ESPECTROFOTOMETRO

Espectrofotmetro

Qu es un Espectrofotometro?

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos.

Qu es un Espectrofotometro?
Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o espectrofotmetro de masa. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones: 1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra 2. Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en la muestra.

Principio de Medicin

La espectrofotometra Ultravioleta-Visible es un mtodo ptico de anlisis que tiene como principio de medicin la absorcin y/o transmisin de la energa radiante emitida por una fuente de luz, atraviesa una sustancia. El mtodo es espectroscpico porque se basa en la medida de la intensidad y de la longitud de la onda de la energa radiante.

Principio de Medicin

La regin del espectro electromagntico que aplica es la Ultravioleta-Visible que va desde 10nm hasta 780nm.

Componentes de un espectrofotmetro
Fuente de luz La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lmpara de wolframio (tambin llamado tungsteno), lmpara de arco de xenn y lmpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atmicos.

Fuentes de luz

Componentes de un espectrofotmetro
Monocromador
El monocromador es un dispositivo ptico que permite, por medio de un mecanismo, seleccionar y transmitir una estrecha banda de longitudes de onda ya sean electromagnticas o no a partir de una fuente emisora que produzca una amplia gama de longitudes de onda. El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica. Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida.

Monocromador

Monocromador

Componentes de un espectrofotmetro
Monocromador Es un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

Componentes de un espectrofotmetro
Compartimiento de Muestra
Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer (relacin emprica que relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado) en su mxima expresin, en base a sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula de fundamental-excitado.

Compartimiento de Muestra

Cubetas de espectofotometra. En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en segundo plano, de plstico, para colorimetra (es decir, empleando luz visible).

Componentes de un espectrofotmetro
Detector El detector, es quien detecta una radiacin y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos:

a) los que responden a fotones; b) los que responden al calor.

Componentes de un espectrofotmetro
Registrador
Convierte el fenmeno fsico, en nmeros proporcionales al analito en cuestin.

Componentes de un espectrofotmetro
Fotodetectores En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la seal en forma simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mviles del equipo.

Funcionamiento del Espectrofotmetro

Al ser expuestos a la luz del espectrofotmetro, algunos electrones de los tomos que forman las molculas absorben energa entrando a un estado alterado. Al recuperar su estado original, la energa absorbida es emitida en forma de fotones. Esa emisin de fotones es distinta para cada sustancia, generando un patrn particular, que vara con el largo de onda usado. Dependiendo del largo de onda, ser la cantidad de energa absorbida por una sustancia, lo que logra generar un espectro particular al graficar Abs vs l.

Esquema de funcionamiento de espectrofotmetro UV-VIS

Funcionamiento de Espectrofotmetro

Espectrofotometro de reflectancia

Utilidades

Los espectrofotmetros son tiles debido a la relacin de la intensidad del color en una muestra y su relacin a la cantidad de SOLUTE dentro de la muestra. Por ejemplo, si usted utiliza una solucin del colorante rojo del alimento en agua, y mida la cantidad de luz azul absorbida cuando pasa a travs de la solucin, una fluctuacin mesurable del voltaje puede ser inducido en una fotoclula en el lado opuesto. Si ahora la solucin del tinte rojo es diluida por la adicin del agua el color ser menos intenso. As, hay una relacin entre el voltaje y la cantidad de tinte en la muestra.

Utilidades

El espectrofotmetro tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica (de una longitud de onda particular) a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al experimentador realizar dos funciones:

Utilidades

1. Nos da informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y graficar estos valores en funcin del largo de onda, formando un espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales nicas, distintas sustancias producen distintos espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de tomos tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga caractersticas nicas.

2. Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en la muestra. La concentracin es proporcional a la absorbancia, segn la Ley Beer-Lambert: a mayor cantidad de molculas presentes en la muestra, mayor ser la cantidad de energa absorbida por sus electrones. Abs = K C L Abs: absorbancia K: coeficiente de extincin molar C: concentracin L: distancia que viaja la luz a traves de la muestra. (normalmente es de 1 cm) La cuveta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas de un centmetro (L). La ecuacin describe una lnea recta, donde el origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K, podemos calcular C en base a Abs: Abs / K L = C

El espectrofotmetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotogrfico, donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de tramitancia. Podemos usar esta unidad o cambiarla a absorbancia usando la siguiente ecuacin. %T = - Log Abs. El espectrofotmetro nos puede dar ambos valores a la misma vez, ahorrando la necesidad de hacer los clculos. (Tramitancia= cantidad de luz que atravieza la mezcla). Una caracterstica del instrumento es la necesidad de blanquear el aparato antes de cada lectura. Esto se hace colocando una cuveta con una solucin control que tenga todos los componentes de la reaccin menos la sustancia que va a ser medida en el instrumento y ajustando la lectura a cero absorbancia. El propsito de esto es eliminar el registro de absorbancia (background) que puedan presentar los dems componentes de la reaccin a ese largo de onda particular. Todas las molculas presentan absorbancia porque todas interfieren con el paso de la luz. Slo que la absorbancia ser ptima a un largo de onda de luz especfico para cada tipo de sustancia.

Tipos de Espectrofotmetro
Existe una gran variedad de estos instrumentos, dependiendo de las caractersticas de fabricacin, podemos mencionar que hay 2 tipos de acuerdo a su diseo ptico: Espectrofotmetro de haz simple. Espectrofotmetro de doble haz. La diferencia entre estos dos tipos de instrumentos es que el de doble haz permite mayor estabilidad, tiene mayor exactitud y se reduce el nmero de pasos en la medicin. Por otras caractersticas instrumentales los hay analgicos, digitales y de barrido que tiene la ventaja de automatizar la medicin y agilizar la captura de datos.

Espectrofotmetro de haz simple.

Espectrofotmetro de doble haz.

Caractersticas

Esquema Electrco

Caractersticas

Caractersticas

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS TU 1800 Uv-Vis Spectrophotometer

El TU1800/1800S es el ms popular espectofotmetro de P-General. Su ptica adopta el sistema de medicin SPLIT-BEAN con un detector formado por dos fotodiodos de estado slido de alta sensibilidad. Las operaciones del instrumento estan controladas a travs de un microchip interno en conjunto con una pantalla de cristal lquido (LCD) y un teclado SoftTouch con salida para impresora. Su compartimiento es para 8 celdas y adems posee una fuente de luz accesible. El TU1800/1800S efecta mediciones fotomtricas, mediciones espectrales y cuantitativas, es fcilmente operable con caracterstiCAS sobresalientes, Escaneo de longitudes de onda automtico entre 1100-200 nm., chequea automticamente la linea de base.