UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA CENTRO DE CINCIAS EXATAS E DA NATUREZA DEPARTAMENTO DE QUMICA QUMICA ORGANICA EXPERIMENTAL I Prof. Dr.

Juliana Alves Vale

Separao dos pigmentos do espinafre por cromatografia

Prtica 2

EQUIPE Alan Andr Sabino Levi Gomes Gabriel Soares

Introduo
Na primeira prtica foi feita a extrao dos pigmentos de folhas de espinafre usando o extrator de Soxhlet. Nesta nova prtica ser feita a separao como tambm a identificao usando mtodos de cromatografia.

Definio de cromatografia
Cromatografia uma tcnica na qual os componentes de uma mistura so separados com base nas diferenas de velocidade nas quais so transportados atravs de uma fase fixa estacionria por uma fase mvel lquida ou gasosa. (Skoog et al., 2006)

Esquematizao geral dos tipos de cromatografia

*CSC = cromatografia super-critica (usa vapor pressurizado acima de sua temp. critica *CLAE: coluna de alta eficiencia *CP: em papel

Aplicaes da cromatografia
Purificao de compostos Anlise simultnea de adoantes (aspartame e sacarina) e conservantes (cido ascrbico e cido benzico). [Anlise de aditivos alimentares] Anlise de EDTA que usado como antioxidante. [Anlise de aditivos alimentares] Anlise de anti-bactericidas e conservantes de carne

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Usando mtodos cromatogrficos e valendo-se da diferena de polaridade entre os pigmentos, fizemos a determinao de seu numero (atravs da TCL) e, a seguir, a separao destes pigmentos (CCC).

Aspectos fsico-qumicos da amostra

m=16,250g (amostra+vidrinho) Aps 1 semana: m=16,597g Presena de gua Rendimento no seria real Colorao verde-escuro

Cromatografia em camada fina (TLC)

Materiais e Mtodos
placa cromatogrfica TLC de alumnio com slica gel papel filtro lpis grafite tubo capilar Becker de 100ml vidro de relgio provetas de 10ml e 100ml Reagentes utilizados foram: acetona [CH3COCH3] hexano [CH3(CH2)4CH3]

Cromatografia em camada fina (TLC)

Materiais e Mtodos
Colocamos papel filtro no bquer e cortamos excesso. Preparamos eluente e transferimos at +/- 0,5cm, tampando com vidro de relgio (para saturar o meio) Marcamos placa de slica Com tubo capilar, aplicamos extrato na linha marcada Transferimos placa para bquer e observamos eluio at aprox. 1cm da extremidade superior Retiramos placa e marcamos um ponto no centro de cada mancha Calculamos Rf

Cromatografia em camada fina (TLC)

Esquematizao

Esquematizao

Rf (fator de reteno) Rf = distncia percorrida pela amostra / distncia mxima que poderia percorrer. Obtivemos os seguintes resultados: a = 5,9cm b1=5,8cm b2=1,6cm b3=1,2cm b4=0,7cm Sabendo-se que Rf = b/a, Rf1=0,098 Rf2=0,27 Rf3=0,20 Rf4=0,12

Com base no conhecimento sobre a estrutura dos trs principais pigmentos e na descrio dada pelo roteiro, podemos deduzir que: o pigmento superior o -caroteno (hidrocarboneto pouco polar) Os outros dois pigmentos so clorofilas

Cromatografia em coluna clssica

Separao dos pigmentos. Mtodo analtico Requer grandes quantidades da substancia. Para tanto usamos o restante do extrato.

Caso os pigmentos tivessem desaparecido, teria que usar um mtodo de revelao pra visualiz-lo.

Cromatografia em coluna clssica

Materiais e Mtodos
Materiais usados Coluna cromatografica Erlenmeyer 100mL Tubos de ensaio Slica Basto de vidro Algodo Bcker de 100mL Garras Suporte universal

Reagentes Hexano Acetona

Cromatografia em coluna clssica

Materiais e Mtodos
Prepar a coluna: pesar 10g de slica em um bquer de 100mL e adicionr hexano at formar uma suspenso homognea (pasta uniforme); Colocar um pedao de algodo na coluna, transferir a pasta para esta com a ajuda do basto e adicionaar hexano continuamente; Com pipeta de pasteur, transferir extrato pelas bordar, continuando a adicionar hexano;

Esquematizao
Solvente: Hexano. Eluato: caroteno Solvente: mistura 7:3 de hexano-acetona. Eluato: clorofila-a. Solvente: acetona. Eluato: clorofila-b

Resultado Esperado

-caroteno -caroteno

O mesmo espera se obter para os demais pigmentos

Resultados obtidos
Nesta ultima etapa no foram obtidos os resultados esperados. Ao adicionar o hexano, todos os pigmentos desceram pela coluna e de forma desordenada. Acredita-se que isto tenha ocorrido pelo fato de ter-se adicionado excesso de eluente ao extrato antes de executar a CCC.

Concluses

Referncias Bibliogrficas
AIP: the journal of chemical physics. Infrared spectroscopy of acetone-hexane liquid mixtures. Disponvel em: <http://jcp.aip.org/resource/1/jcpsa6/v126/i15/p154511_s1?isAuthorized=no>. Acessado em: 06/03/2011. ALIMENTOSTEC, Cromatografia. Disponvel em: < http://alimentostec.blogspot.com/2010/01/cromatografia-quimica-organica.html>.Acessado em: 13/05/11 SBQ, Sociedade Brasileira de Qumica. Cromatografia, um breve ensaio. Disponvel em: < qnesc.sbq.org.br/online/qnesc07/atual.pdf >. Acessado em: 11/05/2011 SCHULER, Alexandre. Cromatografia a gs e a lquido. Disponvel em: <https://sites.google.com/site/arquivosdeq/config/pagetemplates/material-dos-

professores/Cromatografia12.pdf?attredirects=0&d=1>. Acessado em: 08/05/2011.

SHIMADZU Corp. Aplicaes da cromatografia a lquido. Disponvel em: <http://www.shimadzu.com.br/analitica/port/aplicacao/hplc2.cfm >. Acessado em: 10/05/2011. SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de Qumica Analtica. So Paulo: Cengage, 2006. 8 Ed, paginas 875/877