Genre Pseudomonas

Les Pseudomonas sont arobies stricts, oxydase positif, mobiles, produisant souvent des pigments diffusibles et naturellement rsistants de trs nombreux antibiotiques. Saprophytes, on les trouve essentiellement dans l'eau. Ils peuvent contaminer des soluts pour perfusion, des solutions antiseptiques, des prparations mdicamenteuses liquides. L'espce principale, Pseudomonas aeruginosa (ou bacille pyocyanique),

 protolytique, production de deux pigments : la pyocyanine (pigment bleu), qui est spcifique de Pseudomonas aeruginosa, et la pyoverdine ou fluorescine qui est prsente chez d'autres Pseudomonas. production d'une exotoxine ncrosante par certaines souches.

 Pseudomonas aeruginosa exprime son potentiel pathogne lorsqu'il est introduit dans des zones aux dfenses immunitaires diminues. Cest un Opportuniste majeur,.

 il est ainsi responsable :

des suppurations pus bleu des blessures et des brlures, d'infections locales iatrognes aprs manoeuvre instrumentale : urinaires aprs cathtrisme, broncho-pulmonaires chez des sujets sous respirateurs, oculaires sur lentille de contact, de septicmies chez les brls, les granulopniques (aplasies toxiques ou thrapeutiques), de surinfection des bronches dans la mucoviscidose, grce la production d'lastase

HABITAT
Les Pseudomonas sont des bactries ubiquitaires que l'on rencontre dans les sols, sur les vgtaux et surtout dans les eaux douces et marines. De nombreuses souches pouvant se dvelopper basse temprature (souches psychrophiles) contaminent les denres alimentaires ou produits pharmaceutiques conservs au rfrigrateur

 On peut occasionnellement les isoler de la flore intestinale de l'homme ou de l'animal mais leur capacit rsister de nombreux antibiotiques et antiseptiques explique leur prsence de plus en plus frquente en milieu hospitalier. Ils se comportent comme des pathognes opportunistes souvent l'origine d'infections nosocomiales.

Pseudomonas aeruginosa (espce type)

Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Pseudomonas stutzeri Pseudomonas mendocina Pseudomonas pseudoalcaligenes Pseudomonas cepacia Pseudomonas pseudomallei Pseudomonas mallei Pseudomonas pickettii Pseudomonas solanacearum Comamonas acidovorans Comamonas testosteroni Pseudomonas diminuta Pseudomonas vesicularis Pseudomonas paucimobilis Pseudomonas fragi Pseudomonas mesophilica Pseudomonas nautica

PSEUDOMONAS AERUGINOSA

 Pseudomonas aeruginosa (Ps.a) ou bacille pyocyanique (bacille du "pus bleu") est de loin, dans le genre Pseudomonas, l'espce la plus frquemment isole en bactriologie mdicale. Commensal du tube digestif mais peu abondant chez le sujet sain, il occasionne de nombreuses infections chez les sujets fragiliss. Il est l'origine de 10% des infections nosocomiales.

Ps.a est une bactrie aquaphile. On l'isole des eaux de toutes provenances : eaux de rivire, d'gouts, de piscine, de mer, eau potable, eaux minrales ou thermales, eaux dminralises ... On la trouve galement sur les vgtaux, lgumes, salades, fruits ou fleurs.

Epidmiologie
Le milieu naturel de Ps.a est l'eau, les sols humides et les vgtaux. Dans les habitations et l'hpital, on peut trouver la bactrie dans tous les rservoirs et conduites d'eau. Chez l'homme en bonne sant, on trouve assez peu de Pseudomonas (de 2 10% de porteurs selon les sites de l'organisme) tandis que chez les hospitaliss ce taux peut atteindre 50% sur certains sites et 60% sur les plaies de brlures ou d'escarres. Bien entendu, ce sont essentiellement les sujets immuno-dprims qui auront ptir de cette colonisation.

 A l'hpital, Ps.a est un germe dangereux parce qu'il s'y trouve en grande quantit et qu'il y rencontre beaucoup de sujets sensibles. La forte densit de ce germe est due la pression de slection exerce par les antibiotiques. Les Pseudomonas sont avec les staphylocoques et les entrobactries les bactries les plus souvent responsables d'infections nosocomiales. Les marqueurs pidmiologiques (srotypes, biotypes, antibiotypes et autres) sont videmment trs utiles pour mener bien les enqutes la recherche d'une source de contamination hospitalire.

 La principale source de contamination est la flore endogne des malades eux-mmes mais l'environnement est galement incrimin. L'eau des vases de fleurs, les plantes en pot, les fruits et lgumes consomms crus, les eaux des viers, des siphons, les arosols vise thrapeutique ou crs par des manipulations de rcipients contenant des liquides, les humidificateurs, les solutions "antiseptiques" sont des sources potentielles. La transmission d'un malade un autre est souvent manuporte ou iatrogne, surtout par les cathters, sondes, canules, masques ou lunettes pour oxygnothrapie.

Caractres morphologiques
Ps.a est un bacille Gram ngatif, non sporul, trs mobile grce un cil polaire. La membrane externe contient des porines dont le nombre et la taille, susceptibles de varier, conditionnent la permabilit aux antibiotiques. La structure du LPS (lipopolysaccharide) de cette membrane est galement trs htrogne.

Caractres culturaux
La culture est facile sur milieux ordinaires. Elle se fait strictement en arobiose. La temprature optimale de croissance est 30C mais les souches d'origine humaine, rputes pathognes, supportent des temprature plus leves et se dveloppent jusqu' 41C, contrairement aux souches de l'environnement. Une odeur caractristique de fleur de seringa s'exhale des cultures.

 Un milieu slectif contenant un driv d'ammonium quaternaire : le ctrimide ou CtavlonR (bromure de N-cetyl-N-N-N trimethylammonium) et de l'acide nalidixique permet l'isolement de Ps.a de prlvements plurimicrobiens.

Aspect Sur Glose Ctrimide

Pigments
Ps.a produit deux pigments qui diffusent dans le milieu de culture : la pyocyanine, bleu vert, soluble dans le chloroforme et la pyoverdine, jaune vert, fluorescent et soluble dans l'eau. Il existe de rares souches produisant d'autres pigments (noir: pyomlanine ou rouge: pyorubrine) mais surtout 10% de souches sont non pigmentes. La production de pigments est favorise sur les milieux de King "A" pour la pyocyanine et "B" pour la pyoverdine.

Caractres biochimiques
Ps.a n'est pas capable de fermenter les sucres mais peut les attaquer (le glucose en particulier) par voie oxydative, entranant une acidification du milieu. Les milieux MEVAG (Milieu pour l'Etude de la Voie d'Attaque des Glucides) ou de Hugh et Leifson sont spcialement destins mettre cette proprit en vidence.

 -". Le milieu de Kligler en particulier apparat rouge en surface (lactose -) et inchang en profondeur (pas de culture en anarobiose et pas de production d'H2S). En surface, la culture prsente des reflets mtalliques assez vocateurs.

 Ps.a possde une oxydase. D'autres caractres sont utiles pour le diagnostic d'espce :
Indole -, ure -, TDA - (tryptophanedsaminase), H2S -, glatine + ONPG - (orthonitrophnyl-galactose) Nitrate-rductase + LDC - (Lysine-dcarboxylase), ODC (Ornithine-dcarboxylase), ADH + (Argininedeshydrognase).

C morphologiques Bacille Gram Acapsul Asporul Mobile polaire lophotriche Taille C culturaux Conditions physico chimiques Atmosphre : arobie stricte Ph optimum : 7,2 Temprature optimum: 30 37C Dure dincubation: 18 24 h Exigences nutritionnelles : peu (BO, GO) Milieux M ordinaires : BO, GO M slectifs : glose cetrimide , pas de bouillon slectif Aspects sur les milieux

 Aspects sur les milieux BO : voile la surface du bouillon, tout le bouillon sera vert ou bleu, odeur de seringa quand on dbouche le tube GO: S, R, M = P aruginosa mucoide (Muscoviscidose) / Slime ou Zoogle, colonies sont pigmentes : bleu, vert, noire, rouge et odeur daccacia glose cetrimide : colonies sont blanches avec un halo vert de pigment C biochimiques Mtabolisme respiratoire : Type respiratoire : arobie strict Enzymes respiratoires : Oxydase+, nitrate rductase +, Mtab glucidique : Substrat : lactose ng, Enzymes : B galactosidae ng. Mtab protidique: Substrat : Gelatine+, ure neg, Mtabolites : indole neg, H2S neg, Enzymes : LDC neg, ODC neg, ADH pos TDA neg

 Ps.a est capable d'utiliser de nombreux substrats carbons comme seule source de carbone et d'nergie : glucose, acide lactique, acide actique, arginine, mannitol, citrate, malonate ... La ralisation d'un test d'assimilation des substrats carbons ou auxanogramme est utile pour reconnatre l'espce et diffrencier les biotypes..

Gntique
Ps.a possde de nombreux plasmides transfrables par conjugaison ou par transduction et la plupart des souches sont multilysognes ; ceci explique les nombreuses variations gntiques qu'on observe dans l'espce avec pour consquence, en particulier, la frquence des souches polyrsistantes aux antibiotiques.

Facteurs de virulence : Enzymes, Toxines

Ps.a produit de nombreuses substances diffusibles dont la plupart ont des effets toxiques.
- l'exotoxine A, compos protique le plus toxique, produit en
quantit trs variable selon les souches. Elle prsente des similitudes de structure et de mode d'action avec la toxine diphtrique mais ne peut tre transforme en anatoxine - l'exotoxine S, moins toxique, surtout prsente dans les souches responsables de pneumopathie - des protases (protase, lastase, collagnase) d'assez faible toxicit mais occasionnant nanmoins des dgts tissulaires - des hmolysines, glycolipide et phospholipase C agissant en synergie - une cytotoxine, de structure protique, altrant les leucocytes

 Toxines, enzymes, endotoxine du LPS, pili mais aussi sidrophores et slime constituent des facteurs de virulence.

Marqueurs pidmiologiques
Quand plusieurs infections dues une mme espce bactrienne surviennent dans un service hospitalier, il faut vrifier sil sagit dune pidmie ; dans ce cas la mme souche est l'origine de toutes les infections et toutes les bactries isoles possdent les mmes caractristiques. Certains lments phnotypiques, suffisamment discriminants, peuvent, dans ce but, tre utiliss comme "marqueurs pidmiologiques".

En ce qui concerne Pseudomonas aeruginosa, ces marqueurs sont nombreux. srotypie

Il existe chez Ps.a un antigne somatique O thermostable dont on connat actuellement 20 variants. Ces antignes sont la base d'une classification srologique (Habs). On ne dispose, en pratique courante, que de 16 antisrums spcifiques anti O:1 O:16. Ces srums sont galement prsents sous forme de pool contenant chacun 4 antisrums et dsigns A, C, E, F. Il existe des souches non srotypables parce qu'elles sont de type R, muqueuses, non agglutinables ou poly- agglutinables. Les srotypes O:6 et O:11 sont les plus frquemment isols en bactriologie mdicale. Le srotype O:12 est souvent trs rsistant aux antibiotiques.

 lysotypie
Ps.a est trs facilement lys par des bactriophages et la sensibilit des souches l'effet lytique d'une batterie de ces phages permet de distinguer des lysotypes.

bactriocinotypie :
Ps.a produit des bactriocines (pyocine ou aruginocine) doues d'un effet bactriostatique l'gard d'autres souches

 - biotypie.
Pigmentation, hydrolyse de la glatine, test ONPG, assimilation de l'arginine sont des caractres qui permettent de distinguer des biotypes au sein de l'espce.

antibiotypie.
La similitude des rsultats de l'antibiogramme est un bon argument pour suspecter l'identit de plusieurs souches isoles.

 Les rsistances acquises sont dues une impermabilit accrue de la membrane externe (modification des porines) ou la production d'enzymes inactivantes. Ces deux mcanismes peuvent coexister et conjuguer ainsi leurs effets.-

Antibiogramme
Ps.a est rput pour sa rsistance aux antibiotiques qui pose de srieux problmes thrapeutiques et favorise sa dissmination en milieu hospitalier. La rsistance naturelle du bacille pyocyanique relve d'une mauvaise permabilit de la membrane externe et de la production constante d'une btalactamase inductible.

Merci de votre attention