BIOTRANSFORMACION Y STRESS OXIDATIVO y PATOLOGIAS ASOCIADAS

Por Roxana Jurez Bueno.

Polaridad
pKa

BENCENO FENOL
FENILGLUCORONATO

10 3,4

% ionizacin (a pH 7,4) 0,25% 99,99%

REACCIONES DE BIOTRANSFORMACION

EN FASE I : OXIDACION REDUCCION HIDROLISIS

REACCIONES DE BIOTRANSFORMACION

EN FASE II: REACCIONES DE SINTESIS Y CONJUGACION

Fase I: Citocromo P450

Las enzimas de Biotransformacin

Metabolizan compuestos qumicos diferentes Tienen baja especificidad de sustrato Son inducibles por xenobiticos

CYP

I Familia (40-55% de similitud) A Subtipo (ms del 55% de similitud) 1 Producto del gen (especfico)

PRINCIPALES CYP HUMANOS Y SUSTRATOS SOBRE LOS QUE ACTUAN (Tomada De Hodgson y Goldstein) CYP1A Enzima 1A1 y 1A2 HC aromticos policclicos. Cafeina, fenacetina CYP1B Enzima 1B1 Algunos HC aromticos policiclicos, 17 b-estradiol CYP2A Enzima 2A6 Cumarina, (metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanona (NNK), nitrosamina del tabaco, nicotina CYP2B Enzima 2B6 4-hidroxi-ciclofosfamida, S-mefentoina-demetilacin, algunos barbitricos, 7-etoxi-4-trifluorometilcuramina (7EFC) CYP2C Enzimas 2C19 , 2C9 y 2C8 S-Mefenitoina (anticonvulsionante), ometrasol (antiulceroso), proguanil (antipaldico), ciertos barbitricos, diazepan (valium), propanolol (b-bloqueador), imipramina (antidepresivo), algunos herbicidas. Fenitoina (anticonvulsionante), drogas anti-inflamatorias como el ibuprofeno, warfarina (anticoagulante, tolbutamida (antidiabtico). Taxol. Ac- retinoico

CYP2D Enzimas 2D6 Antihipertensivos:debrisoquinab-bloqueantes:metoprolol, propanolol, bufuralolAntidepresivos: nortriptilina, desipramina, clomipramina.Neurolpticos: tioridacina, perfenazina, trifluperidol, clozapina Opiaceos:dimetilacin de codena a morfina CYP2E Enzima 2E1 Alcohol, tetracloruro de carbono, benceno, acetaminofen, activa nitrosaminas a mutgenos y carcingenos CYP3A Enzimas 3A4, 3A5 y 3A7 60% de drogas usadas como: eritromicina, nifedipina (antihipertensivo), lidocaina (anestsico), ciclosporina (droga inmunodepresiva), 17-etnilestradiol (estrgeno de reemplazo), tamoxifeno (CA pecho), lovastatina, dapsona (lepra), testosterona, cortisol . Mismo patron de sustratos que CTP3A4 Forma fetal : metaboliza sustratos del CYP3A4 CYP4A Enzima 4A11 Acidos grasos, clofibrato (droga hipolipidmica)

Citocromo P450

CYP
Exposicin aguda
Cirrosis CYP

Inhibicin
Inhibicin Exposicin cronica induccin

Agentes que afectan el sistema microsomal

INDUCEN

INHIBEN

Fenobarbital 3-Metil colantreno Insecticidas: - Der. Hidrocarburos - Halogenados Herbicidas Aceites voltiles Agentes colorantes Nicotina Preservantes de alimento Xantinas, Flavinas Perxidos orgnicos

Piperonil butoxido SKF 525 A Insecticidas - Organo fosforados Pesticidas: derivados del ncleo metilendioxifenico Tetracloruro de carbono monxido de carbono Ozono Flavonoides

Peroxisomas
Leucocitos

Enzimas

ROS

Xenobioticos

Cadena respiratoria

Transporte de electrones cad. Resp. Mitocondrial

Fuentes endgenas de ROS

Metabolismo de xenobiticos

NADH desh Autooxidacin de CoQ

Peroxisomas:

Herbicidas, contaminantes, Farmacos, Hiperoxia, Irradiacin Metabolismo de cidos grasos

Leucocitos polimorfonucleares:

Otros sistemas enzimticos

NADPH oxidasa

Xantina oxidasa Lipooxigenasa Ciclooxigenasa Citocromo P450 REL Vegetales, estrs fotooxidativo cloroplastos

Factores ambientales frmacos, tabaco, alcohol, polucin, agentes qumicos, dieta Factores genticos Polimorfismos Factores multignicos Errores congnitoFactores endgenos Edad, sexo Estados hormonales Tratamientos teraputicos Enfermedades hepticas Otras enfermedades

GLUCURONIZACION Radical: OH, NH o SH. Glucoronil tranferasa (RE) Donador activado: UDP-Glucornido Conjugados solubles excresin orina y bilis
2

SULFATACION Sulfato activado PAPS a radical OH o NH2 Sulfotransferasa (ciltosol) Producto sulfato orgnico ionizado Excresin orina

AMINOACIDACION

Glicina a radical carboxilo Conjugado se elimina por orina

GLUTATIONIZACION Glutation (GSH) a un carbn electroflico Glutation-S-transferasa Producto Cis-derivado-acetilado: cido mercaptrico

METILACION Metilacin del arsnico Metilo a radical: OH, NH2, SH Enzima metil-transferasa Donador SAM

Capacidades y Afinidades de las Reacciones de Conjugacin

Reaccin Capacidad Glucuronidacin Alta Aminoacidacin Media Sulfatacin Baja Glutationizacin Baja Acetilacin Variable Afinidad Baja Media Alta Alta Variable

La bioactivacin

Figura .- Fase I y II de la biotransformacin de los productos qumicos. En cada etapa intervienen distintos grupos enzimticos codificados por diferentes genes especficos; AGT: transferasas del cido glucuronico; GST: transferasa del glutation; NAT: N-acetil transferasas

Rutas de Bioactivacin:

El tejido blanco bioactiva el xenobitico y es el sitio activo para la especie txica. Ej. tetracloruro de carbono va deshalogenacin por el P-450 del hgado.
Un tejido no blanco bioactiva al xenobitico, el cual experimenta otra bioactivacin en el tejido blanco. Ej, el benceno es oxidado a fenol por los P-450 del hgado y en mdula sea se transforma en hidroquinol, un diol que causa dao en la mdula sea. Un tejido no-blanco bioactiva el xenobitico, el cual tiene sus efectos en el tejido blanco. Ej: el hexano se transforma en 2,5-hexanodiona por la accin del P-450 y la alcohol deshidrogenasa del hgado. Este metabolito produce ligaduras cruzadas en los neurofilamentos causando dao en nervios perifricos.

Bioactivacin del Oxgeno

Especies reactivas de oxgeno

O2 R. Fenton O2.H2O2

Haber-Weiss
Fe2+ Fe3+ ADN LIPIDOS HO. + HO-

CH PROTEINAS

Generacin de especies reactivas de Oxgeno

1O2
Singlet Ntrico

O2
NO+ O2-.
Oxigeno

NO.
Oxido

Superxido

ONOO.

Peroxinitrito
ROO.
Lipoperxido

Nitrosilacin protenas

H2O2
Peroxido de H

.OH
Hidroxilo

Oxidacin de protenas Oxidacin del DNA

Lipoperoxidacin

FRAGMENTACIN DEL DNA (Ishida et al., 1992)

Fuentes endgenas de radicales libres

Cadena respiratoria

Metabolismo de xenobiticos

NADH desh Autooxidacin de CoQ

Peroxisomas:

Herbicidas, contaminantes, Farmacos, Hiperoxia, Irradiacin Metabolismo de cidos grasos NADPH oxidasa

Leucocitos polimorfonucleares:

Otros sistemas enzimticos

Xantina oxidasa Lipooxigenasa Ciclooxigenasa Citocromo P450 REL Vegetales, estrs fotooxidativo cloroplastos

Efectos Biolgicos de ROS

Alteracin de macromolculas Alteraciones bioqumicas y fisiolgicas (Dao) ROS en concentraciones fisiolgicas, participan como mediadores de vas de Estado Prooxidante o de estrs oxidativo trasduccin de seales:

Proliferacin celular, diferenciacin, apoptosis

Cadena Respiratoria Mitocondrial

Citocromo P450

Fase I y II de la biotransformacin de los productos qumicos. En cada etapa intervienen distintos grupos enzimticos codificados por diferentes genes especficos; AGT: transferasas del cido glucuronico; GST: transferasa del glutation; NAT: N-acetil transferasas

Efectos Biolgicos de ROS

Alteracin de macromolculas Alteraciones bioqumicas y fisiolgicas (Dao) ROS en concentraciones fisiolgicas, participan como mediadores de vas de Estado Prooxidante o de estrs oxidativo trasduccin de seales:

Proliferacin celular, diferenciacin, apoptosis

Factor de transcripcin AP-1 unido a la doble hlice de ADN

Lipoperoxidacin

Priones
Priones emplean las defensas contra el estrs oxidativo de la clula para formar agregados tumorales de tipo amiloide semejantes a la enfermedad de Hungtinton y Alzheimer
Yury Chernoff Ph.D.,Biology, St. Petersburg State University (Russia), 1985

Lipoperoxidacin

Iniciacin: LH Propagacin: L . + O2 LOO . + LH Terminacin: LOO . + LOO .

L. LOO . LOOH LO
+

L.

LOH

+ 1O2

Antioxidante: LOO. + VIT E

LOOH

VIT E (oxidada)

Patologas asociadas al stress oxidativo

Patologas asociadas al stress oxidativo

Inflamacin Inicio del Ateroma (OH colesterol) Cataratas, Fibroplasia retrolental Envejecimiento:

Citotoxicidad por xenobiticos Citotoxicidad por exceso de Metales

Arterioesclerosis Alzheimer Parkinson

Cncer Stress oxidativo por isquemia y reperfusin Etc

Hemocromatosis, Acoholismo, Desnutricin

Retinopata La leccin de la Fibroplasia Retrolental

Fibroplasia retrolental

Corte histolgico del globo ocular en donde se aprecia una retina replegada en forma de paraguas.

Copriright. Dr.Manuel Carpajo Vicente 1997

Isquemia y Reperfusin
Isquemia [O2] Perfusin Ca2+

Extracelular
ATP ADP AMP HPX Xantina OXD DAO Cell LOO. O2.Ac. Urico

Intracelular Proteasas

Xantina DSH

Encefalopata Hipxica Neonatal

Lesiones cutneas e infecciones en un caso de Kwashiorkor

Hgado con hemocromatosis

Enfisema

Enfisema Pulmonar Obstructiva Crnica

Vitligo

Origen auto-citotxica ( inhibicin de la tioredoxin-reductasa), un bloqueador de radicales libres localizado en la membrana de los melanocitos. Radicales sperxidos aumentados llevan a la inhibicin de la tirosinasa provocando la vacuolizacin y eventualmente la muerte celular. Los niveles de catalasa son reducidos en toda la piel. Los melanocitos tienden a crecer poco y mueren prematuramente.

Reacciones Inmune mediadas por inflamacin en Esclerosis Mltiple

Estrs oxidativo Liberacin Glutamato
Excitotoxicidad

Produccin de Radicales libres Destruccin de Mielina

Oligodendrocito Neurona

Necrosis Oligodendrocito
Bloqueo Neuronal

Apoptosis o Necrosis

Cataratas Diabticos

American Academy of Ophthalmology

Pterigium

Envejecimiento

Alois Alzheimer

Placas senil clsica

Neurona que contiene entramado neurofibrilar

Cell 1988;52:487-501.

Cambios estructurales de PBA incrementan depsitos de laminillas beta neurotxicos

Procesamiento de la protena precursora amiloide APP

Proc Natl Acad Sci U S A 2000 May 23;97, 5690-5692.

FEBS Lett 2000 483:6-10.

Posibles funciones del stress oxidativo en la patognesis de la Enfermedad de Alzheimer

Neurochemistry 1998;71: 2094-103 Biochem Biophys Acta 1998;1425:469-477.

Estudios en ratones transgnicos sugieren aumento de micro agregados solubles, no reconocibles como placas de PBA son suficientes para producir estrs oxidativo. Am J Pathol 1998;152:871-877

Sntoma precoz de la Enfermedad de Alzheimer

Melatonina

Atrapador de RL. J Neurosci 1997;17:4212-4222 Agente antioxidante del sistema nervioso. Nature Med 1996;2:1146-1150

Proteccin ejercida por melatonina en neuronas del hipocampo (fetos de rata) contra neurotoxicidad de la PBA

Toxicol Appl Pharmacol 1997;144:377-384.

Estrs Oxidativo en la enfermedad de Parkinson

Incremento de peroxidacin lipdica de membrana en sustancia nigra (Dexter 1989) Incremento de malondialdehido Reduccin de receptores para Dopamina Reduccin de neuronas dopaminrgicas Formacin de H2O2 y .OH Reduccin de glutation

Enfermedad de Parkinson

Mutaciones en el brazo largo del cromosoma 4, sntesis de una sinuclena anmala seran detectados en pacientes con enfermedad de Parkinson
Nature 338: 232-233 (julio 17), 1997 Science 277: 180-181; 228-231(julio 11), 1997 ; 276: 1.973-1.974; 2.045-2.047 (junio 27); 1997

Estrs Oxidativo en la enfermedad de Parkinson

Incremento de peroxidacin lipdica de membrana en sustancia nigra (Dexter 1989) Incremento de malondialdehido Reduccin de receptores para Dopamina Reduccin de neuronas dopaminrgicas Formacin de H2O2 y .OH Reduccin de glutation

Agentes Protectores contra el stress oxidativo

Nivel Intracelular: SOD Catalasa Glutation Peroxidasa Glutation Reductasa Glutation reducido Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa Taurina e Hipotaurina Glucosa, Ac Urico

Agentes Protectores contra el stress oxidativo

A nivel de Membrana: Vitamina E Vitamina A Vitamina C (Ac. Ascbico) Glutatin

Agentes Protectores contra el stress oxidativo

A nivel extracelular: Taurina e Hipotaurina Albmina Transferrina Ceruloplasmina

Defensas antioxidantes

Enzimticas No Enzimticas

Scavenger Quelantes de iones Aceptores de electrones

Superoxido dismutasa: 2O2.- + 2H+ H2 O2 Catalasas: H2 O2 + H2 O2 2H2 O H2O2 + AH2 2H2 O Glutation Peroxidasas: H2 O2 + 2GSH 2H2 O ROOH + 2GSH ROH Glutation Reductasa: GSSG + NADPH + H+

Enzimas antioxidantes

+ O2 + A + GSSG + H2 O + GSSG
2GSH

+ NADP+

Defensas No Enzimticas

Glutation (GSH) Retinoides (Vit. A) Tocoferoles (Vit. E) Ac. Ascrbico (Vit. C) Ubiquinol (Coenzima Q reducida) Carotenoides Polifenoles (Flavonoides) Taurina e Hipotaurina Monosacridos

Capacidad antioxidante total Mtodos

Peroxidacin de lpidos:

Malondialdehido o dienos conjugados en orina

Quimioluminiscencia inducida por hidroperoxido Ensayos en luminol Ensayo TRAP (Total radical trapping parameter) Ensayos basados en DCFH-DA Ensayo FRAP (Ferric reducing ability of plasma):

Fin