g.

INFLUENZAVIRUS A
cu tipul de v.gripal A

g. INFLUENZAVIRUS B

FAMILIA

cu tipul de v.gripal B

ORTHOMYXOVIRIDAE

g. INFLUENZAVIRUS C
cu tipul de v.gripal C

g. THOGOVIRUS cu tipurile
Thogoto, Dhori, Batken

g. ISAVIRUS

GENUL INFLUENZAVIRUS
Cuprinde virusuri cu: ARNmc cu polaritate negativ, cu 7-8 segmente simetrie helical infecteaz vertebratele

MORFOLOGIE
polimorfi
forme sferice, ovale
50 120 nm diametru

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

derivat din membrana celulei gazd dublu stratificat prezint 2 feluri de proiecii (spiculi, peplomere virus codificate) n raport de 5:1

forme filamentoase
80-100 nm diametru; 200 300 nm lungime

se disting urmtoarele poriuni:

nveli viral lipoproteic (anvelopa, peplos) proteina matrice componenta central (ribonucleoproteina RNP, nucleocapsida)

hemaglutinin neuraminidaz

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

HA (hemaglutinin) 500-1000 spiculi de HA pe fiecare virion n funcie de specie trimer
protein precursoare HAO clivaj HA1 + HA2 3 grupri

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

HA (hemaglutinin) funcii:
permite ataarea virusului gripal la receptorii celulelor susceptibile aglutineaz hematiile a 22 de specii animale (grup 0 umane, cobai, pui, curcan) produce fuziunea membranelor este int pentru anticorpii seroneutralizani

10 14 nm deasupra nveliului, form de baston dispuse

regulat pe toat suprafaa virionului (hemaglutininesteraza) egal pe toat suprafaa virionului n ciorchine la unele tipuri

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

NA (neuraminidaz) 50-200 peplomere NA pe fiecare virion n funcie de specie form de ciuperc cu plria spre periferia virusului tetramer, format din 4 molecule de glicoprotein

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

NA (neuraminidaz) Funcii: de enzim
scindeaz acidul sialic faciliteaz penetrarea i eliberarea virionilor din celul diger inhibitorii nespecifici, mucoproteici de la nivelul tractului respirator

NVELI VIRAL LIPOPROTEIC (anvelopa, peplos)

! virusul gripal C
nu are neuraminidaz are o singur glicoprotein de suprafa HEF (hemaglutinare, esteraz, fuziune)

Orthomyxovirus, Paul Digard, Dept. Pathology, University of Cambridge

COMPONENTA CENTRAL (RNP, nucleocapsida)

Ribonucleoproteina Paul Digard, Dept. Pathology, University of Cambridge

COMPONENTA CENTRAL (RNP, nucleocapsida)

GENOMUL VIRAL ARN monocatenar segmentat
polaritate negativ 7 8 segmente = 8 minigene codificante pentru:
3 polimeraze HA NA Nucleoproteina (NP) Proteina matrice (M) Proteine nonstructurale

PROTEINE NUCLEOCAPSIDALE 1. COMPLEX TRANSCRIPIONAL

Polimeraze
Proteina PA (proteina acid) funcie incomplet cunoscut Proteina PB1 (proteina bazic)
iniiaz transcrierea, particip la elongarea ARN progen

Proteina PB2 (proteina bazic)

recunoate i se leag de structurile cap ale ARN celular rol de endonucleaz

PROTEINE NUCLEOCAPSIDALE 1. COMPLEX TRANSCRIPIONAL

Nucleoproteina NP
protein structural major la ME form de bastona suportul de nfurare a ARN genomic (nu se vizualizeaz separat) funcii:
parte a complexului transcriptazic intervine n sinteza ARN genomic transport complexe ribonucleoproteice spre i din nucleu int pentru limfocitele citotoxice

PROTEINE NUCLEOCAPSIDALE 2. PROTEINE NESTRUCTURALE

Proteina NS1
protein NS unic protein timpurie acumulat n nucleul celulei infectate promoveaz sinteza ARNm

Proteina NS2
protein tardiv prezent n nucleul i citoplasma celulei gazd funcii incomplet cunoscute

Segmentul

Mrimea

Polipeptid

Funcie

1 2 3 4 5

2341 2341 2233 1778 1565

PB2 PB1 PA HA NP

Transcriptaza: de legare Transcriptaza: de elongare Transcriptaza: activitate de proteaz Hemaglutinin; inierea infeciei, imunitate Nucleoprotein: legare de ARN, parte din complexul transcriptazei, transport nucleo-citoplasmatic al ARN viral Neuraminidaz: penetrare i eliberare virioni Proteina matrice: component major al virionului, astabilitate, asamblare Protein membranar: canal de ioni Virus gripal B, ciclul infectant Protein nestructural: n nucleu, efect n transportul celular al ARN, translaie; rol antiinterferon Protein nestructural: nucleu+citoplasm, funcie necunoscut

Structura antigenic
1. Ag NP
stabil antigenic exprimat i la suprafaa celulelor infectate inta major pentru limfocitul T citotoxic evideniat prin RFC, ELISA, teste de citotoxicitate

antigene specifice de tip

6 7

1413 1027

NA M1 M2 BM 2

Ag M
stabil antigenic identificat prin ELISA, imunoprecipitare n gel

890

NS1

Ag NS
specificitate nalt de tip induce rspuns imun ncruciat (om, cal, porc) detectat prin RT-PCR (amplificare genomic dup reverstranscriere)

NS2

Structura antigenic
2. Ag HA
Ag major de suprafa 15 subtipuri (H1-H15)

Structura antigenic
3. antigene polimerazice
Ag PB1, Ag PB2, Ag PA Identificat cu Ac monoclonali i teste de citotoxicitate

antigene specifice de subtip

H1, 2, 3 proprii omului H4 15 specifice animalelor

Induc rspuns imun protector (AC, limfocite T citotoxice) Evideniat prin
Reacii de HAI, SN, RFC, ELISA Teste de citotoxicitate RT-PCR

Ag NA
Ag de suprafa 9 subtipuri (N1 2 specifice omului) identificat prin reacii enzimatice de inhibare a activitii neuraminidazice nu induc Ac neutralizani activitate protectoare mai redus

VARIAII ANTIGENICE

VARIAII ANTIGENICE
COMUTARE ANTIGENIC (variaie antigenic major, antigenic shift)
apar brusc noi subtipuri virale PANDEMII intervale 30-40 ani v. gripal A circul la om, psri, animale diferene majore de antigenitate genom fragmentat recombinri reasortarea subtipurilor virale la om i animale

Antigenic shift

VARIAII ANTIGENICE
ALUNECARE ANTIGENIC(variaie antigenic minor, antigenic drift)
apariia lent de mutante HA sau NA (mutaii punctiforme) cirulaia v. gripal n populaii parial imunizate diferene minore de antigenitate ntre HA i NA diferitelor tulpini
modificarea conformaiei spaiale modificarea n compoziia unor aa

Antigenic drift

tulpini noi circulante n diferite sezoane EPIDEMII toate virusurile gripale (A,B,C)

VARIAII ANTIGENICE
funcie de compoziia RNP exist 3 tipuri antigenice distincte de virus gripal:

Denumirea virusului
tip de virus / localitate sau ar de izolare / numrul tulpinii / anul descoperirii/ (hemaglutinia i neuraminidaza) A/Hong-Kong/1/68(H3N2) A/Hong-Kong/156/97(H5N1) B/URSS/2/87 B/Hong-Kong/5/72

tipul A
izolat n 1933 generator de pandemii sau mari epidemii infecteaz o mare varietate de mamifere: om, cal, porc, dihor, foca, psri rezervor important: porcii i psrile (pui de gin, curci, rae) poate suferi variaii antigenice minore i majore

tipul B
izolat n 1940 generator de epidemii locale sau regionale infecteaz numai omul nu are serotipuri poate suferi variaii antigenice minore

tipul C
izolat n 1951 generator de cazuri sporadice sau de mici epidemii locale infecteaz numai omul stabil antigenic (nu prezint variaii antigenice)

REZISTENA LA AGENII FIZICI I CHIMICI

Distrug infectivitatea:
temperatura 56C timp 20 30 minute; radiaii UV,

CULTIVARE
culturi de celule renale de maimu Rhesus linii celulare MDCK (rinichi de cine); LLCMK2 (rinichi de maimu) ou de gin embrionat intraalantoidian (A,B), intraamniotic (A,B,C) animale de laborator: dihor, hamster, cobai, obolan, oarece, cal, psri, etc.

Inactivate de:
solveni organici, formol

Prezervarea infectivitii:
pt. timp scurt 4C; ani -70C, liofilizare

Replicare (8 10 ore)
NA scade vscozitatea stratului mucos, diger inhibitorii nespecifici, mucoproteici de la nivelul CR se descoper receptorii de la suprafaa celulelor:
identici pt. VGA i VGB; diferii pt VGC

Replicare (8 10 ore)

Replicare (8 10 ore)
1.

Replicare (8 10 ore)
3.

ADERARE
prin HA pt. A, B, i HEF pt C de mucoproteinele care conin terminaii de acid N-acetil-neuraminic (acid sialic)

DECAPSIDARE:
prin proteina M2

2.

PTRUNDERE prin endocitoz cu formarea endozomului

pH-ul n endozom scade (pH < 5) enzime tripsin-like din endozom scindeaz HA n monomerele HA1 i HA2 modificri de conformaie n spiculii de HA activarea funciei de fuziune membranar de pe HA2 + activarea canalelor de ioni (proteina M2) fuziunea peplosului cu membrana endozomului eliberarea nucleocapsidei n citoplasm

Replicare (8 10 ore)
ECLIPSA - translocarea nucleocapsidei n nucleul celulei gazd - segmentele genomului sunt transcrise de 3 polimeraze asociate fiecrui segment:
4.

- faza iniial (2 h) necesar sinteza activ a ADN celular - PB2 se ataeaz la captul m7G a ARNm al celulei scindarea acestei structuri din ARNm de ctre PB1 rmne lagat de PB2 - captul servete ca primer pt. sinteza ARN sunt adugate 11-15 nucleotide complementare secvenei conservate ale captului 3 a ARNv (rol PB1) PB2 se desprinde de pe catena n cretere - PB1 + PA completeaz sinteza catenei de ARN cu sens pozitiv

- se produc 2 clase de ARN - incomplet ARNm n citoplasm - complet ARNc copie (+) a ARNv (-) - n citoplasm proteine virus specifice - NP se ntoarce n nucleu asociere cu noile catene de ARNv = nucleocapside noi ies n citoplasm spre membrana celular - la 4h de la infecie pe membrana celulei apar fragmente de protein M1 ncorporare de HA i NA pe suprafa

Replicare (8 10 ore)
5.

ELIMINARE
nmugurire treptat, n cteva ore, fr liza celulei gazd

Patogenia
leziuni destructive ale celulelor ciliate eliberare de produse de dezintegrare snge aciune toxic general descuamarea acestora n lumen, infiltraie mononuclear, edem submucos

BOALA LA OM
GRIPA primele epidemii n sec. XIV; pn
azi 31 pandemii
sursa de infecie: omul bolnav rezervor animal: cai, porci, psri ci de transmitere direct (srut); indirect (picturi de secreie naso-faringian) contagiozitate mare (3-5 zile); receptivitate general poarta de intrare cile respiratorii superioare

BOALA LA OM
incubaie 1-3 zile debut: brusc, frisoane, febr (39 40C), mialgii puternice, artralgii severe, cefalee, astenie marcat perioada de stare
semne generale toxice: febr 3-5 zile, facies congestionat, lcrimare, fotofobie,cefalee constant, dureri n globii oculari, mialgii (muchii cefei, lombalgii, rahialgii), adinamie manifestri respiratorii: catar nazal, hiperemie faringian, laringo-traheit tablou sanguin: leucopenie cu limfocitoz (neutropenie), trombocitopenie

convalescen: astenie, stare depresiv, irascibilitate, tuse seac

BOALA LA OM
complicaii:
pneumonie, miocardit, meningit, suprainfecii bacteriene etc.

Imunitate
specific de tip, de scurt durat Ac anti HA neutralizeaz virusul gripal Ac anti NA mpiedic rspndirea virusului la celulele neinfectate Ac tip IgM primoinfecie gripal HAI, RFC Ac tip IgG rspuns imun secundar HAI Ac tip IgA ac virulicizi din secreia cilor respiratorii !! interferon prima linie de aprare

!! SINDROM REYE: encefalopatie, degenerescena gras a ficatului i a altor organe dup grip tratat cu salicilai (ASPIRIN)

Tratament
amantadin; rimantadin pt. VGA inhibitori de neuraminidaz pt VGA i VGB: TAMIFLU; RALENZA (ZANAVIR)

1918

EPIDEMII

Profilaxie
nespecific specific
OMS supraveghere continu a gripei pe glob vaccinare

- 2 miliarde mbolnviri - 20 milioane decese - SUA, Europa Africa - 3 valuri succesive - 30 40 ani - gena NP comun cu cea porcin

1957 / 1958
- afectat 1/3 populaie - 4 milioane decese - China apoi SUA - 5 19 ani - genele HA,NA, PB1 de la tulpina parental aviar

1968
- 2 milioane decese - China apoi Australia, America de Nord, Europa - genele HA i PB1 de la tulpina aviar

1977
- China, rapid n Rusia, Europa, SUA, Australia - sub 20 ani - originea nu se cunoate

n prezent H1N1 i H3N2

Influenza virus tip A

Lungimea liniei = 100 nm Imagine electronomicroscopic; Produs colorat cu PTA 2% Mrire 29.700 ori Universitatea Laval, Facultatea de Medicin, Quebec, Canada, (Dr. Hans Ackermann)

Influenza virus tip A

tulpin utilizat pentru obinerea vaccinului Coloraie cu uranil-acetat 2% Virus purificat prin centrifugare n gradient de zaharoz Institutul Robert Koch, Berlin, Germania (Dr. Stephan Biel)

Influenza virus tip A

tulpin utilizat pentru obinerea vaccinului Coloraie cu uranil-acetat 2% Virus purificat prin centrifugare n gradient de zaharoz Institutul Robert Koch, Berlin, Germania (Dr. Stephan Biel)

Influenza virus tip A

Virioni de sferici de 200nm nveliul extern conine spiculi rigizi de hemaglutinin i neuraminidaz care formeaz un halou caracteristic n jurul particulei virale colorat negativ Universitatea Cape Town, Africa de Sud (Dr. Linda Stannard)

Influenza virus tip A

Genomul viral este alctuit din 8 segmente de ARN monocatenar. Ribonucleoproteina helical nu este ntodeauna vizibil; uneori n particula viral se vd componentele interne helicate. Universitatea Cape Town, Africa de Sud (Dr. Linda Stannard)

Influenza virus tip A

Veterinary Sciences QueenUniversity, Belfast, UK (Prof. Steward McNulty)

Influenza virus tip A2, Asia

Research School of Biological Sciences Australian National University, Canberra, Australia (Dr. Cornelia Bchen-Osmond)

10