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INTEGRANTES: Caldern Espinoza, Yadira. Rayme Poma, Alicia. Arana Veneros, Alberto. Abarca Caqui, Laura. Quiroz Sosa, Luis. Obregn Huayta, Margot. Riojas Llauce, Virginia.
INFECCION URINARIA
COLONIZACIN, INVASIN Y MULTIPLICACIN, EN LA VA URINARIA, DE MICROORGANISMOS PATGENOS QUE SOBREPASA LA CAPACIDAD DE DEFENSA DEL INDIVIDUO AFECTADO.
EPIDEMIOLOGIA
La IU es una causa frecuente de consulta en medicina familiar . 15% al 25% de las consultas hospitalarias diarias.
Entre los 20-50 aos, las IU son 50 veces + frecuentes en mujeres. Incidencia hombres >45 aos con factores urologicos predisponentes.
40-50% de las mujeres han tenido al menos una ITU alguna vez en su vida.
En los neonatos, las IU se producen con ms frecuencia en nios que en nias y se suelen acompaar de bacteriemia.
EPIDEMIOLOGIA
EN AMBOS SEXOS LA PROBABILIDAD DE ITU ES MAYOR EN PACIENTES CON: PATOLOGIA DE LA VIA URINARIA (REFLUJO VESICOURETERAL, LITIASIS)
CLASIFICACION
URETRITIS CISTITIS
CLASIFICACION
Infecciones primarias
SEGN HISTORIA NATURAL DE LA ENFERMEDAD Bacteriuria no resuelta
Infecciones recurrentes
Persistencia bacteriana
Reinfeccin
UROCULTIVO
Se indica para detectar bacterias significativas que van a confirmar o descartar una ITU
FASE PREANALITICA
RECOLECCION DE LA MUESTRA
PREFERENTEMENTE SE DEBE OBTENER LA PRIMERA ORINA DE LA MAANA.
LA PARTE FINAL
PUNCION SUPRAPUBICA
POSICIN PARA LA REALIZACIN DE ASPIRADO SUPRAPBICO VISTA LATERAL LA VEJIGA SE PERFORA EN LA LNEA MEDIA, POR ENCIMA DE LA SNFISIS.
Presenta el riesgo de producir el ascenso de los microorganismos desde la uretra a la vejiga y generar asi una IU iatrognica.
BOLSA COLECTORA
CONDICIONES ESPECIFICAS
La muestra debe ser mantenida lo ms cerca posible de su estado original volmenes de 1 - 5 mL de muestra deben enviarse al laboratorio La muestra debe ser transportada dentro de las 2 horas
a)
b)
VOLUMEN DE MUESTRAS
Rechazar muestras de Sonda Foley es inaceptable para urocultivos. Rechazar la orina de la bolsa de un paciente con catter. Si ha sido inadecuadamente colectada, transportada y manipulada la muestra no debe ser recepcionad, documentar al final de la orden la calidad de la muestra y notificar.
EXAMEN FISICO
Aspecto : Es considerado como normal un aspecto transparente, pero es aceptado hasta un aspecto ligeramente turbio ya que este puede ser debido a contaminaciones. El aspecto de una orina turbia ya es considerado como anormal, esto puede ser debido a presencia de leucocitos, glbulos rojos, bacterias , cristales, grasa (Por obstruccin de linfticos).
EXAMEN FISICO
Color : En condiciones normales el color de la orina va de amarillo hasta mbar. Se pueden encontrar colores anormales debido a la presencia de elementos anormales en la orina como por ejemplo sangre, medicamentos, alimentos y otros pigmentos.
MEDIOS
Las bacterias para su desarrollo requieren de sustancias nutritivas cuyos componentes bsicos deben satisfacer las mnimas exigencias nutricionales y condiciones de atmsfera (aerobiosis, anaerobiosis, microaeroflia), pH y temperatura ptima para su crecimiento in vitro. La eleccin de los medios de cultivo se realiza en funcin a la localizacin de las infecciones y las bacterias a investigar. Los errores cometidos durante este paso del ciclo de procedimientos pueden invalidar la lectura e interpretacin de los cultivos. Los medios usados son: Placas con agar sangre de carnero (AS) Placas con agar Mc Conkey (McC) Otros medios: para hongos si es necesario Agar Sabouraud Asa calibrada: asas de de platino o descartable , se pueden usar las siguientes medidas: 0.001 ml ( 1ul) para detectar colonias mayores de 1000 UFC/ml 0.01 ml (10ul) para detectar colonias entre 100 1000 UFC/ml
INOCULACION
Usar el asa calibrada, flamear, dejar enfriar, mantener en posicin vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezcla de la orina sin centrifugar.
INOCULACION
Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera: Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una serie de pasos de ngulo de 90 a travs del inculo (solo para el mtodo de 0.001 ml).
Sedimento
Agar Cled
Medios de cultivo
Normal sin grmenes Normal con grmenes Patolgico con grmenes Cled Cled, MC Cled, MC Peditrico (AS) AS, Ach, Cled
1 o 10 L
Agar sangre
Agar Chocolate
CLED, Medio
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL TRACTO URINARIO El medio de CLED (Cistina Lactosa Electrolito Deficien). Permite la diferenciacin entre bacterias fermentadoras de la lactosa y las no fermentadoras (indicador azul de bromotimol). Las bacterias Lactosa (+) producen colonias de color amarillo o amarillo plido por acidificacin del medio. Las bacterias no fermentadoras de lactosa producen colonias verdes, azules o incoloras. La composicin del medio (contenido elevado de electrolitos) previene la formacin del velo de Proteus. .
SEDIMENTO URINARIO
Examen microscpico de la orina
Piuria: > de 10 leucocitos / mm3 de orina del chorro medio determinados con cmara de conteo (lmite normal superior 5 a 10 leucocitos por campo de gran aumento en el sedimento)
Hematuria microscpica
LEUCOCITOS
La prueba se basa en la actividad estersica de los granulocitos, esta enzima esterasa rompe una molcula que es un ster y se libera un compuesto alcohlico, el alcohol es capaz de reaccionar con una sal de diazonio y produce un color violeta. La tira es capaz de detectar a partir de unos 10-25 leucocitos/ l. de orina. reactiva. Su sensibilidad es de 75-96% y su especificidad de 94 a 98% al compararla con urocultivos positivos > 100.000 ufc/ml. Por lo que es un mtodo razonable de tamizaje para evaluar la necesidad de cultivo
Se realiza generalmente mediante el recuento en cmara cuentaglbulos, determinando leucocitos/mm3, o tras la centrifugacin, determinando leucocitos/campo en el sedimento urinario. Se considera que un sedimento de orina no es normal cuando una gota centrifugada de 10 ml. (10 min.a 2000 rpm.) contiene mas de 5 leucocitos por campo a 400x.
Definicin : >5 leucocitos/campo (centrifugada) 10 leucocitos/mm3 (no centrifugada) Equivalente: 5 leuc./campo = 25 leuc./mm3 (centrifugada) (no centrifugada
BACTERIURIA
Gram (orina sin centrifugar 100X Es (+), cuando se visualiza al menos una bacteria x campo ( > 10 UFC/ml)
Tcnica: Dos gotas de orina, no centrifugada. En un rea de 1,5 cm de dimetro. Observando 10 campos, de alto poder.
DETECCIN DE BACTERIURIA
La presencia de nitritos en orina es signo de colonizacin o infeccin bacteriana y puede analizarse mediante el examen microscpico y las tiras reactivas ya que por medio de esta revela la presencia de bacterias en la orina a travs de la deteccin de nitritos, los cuales aparecen cuando los nitratos de la orina son reducidos por la nitrato reductasa bacteriana.
Nitritos:
La sensibilidad es muy baja, pero la especificidad es del 92%. La presencia de falsos negativos puede explicarse por una baja cantidad de nitratos en la dieta o porque la bacteria carece de la enzima, como por ejemplo ocurre en Pseudomonas sp., Staphylococcus sp. Enterococcus sp. Acinetobacter y Cndida spp.) y la prueba no es demasiado sensible (60 %). Por lo tanto es imprescindible analizar el sedimento urinario.-
Aunque el diagnstico de ITU se establece demostrando por cultivo la existencia de bacteriuria significativa, la existencia de leucocituria o piuria es un buen indicador e ITU, por lo que es imprescindible realizar un examen microscpico cuantitativo a todas las muestras recibidas para cultivo, a fin de determinar el nmero de leucocitos presentes.
COLORACION GRAM
El examen microscpico con tincin de Gram es el mtodo ms simple, ms rpido, ms barato y probablemente ms fiable para identificar muestras de orina con recuentos bacterianos iguales o superiores a 105 UFC/m
UROCULTIVO-SEDIMENTO
Al momento de informar los urocultivos, se recomienda revisar el resultado del sedimento para que ambos informes sean concordantes. Es necesario definir qu se entiende por sedimento sugerente de ITU para poder evaluar las discordancias entre el sedimento y el urocultivo: Piocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x Leucocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x Bacterias: Regular o abundante cantidad La presencia de clulas descamativas y/o mucus en una paciente mujer, sugiere que la muestra est contaminada con secrecin vaginal.
Identificacin bacteriana
Para un adecuado sistema de vigilancia de infecciones, es necesario realizar la identificacin de las bacterias. El laboratorio de microbiologa tiene la responsabilidad de identificar el microorganismo causante de una infeccin, ms an cuando el espectro de los agentes responsables de infecciones intrahospitalarias han cambiado en los ltimos aos.
Identificacin bacteriana
En los urocultivos se pueden aislar una cantidad considerable de microorganismos causantes de infecciones urinarias, por ello es necesario identificarlo y hacerle su respectivo antibiograma. Estos microorganismos pueden ser: Bacilos Gram Negativos, Cocos Gram Positivos, Bacilos Gram Negativos No Fermentadores (mayormente en infecciones intrahospitalarias)
Identificacin bacteriana
Cada grupo de bacterias tiene un metodologa diferente de identificar, tiene diferente forma de crecimiento en diferentes medios de cultivo. Los medios usados mayormente son:
Agar Sangre: CGP, BGN, BGNNF y levaduras Agar McConkey: BGN y BGNNF Agar Sabouraud: levaduras
Identificacin de CGP
Los CGP solo crecen en Agar sangre Se debe de considerar el tipo de muestra que se esta analizando. Tener en cuenta que enterococcus spp y se aslan con mayor frecuencia en muestras de orina o muestras relacionadas con vas urinarias Los CGP de genero streptococcus spp se aslan con mayor frecuencia en muestras de secreciones farngeas, o secreciones de vas respiratorias. Los CGP de genero staphylococcus spp se aslan en cualquiera de las 2 muestras sean vas urinarias como vas respiratorias, pero tener en cuenta si son capaces de causar dao o son parte de la flora normal.
Identificacin de CGP
Para su identificacion se usan pruebas como: coagulasa, catalasa, fermentacin de manitol, sensibilidad a la novobiocina, a la optoquina y a la bacitracina; NaCl 6.5 %, Bilis Esculina, entre los mas importantes
Streptococcus spp
Enterococcus spp
Staphylococcus spp
Identificacin de CGP
CGP
Catalasa + Catalasa Enterococcus spp Beta hemolticos
Nacl 6.5% (+) BE (+)
Staphylococcus
Streptococcus
S. Aureus
Coag (+) NB (R) Manitol (+)
S. Saprophyticcus
Coag (-) NB (R) Manitol (-)
Alfa hemoltico
S. Epidermidis
Coag (-) NB (S) Manitol (-)
St. Pneumoniae
Optoquin (S)
St. Viridans
Optoquin (R)
St. Pyogenes
Bacitracina (S) PYR (+)
St. Agalactiae
Bacitracina (R) PYR (-)
Para las reacciones bioqumicas se usaran medios diferenciales como: citrato, TSI, LIA, SIM o MIO, Urea, VPRM, oxidasa, entre los mas importantes.
fuente de carbono. TSI: Capacidad de la bacteria para fermentar los azucares (lactosa, sacarosa y glucosa), ademas de produccion de gas y acido sulfurico. LIA: capacidad de la bacteria de desaminar o descarboxilar el medio que contiene Lisina (aa) SIM o MIO: SH2, Indol, Movilidad / Movilidad, Indol, Ornitina descarboxilasa; caracteristicas propias de cada bacteria Urea: capacidad de la bacteria para hidrolizar la urea contenida en el medio a travs de la enzima ureasa. RM/VP: se usa para ver si la bacteria usa otros medio para fermentacion de azucares como por ejemplo la via acido mixta y la via butanodiolica Oxidasa: para comprobar la existencia de la enzima Citocromo C oxidasa, es usado para diferenciar Pseudomonas spp de Acinetobacter spp
P. vulgaris
Morganella spp Providencia spp Enterobacter spp Citrobacter spp
+
+ + +
K/A
K/A K/A A/A A/A
R/A
R/A R/A K/A K/A
+++
--+ --+ --+ +-+
+
+ + -
+++-+ -+
K/K
K/K
---
--
Escherichia coli
Pseudomonas aeurginosas
Enterobacter spp
PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD
Determinacin de la susceptibilidad al antibitico, de las bacterias que causan enfermedad clnica. Garantizar que los antibiticos prescritos sean apropiados respecto al organismo aislado. Mantener una base de datos del perfil de susceptibilidad tanto hospitalarios como medio extra hospitalario.
Flucloxacilina
Staphylococcus aureus SARM
Vancomicina
La prueba CMI y CMB son complejos y no se puede realizar de manera sistmica por la carga presin asistencial. La mayor parte de los laboratorios utilizan la prueba de susceptibilidad con discos.
Utilizamos discos de celulosa impregnados con concentraciones estndar De antibitico. Tamao banda de inhibicin es proporcional a la susceptibilidad del organismo. Mediante la aplicacin de criterios estandarizados se mide el halo de inhibicin y Se informa como S, R ,I
E TEST
Prueba innovadora utiliza una banda de material que incorpora una gradiente exponencial de antibiticos La banda se coloca sobre una placa inoculada a medida que el microorganismo se multiplica los antibiticos muestran difusin. La velocidad de difusin es proporcional a la concentracin en un punto concreto, lo que determina la zona de inhibicin
METODO AUTOMATIZADO
Utiliza sistemas de micro dilucin en medio liquido, sobre micro placas en pocillos en U. Interpreta el crecimiento bacteriano en diferentes pocillos por medio de un auto analizador( medicin por turbidez o fluorescencia) o lectura ptica. Limitacin solo garanta para investigacin de microorganismos de crecimiento rpido.
Antibiograma
Prueba microbiolgica que se realiza para determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibitico o grupo de antibiticos. El antibiograma, una vez realizado, da la siguiente informacin:
Grado de sensibilidad de la colonia bacteriana a un determinado antibitico. Diferencia de sensibilidad por parte de la colonia a diferentes antibiticos. Con esta informacin, se clasifica el efecto del antibitico sobre esa determinada colonia en: Resistente (R), Intermedio (I) y Sensible (S). En el mbito clnico, el estudio sobre la bacteria causante de la infeccin y sobre el antibiograma es entregado al mdico responsable del paciente.
Disco difusor
En una placa de Petri, se siembra la bacteria por diseminacin" para que esta pueda crecer de manera homognea por toda la placa. Acto seguido, se colocan los discos difusores, unas pequeas cpsulas que contienen antibitico, que liberan al medio. Las placas se incuban y pasado el tiempo pertinente se observa. Las bacterias habrn crecido por toda la placa salvo en las zonas impregnadas con el antibitico.
Seleccin de antibiticos
Dependiendo del tipo de bacteria que se haya aislado (BGN, CGP o BGNNF), se pasara a proceder a la seleccin de los discos difusores, ya que todos los discos no son especficos para todas las bacterias.
Seleccin de antibiticos
Si se tratara de un Bacilo Gram Negativo, se usaran antibiticos especificos para este grupo de bacterias (descritos en el manual del INS):
Cefalosporinas Aminoglucsidos Combinaciones con inhibidores de beta lactamasas Ampicilina Carbapenems Quinolonas Monobactams Tetraciclinas Otros (cotrimoxazol, cloranfenicol, fosfomicina)
Seleccin de antibiticos
Si se tratase de un Coco Gram Positivo, se tomara en cuenta el tipo de bacteria que sea y se usarn discos especificos, para:
Staphylococcus spp Streptococcus spp
Streptococcus pneumoniae
Enterococcus spp
Seleccin de antibiticos
Para Staphylococcus spp:
Penicilinas Glicopeptidos Aminoglucosido Fluoroquinolonas Tetraciclina Macrolidos Lincosamidas Otros (cloramfenicol, rifampicina, nitrofurantoina, cotrimoxazol) A considerar (noboviocina, Polimixina B)
Seleccin de antibiticos
Para enterococcus spp:
Penicilinas Glicopeptidos Aminoglucosidos (alta []) Fluoroquinolonas Tetraciclina Macrolidos Otros (rifampicina, nitrofurantoina)
Seleccin de antibiticos
Para steptococcus spp y pneumoniae:
Penicilinas Glicopeptidos Quinolonas Cefalosporinas (solo para streptococcus spp) Lincosamidas (solo para streptococcus spp) Tetraciclina Macrolidos Otros (cloramfenicol, rifampicina, cotrimoxazol) A considerar (optoquina)
Seleccin de antibiticos
Para Bacilos Gram Negativos No Fermentadores:
Cefalosporinas (3 y 4 generacion) Beta lactamico/inhibidores de beta lactamasa SFP (pseudomonas spp), SAM (acinetobacter spp) Tetraciclinas (acinetobacter spp) Carbapenems Monobactams Aminoglucosidos Quinolonas Otros (cloramfenicol, cotrimoxazol)(acinetobacter spp)
Reporte de antibiticos
Se reportar teniendo criterio sobre los antibiticos y sobre las limitaciones de algunos antibacterianos. Se tendr que tomar en cuenta el reporte de resistencias bacterianas (BLEE), para que el medico tome precauciones sobre el tratamiento a aplicar. Para tener la certeza de los resultados, se le harn los controles de calidad respectivos a los discos de sensibilidad, al medio de difusin, a la escala de Mc Farland, disposicin de discos, entre otros.
CONTROL DE CALIDAD
PRE ANALITICO
Calidad de la muestra Material esteril
El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el procesamiento de la misma debeser idealmente no mayor de dos horas
CONTROL DE CALIDAD
ANALITICO
Equipos - Debe existir un control periodico y regular y su rstado debe registrarse adecuadamente.
Medios de cultivo Control de Ph espesor de medio humedad almacenamiento Fecha de vencimiento Control Esterilidad 15 lbs de presion (1210c) x 15 mn control de propiedades con controles de cepas apropiadas a las caracteristicas del medio
CONTROL DE CALIDAD
ANALITICO DISCOS DE SENSIBILIDAD conservacion adecuada(8 C 0 - 14 C ) -lactmicos guardarse congelados Los dispensadores deben alacanzar la T.A adecuada Fecha de vencimiento .
Semicuantitativa
(50) * ( o,oo1) = 50,000 ufc
Estandarizacin:
Espectofometrico manometrico
Post analitico
Validacion de resultados.
Correlacionar la presencia de leucocitos con la presencia de bacterias observadas en el sedimento urinario. examen qumico y microscpico a)Nitritos positivos con bacterias presentes en el sedimento. b)Leucocitos por L con leucocitos presentes en el sedimento.
COMO DETECTAR ANTIBIOTICO EN ORINA Determinacion de sust. antimicrobianas residuales en orina Discos de papel filtro whatman n03 esteril de 6mm diametro Agar Mueller - Hinton Cepas de B. subtilis ATCC 6633
positivo