CRETEREA I MULTIPLICAREA BACTERIILOR Ca rezultat al metabolismului de sintez, bacteriile cresc prin formarea de noi constitueni celulari, dup care

se multiplic. Creterea i multiplicarea bacterian prezint anumite particulariti, ca urmare a intensitii deosebite a metabolismului bacterian i a reglrii lui perfecte. Studiul creterii i multiplicrii bacteriene este important din punct de vedere teoretic, pentru a explica dinamica, mecanismul i factorii care influeneaz aceste procese, dar i din punct de vedere practic, pentru utilizarea eficient a bacteriilor n biotehnologie (pentru obinerea de biomas, produi de fermentaie, produi secundari de metabolism). Creterea bacteriilor Creterea bacteriilor reprezint mrirea coordonat a tuturor constituenilor celulari. Ea este rezultatul sintezei specifice i echilibrate, pornind de la substanele nutritive din mediu, a unor compui de baz, care sunt ulterior asamblai pentru a forma copii fidele ale constituenilor celulari. Specificitatea creterii este determinat de intervenia unor mecanisme de control genetic. Procesul creterii depinde de natura i concentraia substanelor nutritive din mediu, precum i de aprovizionarea continu a celulei cu energia necesar reaciilor de sintez. Mrirea masei totale a celulei bacteriene nu reflect ntotdeauna creterea normal a celulei, deoarece ea poate rezulta prin sinteza i acumularea de substane de rezerv, care nu sunt specifice creterii sau prin sporirea accentuat a coninutului n ap. Creterea celulei bacteriene se realizeaz prin adugarea de constitueni noi la peretele celular rigid, care are loc n moduri diferite: - polar; - bipolar; - ecuatorial, n zona septului de diviziune; - intercalar, prin intususcepiune, n zone specifice de cretere; - prin depunere pe suprafaa intern a peretelui celular. Creterea bacteriilor se realizeaz prin depunerea de substane noi uni-, bi- sau tridimensional. De obicei creterea bacteriilor cilindrice se face n sensul axului longitudinal, iar celulele sferice cresc n sensul celor trei dimensiuni. Creterea bacteriilor nu se face la infinit, ci doar pn la un moment critic, n care creterea este ntrerupt i este urmat de diviziunea celular. Mecanismul ntreruperii procesului de cretere nu este pe deplin cunoscut. Se admite ipoteza c activitatea normal a celulei bacteriene este urmarea unui raport echilibrat ntre volumul celulei bacteriene (care reflect masa celular ce consum nutrienii i produce catabolii) i suprafaa celulei (aria prin care se realizeaz schimburile cu mediul extracelular, care constau n absorbia nutrienilor i eliminarea unor produi de catabolism). n cursul creterii celulei, acest raport echilibrat se modific n sensul diminurii suprafeei (care crete cu o rat ptratic, n timp ce volumul crete cu o rat cubic), astfel nct aportul de substane nutritive devine insuficient i inadecvat necesitilor metabolice ale celulei. Se ajunge astfel la momentul critic, ce declaneaz diviziunea celular, care restabilete raportul echilibrat ntre suprafaa i volumul celulei bacteriene.

Multiplicarea bacteriilor Multiplicarea bacteriilor se realizeaz prin patru mecanisme: diviziune direct (simpl), nmugurire, fragmentare i prin producerea de spori. 1) Diviziunea direct (izomorf) Este forma cea mai rspndit i cea mai bine cunoscut de multiplicare a bacteriilor. Ea const n scindarea celulei mam, ajuns la punctul critic de cretere, n dou celule fiice surori, cel mai adesea identice. La bacteriile cilindrice i spiralate diviziunea se face ntr-un plan transversal, perpendicular pe axul longitudinal al celulei, i numai excepional, la unii spirili, se realizeaz dup un plan longitudinal. Cocii se divid dup unul, dou sau trei planuri, perpendiculare unul pe cellalt, fcnd posibil gruparea celulelor n diplococi, tetrad, sarcin. n general, diviziunea evolueaz n trei etape distincte: - formarea unei membrane ce separ protoplatii ce vor forma celulele fiice; - sinteza peretelui celular pe suprafaa membranei respective sau formarea unui sept transversal prin creterea spre interior a peretelui celular periferic; - separarea celulelor rezultate n urma diviziunii. Exceptnd situaiile anormale, (care se finalizeaz cu formarea unor minicelule sferice, lipsite de ADN, ca urmare a localizrii anormale a situsului de diviziune), bacteriile fr nucleu apar extrem de rar. Acest fapt sugereaz existena unei legturi obligatorii ntre replicarea ADN-ului i diviziunea celulei, precum i existena unui mecanism de control, care permite ca diviziunea s aib loc doar atunci cnd n celula mam exist doi nuclei noi, care vor fi separai n cele dou celule fiice.

n procesul de diviziune celular are loc nti replicarea ADN-ului, apoi formarea septului de diviziune. Aceast corelaie a fost studiat la Escherichia coli, la care timpul de apariie a unei noi generaii este de 45 minute. - timpul 0 informaia genetic este reprezentat de un singur cromozom bacterian; - timpul 18 min. ADN-ul cromozomal este parial replicat; - timpul 20 min. ncepe migrarea celor doi cromozomi obinui prin replicare ctre extremitile celulei; - timpul 25 min. segregarea informaiei genetice a avut deja loc, cresc membrana plasmatic i peretele celular n spaiul dintre cele dou molecule de ADN; - timpul 30 min. ncepe formarea septului transversal de diviziune; - 35 38 min. cele dou celule fiice, fiecare cu cte un nucleosom propriu, sunt n situaia de a se separa; - timpul 45 min. are loc separarea celor dou celule fiice nou formate. Cercetrile ulterioare ale corelaiei dintre replicarea ADN-ului bacterian i ritmul de diviziune au scos n eviden particulariti ale acestui fenomen. Acestea se refer la acumularea unei proteine iniiator, capabil s declaneze ciclul de replicare a cromozomului, ntr-un ritm care depinde de condiiile de mediu, dar i la faptul c n general timpul de replicare a cromozomului este fix, la Escherichia coli durnd 20 minute. Dinamica procesului de multiplicare bacterian n culturi Culturile bacteriene sunt de dou tipuri: continue i discontinue. Culturile continue sunt cele n care mediul de cultur este rennoit permanent cu o anumit rat, o parte din masa bacterian format fiind ndeprtat n acelai timp din cultur, cu aceeai rat. Aceste culturi se realizeaz n aparate speciale i asigur o concentrae constant de celule n cultur (dup principiul turbidostatului) i o concentraie constant a substanelor chimice din mediu (dup principiul chemostatului). Culturile discontinue sunt cele obinute ntr-un mediu de cultur nennoit, n vase nchise. Se pot realiza n dou variante: culturi asincrone i culturi sincrone. Culturile sincrone sunt cele n care majoritatea bacteriilor se multiplic n acelai timp. Culturile asincrone sunt cele n care bacteriile se multiplic n momente diferite. Culturile obinute n laborator n mod curent sunt culturi discontinue asincrone. Acestea prezint urmtoarele particulariti: mediul de cultur nu este rennoit pe timpul cultivrii, fiind ntr-un volum fix pe ntreaga durat a obinerii culturii; compoziia chimic a mediului se schimb pe parcursul formrii culturii (substanele nutritive sunt consumate, se acumuleaz produi de catabolism, se modific pH-ul, ); numrul de celule viabile este variabil, la nceput crescnd progresiv, ulterior scznd datorit mbtrnirii i morii celulelor; ritmul de diviziune este inegal, la nceput, cnd populaia bacterian este tnr i condiiile de mediu sunt optime, fiind mai mare, ulterior scznd; vrsta celulelor bacteriene este diferit; numrul de generaii este limitat, datorit condiiilor de mediu fixe. Procesul multiplicrii bacteriilor n culturi discontinue asincrone evolueaz n cteva faze succesive:

faza de lag (de laten, de cretere bacterian 0) este cuprins ntre momentul iniierii culturii i nceperea multiplicrii bacteriene; numele ei vine de la to lag (engl.) = a ntrzia; numrul celulelor bacteriene din inoculul iniial rmne relativ neschimbat; dei considerat faz de laten, este n realitate o faz activ, n care celulele se pregtesc pentru multiplicarea ce va urma (i refac structurile i sistemele enzimatice necesare, cresc n dimensiuni, prezint un metabolism intens). Aceast faz are o durat diferit n funcie de vrsta inoculului folosit: dac inoculul provine dintr-o cultur tnr, faza de laten este scurt; dac inoculul provine dintr-o cultur mai veche sau aflat n condiii de mediu total diferite de mediul cel nou, faza de laten este de mai lung durat, celulele fiind ntr-o faz activ de adaptare la noile condiii de cultivare. - faza de accelerare const n iniierea multiplicrii bacteriene ntr-un ritm progresiv, care determin i numele fazei; - faza de cretere logaritmic (exponenial) este faza n care multiplicarea se realizeaz cu un ritm constant i maxim, populaia bacterian practic dublndu-se la fiecare diviziune; celulele au o mrime uniform, mai mare dect a celulelor normale, caracteristice speciei, cu citoplasm omogen, bogat n ARN, cu sinteze proteice intense, fr materiale de rezerv. Acest stadiu corespunde celulelor bacteriene tinere, potrivite pentru cercetarea de laborator; - faza de ncetinire este aceea n care ritmul de multiplicare este ncetinit, datorit condiiilor de mediu. Unul dintre factorii nutritivi eseniali din mediul de cultur devine limitant, fiind epuizat treptat i devenind insuficient; - faza staionar a creterii este caracterizat printr-un numr de celule viabile maxim i constant pentru o perioad de timp care depinde de specia bacterian; se consider c n timp ce unele celule bacteriene mor, dispariia lor este compensat de multiplicarea lent a altor celule, astfel nct, n ansamblu, numrul de celule viabile este acelai. Aceast faz corespunde celulelor bacteriene mature, cu morfologie considerat normal, tipic unei specii date; celulele din aceast faz se folosesc pentru coloraii. Spre sfritul fazei staionare ncep s apar primele incluzii bacteriene, vacuole i chiar spori; - faza de nceput al declinului este aceea n care numrul celulelor viabile ncepe s scad ca rezultat al morii unora dintre celule; ulterior scade i densitatea celular, deoarece intervin procese de autoliz, produse de enzime proteolitice endogene; - faza de declin i moarte celular este faza n care se intensific reducerea numrului de celule viabile i fenomenele de autoliz bacterian; este foarte variabil ca durat, de la 24 48 ore pn la sptmni i chiar luni de zile; celulele bacteriene au o morfologie alterat, apar forme filamentoase, spiralate, ramificate, necaracteristice speciei; celulele au afinitate pentru coloranii acizi, conin substane de rezerv, se ntlnesc muli spori. Viteza de multiplicare a celulelor bacteriene se msoar prin durata unei generaii i se numete timp de generaie. El este intervalul de timp scurs ntre dou diviziuni succesive. n general, acest timp este mai mic la bacterii dect la macroorganisme, existnd bacterii care se multiplic foarte rapid (Bacillus subtilis 9-10 minute), altele mai puin rapid (Lactobacillus 100 minute), iar altele foarte lent (Mycobacterium tuberculosis 1600 minute).

Dei au un potenial imens de multiplicare, bacteriile nu i-l realizeaz n practic, ntruct intervin factori de mediu nefavorabili, ce limiteaz acumularea unui numr imens de celule bacteriene. De exemplu, n condiii aerobe obinuite de cultur n laborator, numrul maxim de celule care se acumuleaz este de 200 milioane de celule/ml mediu. n condiii de agitare, care favorizeaz aerarea i contactul celulelor cu nutrienii, se paote atinge un numr de 5 miliarde celule/ml. Un coc cu o greutate de 5x10-13 g, cu un timp de generaie de 20 minute, poate determina dup 132 de diviziuni formarea unei mase celulare cu greutatea de 6x1027g. 2) Multiplicarea prin nmugurire nmugurirea reprezint o modalitate particular de reproducere, care const n separarea a dou celule asimetrice, ca rezultat al formrii de ctre celula mam a unei protuberane locale mai mici dect ea. Aceasta creeaz un spaiu nou, n care vor migra constituenii noii celule sau n care constituenii vor fi sintetizai de novo (din nou). Bacteriile care nmuguresc prezint o mare diversitate taxonomic i sunt mai puin cunoscute. Ele pot fi fototrofe sau chemotrofe; cele mai studiate aparin genurilor de bacterii prostecate: Rhodomicrobium, Rhodopseudomonas etc., dar aparin i genurilor de bacterii care nu sunt prostecate: Nitrobacter, Pasteuria etc. Formarea unei celule noi de ctre o bacterie poate fi cu adevrat un proces de nmugurire dac se ndeplinesc 3 criterii fundamentale:

1) criteriul morfologic: celula nou trebuie s fie mult mai mic dect celula mam i s rmn temporar ca atare (mic) i dup separare; spre deosebire de diviziunea direct binar n care celula mam se divide n dou celule fiice identice i celula mam dispare, n nmugurire celula mam formeaz o celul fiic mai mic i fiecare i pstreaz identitatea de-a lungul generaiei; n multe cazuri, mugurele poate fi deosebit morfologic de celula mam, de exemplu, la genul Pasteuria, mugurele este mobil, n timp ce celula mam e imobil. 2) criteriul de dezvoltare: nmugurirea reprezint un caz particular de cretere a peretelui celulei parentale prin slbirea lui localizat, urmat de o cretere numai ntr-o zon foarte limitat, spre deosebire de diviziunea direct binar, care e precedat de o cretere a peretelui i a membranei celulare ce duce la mrirea lungimii i a diametrului celulei; n cazul nmuguririi, nveliurile celulare sunt integral sintetizate de novo, astfel c nici un constituent parental din peretele celular nu e ncorporat n mugure. Diferena dintre diviziunea direct (a) i nmugurire (b): celula mam a) celule fiice

Materialul peretelui celular e distribuit egal celor dou celule fiice. b)

3) criteriul funcional: mugurele trebuie s reprezinte singurul mod de formare a unei celule noi la specia respectiv. Apariia mugurilor poate fi localizat unipolar sau bipolar. n nmugurire, celula mam reine integral subunitile peretelui celular original, iar mugurele e acoperit cu material nou sintetizat. Simetria e meninut n raport cu axul longitudinal, nu ns i cu axul transversal. Iniial mugurii sunt foarte mici, sferici, apoi cresc n diametru ca urmare a creterii peretelui celular pn ajung la dimensiunea celulei mam. n acest proces i celula mam i celula fiic mbtrnesc progresiv. 3) Multiplicarea prin fragmentare E o form de reproducere vegetativ, observat la multe actinomicete, cum sunt cele din genul Nocardia, Actinomyces. n prima parte a ciclului celular are loc o cretere activ a masei celulare, sub forma unui miceliu, fr creterea numrului de celule viabile. Ulterior, n faza staionar a creterii, n care masa celular rmne constant, miceliul e supus unei fragmentri multiple, cu formarea unor septuri transversale, obinndu-se structuri cilindrice. Primul sept transversal apare aproape de mijlocul hifei i progreseaz secvenial de-a lungul filamentului spre extremiti. Urmeaz apoi eliberarea unor celule cilindrice, scurte, egale, cu extremitile tiate drept i care vor ncepe s creasc i s dea natere unui miceliu.

Dei procesele de formare a septurilor transversale i de segregare a genomului sunt destul de bine coordonate, spre sfritul fazei de fragmentare apar unele fragmente lipsite de nucleosom, neviabile, datorit formrii premature a septurilor, nainte de segregarea materialului genetic. 4) Multiplicarea prin spori Actinomicetele care au un miceliu nesegmentat se reproduc de obicei prin formare de exospori (spori de dispersare, de propagare). Fenomenul a fost mai bine studiat la Streptomyces coelicolor. Sporii sunt de tip asexuat, dispui de regul pe hifele aeriene, n lanuri de diferite lungimi, sau n vezicule sporale numite sporangi. Unele hife prezint o teac extern fibroas, care le nvelete ncepnd cu extremitatea liber, pe toat lungimea lor. nveliul celular este format din peretele hifei, acoperit de teaca fibroas. n anumite puncte ale peretelui hifei ncepe formarea septumului sporal prin depunerea n hifa aerian a unui disc inelar cu grosime dubl. Prin creterea acestui disc paralel cu peretele hifei ncepe formarea peretelui viitorului spor. Sporii se rotunjesc, se separ, se matureaz, vezicula sporal se rupe i elibereaz sporii formai.

PARTICULARITI ALE METABOLISMULUI BACTERIAN Metabolismul reprezint totalitatea reaciilor biochimice prin intermediul crora microorganismele preiau din mediu energie i nutrieni, pe care i folosesc n activitile lor fundamentale. Aceti nutrieni reprezint elemente eseniale pentru viaa celulei i se numesc elemente biogene. Substanele pot fi folosite ca atare sau sub o form mai mult sau mai puin complex. Caracteristic pentru metabolismul bacterian este reglarea lui perfect, supus legii economiei i optimalitii. Aceste principii asigur desfurarea perfect reglat, corelat a activitii celulare, astfel nct beneficiul pentru celula bacterian s fie maxim. Substanele din mediu sunt folosite n 4 scopuri fundamentale: - producerea de energie; - sinteza de constitueni celulari; - creterea celulei i desfurarea normal a activitilor ei fiziologice; - producerea de metabolii, unii dintre ei utili pentru om. Metabolismul bacterian se realizeaz printr-o serie de ci metabolice, reprezentate de secvene de reacii chimice catalizate de enzime. Sunt dou direcii fundamentale de evoluie a acestor ci: degradarea substanelor nutritive preluate din mediu, cu eliberare treptat de energie (deoarece o eliberare brusc de energie este duntoare celulei bacteriene, ducnd la distrugerea ei); folosirea energiei eliberate n procesele de biosintez a constituenilor celulari (cale diametral opus celei dinti); excesul de energie se acumuleaz n legturile macroergice ale moleculelor de ATP, ce reprezint acumulatorul universal de energie. Se cunosc 4 tipuri de ci metabolice: cile catabolice (catabolismul), cile anabolice (anabolismul), cile amfibolice i cile anaplerotice. a) Cile catabolice reprezint ansamblul cilor biochimice prin care se realizeaz degradarea nutrienilor preluai din mediu, cu eliberare de energie. Reaciile catabolice se desfoar n trei faze succesive: 1) macromoleculele nutrienilor sunt degradate pn la subunitile lor de construcie (ex. proteinele pn la aminoacizi), cu eliberarea aproximativ a 1% din energia nutrienilor, care se pierde sub form de cldur; 2) moleculele rezultate n prima faz sunt degradate n continuare, cu formarea unui numr limitat de molecule mai mici, ce reprezint compui intermediari ai cii centrale; numrul acestor compui intermediari este diferit n funcie de bacterie, putnd ajunge la maxim 12; n aceast etap se elibereaz aproximativ 1/3 din energia existent n compuii respectivi; 3) cea de a treia faz este diferit n funcie de natura reaciilor metabolice; n aerobioz reaciile evolueaz cu metabolizarea complet a compuilor intermediari pn la CO2 i H2O, cu eliberare masiv de energie, care este apoi nmagazinat n ATP; n anaerobioz reaciile evolueaz dup modelul reaciilor fermentative, caz n care eliberarea de energie este redus.

b) Cile anabolice se desfoar n sensul utilizrii compuilor intermediari ai cii centrale n vederea sintezei de constitueni proprii celulei bacteriene, proces care evolueaz n faze succesive. n cursul proceselor de anabolism se sintetizeaz macromolecule de depozit, adic polimeri uniformi, formai prin legarea unor monomeri n lanuri de diferite dimensiuni (ntr-o prim faz monomeri, ntr-o a doua faz, numit diataxie, subunitile constituite n prima faz fiind aezate ntr-o ordine riguroas, dictat exact de informaia genetic din genom). c) Cile amfibolice sunt reprezentate de cile metabolice centrale, care ndeplinesc n acelai timp dou funcii: de eliberare de energie i de furnizare a unor precursori necesari biosintezei. Cile catabolice i cele anabolice se desfoar simultan n celula bacterian. Caracterul amfibolic este reprezentat de faptul c la anumite nivele energia eliberat este utilizat la biosinteze, iar la alte nivele intermediare se menine calea catabolic ce duce la degradarea compuilor intermediari. d) Cile anaplerotice sunt cunoscute sub denumirea de ci auxiliare sau de reaprovizionare, deoarece compuii intermediari ai cilor centrale sunt n permanen ndeprtai din celul, pe de o parte n cursul degradrii progresive enzimatice, cu eliberare de energie, n catabolism, iar pe de alt parte prin utilizarea lor n diferite biosinteze ce au loc n celul. Pentru buna funcionare a acestor ci metabolice este necesar o reaprovizionare permanent cu intermediarii respectivi. n urma epuizrii materialului de la care s-a pornit, calea metabolic este frecvent reaprovizionat cu diferite substane provenite din alte ci metabolice, catalizate enzimatic, ce se desfoar simultan n celula bacterian. Cile metabolice auxiliare asigur astfel completarea deficitului cilor metabolice principale, prin aprovizionarea cu diveri compui i permit funcionarea ndelungat a acestora. Particulariti ale metabolismului bacterian Dac iniial se considera greit c bacteriile, avnd o structur simpl, au doar un metabolism rudimentar, cercetrile moderne au demonstrat caracterul remarcabil de asemntor al cilor centrale ale metabolismului la toate formele de via. Microorganismele i realizeaz activitile metabolice prin mecanisme similare cu cele implicate n metabolismul organismelor superioare. Natura i diversitatea nutrienilor folosii n metabolismul bacterian Microorganismele prezint o capacitate unic de degradare a unor substane complexe din mediu i de a sintetiza anumii metabolii, unii folositori omului. Luate ca grup, bacteriile sunt cele mai omnivore organisme din natur. i pot realiza metabolismul folosind numeroase i diverse surse de substane nutritive, ncepnd cu azotul molecular i sulful, pn la cele mai complexe substane organice (se pot dezvolta pe diferite soluii de acizi: oxalic, formic, sulfuric, pe substraturi cu fenoli, proteine, iei; pot degrada asfaltul, masele plastice, cauciucul, lemnul, parafinele, chiar i unele substane antibiotice). Aceste particulariti explic faptul c, dei n natur au fost depuse numeroase produse de uzur i de excreie, cadavre, reziduuri, acestea nu s-au acumulat, pentru c au fost descompuse de ctre microorganisme i reintroduse n circuitul elementelor biogene. n acelai timp, exist unele microorganisme care pot utiliza doar un numr limitat de nutrieni (microorganismele celulozolitice au nevoie absolut de prezena celulozei n mediul nutritiv; nitratbacteriile au nevoie de nitrii n mediu, iar unele bacterii patogene au nevoie de snge n mediul de cultur).

Plasticitatea metabolismului microorganismelor Bacteriile au capacitatea de a folosi alternativ diferite surse de azot i de carbon, n funcie de condiiile de mediu. Se adapteaz, deci, la tipul i cantitatea de nutrieni existeni n mediu. S-a demonstrat c multe bacterii considerate ca autotrofe (capabile s foloseasc substanele anorganice din mediu) pot utiliza uneori substanele organice cu complexitate diferit din mediu. Unele microorganisme heterotrofe (organotrofe) au capacitatea de a se adapta la utilizarea compuilor anorganici din mediu, atunci cnd substanele organice lipsesc. Diversitatea mecanismelor enzimatice i a produilor de metabolism Diversitatea cilor metabolice se manifest n metabolismul bacterian prin existena unor ci alternative care pot fi folosite pentru un anumit compus. n funcie de condiiile de mediu i cele intracelulare, celula bacterian poate opta pentru una dintre cile prin care un anumit substrat poate fi degradat (de exemplu glucoza poate fi degradat prin trei ci metabolice diferite). Intensitatea deosebit a metabolismului bacterian Metabolismul bacterian se caracterizeaz printr-o intensitate excepional n raport cu activitile omoloage de la organismele superioare. Astfel, activitatea respiratorie a unui gram de bacterii aerobe (greutate uscat) este de cteva sute de ori mai intens dect cea a omului. Potenialul metabolic al microorganismelor din cei 25 cm superficiali ai solului de pe o suprafa de un hectar este echivalent cu acela pentru cteva zeci de mii de oameni. Un gram de bacterii lactice hidrolizeaz circa 15000 g lactoz/or. Pentru a atinge un asemenea nivel de activitate metabolic, organismul uman ar avea nevoie de mai multe mii de tone de alimente pe or. Metabolismul bacterian deosebit de intens este corelat cu o multiplicare rapid a microorganismelor, cu producerea unei mari cantiti de biomas. n acest sens, un exemplu dat de UNESCO se refer la aceast capacitate extraordinar de sintez a bacteriilor: - la bovine un organism de 500 kg fabric n condiii normale n 24 ore aproximativ 1/2 kg de proteine; - n condiii de mediu favorabile, 500 kg de mas bacterian sintetizeaz n 24 ore 550 tone de proteine. Aceste date sunt numai teoretice, pentru c n diferite condiii concrete de mediu se mpiedic realizarea acestui uria potenial de replicare. Metabolismul bacterian deosebit de intens, unic n lumea vie, este urmarea faptului c celula bacterian prezint o suprafa foarte mare raportat la volumul i greutatea ei, favoriznd schimbul intens de substane ntre celule i mediu. Dup Luria i Stanier, ar exista o regul conform creia n natur viteza metabolismului ar fi invers proporional cu mrimea organismului.

Transportul substanelor prin membrana celulei bacteriene Membrana plasmatic reprezint o barier care asigur transportul selectiv al substanelor de la exteriorul la interiorul celulei bacteriene i invers. Este denumit i barier osmotic de permeabilitate. Principalele mecanisme de transport prin membrana plasmatic bacterian sunt: 1) difuzia pasiv este un tip de transport nespecific, reprezint o trecere lent a substanelor de la exteriorul la interiorul celulei bacteriene i invers, fr consum de energie. Trecerea este determinat de concentraie, se realizeaz de la o concentraie mare la o concentraie mic; difuzia se oprete cnd concentraia se egalizeaz. Prin difuzie pasiv sunt transportate: apa, O2, CO2, acizii grai, substanele liposolubile. 2) mecanisme de transport cu participarea unui transportor specific (carrier) transportorul specific este situat n membrana plasmatic i este o protein cu greutate molecular ntre 30000 50000 daltoni, cu rolul de a fixa o anumit substan i de a o transporta, traversnd membrana plasmatic. Sunt 3 tipuri de astfel de mecanisme: a) difuzia facilitat se desfoar fr consum de energie i este determinat de gradientul de concentraie, dar se realizeaz cu ajutorul unei proteine transportor (carrier). Trecerea se realizeaz de la o concentraie mare la o concentraie mic, pn se produce un echilibru al concentraiilor de o parte i de cealalt a membranei. Proteina transportor are rolul de a mri viteza de difuzie a substanei n raport cu difuzia pasiv. b) transportul activ este un proces specific, care se realizeaz cu consum de energie. Se poate realiza mpotriva gradientului de concentraie, de la o concentraie mic la o concentraie mare. Astfel se produce o acumulare de substan n celula bacterian, care poate depi de cteva mii de ori cantitatea din mediul extern. Proteina transportor prezint un situs de legare specific pentru substanele respective. c) translocarea n grup se realizeaz cu consum de energie i cu participarea sistemului enzimatic fosfo-transferazic; substana transportat sufer o modificare chimic la trecerea prin membran, astfel c substana din interiorul celulei difer de cea iniial ce exista n mediu; prin acest mecanism se pot transporta: adenina, hexozele (glucoz, fructoz). Tipuri de respiraie microbian Dup comportarea fa de oxigenul atmosferic, se pot descrie 4 tipuri de microorganisme: microorganisme strict aerobe, care au ca tip de respiraie celular respiraia aerob; pentru a se dezvolta, aceste microorganisme au nevoie de oxigen molecular, folosindu-l ca acceptor final de electroni; Ex.: Bacillus subtilis, Azotobacter sp., Mycobacterium tuberculosis, microalgele, majoritatea protozoarelor

microorganisme strict anaerobe, care nu se pot dezvolta n prezena oxigenului; ele au nevoie de condiii de anaerobioz i ca tip de respiraie celular au fermentaia sau respiraia anaerob; Ex.: Clostridium tetani, Lactobacillus sp., Desulfovibrio sp. microorganisme anaerobe, facultativ aerobe, care au n general un metabolism de tip anaerob, dar pot tri i n prezena oxigenului molecular, caz n care prezint un metabolism aerob; tipul de respiraie celular este diferit, n funcie de prezena sau absena oxigenului (respiraie anaerob sau aerob); Ex.: Escherichia coli, Streptoccoccus sp., Staphylococcus sp., Saccharomyces cerevisiae microorganisme microaerofile, care au nevoie de o cantitate de oxigen mai mic dect n atmosfer pentru a se dezvolta, concentraiile mari de oxigen fiind nocive pentru ele; tipul de respiraie celular este o respiraie cu tendin spre fermentaie. Ex.: Leptospira sp., Spirochaeta sp., Thiospirillum sp. Tipuri de nutriie la microorganisme Criteriile dup care se poate caracteriza nutriia microorganismelor sunt: natura sursei de carbon i azot i capacitatea de sintez a metaboliilor eseniali, n funcie de care microorganismele pot avea nutriie: * autotrof * heterotrof sursa de energie, n funcie de care microorganismele pot avea nutriie: * fototrof * chemotrof. Autotrofia este capacitatea de sintez a tuturor metaboliilor eseniali pornind de la substane anorganice simple ca surs de carbon i azot (CO2, NH3, NO3-, NO2-). Heterotrofia este capacitatea de a sintetiza metabolii eseniali pornind de la substane organice preformate. Bacteriile heterotrofe se pot dezvolta doar n prezena unor substane organice, care joac rol de surs de carbon i azot. Fototrofia este capacitatea de a sintetiza metaboliii eseniali cu ajutorul energiei luminoase; este caracteristic microorganismelor fotosintetizante (fototrofe), capabile de fotosintez. Dup natura donatorilor de protoni sau electroni, microorganismele fototrofe se mpart n: - microorganisme fotolitotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane anorganice oxidabile (H2O, H2S, S, H2); se numesc i fotoautotrofe; - microorganisme fotoorganotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane organice oxidabile; se numesc i fotoheterotrofe; Chemotrofia este capacitatea de a sintetiza metaboliii eseniali cu ajutorul energiei chimice nmagazinat n legturile chimice ale substanelor. Sursa de energie este reprezentat n acest caz de energia chimic eliberat din reaciile de oxido-reducere. Microorganismele chemotrofe se numesc i chemosintetizante, sunt capabile de chemosintez. Dup natura donatorilor de protoni sau electroni, microorganismele chemotrofe se mpart n:

microorganisme chemolitotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane anorganice oxidabile; se numesc i chemoautotrofe; - microorganisme chemoorganotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane organice oxidabile; se numesc i chemoheterotrofe. Pe baza acestor clasificri, nutriia microorganismelor poate fi:
Surs de energie Radiaia luminoas Radiaia luminoas Oxidarea substanelor anorganice Oxidarea substanelor organice Surs de carbon i azot Subst. anorg. (CO2,NH3) Substane organice Subst. anorg. (CO2,NH3) Substane organice Donator de protoni sau electroni Substane anorganice (H2O,H2S,S,H2) Substane organice Substane anorganice (NH3,H2S,S,H2) Substane organice Exemple Cianobacterii Bacterii sulfuroase roii i verzi Bacterii sulfuroase roii Bacterii nitrificatoare Bacterii sulfoxidante Hidrogenbacterii Majoritatea microorganismelor (bacterii, drojdii, mucegaiuri, protozoare)

Nr. cr. 1 2 3

Tip de nutriie Fotolitoautotrof Fotoorganoheterotrof Chemolitoautotrof

Chemoorganoheterotrof

ACIUNEA FACTORILOR FIZICI, CHIMICI I BIOLOGICI ASUPRA BACTERIILOR Factorii fizici i chimici din mediu influeneaz n mod semnificativ bacteriile, a cror activitate biologic este maxim atunci cnd condiiile de mediu sunt optime. Efectele factorilor fizici i chimici pot fi de stimulare sau de inhibare a activitii bacteriene, n funcie de intensitatea i durata aciunii lor. ACIUNEA FACTORILOR FIZICI Este deosebit de important cunoaterea aciunii diferiilor factori fizici asupra bacteriilor, deoarece aceasta st la baza utilizrii metodelor de sterilizare. 1. Temperatura influeneaz n mod decisiv viaa bacteriilor, deoarece reaciile enzimatice din celule se desfoar optim la anumite temperaturi. Temperatura de dezvoltare a bacteriilor (n general ntre -5 i 80C) este cuprins ntre o temperatur minim i una maxim, cu un optim mai apropiat de temperatura maxim dect de cea minim. La microorganismele stenoterme domeniul temperaturii de dezvoltare este mai restrns, iar la cele euriterme este mai mare. Bacteriile pot fi ncadrate, n funcie de preferinele lor pentru temperatur (care sunt rezultatul adaptrii la mediu), n trei categorii: criofile sau psihrofile (prefer temperaturile sczute), mezofile (se dezvolt la temperaturi de 10 - 45C) i termofile (a cror temperatur maxim de cretere ar fi de 110 - 150C). La temperatura minim de dezvoltare rata metabolismului este foarte sczut, ncetnd practic transportul substanelor dizolvate prin membrane. La temperatura optim dezvoltarea populaiilor de microorganisme are loc cu o rat maxim, pentru fiecare activitate fiziologic a celulei existnd ns un alt optim de temperatur. La temperatura maxim de dezvoltare multiplicarea bacteriilor nc mai este posibil, dar nceteaz la temperaturi superioare acesteia. Metodele de sterilizare prin cldur duc la coagularea i denaturarea proteinelor celulare bacteriene i a lipidelor membranare, la inactivarea enzimelor i chiar la carbonizarea materialului celular bacterian; ele utilizeaz: - cldura umed, la temperaturi: - sub 100C - pasteurizarea joas i nalt, tindalizarea, - la 100C fierberea, - peste 100C autoclavarea, - cldura uscat utilizeaz temperaturi mai nalte dect cea umed, deoarece puterea de penetrare a materialului biologic este mai sczut: - nclzirea la rou - flambarea - incinerarea - sterilizarea cu aer cald la etuv. Tratamentul termic nu are efect cumulativ asupra celulelor bacteriene. Mediul n care acestea se gsesc influeneaz rezistena la cldur: moartea bacteriilor survine mai rapid la pH acid, dar soluiile concentrate de glucide, proteine, lipide i mediul uscat mresc rezistena bacteriilor la temperatur. Sporii bacterieni sunt mult mai rezisteni la cldur dect celulele vegetative, datorit particularitilor chimice (concentraii mari de ioni de Ca2+ i ap legat, acid dipicolinic) i structurale.

Sensibilitatea microorganismelor fa de aciunea nociv a temperaturilor nalte se poate aprecia prin determinarea punctului termic letal (temperatura la care sunt distruse toate celulele dintr-o suspensie n 10 minute) i a timpului termic letal (durata de expunere la o temperatur dat, necesar pentru a omor toate celulele unei suspensii bacteriene). Temperaturile sczute au n general efect bacteriostatic, reaciile chimice ncetinesc i multiplicarea este stopat. Congelarea lent la temperaturi mai mari de 21,3C are efecte bactericide, deoarece se formeaz intracelular cristale de ghea i proteinele se denatureaz. Congelarea brusc la -70C conserv bacteriile prin solidificarea apei fr formare de cristale. Liofilizarea (criodesicarea) este o metod de congelare brusc nsoit de deshidratare n vid. Dac o suspensie bacterian este conservat astfel ntr-un mediu protector, poate fi pstrat mult vreme n fiole nchise. 2. Presiunea osmotic din celulele bacteriene, datorit substanelor dizolvate reinute n interior de membrana cu permeabilitate selectiv, este mai mare comparativ cu mediul extracelular. Bacteriile suport relativ bine variaiile de la mediul izotonic, dac acestea intervin lent, deoarece se adapteaz la stresul osmotic prin mecanisme active (de exemplu, n mediu hipertonic n citoplasm se acumuleaz substane osmoprotectoare, compatibile cu metabolismul celular chiar la concentraii mari). n caz contrar, efectul poate fi letal, bacteriile suferind o plasmoliz n mediu hiperton i o plasmoptiz n mediu hipoton. Bacteriile care prefer o presiune osmotic extracelular mai mare dect cea intracelular sunt numite zaharofile (se dezvolt pe medii bogate n zaharuri) sau halofile (se dezvolt pe medii bogate n sruri, facultativ sau obligat). 3. Presiunea hidrostatic este diferit n mri i oceane, n funcie de adncime. Microorganismele care cresc la presiuni hidrostatice mari sunt barotolerante i barofile. Unele dintre ele sunt stenobare, altele euribare. 4. Radiaiile electromagnetice sunt fenomene ondulatorii i fascicule discontinue de energie; ele includ: - radiaiile hertziene (undele radio) - radiaiile infraroii - radiaiile spectrului vizibil - radiaiile ultraviolete - radiaiile X - radiaiile gamma. Radiaiile cu lungime de und mai mare de 12000 nu produc modificri substanelor de care sunt absorbite. Cele cu lungime de und ntre 2000 i 12000 produc modificri fotochimice moleculelor de care sunt absorbite. Radiaiile cu lungime de und sub 2000 (X, gamma, cosmice) determin ionizarea moleculelor pe care le ntlnesc. Iradierea poate avea asupra celulelor efect letal sau mutagen. Radiaiile luminoase acioneaz asupra celulelor prin reacii fotochimice cu componentele celulare (procesul de fotosintez i cel de fototaxie). Lumina solar este bactericid (datorit ultravioletelor i nclzirii celulelor), dar lumina vizibil determin i efecte specifice.

Fotosensibilizarea este fenomenul de amplificare a efectului biologic al radiaiilor luminoase, ca urmare a prezenei n mediul extracelular a unor substane care se activeaz la lumin (de exemplu colorantul fluorescent albastru de metilen, n prezena cruia lumina vizibil puternic denatureaz proteinele, omornd bacteriile i inactivnd virusurile). Fotoprotecia este rezultatul aciunii antagoniste a radiaiei luminoase fa de o iradiere simultan cu ultraviolete, modificrile celulare caracteristice acestora din urm fiind atenuate prin expunerea simultan la cele dinti. Fotoreactivarea este fenomenul de revenire la normal a unor celule expuse n prealabil la ultraviolete, sub aciunea luminii vizibile. Fotooxidarea este procesul prin care energia luminoas cu lungime de und mai mare dect a radiaiilor ultraviolete este absorbit de unii compui chimici ai celulei, determinnd oxidarea letal a unor molecule vitale, n prezena oxigenului atmosferic. Radiaiile ultraviolete n doze mari au efect letal asupra bacteriilor. Cele cu lungime de und ntre 230 - 280nm produc modificri profunde, ireversibile, fiind cele mai active din punct de vedere biologic. Ele sunt utilizate pentru sterilizare, cu eficien mic datorit posibilitii de fotoreactivare. 5. Radiaiile corpusculare (alfa - atomi de He, care nu se folosesc pentru sterilizare, beta - electroni cu energie nalt, protonii) sunt ionizante, ca i radiaiile X i gamma, ducnd la ruperea catenelor de ADN i ncetarea diviziunii celulare. Comparativ cu macroorganismele, microorganismele sunt mai rezistente la iradiere. Razele X moi au un efect bactericid intens, pe cnd cele tari, ca i radiaiile alfa i beta, mai puin absorbite, au un efect antimicrobian mai atenuat. 6. Laserul (light amplification by stimulated emission of radiation = amplificarea luminii prin emisie stimulat de radiaii) este un fascicul concentrat de cuante luminoase, generat de obicei ntr-un cristal de rubin n care atomii de crom sunt excitai prin modificarea strii energetice sub aciunea luminii. Spre deosebire de lumina incandescent a becului electric, cu lumina dispersat n radiaii cu lungimi de und diferite, laserul emite o lumin sub forma unui fascicul de radiaii cu o lungime de und uniform, ntre 300 900 nm. Aciunea laserului asupra microorganismelor este aceea de distrugere instantanee (acioneaz intens, localizat, cu o cantitate enorm de energie pe o suprafa infim).

7. Ultrasunetele produc moartea celulelor bacteriene prin ruperea pereilor celulari i creterea temperaturii la 50 - 80C. Vibraiile sonice cu frecven relativ joas, dar cu intensitate mare sunt mai eficiente dect cele cu intensitate mic i frecven nalt. Infrasunetele i sunetele percepute de urechea uman (ntre 16 - 1600 herzi) nu au efect asupra microorganismelor. Liza bacteriilor se datoreaz fenomenului de cavitaie, pereii celulari fiind intens bombardai de bule foarte mici de gaz formate n lichidul de suspensie ca rezultat al vibraiilor cu frecven nalt (ultrasonice i hipersonice). ACIUNEA FACTORILOR CHIMICI Substanele chimice pot exercita asupra bacteriilor mai multe efecte: favorizarea dezvoltrii i multiplicrii celulelor, prin aport de substane nutritive (ndeplinind rol de surs de azot, de carbon, de energie sau factor de cretere), - efect bacteriostatic, prin inhibarea reversibil a multiplicrii celulare, - efect bactericid, prin modificri ireversibile, incompatibile cu viaa celulelor. Aceeai substan, n funcie de concentraie, poate ndeplini roluri diferite: la concentraii foarte mici de substan nutritiv n mediu, creterea bacterian este slab, dar se intensific pe msur ce crete concentraia substanei, pn la un nivel prag, dup care rata de cretere a populaiei celulare nu mai depinde de creterea concentraiei substanei. Cnd concentraia substanei a atins limita de toleran pentru celul, creterea celular este inhibat, iar peste acest nivel substana devine bactericid. Substanele chimice cu aciune antimicrobian pot fi ncadrate n categoria antisepticelor (care pot fi utilizate pe tegumente i mucoase, au toxicitate relativ mic i concentraii relativ mici, nefiind nocive pentru celulele organismului gazd) sau a dezinfectantelor (care pot fi utilizate numai pe suporturi neanimate, au aciune bactericid puternic). Att antisepticele, ct i dezinfectantele au aciune antibacterian nespecific i neselectiv, producnd alterarea direct a substanei vii, exercitnd efecte att asupra celulei bacteriene, ct i a celulelor organismului gazd, pe cnd antibioticele i chimioterapicele au aciune antibacterian selectiv i specific. Mecanismele prin care substanele antimicrobiene acioneaz asupra bacteriilor: denaturarea proteinelor (efect n general bactericid): acizii tari, bazele tari, alcoolii, oxidarea gruprilor chimice libere ale enzimelor: KMnO4, H2O2, halogenarea gruprilor chimice libere ale enzimelor, reducerea gruprilor active ale proteinelor: formaldehida, glutaraldehida, oxidul de etilen, interferena cu gruprile active ale proteinelor: metale grele (Hg, Ag), lezarea membranelor celulare, cu alterri ale permeabilitii: detergenii, spunurile alterarea acizilor nucleici: coloranii bazici, derivaii de acridin (ex.: rivanol). Antibioticele sunt substane cu efect antimicrobian sintetizate de ctre microorganisme (n special mucegaiuri - Penicillium, dar i actinomicete - Streptomyces i alte bacterii - Bacillus), iar chimioterapicele sunt substane cu efect similar cu al antibioticelor, dar obinute prin sintez sau semisintez chimic. Mecanismele lor de aciune asupra bacteriilor sunt foarte variate: -

inhib sinteza peretelui celular (betalactaminele, vancomicina) inhib sinteza proteinelor la nivel ribozomal (aminoglicozidele, cloramfenicolul, macrolidele) modific permeabilitatea membranei plasmatice (colistinul, vancomicina) interfer cu funciile acizilor nucleici (rifampicina, metronidazolul, acidul nalidixic, cotrimoxazolul). Microorganismele pot prezenta rezisten la aciunea antibioticelor, natural (total, caracteristic tuturor indivizilor speciei, determinat genetic) sau dobndit (prin transfer extracromozomial - prin conjugare, prin transducie fagic, prin transformare sau, mai rar, cromozomial de la o bacterie la alta, orizontal sau vertical). Poate fi monovalent (fa de un singur antibiotic) sau plurivalent. Se poate manifesta direct sau ncruciat (cnd o bacterie este rezistent fa de antibiotice nrudite). Dup ritmul de instalare, rezistena bacteriilor la antibiotice poate fi: de tip rapid (tip streptomicin), de tip intermediar (tip eritromicin), de tip lent (tip penicilin) sau foarte lent (tip vancomicin). Pot avea loc mutaii spontane sau induse care s duc la apariia mutantelor rezistente la antibiotice. Mecanismele biochimice ale rezistenei la antibiotice presupun: - producerea de enzime inactivatoare - scderea permeabilitii bacteriei pentru antibiotice - producerea de enzime modificate, care anuleaz aciunea antibioticului la nivelul enzimei int - alterarea intei intracelulare, care devine de nerecunoscut pentru antibiotic - creterea sintezei de acid paraaminobenzoic, anulnd inhibarea competitiv a sulfamidelor - pomparea activ n exterior a substratului.

RELAII ECOLOGICE NTRE MICROORGANISME I MACROORGANISME A. Interaciunile dintre populaiile de microorganisme n majoritatea habitatelor naturale se gsesc asociaii heterogene de microorganisme, numrul speciilor fiind dependent de complexitatea i diversitatea chimic a substanelor nutritive. Interaciunile dintre microorganisme se pot clasifica pe baza mai multor criterii (Starr i Chatergee, 1972): - dup localizare i modul de existen n raport cu altele (comensalism, simbioz, parazitism, prdare); - dup rezultatul asocierii (neutralism, mutualism, antagonism); - dup gradul de dependen a asociaiei (accidental, facultativ sau obligatorie). Unele interaciuni sunt pozitive (benefice), altele sunt negative, unele sunt benefice pentru un partener i duntoare pentru cellalt, iar altele sunt indiferente. Interaciunile posibile ntre populaiile a dou specii de microorganisme (G. Zarnea, 1994, adaptat dup Odum, 1971)
Tipuri de interaciune Neutralism Comensalism Protocooperare Mutualism Competiie prin interferen direct Competiie prin utilizarea nutrienilor Amensalism Parazitism Prdare Specia A B 0 0 + + + + + 0 + + 0 Natura general a interaciunii Nici una din populaiile asociaiei nu este afectat Populaia A comensal beneficiaz, cea asociat B nu este afectat Interaciune neobligatorie, bilateral benefic Interaciune obligatorie, bilateral benefic Fiecare dintre cele dou specii o poate inhiba direct pe cealalt Fiecare dintre cele dou specii o poate afecta pe cealalt prin consumarea unui nutrient puin abundent Populaia A este inhibat, cealalt este neafectat Populaia A, cu dimensiuni mai mici, paraziteaz populaia B Populaia prdtoare A atac populaia gazd B

1.Neutralismul este o asociere puin probabil n mediile naturale, lipsit de influene reciproce, favorizat de mediile cu condiii restrictive, care permit creterea microorganismelor cu o rat minim i care nu intr n competiie pentru nutrieni. 2. Interaciunile pozitive Interaciunile pozitive sunt relaii de tip cooperant, care mresc rata de cretere a microorganismelor asociate i se produc chiar i ntre celulele aceleiai specii. Ele sunt foarte importante n mediile naturale.

a. Comensalismul - se disting dou categorii de microorganisme comensale: - ectocomensale situate pe suprafaa altor microorganisme, plante sau animale, fixate de obicei prin structuri specializate (fimbrii, iar la Caulobacter crampon); - endocomensale, prezente n tubul digestiv al animalelor. b. Protocooperarea - de exemplu, Azotobacter fixeaz N2 utiliznd substane organice simple pe care le furnizeaz alte microorganisme, care hidrolizeaz substanele complexe. c. Sinergismul - form de protocooperare ntre dou sau mai multe tipuri de microorganisme prezente ntr-un mediu, ce pot avea activiti foarte diferite, calitativ sau cantitativ fa de activitile nsumate ale acelorai specii cultivate separat n mediul respectiv; de exemplu, E. coli i Streptococcus faecalis produc putresceina din arginin, numai dac sunt cultivate mpreun, nu i dac sunt cultivate separat. d. Mutualismul - asociaie reciproc benefic, cu diferite grade de asociere. 3. Interaciunile negative Interaciunile negative sunt prezente n special la densiti populaionale mari de microorganisme i afecteaz viteza de cretere a uneia dintre cele dou populaii, datorit competiiei pentru un substrat nutritiv, producerii de compui toxici, cu efect nociv pentru cealalt specie, acumulrii de produi de metabolism cu efect inhibitor pentru cealalt specie. a. Competiia - rezultatul diversitii microorganismelor, a cror dezvoltare depinde de fondul comun de resurse din mediu; avantajeaz microorganismul cu o rat mai mare de cretere, care are o eficien superioar de utilizare a nutrienilor limitani; se realizeaz indirect (efectul negativ al unui organism asupra altuia este rezultat al epuizrii unei surse nutritive din mediu); factorii abiotici influeneaz competiia, care poate fi: - interspecific, bacteriile din mediile naturale sunt mai bine adaptate dect cele alohtone; - intraspecific, ntre tulpinile aceleiai specii. b. Amensalismul - interaciune frecvent n comunitile cu densiti populaionale mari, reprezentat prin producerea de ctre o specie de microorganisme a unor substane solubile organice sau anorganice care afecteaz negativ creterea altor microorganisme asociate din mediu; este o interaciune unidirecional. c. Parazitismul - relaia n care un organism se hrnete cu celulele, esuturile sau lichidele altui organism, care poate suferi prejudicii mai mult sau mai puin severe; interaciunea are uneori un grad nalt de specificitate, alteori paraziii au un spectru larg de gazde; relaia parazit gazd variaz: - ectoparazitism - parazitism intracelular obligat sau facultativ, ca rezultat al unei adaptri complexe a parazitului la mediul celulei gazd, nsoit de pierderea capacitii de a tri extracelular; paraziii intracelulari de obicei au genomuri mai mici, prin pierderea genelor neeseniale pentru celul; supravieuirea parazitului n celula gazd este consecina uneia dintre urmtoarele strategii: infectarea unei celule fr lizosomi (protozoarul Plasmodium infecteaz eritrocitul matur);

 rezistena la enzimele lizosomale (Coxiella burnetti); evadarea din fagosom rapid dup ptrunderea n celul (Rickettsia mooseri); mpiedicarea fuziunii fagolizosomale (Mycobacterium tuberculosis, Chlamydia, Legionella pneumophila); - parazitism absolut (virusuri celul gazd). d. Prdarea - interrelaie n care un organism mai viguros (prdtorul) atac un alt organism (prada); se soldeaz cu distrugerea parial a przii urmat de utilizarea constituenilor ca material nutritiv, distrugerea total sau moartea rapid a przii (dac e unicelular). e. Antagonismul (antibioza) - determinat de aciunea unor substane produse de anumite microorganisme, cu efect inhibitor sau letal pentru alte microorganisme; poate fi: - nespecific, determinat de eliberarea n mediu de ctre bacteria antagonist a unor substane cu aciune toxic neselectiv (acizi, alcooli), similar dezinfectantelor i antisepticelor, manifestat att asupra altor bacterii, ct i asupra organismului gazd; - specific, reprezentat de activitatea antimicrobian a unor produse de metabolism microbian, netoxice pentru organismele superioare, dar active n concentraii mici asupra altor microorganisme; aceste substane sunt de tip antibiotice (utilizate n terapie, cu toxicitate selectiv pentru specii diferite filogenetic de specia productoare) sau de tip bacteriocine (fr utilizare n terapie, cu toxicitate selectiv fa de tulpini din aceeai specie sau fa de specii foarte nrudite; pot fi colicine, piocine, enterocine). Simbioza n sens strict, simbioza reprezint coabitarea de lung durat a unor organisme diferite, care triesc n relaii spaiale directe, beneficiind reciproc din interaciunile lor, caz n care simbioza ar corespunde mutualismului. n sens mai larg, simbioza definete viaa mpreun a unor organisme diferite, indiferent dac asocierea lor are efect benefic sau duntor asupra unuia sau ambilor parteneri, mergnd pn la imposibilitatea speciilor asociate de a se dezvolta independent. Simbiozele stau la baza echilibrului normal n nia ecologic reprezentat de colon, de care depinde starea de sntate a organismului. n funcie de localizarea microorganismelor simbionte se disting: - ectosimbioze; - endosimbioze n funcie de gradul de dependen se disting: - simbioze facultative; - simbioze ecologic obligate - simbioze efectiv obligate sau ereditare n funcie de natura relaiei se disting: - simbioze mutualiste, n care adaptarea ambelor organisme este superioar fiind mpreun dect atunci cnd triesc separat; - simbioze parazitare, cnd unul dintre parteneri este mai adaptat n asociaie dect separat.

B. Relaiile microorganism gazd Relaiile dintre microorganisme i organismul gazd se pot stabili nc din viaa intrauterin (n acest caz este o situaie patologic), dar relaiile operaionale se stabilesc din perioada postnatal, prin colonizare saprofitic sau agresiune din partea patogenilor. Microorganismele care se localizeaz pe tegument i majoritatea mucoaselor vor constitui microbiota normal a organismului, cu rol deosebit de important n aprarea acestuia fa de invaziile microbiene ulterioare, prin competiia fa de aceiai nutrieni sau receptori de pe suprafaa celulelor gazd, prin sinteza de bacteriocine, acizi grai volatili sau ali metabolii, stimularea producerii unor factori imuni de protecie ncruciat i prin stimularea continu a sistemului imun pentru exprimarea constant, la un nivel sczut, a moleculelor complexului major de histocompatibilitate clasa a II-a de pe macrofage i alte celule prezentatoare de antigen. Unele dintre microorganismele din microbiota normal a organismului uman se afl n relaii de simbioz cu acesta (de ex. unii coliformi intestinali), dar majoritatea sunt comensale, microorganismele depinznd nutriional de gazd, fr s determine prejudicii acesteia. Echilibrul multora dintre microorganismele din organismul uman este destul de instabil, fiind modificat de diferii factori interni sau externi, astfel nct microorganisme condiionat patogene din microbiota normal pot avea la un moment dat activitate patogen (de exemplu Streptococcus pneumoniae). Numai n situaii n care microorganismele se dezvolt evident n detrimentul gazdei se poate vorbi de parazitism tipic, unele microorganisme fiind obligatoriu parazite (Mycobacterium leprae, Treponema pallidum), altele facultativ parazite (Clostridium tetani, Salmonella typhi).

TIPURI PARTICULARE DE BACTERII. RICKETTSII, CHLAMIDII, MYCOPLASME, CIANOBACTERII RICKETTSIILE Rickettsiile formeaz un grup mic de bacterii parazite obligatoriu intracelular, care produc boli grave la om i animale n urma transmiterii prin nepturile insectelor. Exist i rickettsii nepatogene, care se dezvolt n organismul unor insecte gazd (acarieni). Iniial rickettsiile au fost considerate microorganisme intermediare ntre virusuri i bacterii. Ulterior s-a stabilit c au organizare de tip celular procariot i o structur intern caracteristic bacteriilor. Rickettsiile sunt bacterii pleomorfe, populaia bacterian prezentnd celule cu forme variate. Celula tipic are form de bacil, cu un diametru de 0,3 - 0,7m i lungime de 1,5 - 2 m. Alte celule au form de coci izolai sau n perechi, de cocobacili sau forme filamentoase. Sunt Gram negative i se coloreaz greu cu colorani de anilin, colorndu-se n albastru prin metoda Giemsa. Au structur asemntoare bacteriilor Gram negative, peretele celular avnd o grosime de pn la 100 nm, iar membrana citoplasmatic fiind trilamelar. La suprafaa peretelui celular se gsete o microcapsul, care n organismul gazd are rol de antigen. Peretele celular conine acid muramic i acid diaminopimelic. n compoziia lor chimic intr proteine, glucide, acizi nucleici, vitamine, sruri minerale. ADN-ul se gsete n cantitate relativ mic, aproximativ 200 - 400 gene. Multiplicarea rickettsiilor se realizeaz prin diviziune simpl, transversal, de obicei n citoplasma celulelor gazd. Exist ns i specii de rickettsii care se multiplic n nucleul celulelor gazd. Diviziunile lor se succed la aproximativ 8 ore. Rickettsiile sunt adaptate la un parazitism obligatoriu, nu se dezvolt n afara mediului celular i sunt sensibile la factorii de mediu. Celulele de rickettsii sunt strict dependente de celula gazd, avnd un echipament enzimatic simplificat, care nu le permite un metabolism cu toate etapele de degradare a substanelor i nici cu toate etapele de biosintez a componentelor celulare. Ele pot sintetiza molecule mici, enzime necesare pentru producerea de energie, dar componentele macromoleculare i unele coenzime sunt preluate din celula gazd. De aceea membrana rickettsiilor prezint o permeabilitate mai mare dect a bacteriilor ce triesc n afara celulelor gazd, fapt ce explic i imposibilitatea creterii lor n laborator pe medii artificiale. Rickettsiile sunt omorte de antiseptice obinuite (fenol, formol), de cldura umed (30 minute la 56C) i de antibiotice cu spectru larg (tetraciclin, cloramfenicol, rifampicin). Rickettsiile produc toxine cu efect letal pentru oarece, la care determin leziuni vasculare generalizate i moartea n cteva ore. n organismul uman rickettsiile au tropism pentru celulele epiteliale ale vaselor de snge, n special capilare, cu modificri ale permeabilitii vasculare. Microorganismele se multiplic n celulele endoteliului vaselor sangvine mici; celulele se umfl, se necrozeaz i vasele se rup. Rickettsiile patogene pentru om i animale sunt transmise de la om la om sau de la animal la om de ctre vectori (pduchi, purici, cpue).

CHLAMIDIILE Chlamidiile sunt organisme procariote care paraziteaz obligatoriu celulele eucariote, producnd infecii la om i animale. Datorit parazitismului intracelular, au fost iniial considerate virusuri de mari dimensiuni. Chlamidiile i pstreaz ns structura celular de tip procariot pe parcursul ntregului ciclu de via, prezentnd structur celular i ambele tipuri de acizi nucleici (att ADN, ct i ARN). Chlamidiile sunt bacterii de dimensiuni mici (0,5 - 1), imobile, care au un ciclu de dezvoltare caracteristic. Prezint o form extracelular stabil, infectant, cu via latent, care ptrunde n citoplasma celulei gazd prin fagocitoz, dup o prealabil legare electrostatic de suprafaa celular. Formele extracelulare se numesc corpi elementari, au un raport ADN:ARN de 1:1. n citoplasma celulei gazd corpii elementari formeaz structuri vegetative numite corpi reticulai, cu un raport ADN:ARN de 3:1 i dimensiuni de 0,5-1m, care prin diviziune dau noi corpi elementari, ce reiniiaz ciclul de infecie. Corpii elementari au form de bacterii cocoide, cu dimensiuni de 1,5 - 3m. Peretele celular este similar ca structur i compoziie chimic cu cel al bacteriilor Gram negative. n citoplasm prezint ribozomi, nucleosomul reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar circular nchis, ARN, enzime care intervin n metabolism. Chlamidiile sunt incapabile s produc compui macroergici de tipul ATP, pentru stocarea i utilizarea energiei, de aceea sunt parazii energetici. Nu se coloreaz prin metoda Gram. Parazitul intracelular utilizeaz metaboliii celulei gazd, intr n competiie cu aceasta pentru aminoacizi i sintetizeaz metabolii toxici, care duc la lezarea membranei celulei gazd i la eliberarea corpilor elementari. n laborator, chlamidiile se cultiv pe ou embrionate de gin n vrst de 6 - 7 zile, intravitelin, dar i pe culturi de celule pulmonare de oarece. Diagnosticul de laborator se stabilete prin metode imunologice i bacteriologice. Deoarece bacteriile se pot transmite prin aerosoli, trebuie luate msuri de prevenire a infeciilor cu chlamidii n laborator. MICOPLASMELE Micoplasmele reprezint un grup de procariote mici (0,2 0,5), variate ca form, lipsite de perete celular, delimitate numai de membrana plasmatic lipoproteic. Formeaz grupul Mollicutes. Sunt cele mai mici i mai primitive organisme capabile de cretere autonom pe medii acelulare inerte. Sunt larg rspndite n natur, mai ales ca saprobioni. Sunt prezente n organismul animal (pe mucoasa bucal i cea genital), n plante, fungi, ape de canal. Pot produce la om afeciuni respiratorii i urogenitale, iar la animale pot determina boli grave. La plante se cunosc peste 40 de boli produse de micoplasme, la citrice, cartof, dud. Sunt frecvent prezente n culturile de celule utilizate n laborator n virusologie, unde pot produce modificri de ordin genetic (li s-a atribuit un rol n malignizarea celulelor animale in vitro).

Micoplasmele prezint mai multe tipuri morfologice: sferice, cocoidale, diplococi, filamentoase, miceliene ramificate. Sunt bacterii Gram negative, dar se pun n eviden mai uor prin coloraii de tip Giemsa. Ultrastructura lor cuprinde membrana plasmatic lipoproteic, tristratificat, cu grosimea de 10 nm, materialul nuclear alctuit din ADN dublu catenar, cu aproximativ 600 - 1000 gene, ribozomi de tip 70S. Au un genom simplificat, care este n corelaie cu structura lor. Pe medii semisolide cu proteine formeaz colonii foarte mici, cu aspect caracteristic de ou prjit. Multiplicarea lor se pare c se poate realiza att prin diviziune direct, ct i prin nmugurire i fragmentare. Sunt bacterii sensibile la cloramfenicol, tetraciclin, dar sunt rezistente la aciunea penicilinei. CIANOBACTERIILE Cianobacteriile sunt organisme foarte vechi, din precambrianul timpuriu. Dup unele ipoteze, evoluia lor endosimbiont a dus la apariia predecesorilor cloroplastelor i la apariia celulelor vegetale. Reprezint cea mai mare, mai divers i mai larg rspndit grup de bacterii fotosintetizante. Sunt microorganisme cu organizare de tip procariot, care posed un aparat fotosintetic similar din punct de vedere molecular, structural i funcional cu cel din cloroplastele celulelor eucariote. Cianobacteriile au form sferic sau bacilar, cu dimensiuni cuprinse ntre 1 i 10m . Se prezint ca celule izolate ori ca asociaii coloniale sau filamentoase. Peretele celular are o structur tipic bacteriilor Gram negative i este frecvent acoperit de o teac gelatinoas polizaharidic sau fibroas. Nucleosomul este reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar circular, cu dimensiuni variabile. Diversitatea lor structural este nsoit de o diversitate genetic, reflectat de valorile G+C (35 - 71%) i dimensiunile genomului (care poate avea o greutate molecular ntre 1,6 x 109 8,6 x 109 Da). Cea mai mare parte din protoplast este ocupat de componentele aparatului fotosintetic, localizate ntr-o serie de saci membranoi turtii, paraleli, numii tilacoizi, care sunt sediul pigmenilor fotosintetizani. Cianobacteriile conin n citoplasm granule de polifosfai, glicogen i cianoficin. Granulele de cianoficin sunt mari (cu diametrul de 1m), refringente, alctuite din lanuri polipeptidice mari, ramificate, care au la baz acidul aspartic i arginina. Ele sunt caracteristice cianobacteriilor. Cianobacteriile constituie un grup relativ uniform de bacterii, deoarece toate sunt autotrofe, rareori necesit factori de cretere, asimilarea CO2 se face prin ciclul Calvin Benson, cu formarea de depozite de glicogen ca material intracelular de rezerv. Multe cianobacterii sunt obligat fotoautotrofe, fiind incapabile s creasc la ntuneric. Rata de cretere la ntuneric a celor care sunt capabile de aceasta este foarte mic n raport cu creterea la lumin.

Anabaena

Nostoc

Nodularia

VIRUSURILE Virusurile reprezint o categorie specific de ageni infecioi, fundamental diferii, structural i funcional, de oricare dintre organismele cunoscute. Din cauza dificultilor de observare, cultivare i studiere, foarte mult vreme au fost analizate prin prisma unor caractere evidente: filtrabilitatea, dimensiunile foarte mici, parazitismul obligatoriu intracelular, inactivarea prin cldur. Aceste caractere s-au dovedit a nu fi definitorii n raport cu ali ageni infecioi, fapt care explic ncadrarea greit i absurd a bacteriilor mici filtrabile, parazite obligatorii intracelular, ca intermediari ntre bacteriile adevrate i virusuri. Primele date referitoare la natura i caracterele specifice ale unor boli virale sunt foarte vechi, fiind consemnate n China antic (anul 2500 .e.n., despre variola uman) sau n lucrrile lui Aristotel (despre turbare). n 1886 Mayer a demonstrat transmisibilitatea mozaicului tutunului prin frecarea plantelor sntoase cu plante bolnave i inactivarea principiului infecios prin tratament cu alcool sau prin nclzire la 80C. El a considerat c boala este produs de un "ferment organizat". n 1898 Beijerink confirm multiplicarea i transmisibilitatea n serie a agentului patogen al mozaicului tutunului, dar i rezistena sa ndelungat n frunzele uscate de tutun i difuzibilitatea lui n agar. El ajunge la concluzia c agentul patogen nu este nici microorganism, nici toxin, ci o substan molecular special solubil, capabil s se multiplice n celulele gazd dac este ncorporat n citoplasma acestora. El l numete "contagium vivum fluidum". Toate aceste date, reconsiderate astzi, au dus la concluzia c Beijerink este descoperitorul virusurilor, deoarece el este primul care a intuit natura lor deosebit de a celorlali ageni patogeni. Recunoaterea tiinific a virusurilor ca entiti particulare se datoreaz lui Andre Lwoff, care n 1953 i n 1981 a ncercat s stabileasc ansamblul caracterelor originale ale lumii virusurilor, descriind deosebirea dintre virus i non-virus. DEFINIREA CONCEPTULUI DE VIRUS Caracterele discriminatorii ale virusurilor i bacteriilor
Nr. crt. 1 2 3 Caracterul Tipul de organizare Unitatea de structur i funcie Stri posibile de existen VIRUSURI organizare acelular virionul virionul - particula viral matur, complet, infecioas, form n care virusul se gsete la sfritul procesului de replicare n celula gazd i este eliberat n mediul exterior virusul vegetativ - genomul viral aflat liber n celula gazd, pregtit de replicare provirusul - genomul viral integrat n genomul celulei gazd PROCARIOTE organizare celular de tip procariot celula bacterian celula bacterian vegetativ, capabil de cretere i replicare sporul bacterian, form facultativ de rezisten

Structura intern

Simetria la nivel molecular

virionul cuprinde: - constitueni eseniali - genomul viral - capsida viral - constitueni accesorii: peplosul Genomul i capsida alctuiesc mpreun nucleocapsida, caracteristic virusurilor nude, neacoperite. Genomul e reprezentat de o molecul de acid nucleic, fie ADN, fie ARN, cu o greutate molecular diferit de la un virus la altul. Molecula de acid nucleic este monocatenar sau bicatenar, linear sau circular, dispus helical, mpachetat pentru a forma o structur compact. Genomul viral poart informaia genetic necesar pentru propria replicare i pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul sintezei de constitueni virali. Acidul nucleic viral determin infeciozitatea virusurilor. Capsida este nveliul proteic ce acoper i protejeaz genomul viral. Este alctuit din uniti morfologice de natur proteic, numite capsomere. Peplosul este un nveli extern prezent la virusurile acoperite, cu nivel complex de organizare, cu rolul de a pstra stabilitatea nucleocapsidei i de a favoriza fixarea virionului pe celula gazd. E alctuit dintrun dublu strat lipidic, n care sunt implantate formaiuni de natur glicoproteic, numite spicule. Spiculele pot fi prismatice alungite (de exemplu hemaglutininele) sau n form de ciuperc (de exemplu neuraminidazele). simetrie constant a aranjrii moleculelor proteice n capsid: - helical - icosaedric - binar (mixt) - fie ADN (la dezoxiribovirusuri) - fie ARN (la ribovirusuri) - virusurile mici au n structura capsidei un numr fix de molecule proteice de acelai fel; virusurile complexe au n capsid mai multe tipuri diferite de molecule proteice, dar numrul este limitat i fix; rolul proteinelor virale este structural i n mod excepional enzimatic; O consecin a numrului fix de proteine este dispunerea lor simetric n capsid, ntr-un mod unic.

celula bacterian cuprinde: - perete celular - membran - citoplasm - nucleoid - ribozomi - vacuole - incluzii - spori - capsul - flageli

lipsete o simetrie molecular

Compoziia chimic - acizii nucleici

- ADN n genomul bacterian - ARN n citoplasm - bacteriile au un potenial de aprox. 3-4 mii de proteine diferite, cu rol structural sau enzimatic. Numrul lor este variabil, randamentul sintezei de proteine fiind inegal, funcie de importana proteinei pentru celula bacterian.

- proteinele

- glucidele i lipidele

- virusurile nu au glucide i lipide, cu excepia unor proteine glicozilate; uneori sunt prezente n nveliul extern, provenind de la celula gazd n care s-au replicat, deoarece peplosul nu este codificat de genomul viral - virusurile sunt lipsite de echipament enzimatic, neputnd s i sintetizeze constituenii, s produc energie i s utilizeze resursele mediului; nu se pot cultiva pe medii acelulare; Uneori virusurile prezint enzime cu rol n replicarea genomului viral, n favorizarea ptrunderii virusului n celul sau a eliberrii din celula gazd. Virusurile nu au capacitatea de a produce energie cu potenial nalt (ATP), nu fac sinteza independent a constituenilor proprii, nu au capacitatea de a crete i de a se divide. Se reproduc obligatoriu n celula gazd vie, pornind exclusiv de la genomul viral.

- glucidele i lipidele sunt prezente n mod constant n structura bacteriilor

- echipamentul enzimatic

Proprietile biologice

Utilizarea sistemelor structurale i biochimice ale gazdei n cursul parazitismului intracelular Parazitismul absolut

Virusurile utilizeaz sistemele enzimatice, ARN de transfer i ribozomii gazdei.

- bacteriile au n mod constant un echipament enzimatic cu grad diferit de complexitate, n funcie de nutriia bacteriilor; este mai complex la bacteriile autotrofe, se simplific la cele heterotrofe i la bacteriile parazite obligatoriu intracelular Bacteriile au un metabolism energetic propriu, chiar i cnd sunt parazite intracelular; au capacitatea de a crete pn la un punct critic urmat de diviziune. Multiplicarea PK pornete de la ansamblul integrat al constituenilor celulari. Bacteriile nu utilizeaz sistemele enzimatice ale gazdei, ci pe cele proprii.

10

Multiplicarea virusurilor

Pentru virusuri este constant i obligatoriu. n celulele infectate cu virusuri, metabolismul celular sufer modificri eseniale, fiind deviat n sensul sintezei constituenilor virali, pornind de la informaia genetic strin, adus de genomul viral n celul. Procesele de sintez celular continu cel puin un timp, deoarece metaboliii eseniali celulari sunt necesari n sinteza de constitueni virali. Competiia dintre virus i celula gazd are loc la nivelul diataxiei (producerea de constitueni): diataxia celular este blocat sau diminuat sub aciunea unor constitueni proteici virali din capsid sau peplos, iar diataxia viral este activ. Multiplicarea virusurilor se realizeaz prin replicare viral (replicarea informaiei genetice virale, sinteza componentelor virale, asamblarea particulelor).

La bacterii parazitismul nu este absolut.

Bacteriile se multiplic prin diviziune direct, fragmentare, nmugurire, prin spori.

MORFOLOGIA VIRUSURILOR Descrierea morfologic i dimensiunile unui virus se raporteaz la virion, particul viral matur, unitate integrat de structur i funcie. Din punct de vedere morfologic se disting mai multe tipuri de virioni: - virioni de form cilindric alungit, adic de bastona rigid (VMT) sau flexibil (bacteriofagii filamentoi) - virioni de form sferic (izodiametric, de exemplu virusul poliomielitei din Familia Picornaviridae) sau sferoidal (virusurile gripale, adenovirusurile, herpesvirusurile) - virioni de form paralelipipedic (poxvirusurile) - virioni cu form de cartu (virusul rabic, din Familia Rhabdoviridae) - virioni n form de cirea cu coad sau mormoloc (bacteriofagii T par); - virusuri de forma cifrei 6 (virusul Ebola).

(http://learnsomescience.com/microbiology/viruses-viroids-and-prions/) Virusurile au dimensiuni submicroscopice: cele mai mari au 240 300nm (orthopoxvirusurile), la limita de rezoluie a microscopiei optice; cele mai mici (enterovirusurile), au sub 30nm diametru. bacteriofagii cei mai mari ating 200nm. MODELUL GENERAL DE STRUCTUR VIRAL Virionii posed doi constitueni eseniali i definitorii: genomul i capsida, care alctuiesc mpreun nucleocapsida virusurilor nude, fr nveli extern (poliovirusul, reovirusurile, adenovirusurile).

Virusurile se deosebesc prin: o natura moleculei de acid nucleic din genom: ADN, pentru dezoxiribovirusuri (adenovirusurile, poxvirusurile, herpesvirusurile, papovavirusurile); ARN, pentru ribovirusuri (virusurile gripale, paragripale, virusul rujeolic, virusul rabic, poliovirusul, VMT). o structura genomului, care este variat: o monocatenar sau dublu catenar, o linear sau circular, o genom segmentat, n aceeai capsid sau capside diferite. Majoritatea virusurilor infecioase pentru om, animale i plante sunt ribovirusuri. n virion genomul ribovirusurilor este asociat cu nucleoproteine i cu proteine de replicare, dar se disociaz de nucleopreoteine cnd ajunge n citoplasma celulei gazd. Majoritatea ribovirusurilor au ca genom o molecul de ARN monocatenar de polaritate: - pozitiv (care funcioneaz ca ARNm i este tradus n proteine fr o transcriere prealabil); - negativ (care nu este tradus direct, ci este transcris mai nti n ARNm). Numai reovirusurile au genom ARN dublu catenar. Genomul dezoxiribovirusurilor este complexat cu proteine att n starea mpachetat n virion, ct i ca genom liber n citoplasma celulei gazd. La virusurile infecioase pentru celulele animale informaia genetic are caracter discontinuu, ca i a gazdelor lor. Moleculele de ADN monocatenar, lineare sau circulare, au o tendin accentuat de a se plia, formnd bucle dublu catenare n ac de pr, ori de cte ori secvenele de baze permit formarea unui numr semnificativ de perechi, reunite prin intermediul punilor de hidrogen, formnd o molecul compact. Genomul viral dublu catenar poate fi linear sau circular nchis, cu diferite grade de supraspiralizare i de condensare. Gradul de pliere a moleculei depinde de prezena ionilor: ionii de Na+ favorizeaz predominana formei monocatenare, cu foarte puine bucle, datorit aciunii de respingere a gruprilor fosfat cu sarcin negativ. Unele virusuri au informaia genetic sub form de segmente multiple ncapsidate ntr-o capsid comun sau n capside diferite, caz n care infecia se poate produce numai cnd n organismul gazd ptrund toate capsidele ce poart informaia genetic necesar replicrii virale. Avantajul genomului segmentat const n aceea c mesajele genetice mai mici sunt mai uor replicate i transmise n celula eucariot animal sau vegetal, putnd fi traduse simultan, facilitnd procesul de replicare viral. Segmentarea genomului viral reprezint un avantaj pentru supravieuirea virusurilor n natur, fiind o adaptare la celula eucariot animal sau vegetal. Pentru virusurile cu genom segmentat repartizat n mai multe capside, faptul pare dezavantajos pentru iniierea replicrii, aceasta necesitnd prezena tuturor segmentelor genomice ncapsidate separat. n realitate n plantele infectate exist cantiti imense de particule virale, care asigur ansa transmiterii tuturor tipurilor de virioni cu informaia genetic viral complementar.

Dintre virusurile ARN infecioase pentru om i animale pot fi amintite: virusul gripal cu 8 segmente de ARN monocatenar, reovirusurile cu 10 segmente de ARN dublu catenar, arenavirusurile cu 2 segmente de ARN inegale. n cazul virusului gripal exist n natur mai multe variante, n funcie de specia de animal pe care o poate mbolnvi. Segmentele de ARN monocatenar sunt specifice pentru fiecare variant, determinnd o mare variabilitate a virusului gripal, cu dobndirea de noi caracteristici n urma unei pseudorecombinri (ntr-o coinfecie cu variante diferite de virus gripal, segmente genomice provenind de la variante diferite se pot recombina). Diversitatea virusului gripal poate sta la baza producerii de epidemii i pandemii grave la om. Unele virusuri ARN patogene pentru plante au genomul ncapsidat n capside diferite i infecia se poate produce numai dac n organismul gazd ptrund toate capsidele ce poart informaia genetic necesar replicrii virale. De exemplu virusul mozaicului lucernei (alfalfavirus - AAV) are genomul repartizat n 4 tipuri de virioni: trei au form de bastona i au cte o molecul de ARN i unul are form elipsoidal i conine dou segmente de ARN. Una dintre particularitile virusurilor este aceea c fac economie de informaie genetic. Aceast economie este necesar datorit dimensiunilor mici ale virusurilor i se realizeaz pe mai multe ci: la virusurile mici capsida viral este format dintr-un singur tip de proteine dispuse simetric, a cror sintez este asigurat de o gen sau de puine gene; virusurile pot utiliza unele proteine din celula gazd pentru efectuarea unor funcii virale; virusurile cu un genom defectiv (care nu au n structura genomului lor genele necesare pentru codificarea proteinelor din capsid) utilizeaz informaie genetic furnizat de alte virusuri (virusuri helper), asociate cu cele defective, care suplinesc deficienele virusului principal, determinnd o sintez n exces de capsomere. De exemplu, virusul sarcomului Rous are capacitatea de a produce transformarea malign a unor celule animale, dar nu se poate replica dect n asociere cu virusul leucemiei murine, care i furnizeaz informaia genetic necesar sintezei proteinelor capsidale. n acest fel, virusul defectiv poate avea capside diferite, n funcie de virusul helper, dar i pstreaz informaia sa genetic. Unele polipeptide capsidale ndeplinesc n acelai timp funcii structurale i funcii de reglare n procesul de replicare viral. Aceeai informaie genic poate fi folosit n mai multe cadre de citire (citire defazat, care are o alt semnificaie genic) n procesul de translaie, cu producerea a dou sau mai multe polipeptide sub controlul aceluiai determinant genetic. Greutatea molecular a virusurilor variaz de la 1,2 - 1,8x106Da n cazul virusurilor mici (virusurile paragripale), la 2,5x106Da n cazul adenovirusurilor, pn la 200x106Da n cazul virusurilor mari (poxvirusurile). Dimensiunile genomului ribovirusurilor sunt relativ uniforme, cel mai mare genom fiind cel al reovirusurilor (15x106Da). Genomul dezoxiribovirusurilor variaz ca dimensiune mai mult, ntre 106Da (virusul hepatitei B) i 185x106Da (avipoxvirusul). Numrul de gene virale variaz de la 3 la 160, iar compoziia n baze (G + C) este cuprins ntre 35 - 58%. Coeficientul G + C% are semnificaie pentru taxonomia virusurilor. n general, virusurile cu potenial oncogen au un coeficient G + C% mai apropiat de cel al celulelor mamiferelor, care este de aproximativ 40%. Grupul adenovirusurilor cuprinde virusuri:

- neoncogene, cu coeficient G + C 58%, - slab oncogene cu coeficient G + C 52%, - oncogene cu coeficient G + C 48%. Genomul viral conine informaia genetic necesar desfurrii ciclului de replicare n celula gazd sensibil: pentru replicarea genomului, pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul de constitueni virali, pentru sinteza proteinelor structurale i de reglare, pentru asamblarea i eliberarea din celula gazd a virionilor nou formai. Genomul viral asigur potenialul de variabilitate a virusurilor i infeciozitatea acestora. Genomul dezoxiribovirusurilor animale (cu excepia celor din grupul Pox), precum i genomul bacteriofagului se pot integra periodic n genomul celulei gazd. Informaia genetic pentru integrare i meninerea ei este furnizat de genomul viral. Unele virusuri animale capabile de integrare n genomul celulei gazd produc concomitent transformarea malign a celulei (virusurile oncogene). Virusurile oncogene cu genom ARN (din grupul oncornavirusurilor, n care sunt incluse i HIV I, HIV II) se integreaz prin intermediul transcrierii ARN viral n ADN dublu catenar, acesta din urm integrndu-se n genomul celulei gazd. Aceste virusuri ARN produc enzima numit reverstranscriptaz, care este o ADN polimeraz ARN dependent, capabil s sintetizeze ADN pe matri de ARN. Capsida viral este un nveli proteic, cu o structur difereniat n funcie de tipul de virus. Unitatea structural a capsidei este capsomera, care este alctuit dintr-un lan polipeptidic sau un agregat de catene polipeptidice identice sau diferite. Capsomerele sunt cele mai mici uniti structurale vizibile la microscopul electronic. n funcie de dispunerea capsomerelor, virusurile prezint trei tipuri de simetrie: helical (helicoidal), icosaedric, mixt (binar). La virusurile cu simetrie helical capsomerele sunt formate dintr-un singur polipeptid (sunt monomere), reprezentnd att unitatea morfologic, ct i unitatea structural a capsidei. La virusurile cu simetrie icosaedric, capsomerele sunt alctuite din mai multe tipuri de proteine (sunt oligomere), ele reprezentnd numai unitatea morfologic a capsidei, alctuit din mai multe uniti structurale. Capsomerele pot fi pentoni (conin 5 subuniti de structur, sunt pentamere) sau hexoni (conin 6 uniti de structur, sunt hexamere). Rolul capsidei virale este acela de a proteja materialul genetic viral de degradarea produs de nucleazele celulare, de a contribui la fixarea i ptrunderea virusului n celula gazd, de a determina spectrul de gazd a virusului prin specificitatea interaciunii capsidei virale cu receptorii specifici complementari prezeni pe suprafaa celulei gazd. Capsida viral conine determinani antigenici responsabili de producerea rspunsului imun n organismele infectate. nveliul extern (peplosul) este derivat din membrana celular cnd virusul prsete prin nmugurire celula gazd n care s-a replicat. Este o structur accesorie, caracteristic virusurilor "acoperite". n structura peplosului intr un dublu strat fosfolipidic provenit din membrana celular, n care sunt implantate proteine proprii celulei gazd i proteine specific virale, codificate de genomul viral. Lipidele din nveliul extern sunt diferite, n funcie de celulele n care s-a replicat virusul.

La nivelul peplosului se gsesc formaiuni de natur glicoproteic, numite spicule, de form prismatic sau de buton, care sunt codificate de genomul viral. Proteina din componena spiculelor este de natur cert viral, glicozilarea fiind efectuat de celula gazd n timpul parcurgerii drumului intracelular de la locul de sintez pn la suprafaa celulei de ctre proteina viral. Semnificaia biologic a capsidei i a peplosului Capsida viral este o structur ce protejeaz genomul viral i particip la infectarea celulei gazd. nveliul extern consolideaz funciile capsidei, asigurnd stabilitatea nucleocapsidei, iar spiculele favorizeaz faza de adsorbie a virusurilor pe celula gazd i ptrunderea acestora n celul. n componena virusurilor intr 3 tipuri de proteine: proteinele capsidale, cu greutate molecular de 12 - 110 kdal; la cele mai multe virusuri ele sunt identice, la altele sunt diferite; proteine interne, situate n interiorul nucleocapsidei virale, alctuind mpreun cu acidul nucleic viral corpul central (nucleoidul viral); rolul lor este de a menine genomul viral n form condensat; proteine cu rol enzimatic, prezente la unele virusuri animale; existena acestor enzime nu infirm faptul c virusurile nu au echipament enzimatic de biosintez, ele avnd rol n replicarea genomului viral. Exemple: ARN-polimeraza poxvirusurilor i a virusului gripal este o transcriptaz ce sintetizeaz ARN pe matri de ADN; neuraminidaza virusului gripal, localizat la nivelul spiculelor din nveliul extern, degradeaz mucoproteinele i receptorii celulari de la nivelul cilor respiratorii ale animalelor, favoriznd infecia viral; reverstranscriptaza este o ADN polimeraz ARN - dependent prezent la virusurile ARN oncogene (HIV, retrovirusuri). MULTIPLICAREA VIRUSURILOR Multiplicarea virusurilor (replicarea viral) are loc exclusiv n celula gazd vie, care le furnizeaz materialul de construcie (aminoacizi, baze nucleice, polizaharide) i dispozitivul celular de biosintez (ribozomi, sisteme generatoare de energie, ARNt). Aceast comportare corespunde parazitismului absolut pe care virusurile l exercit asupra celulei gazd. Replicarea decurge ntr-o serie de etape succesive: - Adsorbia i fixarea reversibil a virusurilor pe celul este o consecin a ciocnirilor ntmpltoare ntre virusuri i celul, rezultate din micarea brownian a celulelor. Este un proces nespecific, reversibil, determinat de atracia ionic, eficiena procesului fiind dependent de numrul de virioni din suspensia viral (cu ct numrul de virioni este mai mare, cu att crete eficiena procesului de adsorbie). Uneori sunt necesare milioane de ciocniri pentru un singur virion.

Ataarea sau fixarea ireversibil a virusurilor pe celul este un proces ireversibil, datorat diferitelor grade de specificitate a fixrii virusului pe celula gazd; este determinat de complementaritatea geometric i electrostatic ntre structurile de pe suprafaa virusurilor i receptorii specifici de virus de pe suprafaa celulelor, care recunosc aceste structuri. Cea mai mare specificitate de fixare exist ntre bacteriofag i bacterie, cea mai mic ntre virusul vegetal i celula vegetal (aceasta nu are receptori pentru virus). Celulele vegetale nu au receptori de virus pe suprafaa lor. Virusurile plantelor nu pot adera la suprafaa peretelui celulozic al celulei vegetale. Nu pot strbate aceast barier dect dac integritatea peretelui celular a fost afectat prin leziuni mecanice. Infectarea celulelor vegetale necesit cantiti mari de virus, dar odat realizat infecia, aceasta va duce la o multiplicare viral intens. La extrema cealalt se situeaz relaia bacteriofag bacterie gazd, unde exist un nalt grad de specificitate a interaciunii gazd parazit. Bacteriofagii au structuri complexe, cu ajutorul crora se fixeaz pe receptorii de pe suprafaa celulelor gazd. Receptorii celulari au o pronunat complementaritate geometric i biochimic fa de structura fagului i deci o specificitate crescut. Virusurile animale ocup o poziie intermediar n ceea ce privete specificitatea interaciunii cu celula gazd, fixarea fiind mai puin specific i eficient dect n cazul bacteriofagilor, dar mai specific dect n cazul virusurilor vegetale. Unele virusuri animale necesit prezena unor receptori specifici pe suprafaa celulelor gazd pentru a se putea fixa, prezentnd un citotropism pronunat, cu consecine majore pentru patogenitate. De exemplu poliovirusul se fixeaz numai pe celule de om i de maimu. Fiind un enterovirus, n celula gazd are specificitate de fixare pentru celulele epiteliale din mucoasa intestinal, infecia cu poliovirus realizndu-se pe cale digestiv. De asemenea, poliovirusul prezint un citotropism pronunat pentru motoneuronii din coanele anterioare ale mduvei spinrii, n urma fixrii de receptorii specifici de pe suprafaa acestor celule. Distrugerea motoneuronilor duce la paralizii ale muchilor striai. In vitro, poliovirusul poate infecta i alte tipuri de celule (de exemplu, celule renale de maimu), diferite de cele ale epiteliului intestinal i de motoneuronii medulari. In vitro suprafaa celulelor respective este modificat din cauza condiiilor de cultivare, fapt care duce la demascarea unor receptori celulari normali, care erau n stare ascuns. Receptorii de virus sunt constitueni normali de pe suprafaa celulelor animale, cu o configuraie structural anume, de care virusurile se leag n mod specific. Specificitatea virusurilor este conferit de o micromolecul sau de mai multe molecule existente la nivelul virionului. Definirea receptorului celular de virus este dificil, deoarece particula viral este un ligand de dimensiuni mari, care interacioneaz cu o suprafa mare a celulei, unde se gsesc molecule de legare specifice i nespecifice. Unele virusuri se pot lega de receptori diferii pe tipuri diferite de celule. Virusurile nvelite se leag de receptorii celulari prin glicoproteinele peplosului. Structurile de fixare pe celula gazd ale virusurilor nude cu simetrie icosaedric sunt situate n vrfurile icosaedrului, fiind polipeptide ale capsidei sau proteine fibrilare proeminente n vertexuri. Receptorii celulari specifici pentru aceste structuri sunt nc necunoscui.

Celulele organismelor animale au receptori pentru un numr mare de ageni infecioi, fiind aproximativ 10000100000/cel. Ei ndeplinesc funcii celulare normale. - Ptrunderea virusurilor n celul se face diferit: virusurile animale ptrund integral prin endocitoz (viropexie) sau fuziune; virusurile vegetale ptrund prin leziunile mecanice ale peretelui celular; bacteriofagii i injecteaz genomul n interiorul celulei bacteriene. Virusurile animale ptrund n celulele receptive ca virioni integrali. Exist dou mecanisme fundamentale de ptrundere a virusurilor n celulele animale: endocitoza i fuziunea. Endocitoza este mecanismul predominant, ca rezultat al interaciunii virion receptor de pe suprafaa celulei gazd. Este un proces activ de ingestie celular, analog pinocitozei. Endocitoza implic o strns potrivire ntre conturul virionului i membrana celular, care se realizeaz progresiv, prin recunoaterea virion receptor celular iniial la nivelul unor puncte de fixare, urmat de o unire treptat prin mecanismul de fermoar, ce asigur adaptarea riguroas la membrana. Acest mecanism este ntlnit la toate virusurile nude, dar i la virusul gripal i la poxvirusuri. Legarea iniial a virionului de receptorii celulari genereaz un semnal care declaneaz emiterea unor pseudopode prin activarea proteinelor contractile intracelulare. Membrana celular alunec pe suprafaa virionului, procesul continund pn cnd se formeaz o vacuol de endocitoz, numit pinosom, virionul ntreg ajungnd n celul, nvelit de vezicula derivat din membrana plasmatic. Membrana celular se reface dup formarea pinosomului. Pereii veziculei citoplasmatice se dezintegreaz ulterior, elibernd virionul n celul. Fuziunea suprafeei virusului cu membrana celular la zona de contact are drept urmare dizolvarea nveliului viral i formarea unui canal la nivelul peretelui celular, care permite trecerea virionului n citoplasm. Este ntlnit la virusurile nvelite i este dependent de glicoproteinele existente n nveliul extern viral. Cele dou mecanisme nu se exclud. Exist virusuri care folosesc ambele ci de ptrundere n celula gazd. n cazuri particulare intervin i alte mecanisme. - Decapsidarea i eclipsa reprezint eliberarea genomului viral de nveliul proteic. nveliul extern este dezintegrat, capsida este descompus pn la capsomere, componentele rezultate trec n rezerva celular i sunt folosite de celul la sintezele ulterioare. La sfritul perioadei de decapsidare virusul se gsete sub form de genom viral liber n celul (virus vegetativ), stare n care poate fi transcris, tradus, replicat. La unele virusuri (enterovirusuri) decapsidarea se face chiar la nivelul membranei celulare. La alte virusuri decapsidarea se realizeaz n citoplasm, dup integrarea virusului n celul, sub aciunea diferitelor enzime celulare. Perioada n care genomul viral este eliberat de nveliul proteic a fost descris iniial ca o faz de dispariie a virusului, numit faz de eclips, deoarece virusul infecios nu mai putea fi evideniat la microscopul electronic. n realitate el exist n celul, dar este doar greu de detectat. Aceast faz de decapsidare are o durat variabil, n funcie de tipul de virus (poliovirusurile 1- 2 ore, papovavirusurile 12 14 ore). - Migrarea intracelular pn la locul de replicare se poate face direct (transmembranar) sau indirect prin structuri canaliculare preformate.

Dup ptrunderea n celul, virusurile se deplaseaz la locul de replicare. Cele care se multiplic n citoplasm ajung la destinaie direct, imediat ce trec prin membrana citoplasmatic. Cele care au o parte a ciclului de replicare n nucleu (de exemplu adenovirusurile, herpesvirusurile, papovavirusurile, virusul gripal) necesit un transfer rapid de la periferia celulei pn n nucleu. Nu se cunosc foarte exact mecanismele acestor deplasri intracelulare. Teoretic, ele pot avea loc direct, transmembranar, trecnd prin membranele intracitoplasmatice care se interpun n calea lor sau indirect, prin structuri canaliculare preformate existente n celul. Ambele ci de deplasare presupun c aceasta este vectorial, nu este ntmpltoare. La virusurile care se replic n nucleu procesul de replicare dureaz mai mult

(http://micro.magnet.fsu.edu/cells/endosomes/endosomes.html) Sinteza proteinelor timpurii se realizeaz pornind de la genomurile virale infectante (iniiale), sub controlul genelor precoce din genomul viral. Are loc transcrierea genelor precoce i traducerea informaiei genetice la proteine, care sunt numite proteine timpurii sau precoce. Acestea sunt necesare n cantiti mici, deoarece n general sunt proteine enzimatice, care pot relua de mai multe ori ciclul de activitate. Sinteza proteinelor timpurii se face pornind de la genomurile iniiale, infectante. Proteinele timpurii sunt: - proteine de reglare, care inhib sinteza de ADN, ARN, proteine specifice celulei gazd, modificnd specificitatea sistemului de replicare, transcriere i traducere i deviind astfel metabolismul celulei gazd n sensul sintezei de constitueni virali; - proteine enzimatice de tipul ADN-polimeraze, ARN-polimeraze, nucleaze, ligaze, care particip la procesul de replicare viral; - proteine de matrice, care au rolul de a delimita matricea n care va avea loc replicarea acidului nucleic viral i morfogeneza viral, n cazul unor virusuri. -

Etapa de replicare a genomului viral este o etap complex, n funcie de structura genomului viral. Sunt cel puin 6 clase diferite de replicare a genomului viral. n urma acestei faze rezult mii de genomuri virale progene. - Biosinteza proteinelor tardive se realizeaz pornind de la genomurile replicate (progene), nu de la cele parentale; se sintetizeaz n numr mare, deoarece vor constitui viitoarele virusuri mature. Setul de gene tardive este transcris numai de la genomurile progene; se face mai nti transcrierea unui ARN premesager, prin procesare se ndeprteaz intronii, se sudeaz exonii, iar ARNm matur rezultat este tradus la proteine. Proteinele tardive sunt de 4 tipuri: - proteine structurale, categorie major, care intr n constituia virionilor; - proteine de reglare, care controleaz expresia genelor timpurii i a celor pentru sinteza proteinelor structurale, astfel nct acestea sunt sintetizate n cantitate suficient; - proteine de morfogenez (eafodaj) n cazul virusurilor cu structur complex, formnd structuri temporare pe care se aaz capsomerele; - proteine care faciliteaz eliberarea virusurilor din celulele infectate. - Morfogeneza viral reprezint procesul prin care diferitele molecule virale acumulate n celul sunt asamblate n virioni maturi fie prin autoasamblare, fie prin depunerea simetric a acestora pe suprafaa unor proteine de morfogenez. Replicarea i morfogeneza virusurilor sunt procese intracelulare, care au loc fie n citoplasm, fie n nucleu, n funcie de tipul de virus. Ribovirusurile se replic n citoplasm, cu excepia virusului gripal, la care nucleocapsida se formeaz n nucleu, hemaglutininele n citoplasm, iar nveliul extern provine din membrana citoplasmatic a celulei gazd, odat cu eliberarea virionului prin nmugurire din aceasta. Genomul dezoxiribovirusurilor este replicat i transcris n nucleu, iar sinteza proteinelor se realizeaz integral n citoplasm. n cazul virusurilor ADN care sunt asamblate n nucleu (herpesvirusuri, papovavirusuri, adenovirusuri), proteinele virale sintetizate n citoplasm sunt transportate n nucleu, unde are loc morfogeneza. Excepie fac poxvirusurile, a cror replicare i morfogenez se realizeaz n citoplasm. - Eliberarea virusurilor din celul este exploziv sau prin nmugurire. Eliberarea exploziv este caracteristic n special celulelor bacteriene infectate cu bacteriofagi i duce la liza celulelor n momentul eliberrii virusurilor progene. Celula bacterian este profund alterat, peretele celular nu rezist la modificrile produse i celula explodeaz, elibernd zeci de mii de fagi progeni. Eliberarea prin nmugurire (prin exocitoz) este caracteristic virusurilor nvelite; ntr-o prim faz, virusurile determin sinteza de spicule virale. Aceste glicoproteine sunt apoi transportate spre suprafaa membranei celulare. n zonele n care s-au depus glicoproteinele virale, n anumite zone ale suprafeei interne a membranei celulare, se depune o protein special, specific viral, numit protein de membran, de matrice, protein M. Zonele respective au fost numite petice, iar nucleocapsidele virale din citoplasm se leag de acestea. Ulterior, membrana celular se bombeaz ca sub aciunea unei presiuni interne, apare un nceput de mugure care continu s se mreasc spre exterior i apoi are loc separarea mugurelui respectiv i desprinderea lui de celula gazd. Virusul este astfel delimitat de nveliul extern provenit din membrana celular (cu fosfolipide i proteine caracteristice gazdei, dar cu spicule caracteristice virusului).

Procesul de nmugurire continu atta timp ct celula mai conine virioni, putndu-se forma cte 5- 6 muguri n acelai timp. Este asigurat refacerea celulei dup desprinderea mugurilor, celula gazd fiind meninut n stare viabil pn se elibereaz toi virionii formai.

(http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/influenza.php)

BACTERIOFAGII Bacteriofagii sunt virusuri adaptate s paraziteze celula bacterian i prin multiplicare produc liza acesteia. Ei au fost descoperii n 1915 de ctre Twort i redescoperii apoi n 1917 de ctre d Herelle, acesta din urm denumindu-i bacteriofagi (mnctori de bacterii). Bordet i Ciuc au descoperit fenomenul de lizogenie, de integrare a genomului fagic n genomul bacteriei gazd, fapt care determin o stare de echilibru ntre fagul infectant i bacteria infectat. Structura fagilor e diferit de la un grup de bacteriofagi la altul, unii au forma unor capside mici, cu simetrie icosaedric (de exemplu fagul X174), alii prezint form filamentoas, cu simetrie helical (fagul M13), iar ali bacteriofagi au form de cirea cu coad, prezentnd o coad complex, scurt sau lung, rigid sau flexibil. Morfologia fagului T4 Fagul T4 prezint un cap n care se gsete informaia genetic viral reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar linear i o coad cu structur complex, ntre cap i coad adaptarea simetriei fiind realizat de un gt. Capul fagului are un contur hexagonal bipiramidal, cu simetrie icosaedric (icosaedrul este un poliedru regulat cu 20 de fee triunghiuri echilaterale, cu 30 de muchii numite creste i 12 vrfuri numite vertexuri). Cele dou prisme terminale se gsesc una fa de cealalt ntr-o poziie corespunznd unei rotaii de 30, astfel nct capul fagului este o antiprism hexagonal bipiramidal. Gtul fagului este o structur simpl, de forma unui cilindru, cu funcie de adaptor de simetrie ntere cap (simetrie icosaedric) i coad (simetrie helical). La nivelul su se gsete un guler de forma unei plci hexagonale, care prezint central o perforaie prin care trece gtul. Pe faa inferioar a gulerului se gsesc situsuri la nivelul crora se prind extremitile fibrelor cozii. Coada fagului prezint n partea central un cilindru axial, gol la interior, cu o lungime mult mai mare dect teaca cozii, cu rolul de a perfora peretele celular al celulei pe care o infecteaz. Teaca acoper cilindrul axial i este alctuit din 144 de capsomere, dispuse pe 24 de iruri paralele, cu o simetrie helical. Coada fagului este contractil. Cnd bacteriofagul se fixeaz pe o celul bacterian, extremitatea distal a fibrelor cozii se desprinde de faa inferioar a gulerului, iar coada se strnge i se ngroa, elibernd cilindrul axial pe o poriune mai mare. Contracia se realizeaz prin modificarea poziiei capsomerelor din teac, ele se apropie ntre ele pe vertical i se ndeprteaz pe orizontal. La baza cozii se gsete placa bazal, care are o structur asemntoare cu gulerul, cu contur hexagonal, dar nu este perforat la mijloc. De zona central se leag 6 puni care se ndreapt ctre cele 6 unghiuri ale plcii. Ele dau posibilitatea plcii s i modifice forma cnd se leag de celula bacterian. Pe faa inferioar a plcii bazale, la fiecare unghi se gsete cte un crlig, la nivelul cruia se leag cele 6 fibre ale cozii. Fibrele cozii sunt alctuite din cte 4 segmente identice. Cnd extremitatea fibrelor este legat de faa inferioar a gulerului, n jurul tecii cozii se formeaz un nveli extern al cozii. n faza premergtoare fixrii fagului de celula bacterian, fibrele se desprind de guler i au aspectul unor picioare de pianjen.

Genomul fagului T4 este reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar, linear, cu o lungime de aproximativ 200 de gene. n interiorul capului se gsesc i o protein intern (aproximativ 1000 molecule), un polipeptid acid (aproximativ 3000 molecule), spermidin (aproximativ 3000 - 4000 molecule) i putrescein (aproximativ 6000 molecule).

Fagul lambda Organizarea genomului fagului lambda () Genomul fagului este format dintr-o molecul de ADN dublu catenar, care n capul fagului este linear, dar se circularizeaz n celula bacterian. Are o greutate molecular de 31x106 Dal, care ar corespunde unei lungimi de aproximativ 50 Kpb. Dac, n general, o protein a procariotelor este codificat de 1 Kpb, acest genom codific aproximativ 50 de proteine. Genomul fagului prezint la extremiti cozi monocatenare, formate din 12 dezoxiribonucleotide, care sunt complementare. Cozile monocatenare formeaz poriunile cos (cohesive ends): cos L (la stnga) i cos R (la dreapta). Aceste prelungiri permit circularizarea genomului fagic (cercul Hershey) atunci cnd este injectat n celula gazd. Prin unirea celor dou capete coezive se formeaz situsul cos. Genomul fagului cuprinde mai multe gene, fiind organizat pe module funcionale. El se poate exprima n procente (%) sau n kiloperechi de baze: - poriunea cos L - o poriune de 20 Kpb, care cuprinde: - modulul cu gene care codific proteinele capului: A, W, B, C, D, E - modulul cu gene pentru proteinele de mpachetare: F1, F2 - modulul cu gene care codific proteinele cozii: H, G, M, L, K, I, J - un modul de aproximativ 10 Kpb, notat b2, dispensabil pentru ciclul de replicare fagic, al crui rol nu este cunoscut - modulul pentru integrarea genomului fagic n cromozomul celulei bacteriene gazd, care cuprinde: - situsul att (attachement site), complementar unui situs din cromozomul bacterian, care permite unirea genomului fagic cu cel bacterian - gena int, care codific o protein responsabil de integrarea ADN fagic n cromozomul bacterian, numit integraz - gena xis, care codific o enzim responsabil de excizia genomului fagic din cromozomul bacterian, sub aciunea factorilor inductori

- modulul responsabil de recombinare, cu genele Exo i Exo - modulul cu gene care codific proteine de reglare: C III (la acest nivel fiind situai i promotorul i operatorul L, POL), N, C I (la acest nivel fiind situai i promotorul i operatorul R, POR) - modulul cu gene implicate n replicarea genomului: O, P - modulul cu gene implicate n liza celulei gazd: Q, S, R - poriunea cos R. Relaia bacteriofag bacterie O celul bacterian normal i desfoar metabolismul ntr-un mod perfect ordonat. Activitile sale sunt coordonate armonios, conform principiului optimalitii, care asigur o foarte mare eficien n sinteza constituenilor celulari, deci n creterea i multiplicarea bacteriilor. Este o ordine biologic normal, asigurat de informaia genetic nucleosomal, ce coordoneaz ansamblul activitilor celulare prin aciunea genelor reglatoare. n momentul n care n celula bacterian ptrunde o informaie genetic strin, spre exemplu cea a unui bacteriofag, exist mai multe posibiliti de evoluie: 1. Restricia: Aceast situaie echivaleaz cu dominana bacteriei asupra genomului fagic, fiind un fenomen de aprare a celulei bacteriene, echivalent cu starea de imunitate a organismelor superioare. Bacteria recunoate informaia genetic strin i, prin intermediul unor enzime specifice, numite endonucleaze de restricie sau restrictaze, cliveaz informaia strin n fragmente de dimensiuni variabile, introducndu-le apoi n rezerva celular de baze azotate, zaharuri i acid fosforic. 2. Starea de relativ echilibru: n aceast situaie informaia genetic fagic este integrat n structura genetic a celulei bacteriene, devenind astfel un provirus (profag). Genomul fagic integrat n "cromozomul" celulei bacteriene se comport ca i genele cromozomale, fiind replicat odat cu acestea, iar procesul de replicare a fagului este represat (blocat). Ordinea biologic bacterian coordoneaz activitatea celulei n aceast stare de relativ echilibru. Integrarea ADN-ului fagic n ADN-ul bacteriei gazd corespunde strii de lizogenie. Sub aciunea unor factori inductori (fizici sau chimici), n anumite condiii, apare fenomenul de inducie fagic, ce const n excizarea (desprinderea) genomului fagic din "cromozomul" bacterian, urmat de replicarea ADN-ului fagic, sintez de proteine fagice, asamblarea componentelor n particule fagice mature i liza celulei gazd. 3. Dominaia ordinei virale: n aceast situaie, care corespunde ciclului litic, genomul fagic reuete s perturbe activitatea bacterian, determinnd celula gazd s asigure sinteza constituenilor virali (s asigure replicarea genomului fagic i sinteza proteinelor fagice), dup care are loc asamblarea acestora n particule fagice mature i liza celulei bacteriene gazd. Pentru a realiza sinteza de componente fagice, este necesar, ntr-o prim faz, ca starea fiziologic a celulei s nu fie profund alterat. Foarte multe dintre activitile celulei, dei controlate de informaia viral, decurg normal.

Cnd virusul se gsete n cea mai mare cantitate n celul, starea acesteia este profund alterat, ducnd la liz celular. Aceast faz corespunde perioadei n care are loc asamblarea moleculelor nou sintetizate specifice virusului, care se gsesc sub controlul genomului viral i se numete faza de diataxie. Virusul este deci multiplicat de ctre celula gazd. Aceast stare de dominaie viral asupra celulei gazd corespunde strii de parazitism absolut specific virusurilor, care nu trebuie confundat cu parazitismul unor bacterii patogene asupra celulelor eucariote. Bacteria parazit intracelular gsete n celula gazd protecie fa de condiiile de mediu nconjurtor, nutrienii necesari metabolismului lor, dar i pstreaz tot timpul integritatea structural i funcional, cresc, ajung n punctul critic i apoi se divid. Multiplicarea lor ncepe de la ansamblul integrat al structurilor lor, la proces participnd toate componentele celulare. Virusul ofer celulei gazd doar informaia genetic ce deviaz activitatea celulei n sensul sintezei de componente virale. ntre un bacteriofag i bacteria infectat pot exista dou tipuri de relaii: ntre un fag virulent i o bacterie sensibil are loc o relaie de tip litic, care duce la distrugerea celulei gazd, numit i celul permisiv; liza celulei bacteriene gazd duce la eliberarea de tip exploziv a particulelor virale; relaia este caracteristic fagilor din seria Tpar; ntre un fag temperat i o bacterie sensibil relaia poate avea dou ci de evoluie: infecia productiv, care determin liza celulei gazd, desfurndu-se ciclul litic; n urma multiplicrii fagului n celul are loc distrugerea celulei, cu eliberarea particulelor virale; Ciclul litic de replicare n cazul bacteriofagului const n transcrierea informaiei genetice a modulelor responsabile de sinteza proteinelor capului, de mpachetare, de sinteza proteinelor cozii, de replicare a ADN i de liza celular. n ciclul litic, gena C I din zona de reglare, responsabil de sinteza unui represor, este blocat; funcioneaz gena N I, responsabil de sinteza unui inductor de natur proteic, ce acioneaz asupra celor doi promotori, determinnd nceperea transcrierii spre dreapta pe o caten i spre stnga pe cealalt. Astfel se transcriu genele Exo i Exo , precum i genele O, P, Q, S, R, A, W, B, C, D, E; dup transcriere se sintetizeaz proteinele corespunztoare, are loc replicarea genomului fagic, asamblarea componentelor n particule fagice mature i eliberarea bacteriofagilor din celula gazd. evoluia spre lizogenizare, cu desfurarea ciclului lizogen; genomul fagic ptruns n celul se integreaz n genomul celulei gazd, devenind profag; se instaleaz faza de toleran a celulei bacteriene fa de profag, care se replic odat cu cromozomul bacterian. Acest tip de evoluie este ntlnit la bacteriofagul . n infecia cu bacteriofagul , etapele sunt: faza de adsorbie iniial, relativ lipsit de specificitate, n care fagul vine n contact cu celula bacterian gazd prin intermediul fibrelor cozii; adsorbia ireversibil, care este specific i se desfoar prin intermediul crligelor cozii (legtura se face ntre bacteriofag i receptorii de pe suprafaa celulelor bacteriene, mai precis de la nivelul peretelui celular i acizilor teichoici la bacteriile Gram pozitive i de la nivelul membranei externe la bacteriile Gram negative, ori de la nivelul capsulei bacteriene sau

flagelilor); infectarea celulei prin injectarea genomului fagic (teaca cozii se contract, cilindrul axial al cozii strbate peretele celular, ADN-ul fagului trece n celul mpreun cu proteinele legate ionic de acesta; structura proteic a fagului rmne la exterirul celulei); integrarea genomului viral n genomul celulei bacteriene infectate; la iniierea ciclului litic are loc excizia genomului fagic, replicarea acestuia i liza celulei bacteriene gazd. n ciclul lizogen gena reglatoare C I este funcional, este transcris i duce la sinteza unei proteine represor, care blocheaz promotorii POR i POL, blocnd astfel transcrierea genelor responsabile de sinteza proteinelor structurale, de maturare, de replicarea ADN i de liza celular. Este represat astfel ciclul litic. de la nivelul unui alt promotor ncepe transcrierea genelor din modulul de integrare a ADN fagic n ADN-ul celulei bacteriene gazd; are loc transcrierea i apoi sinteza integrazei, enzim codificat de gena int, care duce la integrarea ADN-ului fagic n ADN-ul bacterian; integrarea fagului se realizeaz cu ajutorul situsului att, care se prinde de situsul de ataare de la nivelul ADN-ului bacterian. Situsul att fagic (POP) prezint o zon central O de aproximativ 15 pb, complementar unui fragment O din situsul att bacterian. la bacterii, situsul att bacterian (BOB) este situat ntre genele gal (pentru sinteza galactozei) i bio (pentru sinteza biotinei); ca urmare a aciunii integrazei codificat de gena int fagic, are loc o recombinare de tip crossing over ntre situsul att fagic i situsul att bacterian prin zona O. n acest fel, ADN-ul fagic este integrat n ADN-ul bacteriei gazd. Evoluia spre ciclul litic sau spre lizogenie depinde de starea fiziologic a celulei bacteriene infectate, care influeneaz funcionarea sau nefuncionarea unei gene reglatoare din genomul fagic. Starea de lizogenie nu este permanent, ci sub influena unor ageni inductori (factori fizici: temperatura, radiaii U.V. sau ionizante; factori chimici) profagul trece din starea integrat n stare de genom vegetativ, liber n celula gazd, prin excizia din genomul bacterian (inducie fagic). Se iniiaz astfel ciclul de replicare fagic, ce duce la liza celulei bacteriene gazd. Sub aciunea factorilor inductori se sintetizeaz produsul genei xis. Genomul fagului se poate exciza corect, refcnd informaia genetic iniial sau incorect, ncorpornd un fragment de ADN bacterian aflat n imediata apropiere a situsului att. O parte din ADN-ul fagic va rmne n acest caz integrat, deoarece n nveliul proteic al fagului se va ncorpora un fragment cu dimensiuni exacte. Dac un astfel de ADN fagic excizat incorect ajunge ntr-o alt celul bacterian i se integreaz n cursul ciclului lizogenic, transfer informaia genetic bacterian preluat de la gazda anterioar (proces de transfer de material genetic numit transducie fagic). Fagul cu informaia genetic incomplet are nevoie de prezena unor fagi normali pentru a se elibera din celula gazd i pentru a ptrunde n alt celul bacterian.

AGENII INFECIOI SUBVIRALI Agenii infecioi subvirali sunt de dimensiuni mult mai mici dect virusurile, sunt foarte patogeni i determin boli grave la plante i animale. Ei sunt reprezentai de viroizi, virusoizi, virino i prioni. Viroizii Viroizii reprezint o categorie special de ageni infecioi subvirali, patogeni exclusiv pentru plante, caracterizai printr-un genom alctuit din ARN pur, fr capsid proteic i fr stadiul de virion. Informaia genetic este foarte mic, dar sunt capabili de replicare n celula gazd infectat. Viroizii au fost descoperii accidental n 1971 de ctre Diener, care ncerca s caracterizeze agentul etiologic al bolii tuberculilor fusiformi la cartof. Viroizii poart numele maladiei pe care o determin, de exemplu: viroidul tuberculilor fusiformi la cartof, viroidul nanismului i marmorrii clorotice a crizantemelor, viroidul nanismului hameiului. La microscopul electronic viroizii apar ca structuri lineare, ca nite bastonae uor curbate, cu lungimea de 50 nm i grosimea de 2 2,5 nm, izolate sau n grupuri compacte, cu o greutate molecular de 75 125 kDa. Pe lng structurile lineare au fost detectate i molecule circulare de 100 nm. Viroidul tuberculilor fusiformi la cartof este alctuit dintr-o molecul circular de ARN, nchis covalent, cu 359 ribonucleotide (68% - 244 nucleotide - dintre ele fiind legate perechi, celelalte aprnd ca zone monocatenare, fiind neperechi). Rezult astfel o structur n ac de pr, cu anumite constrngeri topologice, molecula suferind o pliere tridimensional. ARN viroidal este lipsit de capacitate de codificare, datorit absenei situsurilor de legare ribozomal, de aceea replicarea sa este total dependent de celula gazd. Unii autori consider c este o molecul care se replic autocatalitic, numindu-se i ARNreplicaz. Replicarea viroizilor are loc n nucleul celulelor gazd. ntr-o celul infectat se gsesc ntre 200 i 10000 viroizi/celul. Transmiterea viroizilor se face pe orizontal de la plantele bolnave la cele sntoase, obinuit pe cale mecanic, sau pe vertical prin polenul plantelor infectate. Infectarea esuturilor plantei cu viroizi duce la variaii cantitative importante ale proteinelor normale, fiind probabil nsoite de perturbri ale mecanismelor de reglare a exprimrii anumitor gene n celul. Scade cantitatea de gibereline i au loc tulburri de crtere. Virusoizii Virusoizii sunt molecule mici de ARN monocatenar, circulare, covalent nchise, incluse n stare fizic autonom n capsida unor virusuri fitopatogene cu genom linear segmentat sau integrate n genomul viral. Spre deosebire de viroizi, genomul lor este ncapsidat i incapabil s infecteze plantele sensibile n absena virusului helper. Au fost descrii la o varietate de mozaic marmorat al tutunului. Uneori se comport ca molecule de ARN satelit, nefiind implicai n replicare. Replicarea lor se realizeaz n citoplasma celulei gazd i nu are loc n absena virusului helper. n unele cazuri, prezena lor asociat este obligatorie pentru producerea infeciei.

Virino Sub aceast denumire a fost descris un agent infecios subviral alctuit dintr-o molecul mic de acid nucleic asociat cu o protein codificat de celula gazd. El poart informaia genetic necesar pentru propria replicare, dar nu codific sinteza unor proteine capsidale. Probabil are rol n reglarea activitii celuleor infectate. Prionii (proteine infectante) n 1967, radiologul Alper i colaboratorii si au raportat despre un agent infecios foarte rezistent la tratamentele care n mod normal distrugeau acizii nucleici, responsabil de transmiterea bolii scrapie. n acelai an, pornind de la sugestia c acest agent infecios ar putea fi o protein cu o abilitate surprinztoare de autoreplicare n organismul gazd, Griffith a formulat ipoteza proteinei infecioase (protein-only hypothesis). Cercetrile ulterioare nu au dus la descoperirea vreunui virus sau vreunui acid nucleic asociat cu acest agent infecios. n 1980 Stanley Prusiner a studiat evoluia unor boli grave la animale i om i a gsit c agentul patogen era o molecul de protein infecioas. El a introdus n biologia molecular termenul de prion cu semnificaia de protein infecioas. Prionii, cunoscui anterior ca protovirinae, virusuri lente, virusuri convenionale, reprezint o categorie de ageni infecioi subvirali, cu greutate molecular de 27000 30000 Da, unici prin rezistena lor la toate procedeele de inactivare care degradeaz acizii nucleici. Prelucrarea ns a produsului patologic prin tratamente care degradeaz proteinele suprim i capacitatea infectant a produsului. Prionul e format exclusiv dintr-o molecul de protein care se replic n organismul gazd n momentul n care e introdus n gazda respectiv. Bolile prionice produse de aceti ageni infecioi de origine pur proteic au fost considerate drept boli pseudoinfecioase, comparativ cu bolile infecioase clasice, ale cror ageni etiologici sunt microorganisme ce conin acizi nucleici. Principalele caracteristici ale bolilor prionice sunt: - afectarea sistemului nervos central, cu producerea de encefalopatii spongiforme; - perioada de incubaie foarte lung, de la cteva luni la 37 40 de ani; - evoluia lent, progresiv, letal; - proteina celular normal (PrPc) din celula neuronal ar interaciona, n cazul unei infecii prionice, cu izoforma ei infecioas (PrPres, rezistent la proteinaza K), suferind o modificare conformaional patologic. Absena timp ndelungat a oricrui semn clinic i lipsa total a vreunui rspuns inflamator au constituit impedimente majore pentru gsirea unor posibiliti de diagnostic precoce al acestor boli. Au fost descrise, pn n 1985, 3 boli prionicela om i 3 la animale: - la om: - boala Kuru - boala Creutzfeldt - Jakob - sindromul Gerstmann Strussler Scheinker - la animale: - scrapia (tramblanta oilor i caprelor) - encefalopatia speciilor de cervicide - encefalopatia transmisibil a nurcilor.

n 1986 au fost semnalate n Anglia primele 63 de cazuri de encefalit spongiform la bovine (ESB); ulterior au fost semnalate i la alte specii (de bovidee slbatice i felide slbatice captive, pisici domestice) cazuri de encefalit spongiform scrapie like. n prezent se cunosc 12 boli prionice, 6 descrise la animale i 6 la om. Scrapia (tramblanta ovinelor) Scrapia este o boal endemic, ntlnit n mod natural la capre i oi, care se transmite maternal i orizontal. Aceast boal, cunoscut n Anglia de mai bine de 200 de ani, e rspndit n toat lumea, mai puin n Noua Zeeland i Australia (unde este eradicat). Boala devine evident numai atunci cnd agentul infecios a ajuns la nivelul SNC. Animalele prezint la nceput tremurturi ale corpului, urmate de prurit foarte accentuat al pielii, ulterior apar tulburri legate de lezarea cerebelului (mers n zig-zag); fenomenul se accentueaz pn la paralizia i moartea animalelor. Boala se agraveaz progresiv prin distrugerea neuronilor animalelor. n cazul n care se confirm anatomopatologic diagnosticul de scrapie chiar la un singur animal din turm, se sacrific ntreaga turm prin incinerare i se autoclaveaz obligatoriu carcasele la 132 - 135C minim 20 minute. Boala nu se poate preveni prin vaccinare. Agentul etiologic este rezistent la dezinfectanii obinuii. Pmntul contaminat rmne infecios mult timp. Reziduurile animale de la oi pot fi i ele infecioase. n omogenatele de creier provenit de la oi bolnave de scrapie s-au izolat i purificat 2 izoforme de proteine foarte apropiate ntre ele: - o protein prionic, - o protein normal, celular. Proteina prionic celular purificat, inoculat la animale de laborator, nu este capabil s produc boala. Proteina prionic propriu zis are toate particularitile unui agent infecios. Izolat n stare pur i inoculat la animale de laborator, dup o perioad de incubaie declaneaz boala. Encefalita spongiform bovin Aceast boal a devenit o problem european din cauza consecinelor ei foarte grave pe plan mondial. A fost evideniat o legtur ntre agentul etiologic al encefalopatiei spongiforme bovine i sindromul Creutzfeldt Jakob la om. Apariia cazurilor de infecie prionic la oameni n urma consumului de carne de vit infectat a artat c proteinele prionice bovine pot traversa bariera de speice, aa cum se presupune c s-a ntmplat i n cazul transmiterii agentului etiologic al scrapiei la bovine. Au existat ipoteze conform crora agentul prionic s-ar putea transmite i prin lapte sau encefalopatia spongiform bovin ar putea s apar spontan la bovine. Se consider c perioada de incubaie a bolii este de aproximativ 10 ani, iar durata medie a bolii de 14 ani. Boala Kuru A fost descris exclusiv la populaia tribului Fore din Papua Noua Guinee. Boala ncepe cu o febr puternic, dureri articulare, dificulti n mers, cu lips n coordonarea micrilor (anarhice, neregulate) urmate de demen i moarte. S-a concluzionat c boala se transmite pe cale oral datorit unor obiceiuri de canibalism ritual. Numrul bolnavilor la acest trib e n scdere de la an la an i bolnavii sunt mai btrni dect cei din anii anteriori.

Perioada de incubaie este de aproximativ 30 ani, boala fiind asociat cu leziuni la nivelul sistemului extrapiramidal, cu micri anormale, rigiditate, evoluie spre demen i moarte. n majoritatea cazurilor a fost descris vacuolizarea neuronilor i proliferarea celulelor astrogliale. Sindromul Jacob Creutsfeld (CJ) Aceast boal are o frecven de 1 la un milion i apare n jurul vrstei de 60 de ani, manifestndu-se prin micri anormale, rigiditate, tulburri psihice de tip demenial. Poate s apar sporadic, ereditar familial sau prin infecie exogen, descriindu-se: Boala CJ sporadic a fost descris la toate vrstele adulte, dar nu la copil (au fost descrise cazuri cu o mare frecven la vrste ntre 70 79 de ani. La vrste de peste 80 de ani apar de obicei alte tipuri de demen (boala Alzheimer, demena vascular de origine genetic); boala este mai frecvent la populaia alb dect la cea neagr, la femei dect la brbai; media de via este de aproximativ 7 luni, incidena bolii i mortalitatea fiind asemntoare n toate rile europene; Boala CJ genetic (ereditar, familial) se pare c ar fi posibil prin mutaii punctiforme sau inserionale. Sindromul Gerstmann Straussler Scheinker (GSS) Este o varietate natural a sindromului CJ, caracterizat prin instalarea precoce a incapacitii de coordonare a micrilor, prin leziuni cerebeloase i demen.

GENETICA BACTERIAN Genomul bacterian include dou categorii de determinani genetici: determinani eseniali, reprezentai de nucleosomul bacterian (genofor, lineom, nucleoid); determinani accesorii, neeseniali, care pot lipsi din celul fr a afecta viabilitatea acesteia, reprezentai de elementele genetice extracromozomale (EGE): plasmidele, secvenele de inserie, transpozonii, la care se adaug bacteriofagii cu capacitate de inserie n genomul celulei gazd. Nucleosomul bacterian Nucleosomul bacterian poart n structura sa ntreaga informaie genetic necesar pentru existena unei celule bacteriene, adic setul de gene care codific arhitectura celulei bacteriene, asigur metabolismul energetic i de biosintez al celulei, gene care sunt necesare creterii i diviziunii celulare, precum i reglrii diferitelor activiti celulare. Este alctuit dintr-o molecul de ADN dublu catenar circular, covalent nchis (ccc), dispus helicoidal. Aceast molecul, lipsit de membran nuclear, conine la E. coli 4,1x106 perechi de baze, ce codific 3 4000 de gene, dintre care aproximativ 1500 au fost cartate deja. Dintre ele, 90% sunt gene structurale, ce codific sinteza unor proteine (enzimatice sau structurale), iar 10% sunt gene implicate n reglarea i iniierea funciilor genelor structurale. Genele reglatoare controleaz activitatea genelor structurale prin intermediul produilor lor de sintez. n general, genele sunt aezate n structura cromozomului ntr-o anumit ordine, existnd o corelaie ntre ordinea genelor n genom i cea a enzimelor codificate de ele, care intr n aciune n calea metabolic respectiv. Sunt ns i gene care codific sinteza unor enzime la unele enterobacterii, care sunt dispuse n genom n alt ordine dect cea n care intr n aciune enzimele n calea metabolic. De exemplu, pentru asigurarea sintezei histidinei sunt necesare 10 enzime, codificate de 10 gene. Ordinea acestor gene n cromozom nu corespunde cu ordinea n care intr n aciune enzimele codificate. Operonii sunt uniti funcionale de reglare, alctuite dintr-un grup de gene structurale, care codific de regul o anumit cale metabolic, reglate de o singur gen de reglare. n general, organizarea unui operon este urmtoarea: o Regiunea operator (O) este un segment de ADN cromozomal din structura operonului, cu rol de receptor de semnal. El nregistreaz prezena substanelor cu funcie de represor sau de inductor din mediu i asigur funcionarea coordonat a operonului. o Regiunea promotor (P) sau iniiator este fragmentul de ADN cromozomal din structura operonului adiacent regiunii operator. Are funcia de iniiere a transcrierii operonului, care duce la sinteza unui ARNm policistronic. La acest nivel are loc legarea enzimei efectoare, ARN-polimeraza. o Gena de reglare (GR) controleaz activitatea genelor structurale (A ... F), determinnd sinteza unei proteine represor, care se leag reversibil de regiunea operator, blocndu-i activitatea. Este blocat iniierea transcrierii genelor structurale de la nivelul promotorului. Cnd proteina represor se detaeaz de operator, acesta este activ i permite iniierea transcrierii genelor operonului respectiv.

Celulele bacteriene prezint i un al doilea sistem de reglare, numit reglon. Reglonul este un sistem de reglare format din mai multe gene structurale necesare unei anumite ci metabolice, dispersate n structura cromozomului bacterian, dar care funcioneaz ca o unitate, deoarece sunt controlate de o singur gen de reglare. Pentru aprecierea cantitii de ADN bacterian se folosete termenul de echivalent genomic, care este cantitatea de ADN corespunztoare cromozomului bacterian, adic structurii normale a celulei bacteriene, care este de tip haploid. O celul bacterian poate conine ntre 1 i 5 echivaleni genomici, atunci cnd celula crete ntr-un mediu foarte bogat n substane nutritive. Viteza de cretere a celulelor ntr-un astfel de mediu este foarte mare, dar viteza de replicare este constant, astfel nct, la un moment dat, n celul intervine o dereglare a replicrii. Unele gene, aflate n apropierea originii replicrii, se gsesc n celul n mai multe exemplare i are loc astfel o cretere a cantitii de ADN. Plasmidele Plasmidele sunt molecule citoplasmatice de ADN dublu catenar helicoidal, separate spaial de cromozomul bacterian. Au dimensiuni mult mai mici dect cromozomul bacterian i de aceea sunt numite i minicromozomi. Dimensiunile lor sunt cuprinse ntre 1 - 100x106 dal. Plasmidele au caracter de replicon, fiind capabile de o replicare fizic independent de cea a nucleosomului, dar sub controlul acestuia. Poart n structura lor o informaie genetic diferit de cea a cromozomului bacterian, neesenial pentru bacterie. Bacteriile pot dobndi sau pierde plasmidele fr ca viabilitatea lor s fie afectat. Au fost izolate peste 1000 de plasmide diferite, prezente n mod natural att la bacteriile Gram pozitive, ct i la bacteriile Gram negative. La Escherichia coli au fost identificate aproximativ 270 de plasmide diferite. Plasmidele bacteriene se pot clasifica dup mai multe criterii: a) dup caracterul fenotipic nou pe care l confer bacteriilor n care se gsesc: - plasmide F (fertility, plasmide de sex) - plasmide R (determin rezistena la antibiotice) - plasmide Col (determin sinteza unor antibiotice speciale, numite colicine). b) dup capacitatea plasmidei de a iniia procesul de conjugare: - plasmide conjugative (conjugon, transferon, plasmide infecioase, self-transmisibile); ele determin transfer de ADN prin conjugare; operonul tra (de transfer) confer celulelor care poart aceste plasmide caracter de celule donor, care transfer informaie genetic celulelor receptoare, lipsite de aceste plasmide. n aceast categorie intr factorul F, plasmidele Ent (care determin sintez de enterotoxine), unele plasmide de tip R i Col. - plasmide non - conjugative (nonself-transmisibile), care nu posed setul de gene implicat n iniierea transferului de ADN prin conjugare, dar posed genele necesare propriei replicri. n aceast categorie intr unele plasmide Col i unii factori R. c) dup capacitatea plasmidelor de a se integra n cromozomul celulei gazd: - plasmide integrabile, care se numesc i plasmide cu funcii episomale (episom = corp adugat), notate INT+. Ele pot exista n celula gazd sub dou forme alternative:

forma autonom, neintegrat, n care plasmidele sunt fizic independente de cromozomul bacterian, fiind libere n citoplasm, forma integrat n genomul celulei gazd. Cnd trec din starea integrat n starea autonom excizia plasmidelor se poate face corect sau eronat. ntr-o excizie eronat plasmida poate prelua o parte din genele cromozomiale. - plasmide neintegrabile, incapabile de integrare n cromozomul celulei gazde, care exist numai n stare autonom n celula gazd. Se noteaz INT-. n aceast categorie intr unii factori Col i factorul F' (derivat al plasmidei F integrate, care prin excizie eronat a captat un fragment de ADN cromozomial). d) dup proprietile de compatibilitate specifice, care limiteaz coexistena n aceeai celul a plasmidelor nrudite. Pe aceast baz plasmidele se mpart n mai multe grupe de incompatibilitate. La bacteriile Gram negative au fost identificate peste 25 de grupe de incompatibilitate ale diferitelor plasmide. n general, un membru al uni grup de incompatibilitate nu poate coexista ntr-o celul bacterian cu oricare alt membru al grupului respectiv (grup format din plasmide identice sau nrudite). Un membru al unui grup de incompatibilitate poate ns coexista stabil cu membrii unui grup de incompatibilitate diferit. Explicaia probabil a acestui fapt este competiia plasmidelor nrudite pentru situsul de legare la unele structuri membranare, situs care nu are capacitatea de a reine mai multe plasmide de acelai tip. Este posibil ca o plasmid stabilit n celula bacterian s determine sinteza unui represor cu activitate specific, ce mpiedic localizarea altor plasmide identice sau nrudite. e) dup controlul cromozomului bacterian asupra replicrii plasmidelor: - plasmide care se replic sub control absolut; controlul absolut este eficient atunci cnd plasmida este integrat n cromozomul bacterian i replicarea ei se realizeaz odat cu genele cromozomiale; sub control absolut se afl plasmidele cu funcii episomale; - plasmide care se replic sub control riguros sau stringent, prezente n puine copii/celul (1 - 3); cromozomul bacterian nu las plasmidele s invadeze bacteria cu un numr mare de copii. Aceste plasmide sunt n general plasmide conjugative, prezint o greutate molecular mare (peste 62 Mdal) i nu sunt multiplicabile n prezen de cloramfenicol; - plasmide care se replic sub control relaxat, prezente n celula bacterian ntr-un numr mare de copii/celul (peste 40). n general sunt plasmide non - conjugative, au greutate molecular mic (4 - 10 Mdal), sunt multiplicabile n prezen de cloramfenicol. Cloramfenicolul inhib sinteza proteic i replicarea ADN cromozomial, dar replicarea ADN-ului plasmidial nu este inhibat, putndu-se acumula pn la 3000 de copii/celul, aproape 50% din masa celular. Astfel de plasmide sunt adecvate pentru studii de inginerie genetic. Structura molecular a plasmidelor este reprezentat de cele trei forme moleculare: circular covalent nchis (ccc), circular deschis (co) i linear. Replicarea plasmidelor, care sunt molecule de ADN dublu catenare, se face ncepnd de la originea replicrii (ori) i continu la unele plasmide secvenial unidirecional, iar la altele bidirecional. Eliminarea plasmidelor din celula bacterian (vindecarea celulelor de plasmide, curring) se poate realiza pe dou ci:

- eliminarea spontan se realizeaz fr intervenia vreunui agent din mediu; fenomenul este legat probabil de segregarea sau nu a plasmidelor n cursul diviziunii celulare bacteriene, astfel nct unele celule fiice sunt lipsite de plasmide, altele au plasmide; - eliminarea indus se realizeaz prin tratarea celulelor bacteriene cu anumite substane, care interfer cu multiplicarea sau segregarea plasmidelor, fr a avea efect asupra celulelor gazd: acriflavin, rifampicin, acridinoranj. Detergenii i substanele tensioactive distrug situsul membranar de legare a plasmidelor i mpiedic segregarea. Rifampicina pare s interfereze direct cu replicarea plasmidelor. Funciile plasmidelor sunt multiple: 1) Funcia de conjugon (transferon) confer celulei purttoare caracter de celul , donoare de informaie genetic, funcie care este condiionat de prezena operonului tra n genomul plasmidei. 2) Funcia de rezisten multipl la antibiotice (ampicilin, streptomicin, tetraciclin, kanamicin, cloramfenicol, sulfamide) confer bacteriei purttoare rezisten la concentraii letale de antibiotice. De exemplu, la Escherichia coli, unele gene pentru sinteza de betalactamaze se gsesc localizate pe plasmide. 3) Funcia de rezisten la metale grele (Hg, Cd, Pb, Bi) determin folosirea bacteriilor care dein aceste plasmide pentru concentrarea metalelor grele din diferite medii naturale. 4) Funcia de rezisten la UV 5) Funcia de mrire a virulenei este caracteristic plasmidelor de virulen, care poart gene productoare de enterotoxine, mrind patogenitatea respectivelor bacterii (de exemplu, la Escherichia coli i la Clostridium tetani, gena pentru producerea toxinei e localizat pe o plasmid; la Escherichia coli enterohemoragic gena pentru sinteza hemolizinei este localizat pe plasmida Hly). 6) Funcia de a metaboliza anumite substraturi poate fi determinat de asemenea de gene localizate pe plasmide. De exemplu, la Proteus mirabilis gena pentru metabolizarea lactozei este localizat pe o plasmid; Lactobacillus sp. prezint genele responsabile de fermentaia lactic localizate plasmidial. 7) Funcia de utilizare a substanelor xenobiotice (xenos = strin) confer bacteriilor respective capacitatea de a supravieui n medii ce conin substane greu de degradat n condiii normale: fenol, camfor, hidrocarburi complexe din structura ieiului. Genele care determin sinteza enzimelor ce intervin n degradarea acestor substane sunt localizate plasmidial. Prin tehnici de inginerie genetic s-a reuit obinerea unor celule bacteriene ce conin mai multe plasmide diferite, cu rol n degradarea hidrocarburilor din petrol. Aceste bacterii pot fi utilizate pentru depoluarea mediului marin de iei (cazul "mareelor negre") prin transformarea lui n mas celular. 8) Funcia de codificare a unor structuri anatomice bacteriene, de exemplu pilii de sex, vacuolele cu gaz (la specii de Halobacterium, pentru deplasarea ctre lumin). 9) Funcia de producere a bacteriocinelor, substane cu rol antibacterian. 10) Funcia de sintez a unor substane antibiotice, de exemplu la unele actinomicete sinteza cloramfenicolului este codificat de gene plasmidiale. 11) Funcia de inducere de tumori la plante, care este caracteristic plasmidei Ti de la Agrobacterium tumefaciens. 12) Funcia de sintez a unor enzime de restricie, de exemplu la Escherichia coli genele care determin sinteza enzimei EcoRI sunt situate plasmidial.

Plasmidele criptice nu au efect aparent asupra fenotipului celulelor gazd. Este posibil ca ele s poarte doar informaia genetic necesar propriei replicri sau s codifice unele funcii ce nu au fost nc evideniate. Semnificaia biologic a plasmidelor Prezena plasmidelor n celula bacterian poate avea rol benefic, ce decurge chiar din capacitatea bacteriei de a primi odat cu plasmida un material genetic de aproximativ 5 - 10 gene. Bacteriile purttoare de plasmide au avantaje metabolice, o mai bun capacitate de adaptare i rezisten la condiii diverse de mediu. De aici posibilitatea ca ele s nlocuiasc bacteriile normale, lipsite de plasmide, ntr-un anumit habitat. Plasmidele reprezint o surs de variabilitate foarte important pentru celulele bacteriene. Au un rol important n evoluia bacteriilor, aa cum a fost demonstrat n cazul procesului de conjugare, care poate avea loc nu numai intra-, ci i interspecific i chiar intergeneric. S-a evideniat posibilitatea conjugrii chiar ntre Escherichia coli i Saccharomyces cerevisiae (1989). Plasmidele pot contribui la mrirea virulenei i patogenitii bacteriilor prin unii determinani genetici de virulen sau toxigenez. Plasmidele confer celulelor bacteriene gazd capacitatea de a rezista la factori nefavorabili creterii i multiplicrii lor n organismul pe care l infecteaz. Existena plasmidelor poate fi interpretat ca o strategie a celulelor bacteriene de a realiza o capacitate de adaptare n natur, fr ca ele s i ncarce permanent genomul cu gene necesare doar n condiii speciale. n mediile naturale, cnd plasmidele sunt prezente numai n cteva celule din populaia bacterian prezent, ele se vor replica doar n acele puine celule. n condiiile unui mediu modificat, plasmidele se transmit rapid n toate celulele din populaia bacterian respectiv. Mobilitatea extrem a plasmidelor, capacitatea lor de a se integra n cromozomul bacterian i de fi pierdute prin vindecare bacterian (curing) reprezint o realitate demonstrat ca atare n condiii de laborator. n mediul natural lucrurile se petrec oarecum diferit, deoarece ntr-o populaie imens apar multe interaciuni care pot atenua acest flux de material genetic, ritmul de multiplicare a celulelor bacteriene fiind mult mai mic. De exemplu, n condiii de laborator o diviziune se poate produce n aproximativ 20 de minute, n intestin la aproximativ 60 de minute, iar n sol la aproximativ 240 de minute pentru aceeai bacterie. Utilizri practice ale plasmidelor Deoarece sunt structuri genetice capabile s nglobeze un anumit numr de gene, s se integreze i s se desprind din cromozomul bacterian, plasmidele sunt folosite n ingineria genetic. Ele reprezint un vehicul ideal de transport al genelor de la o celul bacterian la alta sau chiar n celule de alt origine. Un astfel de vehicul (vector) este capabil s transmit i gene strine de cele bacteriene, de exemplu gene de natur vegetal sau animal, care se pot exprima n celula bacterian (numite gene pasager). Se folosesc n general plasmide non-conjugative (pentru a se evita rspndirea lor necontrolat prin conjugare n populaia bacterian), cu dimensiuni mici, aflate sub un control relaxat exercitat de cromozomul bacterian, multiplicabile n prezen de cloramfenicol.

Elementele genetice transpozabile ale bacteriilor (EGT) Sunt entiti genetice cu limite structurale foarte bine precizate, sub forma unor segmente specifice de ADN, care se pot integra repetat n mai multe zone ale unui genom, sau chiar n genomuri diferite existente n aceeai celul. Astfel de entiti au fost descrise la virusuri, bacterii, levuri, la porumb, la Drosophyla i la Trypanosoma. Pentru elementele genetice transpozabile au fost propuse numeroase denumiri, printre care: elemente mobile, gene cltoare, gene care sar, gene hoinare, vagabonzi genetici. Sunt secvene de ADN care i menin integritatea fizic, structural i genetic i care pot fi translocate de la o poziie la alta pe acelai genom sau pe alte genomuri intracelular. n categoria EGT se ncadreaz: - secvenele de inserie - transpozonii - bacteriofagii i Mu. 1) Secvenele de inserie (SI) sunt de mai multe tipuri. Ele au fost descrise pentru prima dat la E. coli de ctre Heinz Saedler (1967). Sunt secvene mici de ADN, specifice, cu lungimea de 800 1400 pb i nu conin nici o gen cunoscut purttoare a unei funcii fenotipice noi pentru celula purttoare. Secvenele de inserie au capacitatea de a se mobiliza i de a se integra repetat n acelai genom sau n genomuri diferite intracelular. Inseria unei secvene de inserie ntr-o gen suprim funcia respectivei gene, producnd astfel o mutaie. Toate secvenele de inserie prezint o regiune central flancat la ambele extremiti de secvene mai scurte, terminale, repetate fie n ordine direct, fie n ordine invers (SRI).
De exemplu: Elementul SI1 de la E. coli are o lungime de 800 pb i conine o secven central de 720 pb, ce codific o enzim numit traspozaz, iar la extremiti secvene repetate n ordine invers (SRI) cu o lungime de 24 pb. - Elementul SI2 de la E. coli conine o secven central de 1250 pb, flancat de segmente de cte 20 pb (SRI) repetate n ordine invers. Numrul secvenelor de inserie variaz de la o specie la alta (la E. coli au fost descrise n nucleosom 8 copii ale SI1, 5 copii ale SI2, 3 copii ale SI3; au fost descrise secvene de inserie i n plasmidele F i R de la E. coli; la Shigella sp. secvena SI1 se gsete n aproximativ 40 de copii). -

2) Transpozonii (Tn) Transpozonii reprezint o secven specific de ADN cu potenial de transpoziie, care include 5 6 gene structurale, delimitate la extremiti de secvene de inserie. Confer bacteriei purttoare funcii noi, datorit genelor structurale: gene de rezisten la antibiotice (ampicilin, streptomicin, cloramfenicol, tetraciclin, kanamicin, sulfamide), gene de rezisten la metale grele (Hg), gene responsabile de producerea de enterotoxine. SRI SI Tn SRI gene structurale SRI SI SRI

Transpozonii nu se gsesc n citoplasm n stare autonom, ci numai inserai ntr-un genom. Transpoziia const n integrarea sau inseria ntr-un genom a unui element genetic transpozabil provenit din aceeai molecul de ADN sau din alt molecul de ADN prezent n celul. Procesul de transpoziie are urmtoarele caracteristici: - transpoziia nu const ntr-un schimb de material genetic, ci ntr-o adiie de ADN; - transpoziia unui EGT la un nou situs (care denot caracterul invadant al EGT) nu duce la pierderea EGT-ului situat la situsul originar, deoarece la noul situs se va insera o copie, transpoziia fiind ntotdeauna nsoit de replicare; - EGT se pot insera ntr-un numr mare de situsuri n genomul bacterian, nucleosomal sau plasmidial; se pare c exist ns zone favorabile pentru inseria transpozonilor; - EGT sunt rspunztoare de o serie de modificri genetice, deoarece determin mutaii, deleii, inversii, adic fenomene de instabilitate genetic. 3) Bacteriofagii i Mu ndeplinesc i ei funcia de transpoziie. Semnificaia biologic a elementelor genetice transpozabile Inseria EGT poate influena activitatea celulelor bacteriene, putnd fi sursa unor perturbri n exprimarea calitativ i cantitativ a genelor. Inseria EGT poate crea gene noi prin fuziunea genelor din cromozom cu genele din EGT, dac sensul de citire coincide. Dup inserie, EGT pot funciona ca un comutator biologic, capabil s blocheze sau s declaneze expresia genelor apropiate. Au fost descrise EGT i la eucariote, dar n numr limitat. De exemplu tripanosomele au n zona inactiv a genomului lor aproximativ 100 de gene capabile s codifice sinteza unor glicoproteine de nveli diferite, evitnd astfel reaciile de aprare ale organismului gazd.

MECANISME DE TRANSFER DE MATERIAL GENETIC LA BACTERII Transferul de material genetic la bacterii asigur schimbul de informaie genetic ntre dou celule bacteriene diferite. Informaia genetic trebuie s prseasc una dintre celule i s ptrund n cea de a doua. Exist cel puin 10 mecanisme de transfer de material genetic la bacterii, unele dintre ele fiind variante ale aceluiai proces. Transformarea bacterian Reprezint transferul de informaie genetic realizat prin intermediul unui fragment de ADN total al bacteriei donatoare, extras prin procedee chimice sau eliberat prin liza celulei. Celula donatoare este celula bacterian de la care provine fragmentul de ADN, iar celula receptoare este cea care capteaz acest fragment. Fragmentul de ADN exogen, ptruns n celula receptoare, poate nlocui printr-un proces de recombinare genetic (crossing - over) o secven nucleotidic omoloag din genomul celulei receptoare. Dac segmentul astfel integrat difer de cel nlocuit, celula purttoare va dobndi un caracter fenotipic nou, care va fi exprimat. n laborator au fost realizate transformri genetice: - homospecifice (ntre tulpini bacteriene aparinnd aceleiai specii); - heterospecifice (ntre specii diferite ale aceluiai gen); - intergenerice (ntre specii din genuri diferite). Transformarea genetic este condiionat de: proprietile fizice ale ADN-ului donor: moleculele de ADN transformant trebuie s prezinte o structur dublu catenar; moleculele de ADN transformant trebuie s aib o dimensiune minim de 1x106 Da, eficiena transformrii fiind maxim pentru fragmente cu dimensiuni ntre 5x106 i 2x107 Da; frecvena transformrilor este influenat de concentraia de ADN din mediu, fiind necesar o concentraie minim de 1 x 10-5 g/ml. proprietile celulei receptoare: pentru a putea fi transformate, celulele receptoare trebuie s se gseasc ntr-o stare fiziologic special, numit stare de competen, care este o stare temporar, cu durata de aproximativ 15 minute, controlat genetic, asociat cu faza de cretere exponenial a celulei (fie la nceputul acesteia, ca la Rhizobium, fie la sfritul ei, ca la Bacillus subtilis); pe suprafaa celulei receptoare trebuie s se gseasc un antigen de competen, reprezentat de un polipeptid cu greutate molecular mic; la nivelul peretelui celular trebuie s aib loc modificri importante, care constau n demascarea enzimatic a unor receptori de ADN. Fazele procesului de transformare bacterian: faza de apariie a strii de competen fiziologic a celulei receptoare; la bacteriile la care aceast stare lipsete n mod fiziologic, ea poate fi indus artificial n laborator prin tratarea celulelor bacteriene cu o soluie de CaCl2 (Mandel, Higa, 1970) sau un amestec CaCl2 + MgCl2 (0,02M) la rece, pentru a facilita transformarea;

faza de adsorbie i legare reversibil a moleculei de ADN exogen la nivelul unor receptori specifici ai celulei receptoare, al cror numr este variabil chiar i la aceeai specie; faza de legare ireversibil a ADN-ului de celula bacterian, captul anterior al moleculei de ADN gsindu-se n spaiul periplasmic legat de o molecul de protein (protein de legare); faza de nglobare a ADN-ului transformant n celula bacterian receptoare; molecula de ADN exogen: o poate fi distrus n celula bacterian de enzimele de restricie proprii celulei, iar produii rezultai s fie folosii ca surs de dezoxiribonucleotide o se poate integra n cromozomul celulei bacteriene gazd prin recombinare genetic, iar informaia genetic nou adus de ea s fie exprimat fenotipic. Semnificaia biologic a transformrii Dei este un proces descoperit n laborator, numeroase date pledeaz pentru existena sa n condiii naturale, n medii cu populaii bacteriene heterogene i dense. ADN-ul eliberat prin autoliz celular, liz celular produs de fagi sau prin aciunea unor antibiotice poate ptrunde n celulele competente transformndu-le, iar dup recombinare acestea s exprime caractere fenotipice noi. Transformarea acioneaz n natur ca un mecanism sexual primitiv, prin care unele bacterii ar putea moteni gene de la alte bacterii, ducnd la formarea unor clone bacteriene noi, cu genomuri modificate, mai bine adaptate condiiilor de mediu. Conjugarea bacterian Reprezint transferul de material genetic de la o bacterie donatoare la una receptoare, realizat prin intermediul unei legturi intercelulare directe i condiionat de prezena n celula receptoare a unui element genetic specializat, cu funcie de plasmid de sex sau conjugon. Conjugarea este un mecanism de transfer de material genetic frecvent ntlnit la bacteriile Gram negative (Escherichia, Salmonella, Shigella) i mai puin frecvent la cele Gram pozitive. Acest proces a fost descoperit de ctre Ledeberg n 1946 la tulpini de E. coli. n natur conjugarea este frecvent n populaiile bacteriene dense, cu mai mult de 107 celule/ml, care asigur uor contacte intercelulare. Conjugarea are loc uor intraspecific, dar poate avea loc i interspecific sau chiar intergeneric. Fazele procesului de conjugare bacterian: faza de formare a cuplurilor de perechi specific, vizibile la microscopul electronic, instabile la o agitare uoar; faza implic legarea extremitii libere a pilului de sex de la celula donatoare F+ (de tip ) de un receptor celular situat pe suprafaa bacteriei acceptoare F- (); n a doua faz cele dou celule sunt aduse ntr-un contact strns perete la perete, dar i acest contact este fragil i se desface prin fore uoare de agitare; faza de formare a unor contacte stabile ntre pereii celor dou celule, cu formarea de perechi eficiente, rezistente la agitri uoare. Conjugarea ntre bacterii F+ i bacterii FDup formarea cuplului de conjugare apare o incizie monocatenar n structura plasmidei F de sex, produs de o endonucleaz. Semnalul care declaneaz aceast

incizie este determinat de interaciunea dintre extremitatea liber a pilului i suprafaa liber a celulei receptoare. ADN-ul este transferat n form monocatenar, ncepnd cu extremitatea 5. Prin sintez se reface plasmida cu ADN dublu catenar att n celula donoare, ct i n cea receptoare. Proporia de celule F- scade rapid ntr-o popuzlaie bacterian. Conjugarea ntre bacterii Hfr i i bacterii FBacteriile Hfr, considerate supermascul, prezint plasmida F integrat n cromozomul celulei donoare, ntr-o regiune pentru care plasmida are o afinitate special. Factorul f integrat i pierde capacitatea de a se replica autonom, fiind replicat pasiv odat cu genele cromozomiale, ncetnd s mai fie infecios. Integrarea factorului F duce la ruperea cromozomului bacterian n timpul conjugrii i la transferul ADN-ului cromozomal cu o eficien foarte mare, factorul F fiind ntotdeauna poriunea terminal a cromozomului angajat n transfer n cursul conjugrii. Transducia fagic Este procesul prin care un fragment de nucleosom bacterian e transferat de la o celul bacterian la alta prin intermediul unor fagi temperai. Fagii temperai sunt fagii care pot prezenta 2 moduri de via: ciclul litic, nsoit de eliberarea fagilor din celul i starea de lizogenie. Fenomenul a fost descris n 1951 de ctre Zinder i Lederberg, care au demonstrat c fagul P22 a acionat ca vector n transferul de gene bacteriene de la o tulpin de Salmonella typhi la alt tulpin. Acelai fenomen de transducie s-a descris i la fagul de la E. coli. Fenomenul de transducie fagic se desfoar prin 3 mecanisme: - transducie specializat; - transducie generalizat; - transducie abortiv (incomplet). Transducia fagic specializat (localizat sau restrictiv) Este caracteristic fagilor transductori de tipul , care au proprietatea de a transfera eficient un numr limitat de gene i anume cele situate n imediata apropiere a situsului de legare a profagului n nucleosomul bacterian. Ex.: Fagul la E. coli se integreaz doar ntre genele gal i bio. Capacitatea fagului de a transmite gene cromozomale la alte bacterii nu e ntmpltoare. Nu poate fi extins la orice gen i e limitat doar la genele gal i bio. Genomul fagului integrat n nucleosomul bacteriei ntre genele gal i bio (care determin sinteza galactozei, respectiv a biotinei) poate fi excizat din genom fie prin excizie corect i se reface fagul , fie eronat formnd un genom hibrid (ADN fagic + o parte din informaia bacterian adiacent locului de integrare). Exist astfel dou posibiliti: dac genomul fagului a preluat prin excizie eronat gena gal, fagul va avea aceast gen i se va numi gal+; dac genomul fagului a preluat gena bio, fagul se va numi bio+. O poriune din genomul fagic rmne pe nucleosomul bacteriei i fagii transductori sunt defectivi, adic le lipsete un anumit segment din structura lor. Eliberarea fagilor transductori din celul (ei singuri fiind incapabili de replicare i liz) se realizeaz cu ajutorul altor particule fagice normale, numite fagi helper, prezente n aceeai celul i care au genomul complet.

Dup ce genomul fagului transductor a ptruns ntr-o alt celul bacterian receptoare, evoluia sa ulterioar e diferit: a) poate fi degradat de ctre sistemele enzimatice ale gazdei ca un material strin celulei (sub aciunea enzimelor de restricie); b) se poate integra n nucleosomul bacterian la un situs specific, cu o frecven mic (1:10-5) printr-un proces de recombinare; celula bacterian dobndete astfel un fenotip nou, ca urmare a genei nucleosomale aduse de fagul transductor. Fagul e folosit n ingineria genetic (tehnologia ADN recombinat) ca vector pentru a ncorpora gene utile i pentru a le transfera la bacteriile receptoare, obinnd noi fenotipuri bacteriene, importante din punct de vedere economic. De asemenea, este mult folosit la obinerea de bnci de gene (toate genele unui genom eucariot pot fi clonate pe bacterii). Transducia fagic generalizat (nelimitat, nerestrictiv) Este caracteristic pentru fagul P1 de la E. coli, fagul P22 de la Salmonella, fagul SP10 de la Bacillus subtilis. Infecia cu fagii respectivi determin o fragmentare a nucleosomului bacterian al celulei gazd n segmente de ADN cu o lungime similar ADN-ului fagic i exist posibilitatea ca orice fragment din genomul bacteriei s fie ncorporat n structura unui virion (se face o ncorporare accidental a unui fragment de nucleosom). De multe ori, muli fagi maturi conin astfel doar gene bacteriene, purtnd numele de pseudovirioni. Pe lng aceste fragmente pot fi incluse ns i mici fragmente libere de genom viral. Este un mecanism de mpachetare eronat n baza cruia, atunci cnd se produce asamblarea particulelor virale, majoritatea particulelor virale nglobeaz genomuri fagice, dar un numr mic de capside nglobeaz gene nucleosomale. Avnd gene nucleosomale, fagii nu se pot replica. Fragmentele cromozomale nu pot fi transmise la alte celule bacteriene dect n prezena unor fagi helper care suplinesc funciile ce lipsesc particulelor pseudovirale. Dup infecia unei celule bacteriene receptoare cu un fag de transducie generalizat, genele cromozomale sunt introduse n citoplasma celulei receptoare i se recombin cu nucleosomul celulei respective, care primete astfel determinani genetici de la celula donoare. Transducia abortiv Corespunde situaiei n care ADN-ul transductor ptruns n celula bacterian receptoare nu reuete s se integreze stabil n nucleosomul acesteia; totui el e funcional i i exprim genele pe care le poart (ADN-ul respectiv e transcris n ARNm i tradus). Celula bacterian devine astfel diploid pentru segmentul respectiv de cromozom. Acest segment transferat nu e replicat odat cu cromozomul i, n momentul diviziunii celulei bacteriene transduse, el e transmis unilateral linear numai la una dintre celulele fiice. n cursul dezvoltrii culturii bacteriene, segmentul de ADN transdus e diluat progresiv n populaia bacterian, deoarece la fiecare diviziune numai o singur celul are segmentul respectiv. Fenomenul a fost studiat n cazul mobilitii la Salmonella. Bacteriile imobile (fla ) devin mobile (fla+) dac primesc gena respectiv fla. n cazul transduciei abortive, bacteriile fla- primesc gena fla, devin fla+, dar la fiecare diviziune celulele mobile formeaz o celul sor mobil fla- (care va forma o clon fla-) i o celul sor rmne fla+.