Cintica enzimtica

Estgio de Docncia
Aluna: Rosana O. Henriques
Enzimas
Catalisadores biolgicos.
Apresentam um alto grau de especificidade.
Reaes seguras.
Possuem mecanismo de turnover, desempenhando a
mesma funo consecutivamente, sem serem
consumidas no processo.
Enzimas
So econmicas, reduzindo a energia de ativao
necessria para a reao catalisada.
So biodegradveis, sendo o lodo residual reciclado
como biofertilizante.
No so txicas.
Altamente eficientes: aumentando a velocidade de
reao de 10
8
a 10
11
vezes mais rpida.
Condies brandas.
Aplicao Industrial
Alimentcia
Txtil
Farmacutica
Detergentes

Catlise Enzimtica ( Biocatlise):
Representao
termodinmica
da ao cataltica
de uma enzima:
(+) reao no
catalisada
(o) reao
enzimaticamente
catalisada
Durante a reao as enzimas:
No alteram o estado de equilbrio
Abaixam a energia de ativao;
Keq no afetado pela enzima.
No apresenta efeito termodinmico global
AG no afetada pela enzima.

Componentes da Reao



E + S E S P + E
Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima
Video 1
Fatores que Influenciam a Velocidade
das Reaes Biocatalisadas:
1) Concentrao do Substrato:

O efeito de [S] varia durante o curso de uma
reao conforme [S] convertido em [P]
Medir a velocidade inicial.


[E] = cte

+ [S] = V
0
| linear

| [S] = V
0
| por
incrementos cada
vez menores

V
0
= V
mx


2) Temperatura:

Depende do pH e da fora inica do meio;
Acima da T tima pode ocorrer desnaturao
da enzima- rompimento das pontes de
hidrognio e nova conformao.
A temperatura tima depende de cada tipo de
enzima.

3) pH:

No valor timo de pH, a atividade da enzima
mxima.

Velocidade da reao: + pH afasta do timo;

O pH timo dependente dos grupos
ionizveis na reao






4) Concentrao de Enzima:

A Velocidade de transformao do S em P
proporcional a quantidade de E.

Podem ocorrer mudanas na linearidade com :
presena de inibidores na soluo de enzima;
presena de substancias txicas;
presena de um ativador que dissocia a enzima;

CINTICA ENZIMTICA



Victor Henri (1903):


1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
E + S
K1
K-1
ES
Kp
E + P
Etapa rpida Etapa lenta
Portanto:
A velocidade de formao de produto dependente
de [ES].
(eq. 1)
Essa expresso no muito utilizada!!!
Como [ES] no facilmente medida, precisamos
descobrir uma expresso alternativa para [ES].
Excesso de substrato ESTADO ESTACIONRIO

[ES] permanece praticamente constante durante todo o
tempo.


V reflete o estado estacionrio.
No estado estacionrio:
Velocidade de formao de ES = Velocidade de decomposio de
ES
Para simplificar a equao 4, foi definida uma constante,
K
M
, conhecida como Constante de Michaelis:
Note que K
M
a razo da soma das taxas de desaparecimento
do complexo ES pela taxa de formao deste.
quando K
M
pequeno, k
1
relativamente grande e a
barreira de energia livre para a formao do complexo
pequena, portanto a ligao do substrato enzima ser
forte e a enzima ir catalisar a reao com baixas
concentraes.
K
M
, assim, reflete uma habilidade da enzima a se
ligar aos substratos e realizar a catlise.

desaparecimento
formao
1
3 2
) (
k
k k
K
M
+
=
Substituindo a eq. 5 na eq. 4, teremos:
Na reao, pode-se assumir que o stio da
enzima pode estar ocupado ou livre. Assim a
enzima existe em duas formas:

A forma livre E, e a forma ligada ES.
Substituindo a eq. 7 em 6, temos:
Que pode ser transformada em:
Podemos substituir esta eq. 9 na da velocidade inicial da
reao
Em que situao teremos V= k
3
[E]
TOTAL
?
Quando a concentrao de substrato for MUITO MAIOR que
Km!
Como a velocidade mxima todas as enzimas
esto na forma de complexo ES
[E]
TOTAL
= [ES]



a velocidade da reao no pode ser mais rpida do que
quando todas as molculas de enzimas esto na forma de
complexo ES.
Portanto, enquanto houver E livre, pode-se aumentar a [S]
at chegar em um ponto em que tudo estar como [ES], que
a velocidade mxima V
MAX
.
V
mx
= k
3
[E]
TOTAL
(eq. 11)
Ento a equao 10, pode ser representada por:
Equaao de Michaelis-
Menten
V
mx
= k
3
[Et] (eq. 11)


v =
Vmax [S]
Km + [S]
[S]
v
Vmax
2
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
Km
1
2
3
1- [S]+ Km>>[S]
2- [S]| [S]>>Km
3- v = Vmax
2
Exerccio
A reao de p-nitrofenolfosfato p-nitrofenol catalisada
pela enzima fosfatase. Para determinadas condies verificou-
se que esta reao obedece a cintica de Michaelis-Menten
onde Km= 0,5 mmol/L.min Vm=10mmol/L e a [E] 1,4 mg/L
Calcule:
O volume do reator batelada que produza 100 moles/h de p-
nitrofenol a partir do p-nitrofenolfosfato 2M , com converso
de 75% utilizando [E]= 20mg/L. Sabe-se que o tempo entre
uma batelada e outra de 5h.

27
1
[S]
1
v
-1
Km
1
Vmax
Km
Vmax
Inclinao =
km S
S V
km
V
S V
Km
V
1
] [
1
] max[ max
1
] [
1
max max
1
0
=
=
+ =
|
.
|

\
|
Quando y=o:
Modelos de Inibio Enzimtica
Alguns compostos podem ligar-se s enzimas reduzindo
sua atividade cataltica.
Esses compostos so chamados inibidores.

Inibidores irreversveis: metais pesados formam um
complexo com a enzima, deixando-a inativa.
A inibio pode ser impedida somente utilizando agentes
quelantes como EDTA e citrato.
Modelos de Inibio Enzimtica
Inibidores reversveis: podem se dissociar
mais facilmente depois de ligados com a enzima.
Apresentam-se de 3 formas:

Inibidores competitivos
Inibidores no competitivos
Inibio Acompetitica ( excesso de substrato)

1) Inibio Competitiva
Ocorre entre substratos
anlogos, que acabam
competindo com este no stio
ativo da enzima.

Efeitos: aumento do Km,app

Altas concentraes de
substrato podem impedir a
inibio.

|
.
|

\
|
+ =
|
.
|

\
|
+
=
+ +
=
Ki
I
m K app m K
onde
S app m K
S
Vm v
S
Ki
I
m K
S
Vm v
] [
1 ,
:
] [ ,
] [
] [
] [
1
] [
Ocorre entre substratos
no anlogos. O inibidor
liga-se ao stio ativo da
enzima bloqueando-o

Efeito: reduo da Vm.

2)Inibio No-Competitiva
|
.
|

\
|
+
=
+
=
Ki
I
Vm
app Vm
onde
Km S
S
app Vm v
] [
1
,
:
] [
] [
,
3) Inibio Acompetitiva
O inibidor o prprio
substrato . Quando em
excesso ele pode inibir a
reao.

Ki
S
S m K
S app Vm
v
] [
] [
] [ ,
+ +
=