazuri printre pacien ii interna i n clinicile de psihiatrie.  Prezen a sateli ilor pe bra ul q al cromozomului y. Este o variant foarte rar ntlnit fiind semnalat fie la pacien i normali fie la pacien i cu sindromul Klinefelter.Acest caz particular se pare c rezult n urma transloca iei sateli ilor unui cromozom din grupele D sau G pe bra ul q al cromozomului Y.