SINDROME DE PROTEUS

Una mutacin activadora del mosaico en AKT1 asociados con el sndrome de Proteus

GALLARDO MARTINEZ BRYAN RAUL URIAS REYES IVAN EDUARDO

PROTEUS SYNDROME
El sndrome de Proteus se caracteriza

por el crecimiento excesivo de la piel, tejido conjuntivo, rganos, cerebro y otros tejidos.
Junto con la susceptibilidad al

desarrollo de tumores

I N T R O D U C T I O N

PROTEUS SYNDROME
Descrito en 1979 por Cohen y Hayden.

El sndrome no es frecuente. Incidencia menos de 1 caso por 1 milln de habitantes. En la actualidad, no existe ningn informe que clasifica la enfermedad se hereda.

T R O D U C T I O N

PROTEUS SYNDROME
El sindrome de Proteus se ha

descrito hipotticamente como resultado de trastornos somticos o mosaico

(UN TRASTORNO ES UN MOSAICO en que las
clulas en la misma persona, tienen una composicin gentica diferente el uno del otro)

T R O D U C T I O N

PROTEUS SYNDROME

AKT 1
AKT (protena quinasa B, PKB) es una serina / treonina

quinasa que desempea un papel fundamental en la regulacin de la supervivencia celular, la sealizacin de insulina, la angiognesis y la formacin de tumores.

Hay tres isoformas de Akt: Akt 1, 2 y 3 (tambin conocido como PKB, y ).

RELACIN CON EL SNDROME DE AKT-1

Los signos clnicos del sndrome, como el

crecimiento excesivo de los tejidos y rganos, se da por la activacin de AKT1 ser fosforilados como resultado de una mutacin

Mutacin AKT 1

Sndrome de Proteus

Fosforilacin del AKT 1

Favorece crecimiento excesivo de tejidos u rganos

OBJETIVO PRINCIPAL
Identificar la influencia de las

mutaciones somticas en la fosforilacin de AKT-1 en el sndrome de Proteus.

MATERIALES Y MTODOS

1. MUESTRA 29 Pacientes 158 muestras con criterio clnico positivo de Sndrome de Proteus.

MATERIALES Y MTODOS
BIOPSIA PACIENTES ENFERMOS Secuencia exones ADN y comparacin con tejidos afectados
EXONES: son las porciones que codifican las protenas. (Seleccin de regiones que codifican en un genoma humana para identificar genes asociados con desordenes poco frecuentes)

MATERIALES Y MTODOS
CONFIRMACIN Y AMPLIACIN Medida de restriccin para analizar 158 muestras de ADN.
Las endonucleasas o enzimas de restriccin rompen la doble cadena de ADN al reconocer una secuencia especifica de bases, el cual consiste en deshacer la unin que forma el grupo fosfato entre dos molculas de desoxirribosa de la hebra de ADN.

MATERIALES Y MTODOS
ANLISIS DE LA ACTIVACIN DE LA PROTENA AKT EN LOS TEJIDOS AFECTADOS, MEDIANTE LA FOSFORILACIN DE ANTICUERPOS ESPECFICOS (WESTERN BLOT O INMUNOBLOT)

WESTERN BLOT O INMUNOBLOT

SDS- PAGE Poliacrilmida gel electroforesis

Separacin protenas de extractos celulares por electroforesis segn el tamao

Protenas SDS = detergente polaridad (-) Transferencia a filtro : Incubacin con anticuerpos. Ac + filtro = identificacin protena

MATERIALES Y MTODOS

El anlisis de seguimiento se efecto por la secuencia de Sanger (didesoxinucleotidos) y digestin enzima de restriccin , utilizando mtodos para la polimerasa de reaccin en cadena (PCR)

Sindrome de Proteus
PCR (polymerase-chain-reaction): tecnica desarrollada con el objetivo de amplificacin in vitro directa de un gen o fragmento de DNA o indirecta de RNA. - Principio del mtodo:

Desnaturalizacion del DNA para dar hebras sencillas.

Hibridacion especifica: primer

Replicacion: DNA polimerasa.

- Utilidad: rastreo de mutaciones
AKT 1

RESULTADOS
FILTRACION DE LA VARIANTE

Sindrome de Proteus
FILTROS

Anlisis de variaciones

IDENTIFICO

AKT1, c.49GA

a.a.17 Lys por Gln

RESULTADOS
VALIDACION: MUTACIN AKT1/SINDROME DE

PROTEUS
Secuenciacin de Sanger
Consistentes con datos de secuenciacin de

exones
Hipotesis:

insensibilidad a bajos niveles de

mosaicismo

RESULTADOS
DIGESTION POR ENZIMA DE RESTRICCIN

Mutacin ausente en 25 linajes celulares y 2 muestras de tejido fresco en sujetos que no presentaban el sndrome.

De 29 pacientes con el sndrome de Proteus, 26

tenian mutacin somtica con activacin de AKT1. Lo cual corresponde al 90% de la muestra.

RESULTADOS
Western blot imgenes de luminiscencia

CONCLUSION
La mutacin del gen, es un factor predisponente para la

fosforilacin de la protena AKT1.

En el sndrome de Proteus, el aminocido en el que la

fosforilacin se produce mayor es la serina.

La activacin de la AKT1 por fosforilacin se relaciona

con el crecimiento excesivo de tejido en el sndrome de Proteus.

La mutacin somtica que caracteriza al sndrome de

Proteus, que hace de l un trastorno no hereditario.