Lucrarea practic 1. Microscopul. Tehnica microscopic. Metodele histochimice i imunohistochimice. Celula. Criterii generale de recunoatere a esuturilor.

Coloraii: HE Tricrom Masson Tricrom Gmri !" #mpregnare argentic pentru reticulin !l$astru de toluidin !nti%actin !nti%cito&eratine

1. Microscopul optic: Corp 'rol de susinere( )culare *e+ol+er cu o$iecti+e latin Macro , i micro+i- Condensator "istem de iluminare Corpul microscopului % susine celelalte componente % plasea- ocularele. o$iecti+ele. preparatul i sursa de iluminare /n acelai a0 )cularele % lentile mritoare '110( % 2ormea- prin intermediul prismei o imagine $inocular % distana interpupilar regla$il 'pri+ind cu 3 ochi se +ede un singur c4mp( % dioptrii regla$ile 'imagine clar pentru 2iecare ochi( *e+ol+erul cu o$iecti+e % permite schim$area lor 2acil % o$iecti+e de 50. 110. 310. 510. 1110 % o$iecti+ele se schim$ din re+ol+er 67*7 modi2icarea macro+i-ei latina % susine lama cu preparatul % sistem de 2i0are a lamei 'ca+aleri( % sistem de deplasare a lamei pe a0ele )0 i )8 Macro , i micro+i-a % sisteme de angrena9e % permit deplasarea pe a0a )% macro+i-a produce deplasri +i-i$ile % micro+i-a produce deplasri de ordinul micrometrilor Condensatorul % sistem de lentile care /mpreun cu apertura trans2orm 2asciculul de lumin emis de surs /ntr , unul paralel 'iluminare uni2orm a c4mpului(

"ursa de lumin % permite trecerea luminii prin preparat 'transiluminare(

Etapele e0aminrii unei lame la microscop % se mut platina /n cea mai de 9os po-iie % se 2i0ea- /n a0 o$iecti+ul 50 % se a9ustea- intensitatea luminoas a sursei % se a9ustea- distana interpupilar 'un singur c4mp la pri+irea cu am$ii ochi( % plasarea lamei cu preparatul pe platin % aducerea preparatului /n a0ul optic % pri+ind /n microscop. se deplasea- platina din macro+i- 'se ridic preparatul( p4n se o$ine imaginea relati+ clar % se clari2ic imaginea cu micro+i-a % deplasarea -onei de interes /n mi9locul c4mpului % schim$area o$iecti+ului relucrarea primar a preparatelor % permite conser+area i manipularea lor % este standardi-at 'Ehrlich. acum peste 111 ani( % etape: % 2i0area: /ntrerupe procesele de distrucie celular post , mortem % inclu-ionarea: /nlocuirea apei din preparat cu alcool i apoi cu $en-en sau 0ilen i /n 2inal cu para2in : $loc care se poate manipula % secionarea: cu a9utorul microtomului. seciuni cu grosimea de ;< care se lipesc pe lam 'de o$icei cu al$umin( % colorarea are ca scop creterea contrastului dintre nucleu i citoplasm. permi4nd identi2icarea celulelor i esuturilor 'pe lama necolorat nu se +d detaliile mor2ologice celular , tisulare( % montarea: lipirea unei lamele deasupra seciunii cu $alsam de Canada Colorarea : acido2ilia: a2initatea pentru colorani aci-i 'caracteristic su$straturilor $a-ice , proteine citoplasmatice. colagen( : $a-o2ilia: a2initatea pentru colorani $a-ici 'caracteristic su$straturilor acide , aci-i nucleici , nucleu i reticul endoplasmic rugos( : metacroma-ia: proprietate mi0t a su$stratului i a colorantului: +irarea culorii colorantului /n contact cu anumite su$straturi 'cea mai 2rec+ent: al$astru,+iolet( Coloraii: 1. Mor2ologice:

% $icrome 'un colorant nuclear $a-ic i unul acid. pentru citoplasm( % cea mai 2rec+ent utili-at: Hemato0ilin , Eo-in 'HE( % tricrome 'un colorant nuclear. 3 colorani aci-i. din care de regul unul pentru colagen( % cele mai 2rec+ente: % Masson: colagenul este colorat /n al$astru % Gmri: colagen +erde. citoplasma rou aprins. nuclei +iolet /nchis 3. Coloraii histochimice: % permit identi2icarea cu relati+ speci2icitate a unui su$strat prin reacii de culoare sau de precipitare datorate unor grupri ale acestuia % se mai 2olosesc: % reacia !": identi2icarea poli-aharidelor prin colorarea /n +iolet%rou a gruprilor aldehidice li$ere create /n structura lor 'glicogen. mem$rane $a-ale( % coloraia cu al$astru de toluidin: identi2icarea glico-aminoglicanilor din granulaiile mastocitelor i mucinelor prin metacroma-ie '+iolet(. utilitate pentru organele ner+oase % coloraia al$astru alcian: mucine 'glico-aminoglicani( % impregnrile argentice: 5 tipuri % pentru 2i$re de reticulin i mem$rane $a-ale % pentru componente ale neuronilor i celulelor gliale % pentru celule neuroendocrine % pentru germeni 'H. pylori( % mucicarmin 'pentru mucus( % orcein , pentru 2i$re elastice % coloraii histoen-imologice: identi2icarea pre-enei i acti+itii unor en-ime % se mai 2olosesc: % !T , a-a 'intens po-iti+ la polul $iliar al hepatocitelor. identi2icarea canaliculilor $iliari( % mielopero0ida-a 'identi2icarea unor su$tipuri de leucocite( =. Coloraii imunohistochimice: % $a-ate pe reacia antigen , anticorp % anticorp primar , anticorp secundar % anticorpul secundar este marcat. de regul en-imatic % +i-uali-are prin reacie de culoare catali-at de en-ima care marchea- anticorpul secundar % identi2ic tipuri de celule i molecule ale acestora. inclusi+ c4nd celulele sunt trans2ormate malign % utile /n em$riologie molecular. histologie i patologie % e0emple de mar&eri: cito&eratine. +imentin. actin de tip muchi neted. cromogranin !. enola- neuronal speci2ic. protein glial 2i$rilar acid. colagen #>

5. Coloraii citologice: % ! T % ?rgan: % simpl. nu d 2oarte multe detalii celulare % apanicolaou: % mai complicat % d detalii celulare mai multe 'e0. acumularea de &eratin /n citoplasm. util /n diagnosticul cer+ico , +aginal. pleural. la+a9 $ronic( % Ma8 , Gr@nAald , Giemsa: % util pentru 2rotiuri de s4nge peri2eric i mdu+ osoas hematogen % d detalii citoplasmatice mai multe 'granulaii(