AMINOACIZI

Aminoacizii sunt unitile constituente ale proteinelor i cuprind n molecula lor dou grupri funcionale: carboxil i amino.Exist 20 de aminoacizi proteinogeni specificai prin codul genetic, prezeni n toate organismele vii. Aminoacizii naturali au formula general: R-CH-COOH NH2 n care gruparea aminic se afl la carbonul fa de carboxil.Excepie face prolina al crui azot,dei tot n poziia fa de carboxil, face parte dintr-un inel pirolidinic, fiind o grup aminic secundar. Diversitatea aminoacizilor naturali este dat de natura lui R care poate fi o caten hidrocarbonat alifatic sau aromatic, un heterociclu sau care poate s cuprind o funcie adiional. CLASIFICARE Aminoacizii pot fi clasificai: dup natura catenei: alifatic, aromatic, heterociclic; dup numrul gruprilor COOH i NH2: monoamino-monocarboxilici, diaminomonocarboxilici; dup poziia relativ pe care o au gruprilor funcionale n molecul:, , -aminoacizi. dup prezena n cuprinsul catenei a altor grupri funcionale.

Cea mai interesant clasificare ni se pare a fi cea bazat pe polaritatea catenei i cuprinde patru grupe : 1.)cu radical nepolar ( hidrofob ) : glicina, alanina, valina, leucina, izoleucina, prolina,fenilalanina, triptofanul i metionina.Toi sunt mai puin solubili n ap dect aminoacizii polari; 2.)cu radical polar nencrcat electric (la pH=6):serina,treonina,cisteina,tirosina asparagina,glutamina.Aceti aminoacizi sunt mai solubili n ap dect cei nepolari, deoarece catena poate stabili legturi de hidrogen cu apa, datorit gruprilor OH,-NH2 amidice i -SH pe care le conine; 3.)cu radical polar ncrcat negativ (la pH=6): acidul aspartic i acidul glutamic; 4.)cu radical polar ncrcat pozitiv (la pH=6): lisina,arginina,histidina.

Caracteristici generale : Aminoacizii ndeplinesc mai multe roluri biologice,fiind n acelai timp: ioni dipolari cu un moment de dipol mare, care determin o cretere considerabil a mediului n care se dizolv; electrolii amfoteri solubili n ap, cu capacitatea de a aciona ca substane tampon n diferite domenii de pH; sunt optic activi, datorit faptului c posed unul sau mai muli atomi de carbon asimetrici, cu excepia glicinei; sunt compui cu grupe reactive capabile s participe la reacii chimice avnd ca rezultat o mare gam de produse sintetice; sunt liganzi ai multor metale; sunt participani n reacii metabolice cruciale, de care depinde viaa i sunt substane in vitro pentru o gam mare de enzime; sunt constitueni eseniali ai moleculelor proteice ale cror caractere specifice,biologice i

chimice sunt determinate n mare parte de numrul, distribuia i interrelaiile aminoacizilor din care se compun. Ei prezint unitate i diversitate n acelai timp:unitate, deoarece sunt -aminoacizi cu toate consecinele fizice care decurg din aceasta i pentru c cei care sunt componeni uzuali ai proteinelor au aceeai configuraie optic a atomului de carbon din poziia , i diversitate, deoarece fiecare din ei posed o caten diferit, care-i confer proprieti unice, deosebindu-l fizic,chimic i biologic de ceilali. Proprieti fizice Toi aminoacizii sunt substane solide,incolore,cristalizate.Forma cristalelor este caracteristic pentru fiecare aminoacid /11/.Se topesc la temperaturi ridicate (peste 200 C),cu descompunere; nu pot fi distilate nici chiar n vid.P.t. al cristalelor nu constituie un criteriu de difereniere ntre ei. Aminoacizii sunt, n general, solubili n ap, ns gradul de solubilitate este diferit de la un aminoacid la altul.Solubilitatea este determinat de caracterul mai mult sau mai puin polar al catenei i de pH, fiind minim la punctul izoelectric. Sunt n general insolubili n solveni organici, cu excepia prolinei, care este relativ solubil n etanol.Solubilitatea aminoacizilor ca i cea a proteinelor, este influenat de prezena srurilor.

Termenii inferiori din seria aminoacizilor alifatici au gust dulceag,cei cu mas molecular mare au gust amar. Stereochimia aminoacizilor Toi aminoacizii proteinogeni (cu excepia glicocolului) au un atom de carbon asimetric i deci pot exista sub forma a doi antipozi optici.Treonina i izoleucina au doi centri asimetrici i deci au patru stereoizomeri. Prin sintez chimic se obin n general formele racemice.Scindarea acestora nu poate fi efectuat prin metoda chimic obinuit,cu ajutorul bazelor i acizilor optic activi,fiindc aminoacizii sunt acizi, respectiv baze prea slabe pentru a forma sruri stabile, cristalizabile cu aceti compui.Singurul aminoacid suficient de puternic pentru a putea fi scindat prin intermediul srii sale cu chinina, este acidul glutamic.Restul aminoacizilor se transform nti n derivai acilai,care blocheaz gruparea amino i permite reacia cu baze optic active.Mai avantajoase s-au dovedit metodele biochimice pentru scindarea racemicilor, folosind marea specificitate a enzimelor pentru stereoizomerii naturali./1,3/. Activitatea optic este exprimat cantitativ prin rotaia specific []D , la temperatura de 20 sau 25 ,iar D fiind lungimea de und de obicei linia D a sodiului, 589.3 nm.Activitatea optic depinde de natura solventului ,iar n cazul soluiilor apoase, de pH. n general, rotaia optic specific a unui aminoacid monoaminic sau monocarboxilic este maxim la punctul izoelectric.Rotaia specific depinde de natura catenei aminoacidului. S a stabilit c toi aminoacizii din proteinele naturale se nrudesc cu L-glicerinaldehida,i deci fac parte din seria L.n peretele celular al unor microorganisme sau n unele antibiotice se gsesc i aminoacizi din seria D.(n notaia modern, literele D i L se nlocuiesc cu R, respectiv S)./5,8/. COOH H-C-NH2 R D-aminoacid Proprieti spectrale Aminoacizii uzuali nu absorb lumina n vizibil. Dintre acetia, numai tirosina,fenilalanina i triptofanul dau spectre de absorbie la lungimi de und mai mari de 250nm,datorit nucleului aromatic din caten.Fenilalanina prezint un maxim de absorbie la 260nm,tirosina la 275nm i COOH H2N-C-H R L-aminoacid

triptofanul la 280nm.ntruct majoritatea proteinelor conin tirosin, msurarea absorbiei luminii la 280nm la spectrofotometru poate constitui o metod satisfctoare de dozare a concentraiei proteinei ntr-o soluie.Cistina absoarbe la 240nm,datorit gruprii S-S-. Toi aminoacizii absorb n U.V. ndeprtat. Datorit comportrii diferite n soluie a aminoacizilor,n funcie de condiii,spectrele IR difer in ele n funcie de condiiile experimentale. n mediu acid se afl urmtoarele grupri la care corespund benzi caracteristice: -COOH -NH3+ -COOH n mediu bazic: -COO-NH2 -NH C=O o band 1600-1550cm-1 OH C=O 3570-3500 cm-1 -NH2+ 2700-2250cm-1, NH+ 2450cm-1

3130-3030cm-1,

1790-1760cm-1 (neasoc.), 1710cm-1.

3500-3300cm-1(neasoc.), 3000-2000cm-1 dou benzi

n spectrul RMN, protonul din aminoacizi are o deplasare chimic ( ) cuprins ntre 4.30 i 4.80 ppm./1,7,9/. Proprieti electrochimice Datorit prezenei n molecul att a unei grupri funcionale acide (-COOH),ct i a uneia bazice (-NH2), aminoacizii sunt substane cu caracter amfoter.Att n cristale ct i n soluie apoas,moleculele lor apar sub form de ioni dipolari (amfioni). Dovada acestui fapt s-a fcut prin difracia razelor X, determinarea constantelor de bazicitate i aciditate, a momentelor dielectrice, precum i pe baza interpretrii spectrelor Raman.Structura care reprezint caracterul lor dipolar rezult prin reacia protolitic intramolecular: R-CH-COOH NH2 R-CH-COO+NH3

n prezena acizilor sau bazelor, soluiile aminoacizilor funcioneaz ca soluii tampon.Dac se adaug soluiei de aminoacid un acid tare (HCl), protonii si sunt consumai, dnd un acid slab: R-CH-COO- + H3O+ +NH3 R-CH-COO- + HOR-CH-COOH + H2O +NH3 R-CH-COO- + H2O

n prezena unei baze tari, ionii HO- sunt consumai, formndu-se o baz slab:

+NH3

+NH2

Amfionul dipolar nu migreaz n cmp electric;n mediu acid ns, aminoacidul se afl sub form de cation i va migra ctre anod, iar n mediu bazic se afl sub form de anion i va migra ctre catod. Toi aminoacizii pot fi neutri n soluie, deoarece gruprile amino i carboxil se neutralizeaz reciproc;predomin forma amfionic a crei concentraie maxim este condiionat de o anumit valoare a pH-ului, numit punct izoelectric,notat pHi.Punctul izoelectric este pH-ul la care soluia apoas conine anioni i cationi ai aminoacidului n proporie egal: pHi=(pK1+pK2)/2 Valoarea punctului izoelectric depinde de valoarea constantelor de ionizare: K1 pentru funciunea carboxil i K2 pentru funciunea amin;pK1 i pK2 se determin titrimetric./1,2,5,8,9,11/. Pentru aminoacizii monoamino-monocarboxilici pHi se gsete situat n domeniul de pH=4.8-6.3,deoarece grupa COOH este mai puternic ionizat dect gruparea NH2,variaiile fiind determinate de efectul exercitat de radicalul R de la C asupra celor dou funciuni,amino i carboxil. Aminoacizii monoamino-dicarboxilici au pHi situat la valori mai mici ale pH-ului ( domeniu acid) ca o consecin a faptului c n molecul exist nc o grupare carboxil,care nu particip la salifierea intern i pentru a nu fi disociat este firesc ca valoarea pH-ului soluiei s se gseasc situat n domeniul acid. Aminoacizii diaamino-monocarboxilici, din aceleai considerente,au puncte izoelectrice situate la valori mari ale pH-ului,respectiv n domeniul bazic. La punctul izoelectric solubilitatea aminoacidului respectiv este minim, deoarece momentul de dipol mare al amfionului duce la o puternic atracie ntre moleculele din cristal.Aceast proprietate prezint importan pentru separarea unor aminoacizi din amestecuri./5,9/. Pe baza celor menionate, se poate explica i comportarea soluiilor de aminoacizi la trecerea unui curent electric,conductibilitatea acestora fiind determinat de valorile pH-ului. Din punct de vedere structural,sub aspect funcional, electronic i steric, -aminoacizii se prezint ca specii moleculare cu caracteristici bine determinate.

Proprieti chimice Prezena grupelor amino i carboxil confer aminoacizilor caracter acid i caracter bazic,precum i capacitatea de a da reaciile generale caracteristice acizilor carboxilici i aminelor, innd seama totodat i de efectele reciproce pe care le exercit aceste grupri. Aminoacizii dau cu ionii cuprici i ai altor metale tranziionale sruri complexe interne sau chelai, colorai,greu solubili,stabili.Acetia au structuri ciclice fr tensiune, n care aminoacidul ocup dou poziii coordinative ale metalului,una prin oxigen, alta prin perechea de electroni neparticipani ai grupei amino, de tipul /2,3,9/: COO Cu R-CH-NH2 Proprieti determinate de gruparea carboxil Aminoacizii formeaz derivai normali ai acestei funciuni: esteri, amide,anhidride,nitrili,cloruri acide etc. Clorurile acide (obinute prin tratare cu PCl5) ale aminoacizilor suspendai n clorur de acetil se obin numai sub form de clorhidrai i sunt foarte reactive.Derivaii N-acilai ai aminoacizilor ,n aceleai condiii, formeaz i ei cloruri acide care elimin ns HCl i dau azlactone: R-CH-COOH NH-COR R-CH-COCl NH-COR R-CH-C=O N=C-R OOC NH2-CH-R

Esterii se obin sub form de cristalohidrai, prin tratare direct cu metanol sau etanol saturai cu acid clorhidric gazos.Esterii aminoacizilor inferiori se pot distila la presiune redus.Ei au caracter bazic, dat de gruparea -NH2, gruparea -COOH fiind blocat. La conservare sau la nclzire, esterii aminoacizilor se transform n polipeptide i n 2,5-dicetopiperazine-1,4-disubstituite: O C R-CH HN C O Esterii se pot reduce prin hidrogenare catalitic sau cu sodiu i alcool, cu hidrur de litiu i aluminiu, cu borohidrur de sodiu etc,dnd -aminoalcooli: NH CH-R

H2N-CH-COOR R carboxil n cursul sintezei chimice a peptidelor.

H2

H2N-CH-CH2-OH R

Esterificarea cu etanol sau alcool benzilic este adesea utilizat pentru a proteja gruparea

Sub aciunea amoniacului sau a aminelor, aminoacizii i esterii lor dau natere la aminoamide H2N-CHR-CONH2. Atunci cnd gruparea -COOH reacioneaz cu gruparea -NH2 din alt molecul de aminoacid se obine o legtur amidic de tip special, legtura peptidic: H2N-CHR-COOH + H2N-CHR-COOH H2O Pot reaciona mai multe molecule de aminoacid n acest fel, obinndu-se un lan sau o caten polipeptidic.Compuii cu numr mare de resturi de aminoacizi sunt proteine.Aceast proprietate de a se combina ntre ei dnd natere polipeptidelor i proteinelor este una din cele mai importante caracteristici ale aminoacizilor./1,2,4,5,8,9/. Proprieti determinate de gruparea -NH2 Funciunea -NH2 din aminoacizi poate lua parte la alte tipuri de reacii.Astfel, prin tratare cu cloruri acide sau anhidride, se obin derivai acilai.Acest procedeu se folosete de obicei pentru a proteja funciunea aminic n timpul sintezei chimice a peptidelor: C6H5-COCl + R-CH-COOH NH2 ( R=H- acid hipuric) Se mai pot folosi sulfoclorurile aromatice, cloroformiaii de alchil, n special cei de t-butil, sau chiar acidul formic.Derivatul benziloxicarboxilic Ph-CH2-O-CO-NH-CHR-COOH , corespunztor aminoacidului ( numit i derivat carbobenzoxi ) sau t-butiloxicarbonilic (t-BOCderivatul) Me3C-OOC-NH-CHR-COOH, sunt cei mai comuni derivai protejai ai -aminoacizilor. Cnd prepararea lor se efectueaz n condiii suficient de blnde, configuraia atomului de carbon este conservat, dar n condiii mai energice are loc o racemizare. Prin acilare, grupa -NH2 pierde caracterul ei bazic, iar aminoacizii acilai, de tipul acidului hipuric, sunt acizi de tria acizilor carboxilici obinuii.n prezena hidroxizilor, aminoacizii se combin cu CO2, dnd derivai ai acidului carbonic. R-CH-COOH NH2 + CO2 + Ba( OH)2 R-CH-COONH-COOBa2+ R-CH-COOH NH-CO-C6H5 + HCl H2N-CHR-CO-NH-CHR-COOH +

Reaciile de acest tip au loc probabil n cazul transportului dioxidului de carbon de ctre hemoglobin.Aminoacizii se pot alchila la grupa -NH2 prin metodele uzuale (cu iodur sau sulfat de metil n prezena unui hidroxid alcalin). Derivaii metilai cuaternari ai aminoacizilor sunt denumii betaine. Reprezentantul cel mai cunoscut, betaina, este derivatul trimetilic al glicinei i se obine din acid cloracetic i trimetilamin: HOOC-CH2Cl + N(CH3)3 HOOC-CH2-N(CH3)3]+Cl-HCl -

OOC-CH2-N+(CH3)3

Betaina este mult rspndit n plante, de exemplu n sfecl (Beta vulgaris), acumulndu-se n melas n timpul extraciei i purificrii zahrului.Se gsete i n muchii multor nevertebrate.Betainele, fiind sruri cuaternare de amoniu, sufer prin nclzire transpoziie de tip degradare Hofmann;reacia este reversibil/1,3,5,8,9/. (CH3)3N+-CHR-COO(CH3)2N-CHR-COOCH3

O reacie mult folosit a aminoacizilor este cea cu bromur de nitrozil sau cu acid azotos n soluie acid, obinndu-se hidroxiacizii corespunztori i degajndu-se azot : H2N-CHR-COOH
HONO

HO-CHR-COOH + N2 + H2O

Aceast reacie se folosete n chimia analitic pentru dozarea cantitativ a gruprii libere -NH2 din aminoacizi i proteine, msurnd volumul de azot degajat ( metoda Van Slyke).n soluie de HCl sau HBr se formeaz prin aceast reacie acizii clorurai sau bromurai respectivi. Esterii -aminoacizilor dau cu acid azotos diazoesteri /3,8,9/: EtOOC-CH2-NH2 + HNO2 EtOOC-CHN2 + 2H2O ester diazoacetic Prin tratamente termice, aminoacizii se descompun , dnd diferii compui , n funcie de poziia gruprii -NH2 fa de -COOH.Astfel -aminoacizii dau 2,5-dicetopiperazine; -aminoacizii duc la acizi nesaturai prin eliminare de NH3: H2N-CHR-CH2-COOH R-CH=CH-COOH + NH3

i -aminoacizii elimin uor apa intramolecular dnd lactame /1,5,8/: R-CH-CH2-CH2-COOH NH2 R-CH-CH2-CH2 NH CO + H2O

Prin distilare uscat, n prezena hidroxidului de bariu ori sub aciunea enzimelor de putrefacie, aminoacizii se decarboxileaz, conducnd la amine: H2N-CHR-COOH R-CH2-NH2 + CO2

Multe dintre acestea sunt substane cu proprieti fiziologice i farmacologice remarcabile (amine biogene) /1,2,5,8,9/: HOOC-(CH2)3-NH2 Acid -aminobutiric N C-CH2-CH2-NH2 NH histamina CH CH CH2-CH2-NH2 OH etanolamina CH2-CH2-NH2 SH cisteamina H2N-(CH2)5-NH2 cadaverina

Prin topire cu hidroxidul de potasiu, aminoacizii sufer descompuneri adnci, ducnd la acizi grai i amoniac sau amine. Cu anumii ageni oxidani,aminoacizii sufer degradri,dnd aldehidele imediat inferioare sau nitrilii corespunztori /3,5,8/: R-CHO + NH3 + CO2 R-CH-COOH NH2 O reacie caracteristic a R-CN + H2O + CO2 aminoacizilor este cea cu ninhidrina (hidratul

tricetohidrindenului).Se formeaz compui colorai n albastru cu majoritatea -aminoacizilor; excepie fac prolina i hidroxiprolina care formeaz compui galbeni.n prima faz se produce o degradaere oxidativ a aminoacizilor la aldehide. Identificarea i dozarea aminoacizilor Se realizeaz prin mai multe metode i anume: 1.Reacii de culoare: cea mai important este reacia -aminoacizilor cu

ninhidrina.Compuii de culoare albastr au un maxim de absorbie la 570nm.Prolina i hidroxiprolina dau cu ninhidrina compui galbeni cu maxim de absorbie la 440nm.Adaosul de compui de cadmiu stabilizeaz culoarea /1,2,5,8,9/. 2. Msurarea absorbiei n u.v. se poate folosi pentru dozarea aminoacizilor aromatici, n amestec cu ali aminoacizi.Citirea se face la 260nm pentru fenilalanin i 280nm pentru tirosin i triptofan /5,8/. 3.Metode cromatografice.Se folosesc toate variantele acestei tehnici:CH,CSS,CSI,GC,HPLC. n cromatografia pe hrtie (CH) i n strat subire (CSS) exist o strns dependen ntre constituia catenei unui aminoacid i viteza sa de migrare.Cei cu catene hidrofobe mari (valina,leucina,izoleucina,fenilalanina,tirosina,triptofanul,metionina) migreaz mai repede dect cei

cu catene hidrofobe mai scurte (alanina, glicina,prolina) i dect cei cu catene hidrofile (cistein,serin, treonin, acid aspartic, acid glutamic, lisin, arginin,histidin).Migrarea difereniat a aminoacizilor este determinat de afinitatea mai mare pe care o au aminoacizii cu catene hidrofile pentru faza staionar (apoas) i cei cu catene hidrofobe pentru faza mobil (solvent organic).n cazul amestecurilor complexe de aminoacizi se folosete cromatografia bidimensional, folosindu-se un amestec de solveni organici cu migrare ntr-un sens i un alt amestec de solveni pentru sensul perpendicular pe primul.Aminoacizii se dozez prin tratare cu o soluie de ninhidrin, la cald,eluia fiecrui spot colorat ntr-un solvent al compusului cu ninhidrin, stabilizarea acestuia prin combinaii cu sruri de cadmiu i citirea absorbiei la o lungime de und de 570nm la un spectrofotometru. Separarea cromatografic pe schimbtori de ioni are loc datorit afinitii diferite a aminoacizilor pentru acetia, n funcie de constantele de disociere a gruprilor -COOH i NH 2. Eluia aminoacizilor reinui n coloan se face cu solveni cu valori de pH crescnde (n gradient de pH); eluia aminoacizilor se va face n ordinea invers afinitii lor pentru schimbtorul de ioni folosit.S-au elaborat dou tehnici: una folosind un colector automat de fraciuni i a doua, folosind un analizor automat de aminoacizi. n cazul cromatografiei de difuzie pe gel, aminoacizii cu molecul mai mic i mai hidrofili difuzeaz n gel i sunt mai puternic reinui;cei cu molecule mai mari rmn n apa dintre particulele de gel i ies mai repede de pe coloan. n electroforez sau ionoforez, separarea are loc sub aciunea unui cmp electric.Aminoacizii se separ n funcie de valoarea constantei lor de disociere la un anumit pH dat.Se folosete de obicei pH-ul 4,0 la care separarea este net pentru toi aminoacizii (n condiiile unei tensiuni electrice mari, 70 V/cm). Indiferent de metoda de separare,prelucrarea probelor cu ninhidrin i citirea absorbiei la 570nm este procedura final comun. Pentru dozri exacte, n special pentru stabilirea unor mecanisme de reacie sau a unor ci de metabolizare sau de biosintez se aplic metoda diluiei izotopice /1,3,5,8,9/. Prezena unor anumii aminoacizi este indicat dup poziia maximelor, iar raportul n care se gsesc,dup intensitatea maximelor de absorbie: Asp:Thr:Ser:Glu:Pro:Gly:Ala=15:10:15:12:4:3:12 4.Determinri microbiologice.Exist dou tipuri de metode microbiologice folosite la dozarea aminoacizilor.Prima metod se bazeau pe compararea gradului de dezvoltare a unui microorganism dependent de aminoacidul ce urmeaz s fie dozat, cu o curb de dezvoltare

prestabilit n funcie de concentraia aminoacidului.A doua metod de dozare microbiologic se bazeaz pe faptul c unele microorganisme conin enzime specifice de degradare pentru anumii aminoacizi, de exemplu decarboxilaze care catalizeaz decarboxilarea aminoacidului cu degajare de CO2.Se msoar cantitatea de CO2 degajat n condiii de lucrubine stabilite, care este proporional cu concentraia aminoacidului n prob . Metode de preparare Importana deosebit a aminoacizilor att pentru cercetrile biochimice, nutriionale i microbiologice, ct i pentru utilizarea lor n preparate farmaceutice, alimente i furaje a determinat elaborarea unei multitudini de metode de preparare n laborator i n industrie.Astfel, aminoacizii pot fi obinui prin izolarea lor din hidrolizatele acide,bazice sau enzimatice ale proteinelor, prin sinteze chimice i prin biosintez. I.Izolarea din hidrolizatele proteice Izolarea aminoacizilor se poate realiza folosind adsorbia pe crbune activ, pmnturi adsorbante, schimbtori de ioni, cromatografie de repartiie, electroforez,coprecipitare cu reactivi specifici.n timpul hidrolizei acide, triptofanul este degradat aproape complet; el se separ din hidrolizatele alcaline.Serina i treonina sunt i ele distruse parial n condiiile hidrolizei acide.De asemenea, n timpul hidrolizei acide i alcaline, aminoacizii se racemizeaz parial.Prin hidroliz enzimatic se obin aminoacizi optic activi, cu configuraiaL.Izolarea din hidrolizatele proteice servete la prepararea industrial a multor aminoacizi, cum sunt:acidul glutamic,lisina,cisteina,arginina,triptofanul,tirosina. II.Sinteze chimice de aminoacizi 1.Aminarea acizilor -halogenai Prin tratarea unui acid -clorurat sau -bromurat cu amoniac sau hexametilentetramin se obine aminoacidul corespunztor: R-CH-COOH + 2NH3 X R-CH-COOH + NH4X NH2

Metoda se aplic la toi -bromacizii accesibili prin bromurarea acizilor, folosind metoda HellVolhard-Zelinski.Se utilizeaz un exces mare de amoniac, pentru evitarea formrii de amine secundare i teriare.Cu HMTA se formeaz un aduct care se descompune prin nclzire cu HCl, dnd aminoacidul cu randament mare. 2. Aminarea reductiv Prin reducerea catalitic (cu Pd i H2) a unui -cetoacid n prezena amoniacului se obine aminoacidul corespunztor:

R-C-COOH O

+NH3

R-C-COOH NH

+H2

R-CH-COOH NH2

-H2o

-cetoacidul sau esterul acetilacetic substituit pot fi transformai n oxime, hidrazone sau fenilhidrazone, care formeaz aminoacidul respectiv, prin reducere chimic sau catalitic: R-CO-COOH
+PhNHNH2

C6H5-NH-N-CR-COOH HON=CR-COOEt

H2

H2N-CHR-COOH H2N-CHR-COOH

CH3-CO-CHR-COOEt

Reducerea se poate efectua cu Sn i HCl sau Zn i CH 3-COOH, cu amalgam de sodiu sau de Al, catalitic (cu Ni Raney) sau electrolitic. Importana preparativ a metodei reductive este mult mrit prin obinerea compuilor azotai intermediari pe ci mai simple dect cele de la acizii -cetonici.O astfel de cale este cuplarea esterilor -cetonici -substituii cu sruri de diazoniu aromatice (Feofilaktov, 1938). R-CH-COOEt + C6H5-N=N]+ClCOCH3 +H2N-C6H5 3.Aminarea prin transpoziie intramolecular Aceast metod implic transformarea unui derivat al acidului cianoacetic ntr-o azid sau amid i apoi n aminoacidul dorit, folosind transpoziiile (degradrile) Schmidt, Curtius sau Hofmann: CN R-CH COOEt CN R-CH CONHNH2 CN R-CH COOH CN R-CH CON3 CONH2 R-CH COOH CN R-CH NHCOOEt NH2 R-CH COOH COOH R-CH NH2 R-C-COOEt N-NHC6H5 R-CH(NH2)-COOH +

4.Reacia cianhidrin (sinteza Strecker, 1858) Aceast metod implic interaciunea unei aldehide cu ionul cianur, n prezena amoniacului sau a carbonatului de amoniu.Se formeaz aminonitrilul,respectiv hidantoina substituit, care prin hidroliz cu acizi sau baze, se transform n aminoacidul respectiv:

R-CH=O + HCN

R-CH-CN OH +(NH4)2CO3

R-CH-CN NH2

R-CH-COOH NH2

R-CH-CO-NH NH-CO

+H2O -NH3, -CO2

5.Condensarea cu esteri N-acilai ai acidului aminomalonic Esterul aminomalonic se obine prin reducerea esterului izonitrozomalonic.Derivaii Nacilai formeaz combinaii sodate, care reacioneaz n acelai mod ca esterul malonic sodat.Se utilizeaz de obicei derivatul N-acetilat sau N-formilat. EtOOC CH2 EtOOC EtOOC CH-NH-COCH3 EtOOC Se pot folosi i esteri aminocianoacetici N-acilai: EtOOC-CH-NH-COCH3 CN Derivaii esterilor acidului aminomalonic se transform n combinaii sodate (cu etoxid de sodiu) care, prin condensare cu halogenuri de alchil sau acil i hidroliz ulterioar, formeaz aminoacizii corespunztori. Obinerea formelor optic active Metodele chimice de sintez conduc de obicei la aminoacizi racemici.Dedublarea formelor racemice ale aminoacizilor se poate realiza, n principiu, prin urmtoarele metode : a.) Cristalizarea selectiv a unuia din enantiomeri din soluia saturat a acestuia. b.) Formarea de sruri diastereoizomere cu baze sau acizi chirali.Se folosesc de obicei aminoacizi N-acilai, pentru a le intensifica caracterul acid i a forma sruri cu baze optic active. Se pot utiliza i esteri ai aminoacizilor, care au caracter bazic mai pronunat dect aminoacizii i formeaz sruri cu acizi optic activi.Aminoacizii bazici reacioneaz ca atare cu acizii optic activi (acid D-camforic).Srurile diastereoizomere se separ prin diferena de solubilitate.Dup separare, prin hidroliz se obin aminoacizi liberi. c.)Tratarea racemicului cu preparate enzimatice.Aceast metod este nalt selectiv datorit marii specificiti a enzimelor i posed avantajul c permite obinerea unor izomeri cu coufiguraie cunoscut.Procedeele constau n:
ONOH

EtOOC C=NOH EtOOC

+H2, -H2O

EtOOC CH-NH2 EtOOC

Ac2O

- introducerea amestecului racemic, prin ingerare (furaj) sau prin injectare, ntr-un animal, ale crui enzime metabolizeaz numai forma L.Din urin se separ apoi enantiomerul D rmas netransformat; - oxidarea sau decarboxilarea cu ajutorul unor microorganisme specifice sau esuturi, ale unuia din izomeri, cellalt rmnnd neatacat. - hidroliza asimetric sub aciunea unor enzime (amidaze, esteraze, acilaze) ale derivailor aminoacizilor racemici substituii n mod adecvat, prin care se elibereaz numai antipodul L, care se separ de enantiomerul D rmas nehidrolizat. III. Metode de biosintez a aminoacizilor /2,5,7,8,9,10,12/ Aceste metode se bazeaz pe capacitatea de biosintez a microorganismelor i au avantajul c se obin aminoacizi din seria L, avnd configuraia aminoacizilor naturali din proteine.Mecanisme foarte precise de reglare menin concentraia aminoacizilor n celule n limite foarte strnse.Prin mutagenez, celulele microbiene sufer modificri genetice, cu implicaii asupra mecanismelor de reglare.Ele pot suferi o mutaie sau deleie a genelor operatoare sau reglatoare ale unora din enzime sau prin mutaie genetic se pot codifica enzime modificate astfel nct s nu mai fie sensibile la metabolitul care le regleaz n mod normal.Acest fel de microorganisme cu mecanismele de reglare modificate, cu permeabilitatea membranei celulare schimbat sau cu deficiene metabolice, pot fi ntrebuinate industrial pentru producerea unor metabolii importani pentru om, printre care i aminoacizii. Pentru obinerea aminoacizilor se folosesc mutani de Brevibacterium sau Corymbacterium, dependeni de ali aminoacizi ce fac parte din schema de biosintez a aminoacidului n cauz (de exemplu pentru producerea lisinei se folosesc mutani dependeni de homoserin) sau mutani rezisteni la analogi ai respectivului aminoacid. Drept materii prime se folosesc hidrai de carbon, alcooli,hidrocarburi alifatice cu cel puin 10 atomi de carbon, compui cu azot (proteine, peptide, uree, sruri de amoniu), sruri minerale (ce conin K, Mg, Ca, P, Fe, Mn, Zn etc) i factori de cretere.Aceste substane sunt folosite de microorganisme pentru a se dezvolta i pentru a efectua biosinteza propriu-zis a aminoacidului. n timpul biosintezei se introduce aer sub presiune, steril, care furnizeaz oxigen diferitelor procese metabolice.n funcie de aminoacid, concentraia acestuia n mediile fermentate este cuprins ntre cteva grame i pn la 90-100 g/l.Aminoacizii astfel sintetizai sunt izolai i purificai cu ajutorul schimbtorilor de ioni, cristalizrii fracionate, adsorbiei pe diferii adsorbani. IV.Metode mixte

Aceste metode se folosesc de avatajele metodelor chimice i biochimice,deopotriv.Astfel, se produc n cantiti mari intermediari prin sintez chimic i apoi sunt supui transformrilor stereospecifice, cu obinerea direct a L-aminoacidului.

Utilizrile aminoacizilor Aminoacizii se folosesc n medicin pentru prepararea unor medicamente i pentru alimentaia artificial n anumite mbolnviri ale sistemului digestiv, n caz de intervenii chirurgicale etc.Se folosesc n alimentaie, pentru suplimentarea unor produse deficitare n aminoacizi eseniali, pentru accentuarea aromelor, pentru prepararea supelor concentrate,a alimentelor pentru copii, alimentaia dietetic pentru cosmonaui,ca antioxidani la prepararea conservelor i buturilor etc /5,10/. Cantiti mari de aminoacizi se folosesc n zootehnie, pentru obinerea concentratelor furajere i pentru a mri digestibilitatea furajelor bogate n hidrai de carbon i srace n proteine complete.Se folosesc, de asemenea, pentru prepararea unor medii bacteriologice necesare depistrii unor boli /5,10/. Din punct de vedere fiziologic aminoacizii au un rol deosebit. Astfel, acidul glutamic are un rol major n dezintoxicarea organismului, glutamina obinut prin aminarea lui fiind recomandat mpotriva oboselii, depresiei i impotenei.Glicina intervine n sinteza hemoglobinei; ca precursor al glutationului, glicina se combin cu acidul colic i formeaz glucocolai (sruri biliare) cu rol deosebit n digestie.Serina particip la sinteza cefalinei i stingomielinei.Arginina trece n ornitin care permite sinteza spermidinei i sperminei, prolamine considerate principali factori decretere.Tirosina este precursorul a doi hormoni tiroidieni i anume: triiodotironina i tiroxina.De aceea, tirosina este deosebit de important n eliminarea dereglajelor tiroidiene.De remarcat c tirosina este precursor al adrenalinei i noradrenalinei, substane cu rolimportant n pstrarea echilibrului psihic.Triptofanul conduce la formarea serotoninei care este un vasoconstrictor puternic, un bun stimulator al contraciei muchilor netezi, un excelent neurotransmitor al sistemului nervos central.Am menionat o parte din aminoacizi, n special cei a cror activitate fiziologic este remarcabil i care nu se gsesc ntotdeauna ct ar trebui n alimentaia zilnic /1,3,7,12/.