Marysabel Benal Mara Anglica Coronel Luis Fernando del Rio Leslie Daz Giselle Gonzlez Anglica Guerra

Lineth Gutirrez

INTRODUCCIN
La Hb es una protena que se encuentra en mayor concentracin dentro del eritrocito y cuya funcin es transportar el oxgeno desde los pulmones hasta los tejidos del organismo y de manera indirecta al bixido de carbono para que sea expulsado en los alvolos pulmonares.

INTRODUCCIN
La Hb esta formada por un grupo prostetico (hem) y un grupo proteico (globina).

La porcion globinica se encuentra codificada por genes especificos y formada por cuatro cadenas polipeptidicas (tetramero) de dos tipos: alfa y no alfa.

Existen dos globinas tipo alfa: zeta y alfa , ambas de 141 aa; y cinco de tipo no alfa: epsilon, gamma G-A, delta y beta de 146 aa.

INTRODUCCIN
Estas globinas forman las 6 hemoglobinas humanas normales denominadas: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Hb Gower 1 (zeta2,epsilon2) Hb Gower 2 (alfa2, epsilon2) Hb portland (zeta2, gamma2) Hb fetal (F) (alfa2, gamma2) Hb A (alfa2, beta2) Hb A2 (alfa2, delta2)

INTRODUCCIN.
En la Hb A, estas cadenas globina se llaman alfa y beta las cuatro cadenas estan plegadas y adosadas formando un tetrametro globular con un peso molecular de aproximada/ 64.500, una estructura que para la Hb A se abrevia como alfa2 y beta2.

Los dos tipos de cadenas son casi iguales en longitud: la alfa globina tiene 141 aa y la cadena beta 146 aa.

Las cadenas se parecen mucho, tanto en la secuencia de aa como en su configuracion tridimensional.

INTRODUCCIN
La Hb A presenta modificaciones postraduccionales. La principal es la adicion de azucares en la globina beta; dicha modificacion se conoce como Hb glucosilada.

Se conocen tres tipos de Hb glucosilada:

1. La 2. La 3. La formada por la adicion de glucosa 6 fosfato formada por la adicion de manosa. formada por adicion de glucosa .

INTRODUCCIN
La Hb varia su porcentaje de 1,8% hasta 3% en individuo de 1 ano de edad.
Apesar de sus bajos valores en personas normales y, por tanto, la escasa importancia fisiologica, esta Hb se encuentra en estudio para establecer los mecanismos moleculares que expliquen tanto su baja expresion cuanto porque los valores elevados resultan patognomonicos de talasemia beta clasica en estado heterocigoto.

INTRODUCCIN.
La HbF existen dos tipos de globina gamma que difieren en un solo aa en la posicion 136; las cadenas presentan el aa glicina y las cadenas tienen alanina. En el recien nacido la Hb F se encuentra en proporciones que varian de 70-90% y el resto lo conforman las Hb adultas. Entre las principales caracteristicas funcionales de la HbF consisten en baja combinacion con 2,3-DPG. Lo cual origina una mayor afinidad por oxigeno que es transportado de la circulacion materna al feto.

ESTRUCTURA Y LOCALIZACION DE LOS GENES GLOBINICOS.

Periodo de aparicin de las diferentes cadenas globinicas intrauterinas y extrauterinas.

en vidas

INTRODUCCIN
La hemoglobinopata es un grupo de trastornos que se transmiten de padres a hijos (hereditarios), en los cuales hay una estructura y produccin anormal de la molcula de la hemoglobina.

Los Trastornos Hereditarios De La Hb Se Clasifican En Tres Grupos:

HEMOGLOBINOPATIAS

Variantes Estructurales

Talasemias

Persistencia hereditaria de la hemoglobina Fetal

INTRODUCCIN
Los eventos mutacionales productores de alteraciones en la sitesis o estructura de la hemoglobina pueden deberse a: 1. 2. 3. 4. Sustitucin de una base por otra Deleccion Adiccin Fusin genica

Genes globina

Genes globina
Gen epsilon
Se expresa normalmente en la yema del saco embrionario

Gen gamma AyG

Se expresan durante el desarrollo fetal.

Gen delta y beta

Se expresan durante el desarrollo adulto

Primeras 12 semanas despus de la concepcin

predominan 7 semanas despus de la fecundacin hasta nacimiento

presentes en la vida postnatal

Un ligero cambio en uno de los genes que codifican para una subunidad de la molcula de hemoglobina puede tener resultados desastrosos. La Expresin de todos estos genes est controlada por una sola regin controladora de locus (LCR)

Genes globina
El cambio de la sntesis de globina embrionaria a la sntesis de hemoglobina fetal se produce de forma concomitante con la migracin de la eritropoyesis en saco vitelino a hgado fetal.

Una cantidad significativa de la hemoglobina fetal persiste durante siete u ocho meses despus del nacimiento.

El gen delta produce una pequea cantidad de globina delta en nios y adultos

El producto del gen de la globina delta se llama hemoglobina A2, y normalmente comprende menos del 3% de la hemoglobina en los adultos

Regulacin de la expresin de los genes globina

Este es el resultado de un control preciso de la transcripcin, postranscripcional y postraduccional. Sin embargo, los mecanismos de regulacin no tienen en cuenta si los genes, que an no se han activado, son funcionales o no.
En consecuencia, cuando el tiempo programado en el desarrollo de la activacin de un gen de globina es alcanzado, la maquinaria de transcripcin se colocar incluso cuando el gen es defectuoso y no puede producir ninguna protena. Cuando el defecto reside en el gen globina, la disminucin de la sntesis de -globina se traducir en la cadena de produccin desequilibrada y talasemia.

HAPLOTIPO
Los haplotipos se definen como diferentes combinaciones de sitios polimrficos a lo largo de una regin cromosmica

Haplotipo corresponde a una regin especfica del genoma donde existen combinaciones de bases particulares identificadas como sitios de restriccin

Su determinacin puede ser til para la deteccin de una determinada mutacin

HAPLOTIPO
Se han encontrado 6 haplotipos principales coheredados con la mutacin beta S, como alelos sencillos demostrndose que se correlacionaban con reas especficas de frica y Asia denominndose como:
Haplotipos Benin (Ben) Haplotipo Republica Centro Americana (CAR) o Bant Haplotipo Senegal (Sen) Haplotipo Camern (Cam)

Haplotipo Arabe.Saud (Arabe)

Haplotipo Asitico (Indio o Hind)

Haplotipos menores

HAPLOTIPO
Los haplotipos toman el nombre de las regiones de frica y Asia donde son predominantes; por ejemplo: Senegal: asociado a cuadros clnicos de menor severidad seguido del haplotipo Benn. los haplotipos Camern y Arabe-Saudi se vinculan con una clnica de severidad intermedia. El Bant (CAR, por sus siglas en ingls Central African Republic) se asocia a la forma ms severa de la enfermedad.

haplotipo Sen prevalece en el frica del litoral atlntico; el Ben se localiza predominantemente en el occidente centroafricano; el CAR predomina en el frica central y el fragmento polimrfico Cam se circunscribe a una zona limitada de Camern

50,8% al haplotipo Benin, 32,2% al CAR, 14,2% al Senegal y 2,3% al Camern

HEMOGLOBINOPATAS

VARIANTES ESTRUCTURALES
Se producen como resultado de:

Mutaciones puntuales en uno de los genes estructurales de la globina

U otros mecanismos moleculares ms complejas

+ de 400 HB Anormales

VARIANTES ESTRUCTURALES Se agrupan en:

Variantes que causan Anemia Hemoltica

Mutaciones con alteracin del transporte de oxigeno

Variantes por mutaciones en regiones codificantes (Talasemias)

ANEMIA CLULAS FALCIFORMES

Es una grave enfermedad hemoltica autosmica recesiva que se caracteriza por que los glbulos rojos presentan una deformidad intensa en su forma (falciforme es decir en forma de hoz) en condiciones de presiones de oxigeno baja; esto debido a la variante estructural de la B globina que determina la presencia de la Hb S.

Hemoglobina S
Fue la primera hemoglobina anmala q se describi. Se origina por la sustitucin de un solo nucletido que cambia el codn del sexto aminocido de la globina de acido glutmico a valina (GAG GTG: Glu6Val).

La homocigosidad para esta mutacin es la causa de anemia falciforme y los heterocigotos se dicen tienen el rasgo falciforme.

ANEMIA CELULAS FALCIFORMES

EPIDEMIOLOGA

SIGNOS Y SINTOMAS

SIGNOS Y SINTOMAS
Fatiga

palidez
Dificultad respiratoria Dactilitis depranocitica o enfermedad manos-pie

Problemas retinianos
Crisis de secuestro esplnico

SIGNOS Y SINTOMAS
Crisis dolorosas
Ictericia Accidentes vasculares
Crecimiento y pubertad tardos
Sndrome torcico agudo

Infecciones

CLINICO

BIOQUIMICO DIAGNOSTICO ELECTROFORTICO

MOLECULAR

DIAGNOSTICO CLINICO
Historia clnica adecuada:

Antecedentes familiares de ACF. Raza negra. Antecedentes de anemia Anemia + infecciones. Anemia + dolor. Anemia + priapismo Anemia+ hiperesplenismo

- Historia o presencia de alguno de los signos o sntomas mencionados anteriormente.

PARACLINICOS

Hemograma con reticulocitosis.

Extendido de sangre perifrica

HEMOGRAMA

EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA

DIAGNOSTICO BIOQUIMICO
Cromatografa: Es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.

DIAGNOSTICO BIOQUIMICO
HPLC (cromatografa lquida de alta presin): mtodo inicial para recin nacidos ideal, puesto que utiliza como muestra el papel secante del cribado de metabolopatas neonatal. Tambin es til para la cuantificacin de HbS y F en el seguimiento de los tratamientos.

DIAGNOSTICO ELECTROFORTICO
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas (protenas o cidos nucleicos) segn la movilidad de estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use. En estos casos, las protenas se desnaturalizan mediante la adicin de un detergente como el dodecilsulfato sdico/dodecilfosfato sdico (SDS/SDP).

DIAGNOSTICO ELECTROFORTICO
Les otorgan una carga neta negativa que les permite migrar a travs del gel en relacin directa a su tamao, ya que la cantidad de cargas negativas que se unen a la protena depende del tamao de sta, existiendo una relacin masa/carga similar. As, los ms grandes se desplazan ms lentamente.

MOLECULAR
En la Anemia de Clulas Falciformes se realiza el estudio molecular utilizando la tcnica de Southern Blot para el anlisis de polimorfismo por restriccin de la longitud de fragmentos (PTFR).

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

El ADN geonmico se asla y se digiere con la enzima de restriccin MstII. Un sitio MstII se pierde en el locus de clulas falciformes. El ADN es entonces analizado por Southern blot y es probado con un probando especifico de la -globina-especfica que corresponde a extremo 5' del gene.

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

La anemia de clulas falciformes resulta (a nivel del gene) de un solo cambio de nucletido (de A a T) en el codn 6 dentro del gene de la -globina que lleva a la sustitucin del aminocido Glu (G) por Val (v). Al mismo tiempo se suprime el sitio de restriccin de MstII. Consecuentemente un probando del gen de la globina se puede utilizar para detectar los diversos fragmentos de restriccin de MstII.

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

Debe recordarse que hay dos copias de cada gen en todas las clulas humanas, por lo tanto, el anlisis del PTFR detecta ambas copias: el alelo afectado y el alelo no afectado.

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

Los individuos homocigticos para los genes normales de la globina exhibirn una sola banda de la hibridacin puesto que los genes maternales y paternales no estn afectados. Los heterocigotos exhibirn la banda normal y la banda ms grande del gene de las clulas falciformes.

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

Anlisis de PTFR para la presencia del locus de clulas falciformes.

TRATAMIENTO DE LAS MANIFESTACIONES

CRISIS DE DOLOR VASO-OCLUSIVA:

Episodios de dolor sin complicaciones
Hidratacin oral Analgsicos orales: como el paracetamol, el ibuprofeno, y los opiceos

Episodios graves de dolor

Hospitalizacin y la administracin de lquidos parenterales Analgsicos: morfina o narcticos + AINES Una evaluacin infeccin: Hemocultivo, Cultivo de orina, Radiografa de trax

Enfoque multimodelo

Masajes calor La distraccin La acupuntura El bioretroalimentacion, La auto-hipnosis.

INFECCIN O FIEBRE

Recuento de reticulocitos

Hemocultivo

Radiografa de trax

Antibiticos parenteral

SNDROME DE PECHO
4. Hipoxemia puede progresar a la necesidad de intubacin y soporte ventilatorio mecnico

1. Oxgeno

2. Analgsicos

3. Antibiticos (incluyendo un macrlido).

SECUESTRO ESPLNICO
Episodios graves colapso cardiovascular y muerte La transfusin de emergencia est indicada cuando los signos de inestabilidad cardiovascular estn presentes. Episodios mltiples o graves Esplenectoma.

PREVENCIN DE LAS MANIFESTACIONES PRIMARIAS

EDUCACIN DE LOS PADRES, CUIDADORES Y PERSONAS AFECTADAS

La atencin integral y permanente morbilidad y mortalidad y calidad de vida

Visitas de rutina, los medicamentos profilcticos y de intervencin temprana

Fiebre, sntomas respiratorios, palidez, letargo, aumento del bazo, y los cambios neurolgicos

TRANSFUSIN DE GLBULOS ROJOS

El objetivo inicial mantener el porcentaje de la Hb S por debajo del 30% y suprimir reticulocitosis.
El tratamiento del dolor crnico refractario a otras terapias La prevencin primaria del accidente cerebrovascular

Hipertensin arterial pulmonar e Insuficiencia renal crnica

Transfusiones
Las complicaciones de las transfusiones son: la sobrecarga de hierro, la aloinmunizacion y, en raras ocasiones la infeccin

HIDROXIUREA
La hidroxiurea (10 a 30 mg/kg/da) hemoglobina fetal Hidratacin de los eritrocitos, Adherencia a la pared vascular granulocitos y reticulocitos
frecuencia de las crisis dolorosas y del sndrome torcico agudo. transfusiones de sangre y acuden menos veces al hospital.

PREVENCIN DE LAS COMPLICACIONES SECUNDARIAS

 Profilaxis de la penicilina previene el 80% de los episodios que amenazan la vida de la infancia.
Dosis diarias de penicilina Administracin vacunas

Desde los 2 meses de edad y continuar hasta que el nio tenga por lo menos 5 aos.

Meningococo y Neumococica Antigripal anual

AGENTES / CIRCUNSTANCIAS QUE DEBEN EVITARSE

La deshidratacin Temperaturas extremas Agotamiento fsico Muy alta altitud sin oxgeno suplementario La meperidina se debe evitar como terapia de primera lnea debido a la toxicidad potencial del SNC.

TERAPIA GNICA
Como la enfermedad de clulas falciformes surge de una sustitucin de nucletidos definida en el gen beta-globina, cuya expresin se restringe a las clulas eritroides derivados de clulas madre de mdula sea hematopoytica, la enfermedad de clulas falciformes es un candidato ideal para la terapia gnica.

La terapia gnica podra llevar a un en las cadenas de beta no falciformes, al tiempo que el nmero de cadenas falciformes

TERAPIA GNICA
El objetivo principal ha sido la de aadir un gen beta normal potencialmente modificado para adicionarles propiedades antifalciforme.

TERAPIA ANTISENTIDO
El trmino antisentido se aplica a secuencias cortas de ADN o ARN (oligonucletidos) diseadas para ser complementarias de secuencias gnicas especficas, con el fin de interferir el flujo de informacin gentica.

TERAPIA GNICA

TERAPIA ANTISENTIDO

TERAPIA ANTISENTIDO
La molcula de ARN que va a actuar como molcula teraputica Podr eliminar el ARNm diana o modificarlo

Aadiendo o eliminando fragmentos del ARNm correspondientes a exones alterados o a intrones

Que aparecen en el ARNm de forma anmala.

Alterando el proceso de splicing, promoviendo un proceso conocido como trans-splicing o participando en fenmeno de interferencia por ARN (ARNi).

TERAPIA ANTISENTIDO

Figura 1: Produccin de protenas en la clula

TERAPIA ANTISENTIDO

Figura 2: Inhibicin de la produccin de protenas a travs de molculas antisentido

TERAPIA ANTISENTIDO
1 Desarrollo de mtodos para reparar pre-ARNm causantes de enfermedades mediante el cambio de parte del transcrito.

Estos mtodos pueden estar basados en la maquinaria molecular spliceosoma llamados SMaRT o basados en ribozimas.

En ambos casos se va a producir un reemplazamiento de parte del pre-ARNm por un fragmento libre de mutaciones.

TERAPIA ANTISENTIDO
Los mtodos SMaRT se basan en la introduccin de una molcula de pre-ARNm diseada especialmente para que lleve a cabo el proceso de trans-splicing con la molcula de pre-ARNm diana que se encuentra en el ncleo de la clula. La reparacin del transcrito empleando este mtodo supone el reemplazamiento del fragmento del pre-ARNm que contena las mutaciones causantes de enfermedad por un fragmento sin mutaciones.

TERAPIA ANTISENTIDO
Los mtodos basados en ribozimas emplean estas molculas para llevar a cabo el trans-splicing. Las ribozimas catalizan el trans-splicing entre la molcula de ARNm a la que reconocen especficamente y su regin 3.

El empleo de estos mtodos consigui la reparacin de la cadena beta de la hemoglobina en precursores de la serie eritroide de pacientes con anemia falciforme.