TECNICAS HISTOLOGICA

La tcnica histolgica es una serie secuencial de pasos a travs de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Sinopsis general
Obtencin

Montaje

Fijacin

Coloracin

Inclusin

Corte

HISTOQUIMICA
La histoqumica es el conjunto de tcnicas de coloracin destinadas a visualizar sustancias especficas en los tejidos. Puede realizarse con fines diagnsticos y desde ya resaltemos que los procedimientos histoqumicos se convirtieron en un instrumento invalorable en el diagnstico y/o pronstico de innumerables enfermedades.

DETECCIN DE LPIDOS
El procedimiento utilizado ms frecuentemente en la demostracin de los lpidos consiste en su tincin con un colorante del grupo de los Sudanes o del Aceite Rojo 0. El osmio es un fijador que insolubiliza a los lpidos y al mismo tiempo les imparte un color oscuro, por lo que en ocasiones se lo utiliza como fijador y a la vez colorante en preparados de microscopa ptica.
Corte por congelacin de hgado teido con Sudan IV, colorante liposoluble, que tie de rojo las grasas neutras, aqu en forma de gotas pequeas y medianas. 500x.

DETECCION DE HIDRATOS DE CARBONO

Existen tcnicas histoqumicas para detectar glcidos, protenas y nucletidos. La tcnica histoqumica ms empleada es la reaccin de PAS (Periodic Acid Schiff). Se utiliza para la deteccin de hidratos de carbono, libres o conjugados, en los tejidos cuando estn en cantidades relativamente grandes.

Aspecto del material inyectado cuando se examina con la tcnica de P.A.S. para carbohidratos ( grupos aldehdos). Existen reas dbilmente positivas (*).

METACROMASIA
La propiedad de teir ciertos componentes celulares con un color que difiere del original del propio colorante se denomina metacromasia. Es caracterstica de algunos colorantes bsicos del grupo de las tiazinas, especialmente la tionina, azur B y azul de toluidina, al colorear molculas con grupos cidos ubicados de modo repetitivo y muy prximos entre s. Por oposicin, la propiedad de los colorantes teir con su color original se denomina ortocromasia.

Ntese la metacromasia del citoplasma en las neuronas alteradas.

DETECCION DE PROTEINAS.
Se conoce como acidofilia y basofilia a un conjunto de coloraciones basadas en el comportamiento de las diferentes protenas a las variaciones del pH. La ionizacin cida se produce por los grupos carboxilo (.COOH), hidroxilo (-OH), sulfato (.HSO4) o fosfato (.H2PO4). En las protenas la ionizacin bsica se realiza en el grupo amino (.NH2) y en otros grupos bsicos. Si el pH del medio en el que se realiza la coloracin es superior al punto isoelctrico, los grupos cidos se ionizan y si es menor, se ionizan los grupos bsicos.

Impregnacin argntica El nitrato de plata, en condiciones muy controladas de concentracin, pH y salinidad del medio, precipita sobre grupos amino libres muy caractersticos de algunas protenas permitiendo su identificacin.

Criptococosis renal. Impregnacin argntica (Gomori-Groccot). Ntese la presencia de levaduras en el seno de un glomrulo cortical y la existencia de formaciones microqusticas, conteniendo levaduras, con la consiguiente destruccin de los penachos capilares glomerulares.

DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Los mtodos citoqumicos para cidos nucleicos dependen de las propiedades de los tres componentes que constituyen sus nucletidos (pentosa, cido fosfrico y base nitrogenada). La basofilia est originada por la presencia de los grupos fosfato, tanto del ADN como del ARN y para ella son muy utilizados el Azur B y el azul de toluidina a pH muy bajo. El verde de metilo en ciertas condiciones colorea principalmente al ADN, y la pironina al ARN. Utilizando el colorante anaranjado de acridina sobre un corte de tejido, luego de la acetilacin, es posible obtener una fluorescencia verde para el ADN y roja para el ARN.

Hibridacin in situ: La hibridacin in situ consiste en la deteccin de secuencias muy especficas de un cido nucleico a travs de su capacidad de aparearse con una secuencia complementaria. Esta tcnica se implementa usualmente para el ADN, consistiendo su primer paso en separar las cadenas del mismo (desnaturalizacin), por medio del calentamiento a 90 C. A continuacin se incuba el corte con una secuencia de ADN de simple cadena y complementaria con la que se quiere investigar conocida como sonda y que se ha marcado de alguna manera Posteriormente se visualiza con alguno de los sistemas similarmente a como se lo hace para la inmunohistoqumica.

Los principales tipos de hibridacin in situ son:

1) La hibridacin no fluorescente de ADN, utilizada frecuentemente para detectar : virus y otros microorganismos con ADN, para identificar copias simples de genes individuales, y para identificar traslocaciones y otras anomalas cromosmicas. 2) La hibridacin no fluorescente de ARN mensajero, empleada para el estudio de la expresin de genes a nivel celular y subcelular.

3) La hibridacin fluorescente de ADN (FISH), de gran utilidad para realizar el cariotipo del ncleo en interfase.