Sunteți pe pagina 1din 35

LIPOZOMII, reprezentanti din noua generatie de forme farmaceutice

Vectorizarea sau transportul i cedarea la int (locul specific al aciunii famacologice)


Optimizarea BD s.m. n vecintatea receptorilor farmacologici specifici Protecia s.m.

Creterea concentraiei s.m. la locul de aciune

Reducerea prezenei s.m. n alte pri ale organismului

mbuntete efectul terapeutic Reduce riscul efectelor adverse

Se realizeaz direct, prin administrare la locul de aciune sau prin folosirea de transportori. Lipozomii sunt transportori medicamentoi de generaia a II-a, cu specificitate pentru esuturi.

LIPOZOMII

Sunt vezicule fosfolipidice mici (diametrul cuprins ntre 50 nm i 100 m), aproape sferice, capabile s ncapsuleze substane medicamentoase hidrofile i lipofile, uneori simultan. Sunt biocompatibili i biodegradabili deoarece au o compoziie asemntoare cu cea a membranelor biologice. Dimensiunile reduse le permit s ptrund n celulele vii.

Avantaje: sunt ineri din punct de vedere biologic i biodegradabili. sunt netoxici, nonantigenici i apirogeni. pot ncapsula o mare varietate de substane medicamentoase hidrofile i lipofile. pot fi administrai pe cale parenteral (intravenos) datorit biocompatibilitii i caracteristicilor dimensionale. asigur protecia substanelor active ncapsulate fa de degradarea enzimatic sau inactivarea sub aciunea factorilor de mediu.

Avantaje

LIPOZOMII

permit transportul dirijat al substanelor medicamentoase ctre inte specifice prin cedarea lor la locul distrugerii lipozomului. fac parte din noua generaie de forme farmaceutice utilizate ca sisteme de transport i cedare la int a unor substane medicamentoase a cror administrare este delicat i costisitoare din cteva motive: indice terapeutic sczut, specificitate redus i numeroase efecte secundare (antitumorale), stabilitate redus (proteine), profunzimea locului de aciune (ADN). permit administrarea acestor substane n doze mai mici, diminundule astfel toxicitatea.

Dezavantaje sunt puin stabili in vivo.

tind s se acumuleze n anumite organe. lor depinde de ameliorarea stabilitii i

Succesul administrrii specificitii lor.

FORMAREA LIPOZOMILOR

Lipozomii rezult n urma asocierii fosfolipidelor ntre ele, n prezena apei. Fosfolipidele sunt molecule amfifile, constituite dintr-un strat dublu hidrocarbonat i o parte polar.

FORMAREA LIPOZOMILOR

n stare hidratat, fosfolipidele sunt capabile s se organizeze, n funcie de caracterul lor hidrofob-hidrofil, formnd, n locul micelelor, structuri particulare denumite faze lamelare.

Existena acestor structuri se explic prin diferenele geometrice existente ntre tensioactivi obinuii i fosfolipide. Tensioactivii sunt molecule de form conic. Fosfolipidele, datorit dublului strat prezent n structura lor, au o form tubular, mai favorabil agregrii n lamele dect n micele. n condiii de hidratare puternic i agitare, fazele lamelare pot adopta o form sferic, obinndu-se astfel vezicule.

FORMAREA LIPOZOMILOR

Din punct de vedere structural, lipozomii prezint: un perete constituit dintr-un strat dublu de molecule fosfolipidice, o cavitate central apoas. Substanele medicamentoase lipofile se repartizeaz n straturile lipidice, iar cele hidrofile se dizolv n compartimentele apoase ale lipozomilor.

CLASIFICAREA LIPOZOMILOR
n funcie de dimensiunea lor: Lipozomi multilamelari (multilamellar vesicles, MLV)

formai din mai multe bistraturi concentrice separate prin compartimente apoase; diametrul total este cuprins ntre 200 nm i 10 m; pot ncorpora substane active hidrofile i lipofile, avnd diferite diemensiuni; prezint o capacitate sczut de ncapsulare, limitat de volumul redus al fazei apoase.

CLASIFICAREA LIPOZOMILOR

Lipozomi unilamelari Constituii dintr-un singur bistrat fosfolipidic care nconjoar un compartiment apos. Lipozomi unilamelari mici (small unilamellar vesicles, SUV) al cror diametru variaz ntre 25 i 70 nm; se obin prin uor, prin fragmentarea MLV; au o capacitate redus de ncapsulare (0,1 1%, dependent de concentraia lipidic) care le limiteaz aplicabilitatea.

Lipozomi unilamelari mari (large unilamellar vesicles, LUV), avnd un diametru de 100 400 nm (comparabil cu cel al MLV) i ca urmare, pot conine un volum mai mare de ap care permite ncapsularea unor cantiti mai mari de substane active dect SUV.

CLASIFICAREA LIPOZOMILOR
n funcie de modul de obinere: Se disting alturi de cele trei tipuri menionate mai sus, lipozomi oligo sau multilamelari preparai prin evaporarea solventului n faz invers (reverse phase evaporation vesicles, REV).

COMPONENTELE LIPOZOMILOR

Fosfolipide

prezint n structura lor o parte polar, avnd dimensiune i sarcin variabil, precum i un lan dublu hidrocarbonat saturat sau nesaturat format din 12-24 atomi de carbon.

COMPONENTELE LIPOZOMILOR

Fosfodigliceride

Fosfatidilcoline naturale (din glbenuul de ou sau soia) lecitina sintetice (dimiristilfosfatidilcolina DMPC, dipalmitoilosfatidilcolina DPPC, distearoilosfatidilcolina DSPC) Fosfatidiletanolamina (PE) Fosfatidilserina (PS) Fosfatidilinositol (PI)

Sfingolipide

Sfingomielina (SM) prezent frecvent n celulele animale.

COMPONENTELE LIPOZOMILOR

Proprietile fizico-chimice ale fosflipidelor influeneaz n mare msur caracteristicile lipozomilor. Temperatura de tranziie de faze a fosfolipidelor

depinde de lungimea resturilor acil: cu ct catena este mai lung cu att temperatura de tranziie de faze este mai ridicat (Tc DMPC (C14) = 23C, Tc DPPC (C16) = 41C). scade foarte mult n prezena dublelor legturi sau a lanurilor secundare n structura restului hidrocarbonat (Tc DSPC (C18) = 58C, Tc DOPC (C18) = -22C). depinde de natura prii polare a fosfolipidelor, de gradul lor de hidratare, de prezena ionilor bivaleni i de variaiile de pH. Cunoaterea sa este important pentru prepararea i conservarea lipozomilor (la o temperatur superioar Tc, permeabilitatea dublului

COMPONENTELE LIPOZOMILOR
Starea fizic a fosfolipidelor depinde de temperatura la care sunt supuse:

La valori de temperatur mai mici dect temperatura de tranziie de faze, resturile acil din structura fosfolipidelor au un aspect rigid (faza de gel). La temperaturi mai mari dect temperatura de tranziie de faze, resturile hidrocarbonate ale fosfolipidelor devin fluide, permind rearanjarea moleculelor n bistrat (starea de cristal lichid).

COMPONENTELE LIPOZOMILOR
Alturi de fosfolipide i sfingolipide, la prepararea lipozomilor se pot utiliza i ali constitueni n scopul ameliorrii calitii acestora, astfel: Stabilitatea biologic: Colesterol, n concentraie molar de maxim 50%, acioneaz prin creterea compactitii peretelui (straturi fosfolipidice de tip fluid) sau prin creterea fluiditii i permeabilitii acestuia (straturi fosfolipidice duble de tip solid) fosfolipide ncrcate electric, conferind lipozomilor o sarcin negativ sau pozitiv care genereaz repulsia electrostatic n diferitele nivele i determin astfel creterea spaiilor interlamelare i a capacitii de ncapsulare a substanelor hidrosolubile. polizaharide; Specificitatea: Anticorpi monoclonali, Glicolipide, Proteine; Capacitatea de ncapsulare a substanelor medicamentoase: Lipide i fosfolipide ncrcate electric pentru fixarea ADN; Facilitarea liofilizrii lor: Zaharuri; Conservarea: Antioxidani.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda agitrii (metoda Bangham) Permite obinerea lipozomilor multilamelari (MLV) n trei etape principale:

dizolvarea fosfolipidei i a altor substane liposolubile ntr-un solvent organic volatil (cloroform, etanol, eter sau un amestec al acestor solveni).

dac este necesar, soluia obinut se filtreaz n scopul ndeprtrii impuritilor insolubile sau se supune ultrafiltrrii pentru a limita prezena pirogenelor.

evaporarea solventului sub presiune redus. adugarea unei soluii apoase, n general tamponat, pentru hidratarea lipidelor; aceast soluie se adaug la o temperatur superioar temperaturii de tranziie de faze a fosfolipidelor, sub agitare n prezena unor bile de sticl pentru a facilita dispersarea fosfolipidelor.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda agitrii (metoda Bangham)

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda agitrii (metoda Bangham)

MLV formate n timpul fazei de hidratare prezint dimensiuni diferite (distribuie eterogen a mrimii particulelor). reducerea mrimii acestor MLV se poate face prin sonicare (baie de ultrasunete sau cu ajutorul unei sonde). sonicarea cu ajutorul sondei permite reducerea rapid a mrimii lipozomilor, dar determin nclzirea suspensiei i n consecin, desprinderea particulelor metalice care vor contamina preparatul. cldura i particulele metalice sunt factori care pot contribui la denaturarea fosfolipidelor.

Avantaj: metoda este simpl i rapid. Inconveniente: capacitatea redus de ncapsulare a lipozomilor obinui (MLV); obinerea unei populaii eterogene de lipozomi.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda injectrii solventului (metoda de pulverizare a eterului)

Const n injectarea rapid (cu ajutorul unei seringi) a unei soluii eterice de lipide ntr-o soluie apoas (eventual tamponat) nclzit la 55-65C; evaporarea eterului conduce la formarea LUV (1500-2500). Poate fi aplicat i pentru ali solveni miscibili cu apa (ex. etanol). lipidele se dizolv n etanol (20-40moli fosfolipid/ml), soluia etanolic obinut este apoi injectat rapid ntr-o soluie apoas tamponat, aflat n exces; etanolul i apa formeaz imediat o singur faz, fosfolipidele se disperseaz, rezultnd lipozomi unilamelari. Avantaje este uor de aplicat i reproductibil, asigur obinerea unor populaii omogene de lipozomi, Inconveniente utilizarea eterului este uneori incompatibil cu unele principii active ncapsulate n lipozomi (ex. proteine); suspensiile etanolice de lipozomi obinute sunt foarte diluate, avnd o eficacitate de ncapsulare redus.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda eliminrii detergentului

Const n ndeprtarea treptat a detergentului din dispersia apoas a micelelor mixte de fosfolipide i detergent (sruri biliare, triton X100), condiii n care crete proporia fosfolipidelor n micele, fapt ce conduce la formarea de vezicule unilamelare mici (SUV). ndeprtarea detergentului din sistem se poate face prin diverse metode ca: dializ, centrifugare, cromatografie pe coloan, adsorbia pe bile urmat de filtrare. Avantaje obinerea unei populaii omogene de vezicule; buna reproductibilitate; poate fi aplicat pentru o gam larg de fosfolipide i de amestecuri ale acestora, cu exceptia fosfolipidelor cu caracter acid.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Metoda evaporrii solventului n faz invers

Asigur obinerea lipozomilor unilamelari mari (LUV) care prezint o capacitate de ncapsulare crescut i permit incluziunea macromoleculelor (proteine, enzime, ADN). Se realizeaz n urmtoarele etape:

dizolvarea fosfolipidelor n eter sau amestec de eter i cloroform; adugarea fazei apoase care conine substana medicamentoas hidrofil la soluia organic de fosfolipide; sonicarea amestecului timp de cteva minute cnd se formeaz o emulsie A/U; ndeprtarea solventului organic prin evaporare sub presiune redus, cu ajutorul unui rotavapor.

PREPARAREA LIPOZOMILOR
Prepararea lipozomilor oligolamelari (OLV) sau unilamelari prin extrudare Const n extrudarea repetat a suspensiilor de MLV prin membrane de policarbonate, permind diminuarea progresiv a mrimii lipozomilor, precum i a numrului de bistraturi.

Lipozomii oligolamelari prezint un perete constituit din 4-5 straturi fosfolipidice i o cavitate apoas central.

Metode de reducere a mrimii lipozomilor: ultrasonicarea,

microfluidizarea, extrudarea prin membrane sintetice cu porozitate definit, la presiune crescut.

PREPARAREA LIPOZOMILOR

Metode de reducere a mrimii lipozomilor

CARACTERIZAREA LIPOZOMILOR

Determinarea mrimii veziculelor, Determinarea numrului de straturi duble din structura lor; Determinarea permeabilitii; Determinarea volumului apos i a capacitii de ncapsulare.

Incluziunea unui principiu activ noiunea de grad (coeficient) de ncapsulare

Dependent de caracterul lor hidrofil sau lipofil, substanele medicamentoase se adaug n faza lipidic (fosfolipide) sau n faza apoas. Substanele lipofile se insereaz la nivelul lanurilor hidrocarbonate din structura fosfolipidelor. Substanele hidrofile se dizolv n compartimentul central apos al lipozomului sau se adsorb la nivelul prilor polare ale fosfolipidelor. Substanele amfifile se orienteaz n stratul dublu al lipozomului. Macromoleculele (cu structur complex) i proteinele se pot organiza astfel nct s se ancoreze n dublul strat sau s se adsoarb.

Incluziunea unui principiu activ noiunea de grad (coeficient) de ncapsulare

Localizarea principiului activ depinde de: coeficientul su de partiie ntre compartimentul apos i dublul strat lipidic, metoda de preparare Cantitatea de substan activ ncapsulat (gradul de ncapsulare) depinde de: solubilitatea substanei n faza hidrofil sau lipofil; metoda de preparare concentraia lipidelor n lipozomi. Volumul compartimentului apos variaz n funcie de: metoda de preparare concentraia lipidelor n lipozomi natura principiului activ.

STABILITATEA FIZICO-CHIMIC A LIPOZOMILOR

Lipozomii trebuie s fie stabili n suspensie sau n stare deshidratat timp de 1,5-2 ani, la temperatura ambiant. n timpul preparrii i conservrii sub form de suspensie, instabilitatea lipozomilor se manifest prin diferite fenomene ca: pierderea substanelor active ncapsulate; modificri ale distribuiei mrimii particulelor; agregarea-fuziunea i sedimentarea veziculelor Stabilitatea fizic a lipozomilor depinde de proprietile mecanice i termodinamice ale membranelor. Lipozomii se caracterizeaz i printr-o pronunat instabilitate chimic manifestat prin sensibilitatea fa de hidroliz i oxidare: ex. lizofosfatidilcolina, produsul de hidroliz al fosfatidilcolinei, mrete permeabilitatea lipozomilor.

STABILITATEA FIZICO-CHIMIC A LIPOZOMILOR

Aciunea nefavorabil acestor factori asupra stabilitii fizico-chimice a lipozomilor poate fi limitat prin: folosirea fosfolipidelor saturate i expunerea ct mai puin posibil la aciunea oxigenului (ex. utilizarea unui gaz inert); complexarea ionilor metalelor grele; adugarea unui antioxidant (ex. -tocoferol); conservarea n recipiente colorate, ferit de lumin; uscarea lipozomilor prin liofilizare i pstrarea lor n aceast form. ndeprtarea apei din lipozomi prin liofilizare necesit asocierea unei substane crioprotectoare (ex. glucoz) care asigur integritatea structurii lipozomilor deoarece n stare anhidr, zaharul nlocuiete moleculele de ap legate de gruprile hidrofile ale fosfolipidelor, iar la adugarea apei n scopul reconstituirii lipozomilor (n stare hidratat) apa substituie rapid moleculele de zahar. Aplicarea liofilizrii ca modalitate de stabilizare a lipozomilor este convenabil n cazul ncapsulrii substanelor medicamentoase liposolubile (ex. amfotericina B, doxorubicina) care, solubilizndu-se n dublul strat lipozomal, rmn la acest nivel i dup rehidratarea lipozomilor nainte de administrare, fr ca localizarea lor s fie influenat de fenomenul de substituire descris mai sus. Reconstituirea lipozomilor uscai prin liofilizare este mai dificil n cazul substanelor active hidrosolubile datorit partiiei acestora ntre faza apoas extern i compartimentul apos intern al veziculelor.

STABILITATEA BIOLOGIC A LIPOZOMILOR

Stabilitatea lipozomilor in vivo poate fi influenat de sngele total, plasm sau ser, mai ales prin intermediul proteinelor plasmatice care se adsorb la suprafaa veziculelor, modificndu-le semnificativ permeabilitatea. Limitarea acestui efect i implicit creterea stabilitii lipozomilor in vivo se poate realiza prin prezena colesterolului sau a sfingomielinei n structura lipozomilor;

asocierea fosfolipidelor cu monomeri lipidici, urmat de iniierea polimerizrii acestora pe cale chimic sau prin iradiere (UV); acoperirea lipozomilor cu polimeri hidrofili neionici (ex. polizaharide sau PEG) care formeaz o barier steric hidrofil ce se opune adsorbiei proteinelor.

TROPISMUL LIPOZOMILOR

Administrai pe cale intravenoas, lipozomii se acumuleaz rapid n ficat, splin i mduva osoas, astfel nct pentru a ajunge la esuturile i celulele int, ei trebuie s traverseze bariera vascular care ns, permite pasajul veziculelor numai dac este discontinu (ex. n ficat). n consecin, veziculele mari sunt n general reinute n compartimentul vascular, iar proteinele plasmatice favorizeaz captarea lor de ctre celulele sistemului fagocitar (monocite sanguine i celulele macrofage din ficat, splin i mduva osoas). Transformrile suferite de veziculele mici n organism depind de ncrctura lor electric de suprafa: veziculele mici ncrcate negativ sunt n general eliminate mai repede din circulaia sanguin dect lipozomii neutri sau cei cu sarcin pozitiv. Tropismul natural al lipozomilor fiind nefavorabil pentru unele din aplicaiile lor, s-a urmrit atenuarea acestuia pentru a le conferi o mai bun stabilitate in vivo i specificitate.

TROPISMUL LIPOZOMILOR

Stabilitatea biologic a lipozomilor n snge i implicit prelungirea timpului lor de circulaie se pot asigura prin evitarea/controlul unor interaciuni electrostatice i/sau hidrofobe ale acestor vezicule: adsorbia proteinelor plasmatice recunoscute de fagocitele mononucleate; interaciunea cu liganzii existeni la suprafaa membranei celulelor sistemului fagocitar. n acest scop, se poate aciona la nivelul prilor polare i a lanurilor lipidice ale fosfolipidelor din peretele lipozomilor prin urmtoarele dou modaliti: includerea colesterolului i a fosfolipidelor avnd o temperatur de tranziie de faz ridicat (sfingomielina, DSPC) n dublul strat; ncorporarea n membrana lipozomal a derivailor lipidici ai PEG cu lanuri lungi de atomi de C, care formeaz o barier steric i hidrofil n jurul lipozomilor (stealth liposomes).

Ameliorarea specificitii lipozomilor se poate realiza prin cuplarea fosfolipidelor din structura lor cu markeri (anticorpi monoclonali, zaharuri, proteine) care favorizeaz interaciunea veziculelor cu celulele int.

INTERACIUNEA LIPOZOMILOR CU CELULELE


n absena oricrei specificiti, lipozomii pot interaciona cu celulele prin diferite mecanisme:

endocitoz, mecanismul predominant de ptrundere a lipozomilor i coninutului lor celule; n acest caz exist riscul degradrii principiului activ n lizozomi; schimburi de lipide la contactul celor dou membrane (lipozomal, respectiv celular), fr distrugerea lipozomului (ex. colesterolul trece foarte uor dintr-o membran n cealalt); contact, care poate determina modificarea permeabilitii lipozomilor nsoit de eliberarea unei pri din faza apoas a veziculelor astfel nct, n anumite condiii, substanele active ncapsulate traverseaz apoi membrana celular; adsorbie la suprafaa celulelor prin fore de atracie sau prin intermediul unor legturi specifice (receptor-ligand, lectin-zahar, anticorp-antigen); contopirea (fuziunea) membranelor lipozomale i celulare, mecanism ce permite eliberarea substanei medicamentoase direct n citoplasm; contopirea spontan a lipozomilor cu celulele este un fenomen rar, care ns poate fi favorizat de introducerea n peretele lipozomal a unor molecule (lizolecitina, anumii detergeni sau proteine membranare).

APLICAII ALE LIPOZOMILOR

n domeniul medicamentului, lipozomii sunt utilizai ca sisteme terapeutice de eliberare la int (vectori medicamentoi) a substanelor antimicrobiene, anticanceroase, a unor hormoni i mai recent pentru vectorizarea ADN-ului. Formularea este delicat datorit stabilitii reduse i a tropismului fa de sistemul fagocitar. Dei lipozomii sunt larg comercializai pe piaa produselor cosmetice, n domeniul farmaceutic ei au constituit mai ales teme de cercetare. Totui, lipozomii coninnd amfotericin B (Ambisome, compania Nextar) sau doxorubicin (Myocet, compania Elan Corp) au obinut autorizaia de punere pe piaa farmaceutic n anul 1998, respectiv 2000. n medicamentul Myocet, destinat tratamentului cancerului de sn, doxorubicina este formulat ca lipozomi n scopul ameliorrii specificitii cedrii substanei active, limitnd astfel modificrile ireversibile care se produc la nivel cardiac. Aceste specialiti se administreaz intravenos, fiind utilizate numai n spitale.

APLICAII ALE LIPOZOMILOR


Produsul Ambisome se prezint sub form pulbere suspendabil steril i conine 50 mg amfotericin B. Suspensia de lipozomi, reconstituit prin dispersarea pulberii n ap pentru preparate injectabile i filtrat, se administreaz n perfuzie i.v.

Lipozomii (SUV) au diametrul inferior de 100 nm i sunt constituii n principal din fosfatidilcolin hidrogenat de soia, distearoilfosfatidilglicerol i -tocoferol. Amfotericina B se gsete n membrana lipozomilor, fiind stabilizat prin intermediul distearoilfosfatidilglicerolului i colesterolului. In vivo lipozomii se ataeaz de peretele celular al fungilor, se desfac i elibereaz substana activ care deterioreaz membrana celular microbian, producnd moartea acestora. Prin ncapsularea amfotericinei B n lipozomi nu se suprim efectele secundare asociate administrrii acestei substane active.

VA

MULTUMESC PENTRU ATENTIE