Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Definiciones
Tcnica que consiste en la introduccin de genes en el genoma de un individuo que carece de ellos Se realiza a travs de enzimas de restriccin (ER) ADN recombinante (ADNr) = ADN formado luego de intercalar un segmento de ADN extrao en un ADN receptor
BIOTECNOLOGA
Cultivo de Clulas Vegetales Diagnsticos
Frmacos Anti-cncer
Solucin de crimenes Tecnologa del ADN Bancos de ADN, ARN Protenas Mapas de Genomas completos
Biologa Molecular
Ingeniera Gentica
Sntesis de Nuevas Protenas Nuevas Plantas y Animales Nuevos Alimentos Nuevos Antibiticos Clonacin Produccin de Protenas humanas Recursos humanos qumicos raros Terapia Gnica
Marcadores
AVANCES HISTRICOS
1941 Genes codifican las protenas 1944 Prueba que el ADN porta la informacin gentica 1953 Determinacin de estructura del ADN 1961 Cdigo Gentico, ARN mensajero, regulacin gnica 1967 Wise y Richardson aislaron ADN ligasa 1970 Smith y colegas aislaron y caracterizaron la Hind III 1972 Janet Mertz y Ron Davis cortaron y pegaron mol de ADN 1973 Stanley Cohen y H. Boyer pusieron ADNr en bacterias 1977 Fred Sanger secuenci el virus de ADN X174 1978 Biblioteca gnica humana 1979-81 genes humanos clonados y secuenciados
AVANCES HISTRICOS
1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente 1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas
publican la secuencia del lambda 1986 La secuenciacin del ADN es automatizada 1987 Inicia el Proyecto del Genoma Humano 1995 Es secuenciado la bacteria Haemophillus influenzae 1996 Es secuenciada la levadura Saccharomyces cerevisiae 1998 Es secuenciado el nemtodo Caenorhabditis elegans 1999 Es secuenciado el cromosoma 22 humano 2000 Es secuenciada la mosca de la fruta D. melanogaster / 26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano 2000 14 de dic. secuencia de Arabidopsis thaliana 2001 26 de enero borrador genma del arroz Oriza sativa
R. ALEGRA CONACYT 2002
Enzimas de restriccin
Endonucleasas
Cortan los enlaces fosfodiester a partir de ua secuencia que reconocen.
Nomenclatura
Nombre dado segn el gnero y la especie de la bacteria de donde se aisl por primera vez esta enzima La primera letra representa el gnero de la bacteria Las prximas dos indican la especie Una cuarta letra indica la cepa y un nmero al final indica la cantidad de enzimas que se han aislado de esa cepa. Ej:
Eco RI
E = gnero Escherichia co = especie coli R = cepa RV 13 I = primera endonucleasa aislada de esta cepa
Las enzimas de restriccin al cortar DNA pueden producir dos tipos de cortes:
Cohesivos o pegajosos: cortan a manera escalonada en dos puntos diferentes.
Una molcula de DNA cortada con enzimas de restriccin genera diferentes fragmentos. Estos pueden ser separados en base a su tamao utilizando un gel de electroforesis. El gel puede estar hecho de agarosa o poliacrilamida
Concentracin de agarosa
Aplicaciones de las ER
Mapas de restriccin
plsmido o bacterifago.
Fragmentar DNA genmico para separacin de electroforesis Generacin de fragmentos para ser usados como sondas marcadas
Generacin de fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados, creacin de DNA recombinante
Etapas
Extraccin (purificacin) de ADN
Amplificacin de 1 regin (PCR) Fragmentacin (ER) Separacin por Electroforesis
Estudio de paternidad
MADRE
PADRE
NIO 1
NIO 2
NIO 3
NIO 4
Construccin de libreras
Vectores Clonacin
Vectores
Los vectores de clonacin son pequeas molculas de ADN con capacidad para autoreplicarse dentro de clulas hospedadoras Tipos
Plsmidos
ADN circular (origen de replicacin)5000 a 40000 pb Zonas de restriccin Genes de resistencia a antibiticos
Clonacin
Definicin
clonar es aislar y multiplicar en tubo de ensayo un determinado gen o, en general, un trozo de ADN
clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una clula somtica o de un ncleo de otro individuo, de modo que los individuos clonados son idnticos o casi idnticos al original
Definiciones
Clon segn Dic. R.A.E. (Del gr. , retoo).
1 m. Biol. Conjunto de clulas u organismos genticamente idnticos originados por reproduccin asexual a partir de una nica clula u organismo o por divisin artificial de estados embrionarios iniciales.
2 m. Biol. Conjunto de fragmentos idnticos de cido esoxirribonucleico (ADN) obtenidos a partir de una misma secuencia original.
Clonacin molecular
Obtencin de ADN donador Obtencin del gen de inters Insercin del gen en vectores de clonacin Introduccin del vector a clulas hospedadoras Comprobacin de la presencia y expresin del gen Clonado del ADN: multiplicacin de la clula hospedadora
Insercin en plsmidos
Insercin en bacteriofagos
Insercin en csmidos
IN VIVO
E. coli K12 a ser transformada
Clulas competentes
2 DIGESTIN
Placa de transformacin Ej.: medio con tetraciclina para la seleccin Se replica sobre el terciopelo, dejando material de las colonias en sus posiciones relativas Tambor recubierto de terciopelo estril
Placa de deteccin Ej.: medio con ampicilina Se posa sobre el terciopelo marcado con las colonias y el material pasa a la placa.
Se incuba.
Las colonias que crecen slo tienen vector. Las colonias que no crecen tienen plsmidos recombinantes.
Construccin de libreras
Librera genmica
Series de plsmidos que contienen una serie de trozos de ADN correspondientes a un genoma
Secuenciacin de ADN
Mtodos
Qumico de Maxam y Gilbert Enzimtico de Sanger (terminadores de cadena) o del didesoxi Secuenciacin automtica
Mtodo de Sanger
Terminadores de cadena marcados
Dideoxinucletidos (ddNTPS) en baja concentracin
Similares a nucletidos pero carecen del grupo 3 OH Detienen elongacin por ADNpol
ADNpol
incorpora el ddNTP en una cadena en crecimiento mediante formacin de un enlace entre el grupo 5PO4del nuevo nucletido y el grupo 3OH del nucletido previo
Elementos y etapas
Mezcla
ADN molde Cebadores o primers marcados Deoxinucletidos normales (dNTPs)
Divisin en 4 tubos
A cada tubo un ddNTP diferente, marcado y en baja cc ADNpol (I de T4)
Electroforesis en poliacrilamida
Geles 0,5 mm de espesor y 50 cm long) Mezclas de reaccin desnaturalizadas y cargadas en pocillos diferentes
Secuenciacin automtica
Emplean el mtodo enzimtico
Con sebadores fluorescentes Con terminadores fluorescentes
Ingeniera gentica en :
Medicina Veterinaria Agricultura
Clonacin de animales
Por disgregacin de clulas embrionarias
Se basa en el mismo principio por el que nacen gemelos de forma natural.Se pueden separar las clulas de un embrin en diferentes estados de desarrollo, desde el estado de 2 clulas hasta el estado de mrula. Cada clula separada puede funcionar como un zigoto que puede desarrollarse para dar un individuo completo
Produccin de protena C humana en leche de cerdos, para desrdenes como hemofilia. Hormonas de crecimiento humano en tejido seminal de cerdo.
Antitrombina humana III, anticoagulante sanguneo secretada en leche de cabras transgnicas. Cabras transgnicas para producir BioSteel fibra hecha por el hombre con propiedades de tela de araa.
PAPA
con la vacuna que previene la insulina dependencia de la diabetes mellitus 100 veces ms poderosa que la actual vacuna. con la sub-unidad B antignica de la enterotoxina del Vibrio cholerae causante del clera). F