Lipidele membranare i organizarea lor ca bistrat molecular Generaliti Lipidele reprezint 40-50% din materialul organic al membranelor.

Sub aspect molecular ele reprezint componenta structural de baza a membranelor celulare (raportulmolecular lipide/proteine fiind de ~50/1).Lipidele suntstructurate n membrane sub form de bistrat, cu capetele hidrofile la exterior i cozile hidrofobe n interior, bistrat care prezint proprieti fluide, manifestate bidimensional. n bistrat lipidele au o distribuie asimetric i sunt de o mare eterogenitate. Asadar membranele celulare sunt structurate pe un bistrat lipidic bidimensional, asimetric i eterogen.

Definiia lipidelor membranare Lipidele membranare reprezint o categorie larg de substane organice relativ insolubile n ap, solubile n cei mai muli solveni organici, cu caracter amfifil, multe dintreele fiind esteri ai unor alcooli polihidroxilici cu acizi grai (acizi carboxilici cu lan alifaticliniar, adic o caten liniar coninnd mai muli atomi de carbon). Descrierea lipidelor membranare i caracterizarea bistratului lipidic
Caracterele fizico-chimice ale lipidelor le definesc drept molecule ideale pentru structurarea de membrane, a cror principal menire este aceea de a separa dou compartimente apoase (interiorul celulelor de mediul nconjurtor). Lipidele sunt molecule mici cu posibiliti mari de mobilitate, astfel nct structurile pe care le pot asambla nu sunt rigide. Sunt molecule relative insolubile n medii apoase, prezentnd tendin de asociere spontan, ceea ce confer structurilor pecare le formeaz tenacitatea de a-i pastra integritatea, sau de a se reface rapid, atunci cnd sunt agresate mecanic. Tendina spontan de asociere implic un consum energetic minim, ceea ce reprezint un avantaj n economia celular. Dei sunt molecule mici,structura lor este deosebit de complex.

Proprietile lipidelor membranare Autoaranjarea spontan (autoorganizarea). Aceast proprietate se datoreaz caracterului amfifil (sau amfipatic) descris; astfel, fosfolipidele i glicolipidele introduse n ap formeaz un dublu-strat. Acest proces are loc datorit interaciunilor hidrofobe, interaciuni care constituie forele ce conduc

la formarea dublului strat. Asamblarea lipidelor ce are ca rezultat formarea acestei matrici (dublul strat) este un proces spontan. Styrer meniona c n momentul n care moleculele lipidice sunt captate n bistrat (dublul-strat), moleculele de ap sunt ndeprtate. ndeprtarea apei duce la creterea entropiei . n plus, cozile hidrocarbonate ale lipidelor sunt legate ntre ele prin fore Wan der Waals , fore care vor favoriza aglomerarea intim a acestor cozi. Fosfolipidele extrase din membrane i plasate ntr-un mediu apos se dispun spontan ntr-un bistrat, formnd astfel membrane artificiale. Din diverse experimente, cunoatem 2 tipuri de organizare a bistraturilor lipidice: bistraturi lipidice plane (denumite i membrane negre); bistraturi lipidice ce formeaz vezicule - denumite liposomi. alt form de organizare spontan este reprezentat de micelii, de asemenea sferice ca i liposomii, dar, spre deosebire de acetia, cozile lor hidrofobe exclud apa din interiorul lor. A. Bistraturile lipidice plane Pot fi obinute prin amplasarea unei picturi lipidice dizolvate n solveni organici, la nivelul unui orificiu care separ 2 compartimente ce conin ap. Dup cteva minute, pictura lipidic se etaleaz n bistrat sub forma unui film bilipidic negru, deoarece nu reflect lumina (de unde i numele). Aceste structuri au fost utilizate n 1970, pentru a demonstra deplasrile lipidelor n planul aceluiai strat sau dintr un strat lipidic n altul. Aceste membrane au grosimi variabile de la 5nm la 9nm i prezint, n microscopia electronic o structur trilamelar. Au o structur asemntoare membranelor biologice dar difer prin faptul c sunt mai puin permeabile i au o rezisten electric mai nalt. B. Liposomii Fosfolipidele introduse n ap pot forma liposomi multilamelari, cu un diametru de aproximativ 2 m. Formarea lor poate fi accelerat de agitarea mecanic a vasului de formare. Prin tratamentul lor ultrasonic pot fi transformai n liposomi unilamelari. Liposomii sunt folosii n experiene de reconstruire a membranelor prin adiie de proteine. Astfel ei sunt utilizai n terapeutic. Ei permit vehicularea (transportarea) unor medicamente pe care le nglobeaz, n torentul sangvin de unde pot fi dirijai ctre esuturile int. C. Miceliile

Miceliile reprezint structuri sferice care conin cteva zeci pn la cteva mii de molecule lipidice dispuse cu regiunile hidrofobe agregate spre interior, excluznd moleculele de ap, i cu capetele hidrofile spre exterior, n contact cu mediul apos. Formarea miceliilor este favorizat atunci cnd aria pe seciune a capetelor polare este mai mare dect cea a lanurilor acil (de acizi grai). Acesta este cazul unor molecule ca: acizi grai liberi, lizofosfolipide (fosfolipide crora le lipsete un lan de AG acid gras) sau detergeni cum ar fi sodiu-dodecil-sulfat (SDS) folosit la electroforez. Fluiditatea bistraturilor lipidice. Bistraturile lipidice sunt structuri cvasifluide, interiorul bistratului fiind fluid. Aceast cvasi-fluiditate este rezultatul micrilor efectuate n special de fosfolipidele membranare. Cele mai importante micri efectuate de lipide sunt rotaia n jurul propriei axe i micrile lanurilor laterale. Fluiditatea este proporional cu amplitudinea acestor micri i are ca rezultat deplasarea lipidelor i a proteinelor n planul membranei. Micrile lipidelor sunt: a. Intramoleculare - cnd se deplaseaz numai anumite poriuni ale moleculei lipidice. b. De rotaie i de translaie cnd n micare este angajat ntreaga molecul. Micrile intramoleculare sunt puin accesibile i numai metodelor de investigaie ca RMN (Rezonana Magnetic Nuclear) sau RES (Rezonana Electromagnetic de Spin). Aceste micri sunt reprezentate de micri ale grupurilor de atomi n jurul legturilor simple precum i de micri segmentare la nivelul acizilor grai i modificri de conformaie la nivelul gruprilor polare. Micrile de rotaie i de translaie sunt mai accesibile investigaiilor. Micarea de rotaie este foarte rapid (10-6-10-7 sec.). Moleculele se rsucesc n jurul propriei axe i, din cauza flexibilitii lanurilor laterale, molecula lipidic va fi flectat la maxim la nivelul miezului dublului strat lipidic i mai puin flectat la nivelul capetelor polare. Micrile de translaie sunt de dou tipuri: micare de translaie lateral migrare a lipidelor dintr-un strat n altul. Prin translaie lateral, lipidele i schimb locurile ntre ele de circa 107 ori pe secund, deci coeficientul de difuziune (D) este n medie de 10-8 cm2/sec. Aceasta nseamn c o molecul lipidic poate difuza ("strbate") suprafaa unei bacterii mari (aprox. 2 m) ntr-o secund. Este permis comparaia cu un ocean lipidic n

care moleculele componente au libertate de micare datorit interaciunilor Van der Waals. Micrile de lateralitate afecteaz i mobilitatea proteinelor care, pentru regionalizare i pstrarea polaritii funcionale necesit sisteme specifice de ancorare prin generarea de clustere (agregate macromoleculare lipido-proteice care pstreaz poziiile relative ale proteinelor n membran) sau prin ancorarea la elementele citoscheletului cortical (cazul proteinelor transmembranare). Un exemplu util este cel al glicoforinelor i pompelor Na/bicarbonat care sunt cuplate i imobilizate de spectrin, o protein specific citoscheletului eritrocitelor. Migraia lipidelor dintr-un strat n altul este destul de rar i lent i se realizeaz printr-o micare de "basculare" (sau de flip-flop). Aceste micri survin destul de rar (o dat la 7-10 zile pentru o molecul lipidic) i necesit o cantitate mare de energie sau prezena unei proteine denumit flipaz. Micrile descrise mai sus subliniaz afirmaia conform creia bistratul lipidic este un fluid bidimensional. Acest caracter depinde, de asemenea, de compoziia dublului strat deoarece: fosfolipidele particip la inducerea tranziiilor de faz (trecerea din starea de cristal lichid n cea rigid de gel-cristal). Tranziiile de faz, diferite pentru lipide diferite, depind de natura prii hidrofobe (lanurile hidrocarbonate). Lanurile pot adopta fie o conformaie regulat (cnd lanurile sunt rigide i etalate (drepte) fie una perpendicular pe bistratul lipidic sau nclinate . Aceast tranziie de faz se datoreaz unei reorganizri a lanurilor de acizi grai care trec de la o structur nalt organizat, cea de gel-cristal, rigid, la una mai mobil-fluid, cea de cristal lichid. Aceast tranziie de faz de la gel la fluid este energo-absorbant. n general, lipidele care conin acizi grai nesaturai sufer tranziia de faz la o temperatur mai joas dect lipidele care conin acizi grai saturai. Aceast regul este valabil pentru lipidele cu lanuri scurte de acizi grai deoarece vor avea cozile mai scurte iar forele de interaciune Van der Waals dintre ele vor fi mai slabe; n consecin, starea de gel este mai puin stabil i sufer tranziia de faz la temperaturi mai joase. Bistratul lipidic care conine mai muli acizi grai nesaturai i mai multe duble legturi ntre acizii grai, va fi mai fluid iar temperatura tranziiei sale de faz va fi mai sczut. Meninerea fluiditii bistratului lipidic pare a fi o necesitate vital pentru dezvoltarea i reproducerea celular. Membranele conin un amestec de lipide, fiecare lipid fiind caracterizat de propriul su punct de tranziie de faz. Adaptarea la temperaturi joase se datoreaz creterii raportului dintre acizii grai nesaturai i cei saturai, raport care menine fluiditatea necesar. Fluiditatea dublului strat lipidic este, de asemenea, influenat de un alt lipid esenial - colesterolul. Colesterolul singur este prea hidrofob pentru a forma un

bistrat lipidic i cu toate acestea l gsim intercalat printre fosfolipide. Gruparea sa polar prezint interaciuni cu gruprile polare ale fosfolipidelor n timp ce inelul steroidian prezint interaciuni cu acizii grai ai fosfolipidelor. Efectul colesterolului asupra fluiditii membranare variaz n funcie de compoziia lipidic a acesteia. Colesterolul reduce micrile aleatorii ale prilor acizilor grai situai spre suprafaa bistratului dar n acelai timp disperseaz cozile acizilor grai, ceea ce crete uor fluiditatea regiunii interne a bistratului. La concentraii nalte ale colesterolului n membranele celulelor eucariote, la 37C, acesta le reduce fluiditatea. De asemenea, la temperaturi superioare celei de tranziie, colesterolul reduce fluiditatea bistraturilor lipidice. La temperaturi inferioare celei specifice tranziiei de faz, colesterolul menine membrana ntr-o stare fluid, ceea ce previne acroarea cozilor acizilor grai n cazul variaiilor brutale de temperatur. Astfel sterolii pondereaz extremele strilor de agregare ale membranelor. Microdomeniile lipidice - exist sau nu ? Cercetri mai mult sau mai puin recente au nscut ipoteza existenei microdomeniilor lipidice, cu caracteristici particulare, ipotez sugerat de existena a sute de specii lipidice. Prezena lor a fost semnalat n aceeai msur n membranele naturale ct i artificiale. Autorii acestei teorii afirm c dispoziia acestora ar fi de tip HII i ar fi expresia mezomorfismului fosfolipidelor. Mezomorfismul semnific o stare intermediar de trecere de la cristal la lichid, caracterizat de stri succesive de cristal lichid sau de lichid anisotropic cu proprieti intermediare ntre lichide i solide. Aceste microdomenii joac probabil, un rol important n procesul de amaraj (ancorare) al proteinelor n bistratul lipidic, n procesele de transport facilitat al Ca2+ sau n procesele de fuziune a membranelor. Asimetria dublului strat lipidic.Un mare numr de membrane au o componen lipidic diferit pentru cele 2 monostraturi din structur. Originea asimetriei chimice se gsete la nivelul locului lor de sintez, adic n reticulul endoplasmic neted (un organit celular specializat), unde se gsesc translocatori ai lipidelor care le inser i le repartizeaz ntr-un monostrat sau n altul (aa cum se va vedea n capitolele referitoare la organitele celulare, rennoirea membranelor celulare depinde de reticulul endoplasmatic - att rugos ct i neted - care "nmugurete" trimind vezicule spre membrana celular cu care fuzioneaz). Importana asimetriei (manifestat mai ales la fosfolipide) se exprim mai bine la nivelul eritrocitelor. Astfel, la nivelul monostratului extern exist mai ales fosfolipide care au colina ca i grup polar precum i sfingomielin. n monostratul

intern gsim fosfatidil-serin i fosfatidil-etanolamin. Prezena serinei este capabil s creeze o diferen de potenial electric ntre cele 2 straturi, diferen important pentru funcionarea unor enzime. Astfel, protein-kinaza C este activat de semnale extracelulare dar numai n prezena membranar a fosfolipidelor ncrcate negativ (datorit serinei la nivelul capului polar).