METODOS DE ANALISIS EN

BIOQUIMICA
Benjamn Paz Aliaga Profesor Principal de la UCSM Profesor Emrito de la UNSA 2009-2010

METODOS MAS FRECUENTEMENTE USADOS

1. Mtodos Fotocolorimtricos 2. Anlisis por Sedimentacin ( Ultracentrifugacin) 3. Cromatografa 4. Electroforesis 5. Mtodos Radioisotpicos

ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

FOTOCOLORIMETRO

Espectros de absorcin de luz de diferentes sustancia

ULTRACENTRIFUGA

ROTOR DE LA ULTRACENTRIFUGA

LAS MOLCULA PEQUEAS SEDIMENTAN LENTAMENTE

LAS MOLCULAS GRANDES SEDIMENTAN MA RAPIDAMENTE

CROMATOGRAFIA
1. 2. 3. 4. 5. 6. Cromatografa por adsorcin Cromatografa de reparto o de particin Cromatografa por intercambio inico Cromatografa de filtracin molecular Cromatografa de filtracin en gel Cromatografa de afinidad

SUSTANCIAS QUE SE SEPARAN BIEN POR CROMATOGRAFIA AL PAPEL

Aminocidos Azcares Pptidos pequeos Bases nitrogenadas Nucletidos

Sustancias que se separan bien por TLC

Aminocidos Azcares Pptidos de bajo PM Nucletidos Esteroides Acidos grasos

REVELADORES USADOS FREUENTEMENTE EN TLC

Ninhidrina para aminocidos Dinitrofenilhidrazina para cetocidos Rodamina B para los lpidos Cloruro de antimonio para los esteroides y terpenoides Vapores de bromo para las oleofinas

Rf

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA ( TLC)

CROMATOGRAFIA DE GAS
MATERIAL DE EMPAQUE:
Tierra e diatomeas Microbolas de vidrio Tefln el polvo
Impregnados en un lqido no volatil, como aceite de silicona, plietilen glicol

FASE ESTACIONARIA

FASE MOVIL : GAS ( He, Ar, N, etc?

CROMATOGRAFIA DE GAS
Permite identificar:
Alcoholes Esteres Acidos Grasos Aminas

Es my sensible, permite identificar sustancias que est a concentraciones tan pequeas como picogramos o aun menores

SEPARACION DE PROTEINAS MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

SOLVENTES USADOS EN LA CROMATOGRAFA DE ADSORCION

Eter de petrleo Tetracloruro de carbono Fenol Acetona Disminucin de la polaridad Benceno Metanol Etanol Agua

Aumento de la polaridad

MATERIALES USADOS EN LA CROMATOGRAFIA DE ADSORCION Y LAS SUSTANCIAS QUE MEJOR SEPARAN MATERIAL Almina Gel de slice Carbon activado Fosfato de calcio Hidroxiapatita SUSTANCIAS QUE SEPARAN Pequeas molculas orgnicas, protenas Esteroles, aminocidos y lpidos Pptidos, aminocidos azcares Protenas, polinucletidos Acidos nucleicos

CROMATOGRAFIA POR INTERCAMBIO IONICO

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

SOPORTES SOLIDOS Y LOS GRUPOS UNIDOS SP-Sephadex DEAE- Sephadex CM-Celulosa DEAE -Celulosa P-Cel ( Celulosa) Dowex AG-50 (Estireno) Sulfopropilo Dietilaminoetilo Carboximetilo Dietilaminoetilo Fosfato Divinilbenceno Acido Sulfnico

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Util para la separacin de aminocidos, protenas, nucletidos, pptidos y en general cualquier molcula que tenga grupos ionizables

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

INTERCAMBIADOR CATIONICO SO3
NH3-CH-COOH
R
+

CROMATOGRAFIA POR ULTRAFILTRACION MOLECULAR

CROMATOGRAFIA POR

AFINIDAD

Protenas que se unen a la tubulina seleccionadas por cromatografa por afinidad

HPLC

CROMATOGRAFIA POR INTERCAMBIO IONICO

Catodo (--)

- globulina - globulina -2 globulina

-1globulina albmina

Anodo (+)

ELECTROFORESIS AL PAPEL

ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN GELES DE POLIACRILAMIDASDS (PAGE)

Miosina
Galactosidasa Glucgeno fosforilasa Sero albmina Ovoalbmina Anhidrasa carbnica Inhibidor de tripsina

Figura 7.8 Resultado de la electroforesis de una protena desconocida en PAGE en comparacin con otras protenas de PM conocido

Lisozima

Protena desconocida

Miosina
Galactosidasa Glucgeno fosforilasa Sero albmina Ovoalbmina Anhidrasa carbnica Inhibidor de tripsina

Figura 7.8 Resultado de la electroforesis de una protena desconocida en PAGE en comparacin con otras protenas de PM conocido

Lisozima

Protena desconocida