Métodos

inmunoanalítico
s
 MÉTODOS
INMUNOANALITICOS
• Características de un inmunoanálisis 
•  Marcadores de antígenos y anticuerpos 
•  Ensayos homogéneos y heterogéneos 
•  Clasificación 
• Métodos inmunoanalíticos sin marcadores 
• Analizadores  automáticos  para 
inmunoanálisis nefelométrico y turbidimétrico.
 MÉTODOS
INMUNOANALITICOS
 Visión global
• Visualizar
(con instrumentos)
Visualización
• Marcador

• Homogéneos
Separación • Heterogéneos

• Competitivos
Reacción
• No competitivos
 Clasificación
• Sin marcador
– Inmunoprecipitación
Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
– Aglutinación
Particuloinmunoanálisis
• Con marcador
– Enzimoinmunoanálisis
– Fluoroinmunoanálisis
– Radioinmunoanálisis
– Quimioinmunoanálisis
 Inmunoprecipitación
• Precipitación (formación de un complejo
visible) resultante de la combinación de un
antígeno y un anticuerpo

– Simple - Radial
– Doble - Cohete
– Electroinmunodifusión
– Inmunoelectroforesis
 soluble

insoluble

Antígeno Anticuerpo soluble

 Inmunodifusión radial

y = bx+a
y = (diametro)2
b = pendiente
Título

Inmunodifusión
doble
Identidad antigénica: Se fusionan las líneas
Identidad antigénica parcial: aparece “espolón”
Falta de identidad: Se cruzan
Electroinmunodifusión
Electroforesis
Inmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis en
cohete
 Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría

1 .-Inmunoprecipitación
2.- Detectarlo por métodos ópticos basados en la
dispersión de la REM

ID

λ
Región ID
UV
visible I0
IR
 Dispersión de luz según el tamaño de
partícula
Partículas grandes
Rayleigh

Tamaño partícula < λ

Inmunoturbidimetría e
inmunonefelometría
Particuloinmunoanálisis
Detección mediante técnicas basadas en dispersión

Nefelometría

Turbidimetría

REM dispersada Turbidimetría y nefelometría

 Inmunoturbidimetría e
inmunonefelometría

Nefelometría

Turbidimetría

REM dispersada Turbidimetría y nefelometría

Turbidancia = log I0/I

Señal a 90º
 Lectura a punto único

Punto
final Segunda lectura

Señal Señal

Atg Ac

Tampón Atg+Ac
1ª lectura

Tiempo Tiempo
 Lectura múltiple

Zona de medida Zona de seguridad

Señal

Concentración de antígeno

Intervalos de tiempo de 0,1 y 0,2 s

Análisis nefelométrico en flujo
continuo
Proteinas que se pueden determinar por
inmunonefelometria
 Aglutinación

Reacción inmunoquímica que produce la formación de

agregados insolubles de “partículas” (células, bacterias,
perlas..) recubiertas con antígenos o anticuerpos.
- Directa
- Indirecta
Prueba de Combs (directa e indirecta)
- Inhibición de la aglutinación
1 Atc (completo)+Ag 1 Atc
(incompleto)+Ag
2 Aglutinación
2 NO Aglutinación
Aglutinación indirecta
Aglutinación directa

Tratamiento de eritrocitos con enzimas

 Demostrar presencia de anticuerpos incompletos (no aglutinantes)contra
antígenos ABO y Rh de los eritrocitos
utilizando antiinmunoglobulina como segundo anticuerpo

Detecta el AC
en los
eritrocitos

Analiza el
suero para
buscar
anticuerpos lavado
 Particuloinmunoanálisis

• Sin marcador homogéneos

– Miden la aglutinación como
señal de la reacción atg- ac
– Partículas:
– Inorgánica: metal
– Biológica (Celular):
microorganismo,
eritrocito
– Orgánica inerte:
Polisacárido,
bentonita, liposomas
Latex
Aglutinación

Determinación de antígenos

Determinación de
anticuerpos
Inhibición de la aglutinación
Compiten
 Factor reumatoide
No se une al anticuerpo aislado,sí se une cuando cuando forma complejos
ELISA
WESTERN BLOT
CITOMETRIA D E FLUJO
 Sensibilidad

MÉTODO SENSIBILIDAD (µg/ml)

Precipitación en gel 30

Precipitación en anillo 18

Aglutinación bacteriana 0,05

Fijación de complemento 0,05

Hemaglutinación pasiva 0,01
Inhibición de la hemaglutinación 0,005

Inmunofluorescencia 0,005

ELISA 0,0005

Neutralización bacteriana 0,00005