DETERMINACIN DE LA MUTACIN DEL KRAS EN CARCINOMA COLORRECTAL AVANZADO.

Resumen de nuestra experiencia en los dos ltimos aos

Aguirre JJ, Moreno V, Quintero ZS, Jo ME, Gmez C, Gutierrez FB, Felipe I, Guerra I HUA Txagorritxu Vitoria-Gasteiz

Reunin Regional Norte SEAP Pamplona 1612-2011

Determinacin kras en carcinoma colorrectal avanzado

Introduccin Importancia de la determinacin del KRAS Nuestra experiencia

Metodologa

empleada para la determinacin de

la mutacin Resumen de la actividad desarrollada en los aos 2010-2011 Seguimiento de la evolucin clnica de los pacientes

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Importancia de la determinacin del kras

marcador

predictivo de resistencia a la terapia dirigida contra el EGFR.

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Importancia de la determinacin del kras

marcador

predictivo de resistencia a la terapia dirigida contra el EGFR.

kras nativo

Los Ac antiEGFR interrumpen las vas de sealizacin que promueve la progresin tumoral

kras mutado Las vias de sealizacin que promueven la

progresin tumoral permanecen activas

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Mtodos de determinacin:
Mtodos

basados en la Secuenciacin

Secuenciacin

directa Pirosecuenciacin (PiromarkTM KRAS)

Mtodos
PCR

basados en PCR

a tiempo real PCR a tiempo real + ARMS (Therascreen (KRAS, EGFR, BRAF) PCR + hibridacin inversa (KRAS Strip Assay)

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PCR + hibridacin inversa (KRAS Strip Assay)

Sensibilidad

(95-100%) Especificidad (100%) Capacidad de deteccin desde un 1% de alelos mutados. Hibridacin directa en tiras reactivas Fcil interpretacin Relativamente rpido: Informe disponible en 24h desde el inicio de la extraccin del ADN

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Pasos:

Seleccin de la muestra a analizar

reas con ms de un 70% de clulas tumorales. Tumor primario Evitando reas de adenoma y carcinoma in situ.

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Pasos:

Extraccin de ADN (kit QIAampR DNA FFPE TISSUE (QIAGEN))

Amplificacin (PCR) Hibridacin Identificacin de la mutacin (simple vista)

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Revisin
Entre el 01-01-2010 y 30-11-2011 se ha determinado la mutacin del kras en 53 pacientes, 36 hombres y 17 mujeres, con edades comprendidas entre los 24 y los 83 aos (media 64; DE 11). En 32 casos (42%) se detect mutacin en kras mientras que en 31 ocasiones (58%) se inform como no mutado. Todas las mutaciones detectadas se observaron en el codon 12:

50% 12 asp 45% 12 val 5% 12 arg

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Revisin
Edad (media + DE) Sexo (n; %) Hombre Mujer Localizacin primario n (%): Colon derecho Colon transverso Colon izquierdo Recto Estadio en momento del diagnstico n (%): E-I E-II E-IIIa E-IIIc E-IV Metstasis n (%): Hepticas Pulmonares Oseas Cerebrales Ginecolgicas Otras Kras mutado 66 + 8 aos 14 (64%) 8 (34%) 6 (30%) 0 (0%) 4 (20%) 10(50%) Kras nativo 63 + 13 aos 22 (71%) 9 (29%) 4 (13%) 1 (3%) 15 (48%) 11 (35%) sig 0,292 0,573

0,606

1 (4 %) 3 (14 %) 5 (1%) 4 (18%) 13 (59%) 14 (66%) 2 (9%) 1 (5%) 0 (0%) 0 (0%) 7 (33%)

1 (3 %) 4 (13 %) 0 (0%) 5 (16%) 21 (68%) 15 (50%) 3 (10%) 3 (10%) 2 (7%) 1 (3%) 4 (13%)

0,799

0,266 1,000 0,634 0,506 1,000 0,165

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Revisin

Mediana: 162 semanas

42%

P=0,041

Mediana: 81 semanas

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Revisin
Mediana: 176 semanas

Mediana: 176 semanas Mediana: 112 semanas Mediana: 112 semanas

Mediana: 54 semanas

Mediana: 81 semanas Mediana: 54 semanas

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Revisin

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Y ahora que

Buscar factores que pudieran explicar los hallazgos. Repetir la determinacin del KRAS en los pacientes en los que ha fracasado el tratamiento. Determinar posibles mutaciones BRAF en aquellos pacientes con KRAS nativo que no han evolucionado satisfactoriamente. Revisar con el servicio de oncologa los resultados.