Parámetros Cromatográficos Expo

ANLISIS INSTRUMENTAL UAGRM
PARAMETROS DE LA
CROMATOGRAFIA
Columna
con la fase
estacionaria
Muestra (ABC)
Fase mvil
C
B
A
C
B

A
C
B
Detector
t
0
t
1
t
2
t
3
t
4

A
B
Secuencias de la Separacin Cromatogrfica
04/05/2012 2
t
0
t
1
t
2
t
3
t
4

04/05/2012 3
Parmetros que caracterizan una separacin cromatogrfica
Parmetros de retencin

Eficiencia

Resolucin
Parmetros de retencin: Fundamento de la retencin
Distribucin del analito entre las dos fases
Fase
estacionaria
Fase
mvil
analito
04/05/2012 4
Fase mvil
Temperatura
Fase estacionaria
04/05/2012 6
Ancho de base.- ( Wb) Distancia entre las
intersecciones de las tangentes del pico o los
puntos de inflexin de la lnea base

Tiempo muerto.- (t
m
) tiempo necesario
para que un compuesto no retenido
por la columna, llegue al detector.

Tiempo de retencin.( t
r
) tiempo
transcurrido desde el momento de la
inyeccin de la muestra, hasta el
punto mximo del pico registrado

t
r
= minutos
V
r
=t
r
*F

F=flujo
Vr= volumen de retencin
Flujo verdadero: Fc, es el flujo volumtrico de la fase mvil medido a la
salida de la columna, a la temperatura de la columna y a la presin de
salida.
Volumen de retencin: Vr, volumen de fase mvil necesario para que un
compuesto llegue al detector, medido a la temperatura de la columna y a
la presin atmosfrica.
Fc = F x T /T
1 2
Vr = t x Fc
r
04/05/2012 7
jr
tiempo
c
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

Ancho a media altura
04/05/2012 8
CROMATOGRAMA
04/05/2012 9
04/05/2012 10
t
r1
t
r2
Tiempo de retencin ajustado (t
r
)
t
r
= t
r
t
m

V
r
= t
r
*F

V
r
=volumen de retencin
ajustado

Factor de capacidad: k, es el cociente entre el nmero de moles del
soluto en la fase estacionaria y el nmero de moles de soluto en la fase
mvil. indica el tiempo durante el cual cada compuesto es retenido por
la columna.
0 < k<

K<<1 elucin muy rpida

K>20 elucin muy lenta

1<k<5
m
r
m
r
m
m r
v
v
t
t
t
t t
k
' '
= =
=
04/05/2012 11
Factor de selectividad (factor de separacin o ndice de retencin
relativa): o, relaciona el tiempo durante el cual dos compuestos
correspondientes a picos adyacentes, permanecen en la columna y
describe la posicin relativa de un pico respecto al otro.
04/05/2012 12
rA
rB
A
B
t
t
k
k
'
'
= = o
1
04/05/2012 13
Eficiencia

Mide el grado de ensanchamiento de las bandas a medida que los analitos
avanzan a travs del sistema cromatogrfico

El ensanchamiento de las bandas se debe a:

Tiempos de residencia en la columna
Velocidad de la fase mvil

Buena eficiencia = picos estrechos
04/05/2012 14
Consecuencias de una baja eficiencia
Disminucin de la altura de los picos cromatogrficos

prdida de sensibilidad

Aumento del ancho de los picos cromatogrficos

posibilidad de solapamiento
04/05/2012 15
Difusin longitudinal
Resistencia a la transferencia de masa
Irregularidades del empaque, caminos mltiples
Ensanchamiento de banda
04/05/2012 16
cmo se mide la eficiencia?
Teora de los platos

Teora de las velocidades
Teora de los platos
N = 16 ( )
t
r
W
b
2
N = 5.54 ( )
t
r
W
0.5h
2
N = 25 ( )
t
r
W
4.4%
2
H = altura equivalente de plato terico = HETP
N = L /H
04/05/2012 17
Ecuacin de van Deemter
04/05/2012 18
Teora de las velocidades
A= difusin aparente
B= difusin longitudinal
C= transferencia de masa en ambas fases
04/05/2012 19
Ancho de pico empleados para el clculo de N
Influencia de la forma de la
seal sobre la eficiencia
Factores que afectan
la eficiencia
Calidad del empaque de la
columna
Distribucin del tamao de
partcula
Tamao de las partculas
Tipo de estructura del soporte
Calidad del material del empaque
04/05/2012 20
Eficiencia
04/05/2012 21
Resolucin
Indica la SEPARACIN entre dos picos consecutivos
( )
) (
B A
rA rB
W W
t t
R
+
=
2
04/05/2012 22
Resolucin
R=1,50buena separacin (solapamiento de un 0,13%)
R=1,25solapamiento de un 8%
R=0,75 mala separacin
04/05/2012 23
|
|
.
|
\
|
+
|
.
|
\
|
=
B
B
k
k
N R
1
1
4
1
o
o
Resolucin
Cuando los picos tienen alturas muy diferentes
04/05/2012 24
Resolucin vs o
Cambiar la composicin de la fase mvil
Cambiando el pH de la fase mvil
Cambiar la naturaleza de la fase estacionaria
Cambiar la temperatura del solvente
Utilizar efectos qumicos especiales
Trabajar con gradiente
04/05/2012 25
Efecto de la fuerza del solvente sobre la resolucin
04/05/2012 26
Factores que afectan la asimetra
tcnica de la inyeccin
volumen muerto
cantidad de soluto
tiempo de residencia
isoterma de adsorcin
tiempo
Asimetra
04/05/2012 27
tiempo
10
a b
a
b
As =
% 10
'
'
%
a
b
As =
5
04/05/2012 28
Integracin de la seal
La seal generada por el detector se transmite a los
registradores o integradores.
Los registradores grafican el pico y su rea debe
medirse manualmente.
Los integradores transforman la seal analgica en
digital, calculan el rea o altura de los picos y
efectan una serie de operaciones programadas
generando un reporte analtico.
04/05/2012 29
04/05/2012 30
A= H*W
1/2
W
1/2
Integracin de la seal

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