UNIUNEA EUROPEAN

GUVERNUL ROMNIEI MINISTERUL MUNCII, FAMILIEI I PROTECIEI SOCIALE AMPOSDRU

Fondul Social European POSDRU 2007-2013

Instrumente Structurale 2007-2013

OIPOSDRU

UNIVERSITATEA TEHNIC GHEORGHE ASACHI DIN IA I

UNIVERSITATEA TEHNIC GHEORGHE ASACHI DIN IAI COALA DOCTORAL A FACULTII DE TEXTILE PIELRIE I MANAGEMENT INDUSTRIAL

OBINEREA PRODUILOR DE INCLUZIUNE AI MONOCLORTRIAZINIL CICLODEXTRINEI GREFAT PE TEXTILE CU SUBSTANE BIOACTIVE

RAPORTUL DE CERCETARE TIINIFIC Nr.2

Conductor de doctorat: Prof.univ.dr.ing. AURELIA GRIGORIU

Doctorand: Ing. OCTAVIAN POPESCU

Domeniul de doctorat: INGINERIE CHIMIC

Aceast lucrare a fost realizat cu suportul financiar al proiectului POSDRU CUANTUMDOC STUDII DOCTORALE PENTRU PERFORMANE EUROPENE N CERCETARE I INOVARE ID79407 proiect finanat de Fondul Social European i Guvernul Romniei 2013

CUPRINS

Introducere..................................................................................................................5 Capitolul 1. Grefarea monoclorotriazinil--ciclodextrinei pe estur din bumbac....................................................................................................6 1.1. Optimizarea funcionalizrii materialelor celulozice cu monoclorotriazinil--ciclodextrin n mediu bazic...............................6 1.2. Evidenierea triazinilciclodextrinei grefate pe materialul celulozic prin metode instrumentale...................................................15 1.3. Concluzii.......................................................................................18 Capitolul 2. Includerea prometazinei n triazinilciclodextrina grefat pe bumbac..................................................................................................20 2.1. Constantele de stabilitate pentru produsul de incluziune PM/ MCT--CD n mediu apos acid i bazic..............................................20 2.2. Realizarea produsului de incluziune PMHCl / MCT--CD grefat pe bumbac n mediu de etanol................................................22 2.3. Concluzii.......................................................................................23 Capitolul 3. Obinerea in situ a nanoparticulelor de argint pe estura din bumbac .................................................................................................24 3.1 Analiza modului de formare a AgNPs pe estura grefat cu triazinilciclodextrin...........................................................................25 3.2. Analiza modului de formare a AgNPs pe estura grefat cu sarea disodic a monoclortriazinei...............................................................38 3.3. Concluzii.......................................................................................45 Capitolul 4. Testarea activitii antimicrobiene a argintului................................47 4.1. Metoda difuzimetric...................................................................47 4.2. Metoda testrii cu tetrazoliu/formazan(TTC) .............................58 4.3. Concluzii......................................................................................61

BIBLIOGRAFIE.........................................................................................................62

Introducere Datorit structurii oligomere speciale, cu caviti lipofile i exterior hidrofil, ciclodextrinele ofer posibiliti extraordinare chimiei supramoleculare prin capacitatea de a forma compleci de incluziune. Aceast proprietate a fost exploatat n domeniul textil pentru modificarea suprafeelor produselor. ncercrile actuale de cretere a valorii produselor textile s-au concretizat, de exemplu, n obinerea unor materiale cu aplicaii n medicin, care utilizeaz ciclodextrinele drept rezervor pentru diverse substane bioactive ce pot fi eliberate controlat, ca n cazul administrrii transdermice. Scopul acestui studiu este de a obine modificri permanente ale suprafeei materialelor textile celulozice prin grefarea unui derivat de -ciclodextrin (monoclorotriazinil--ciclodextrina, MCT--CD) n condiii optime de grefare i alegerea unui procedeu de pregtire a materialului (bumbac) care s poat fi grefat cu o cantitate suficient de MCT--CD i care ulterior s permit, n mod eficient, includerea unor substane bioactive cu efect benefic asupra organismului uman sau a altor substane, de exemplu odorizante. MCT--CD posed o grupare reactiv i este capabil s realizeze legturi covalente cu celuloza att n mediu bazic conform reaciei (R1) la pH = 10-11 realizat cu carbonat de sodiu, sod caustic sau alte baze (Grigoriu i colab., 2010) ct i n mediu acid conform reaciei (R2) la pH = 5 realizat cu acid clorhidric:

(R1)

(R2)

Capitolul 1. Grefarea monoclorotriazinil--ciclodextrinei pe estur din bumbac

1.1. Optimizarea funcionalizrii materialelor celulozice cu monoclorotriazinil-ciclodextrin n mediu bazic S-a utilizat estur crud din bumbac 100%, cu masa specific de 130 g/mp, achiziionat de la Iaitex S.A.-Iai, ca agent de descleiere oxidativ - Beisol DO (Bezema), ca stabilizator pentru peroxizi - Contavan ARL (Bezema), o combinaie de surfactani pentru splare, emulsifiere i cltire - Lavotan DSU (Bezema), CAVATEX W7 MCT (Wacker Chemie, Germania). estura a fost pregtit prin dou metode: a) tratare alcalin timp de 2 ore cu 20g /L NaOH, 5g/L carbonat de sodiu, 5g/L Lavotan DSU, 2g/L fosfat trisodic, hidromodul 1:20, precedat de o descleiere prin impregnare la 65C cu 7g/L Beisol DO conc. i 5g/L Lavotan DSU, hidromodul 1:10, apoi depozitare timp de 2 ore la 50-60C; ca tratamente finale s-au realizat splri repetate fierbini (90C) i reci cu ap, pn la pH= 6,5-7. b) albire la rece cu 20g /L NaOH, 25g/L ap oxigenat 35%, 5g /L Beisol DO conc., 5g/L Lavotan DSU, 4g/L Contavan ARL, hidromodul 1:10, depozitare 16 ore. Ca tratamente finale s-au realizat splri repetate fierbini (90C) i reci cu ap, pn la pH= 6,5-7. Grefarea MCT--CD pe testura din bumbac, pregtit n cele dou moduri, s-a fcut n mediu bazic, mediu care ofer maximum de randament al reaciei. Cte 40 de eantioane din estura pregtit n cele dou moduri, condiionate i cntrite cu precizia de 1 mg pe o balan Shimadzu Type AW 220, s-au impregnat conform unui program experimental cu soluii intre 50-150g/L MCT--CD i 20-80g/L Na2CO3 (vezi Tab. 1) cu un grad de preluare de cca.100%. Eantioanele au fost uscate la temperatura camerei nainte de fixarea termic, fixare care s-a realizat ntre 100160C. La fiecare tip de pregtire a esturii, 20 de eantioane s-au tratat termic timp de 10 min iar celelalte 20 s-au expus la temperatur 15 min. Dup tratarea termic, eantioanele au fost splate la cald i la rece pn la obinerea unui pH neutru. Evaluarea gradului de grefare (Y) s-a fcut prin metoda gravimetric, prin cntrirea eantioanelor nainte i dup tratare (1), dup o prealabil condiionare:

Y=

Mt M0 100, % M0
6

(1)

unde Mt i Mo sunt masele eantionului tratat, respectiv a martorului. Pentru a obine un maximum de informaii asupra parametrilor care influeneaz semnificativ procesul prin efectuarea unui numr redus de experimente, s-a aplicat o metod de planificare a acestora numit ,,experiment design. Parametrii care pot influena grefarea MCT--CD pe bumbac sunt: concentraia MCT--CD, durata de imersare, gradul de preluare, temperatura i durata de uscare, natura i concentraia alcaliilor, temperatura i durata fixrii termice i valoarea pH-ului. Dintre acetia, consultnd literatura de specialitate, s-au ales ca avnd o importan principal trei variabile: concentraia MCT--CD, concentraia carbonatului de sodiu i temperatura de fixare (Grigoriu i colab., 2010). S-au efectuat dou serii de experimente cu timpi de fixare diferii (10 i 15 min), att pe bumbacul pregtit prin tratare alcalin (F) ct i pentru cel albit (A). Avnd n vedere cele 3 variabile independente care au cea mai mare influen asupra procesului de grefare, s-a procedat la aplicarea unui program central rotabil compus de tip 23. n acest caz, modelul matematic cuantific influena celor 3 variabile independente, i anume concentraia de MCT--CD ( X1, g/L), concentraia carbonatului de sodiu (X2, g/L) i temperatura de fixare (X3, C) asupra gradului de grefare (Y, %) care este funcia-obiectiv. Domeniile de variaie a parametrilor independeni, valorile naturale i codificate ale acestora sunt redate n Tabelul 1.

Tabelul 1. Codificarea parametrilor

Factor Conc. MCT-CD Conc. Na2CO3 Temp. de fixare U M g/L Cod factor x1 Xi minXi max 50 - 150 Xio 100 -1,682 50 -1 70,27 0 100 +1 129,72 +1,682 150

g/L

x2

20 - 80

50

20

32,16

50

67,83

80

x3

100 -160

130

100

112,16

130

147,83

160

Codificarea parametrilor const n transformarea variabilelor reale (X1, X2,, Xn) n variabile adimensionale sau variabile reduse fr uniti (x1, x2, x3) i s-a fcut pe baza relaiei (2). n general, orice valoare dimensional (real) Xi, luat n interiorul domeniului considerat, poate fi transformat ntr-o valoare adimensional echivalent xi (cuprins ntre -1 i +1) cu ajutorul relaiei:

xi =

Xi Xi 0 Xi

(2)

Aceast relaie are o importan deosebit pentru transformarea ulterioar invers (decodificarea) a valorilor reduse ale coordonatelor optimului. Coordonatele sunt determinate prin folosirea relaiei (3).
X i = xi X i + X i 0

(3)

n scopul stabilirii corelaiei dintre gradul de grefare i cele trei variabile independente menionate mai sus s-a utilizat urmtorul model de ecuaie polinomial (Akhnazarova i Kafarov, 1982):
Y = a0 + a1x1+ a2x2 +a3x3 + a11x12+ a22x22 + a33x32 +a12x1x2 + a13x1x3+

+a23x2x3 unde

(4)

a0,, a23 sunt coeficienii de regresie. n Tabelul 2 sunt prezentate

planul experimentului central rotabil compus de tip 23 (matricea experimental) i valorile gradului de grefare obinute experimental pe estura pregtit prin tratare alcalin, la timpi de fixare de 10 i 15 min (Ye F10 i Ye F15).
Tabelul 2. Matricea experimental pentru estura pregtit prin tratare alcalin. Valorile gradului de grefare obinute experimental la timpi de fixare de 10 min (Ye F10) i 15 min (Ye F15) Nr, Probei
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

x1
-1 1 -1 1 -1 1 -1 1 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

x2
-1 -1 1 1 -1 -1 1 1 0 0 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0 0 0

x3
-1 -1 -1 -1 1 1 1 1 0 0 0 0 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0

Ye F10
1,1082 1,2909 0,7063 1,4916 3,8836 5,1811 1,3868 3,1876 1,9244 3,4195 2,7504 1,1027 0,5742 3,9058 3,1132 3,2036 3,0306 3,2104 3,0469 3,2127

Ye F15
1,1101 1,6659 0,7102 1,7974 4,3290 5,2992 1,6293 3,6426 1,9321 3,9429 3,5221 1,4380 0,5801 4,4705 3,2693 3,2948 3,2079 3,1534 3,3178 3,3008

Valorile gradului de grefare obinute experimental pe estura albit, la timpi de fixare de 10 i 15 min (Ye A10 i Ye A15) sunt prezentate in Tabelul 3.
Tabelul 3. Matricea experimental pentru estura albit. Valorile gradului de grefare obinute experimental la timpi de fixare de 10 min (Ye A10) i 15 min (Ye A15) Nr. Probei 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 x1 -1 1 -1 1 -1 1 -1 1 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 x2 -1 -1 1 1 -1 -1 1 1 0 0 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0 0 0 x3 -1 -1 -1 -1 1 1 1 1 0 0 0 0 -1,682 1,682 0 0 0 0 0 0 Ye A10 0,6548 1,6370 0,4911 1,3096 2,4556 4,1955 1,8007 2,7830 1,4733 3,0285 2,2919 1,1459 0,2300 3,1590 2,0193 1,9644 1,8538 1,9299 1,9644 2,1499 YeA15 0,7022 2,1377 0,6713 1,6713 2,8983 4,4077 1,9898 3,2099 1,5511 4,0435 2,3001 1,1501 0,5794 3,7734 2,0314 1,9441 1,9502 2,0953 2,0584 2,0719

Gradul de grefare determinat cu relaia (1) pentru cele patru serii de 20 de experimente este reprezentat n Fig. 1. Se observ c n toate cele patru cazuri valorile cele mai favorabile ale celor trei variabile, unde gradul de grefare este maxim, se gsesc la experimentul al aselea (X1 = 129,72 g/L MCT--CD, X2 = 32,16 g/L Na2CO3 i X3 = 147,83C), pentru timpul de fixare cel mai lung (15 min). De asemenea, se observ c variabilele independente influeneaz gradul de grefare n toate cazurile, prin urmare sunt semnificative. Pentru calcularea coeficienilor de regresie, s-a folosit programul MODDE 8.0.2.0 iar valorile calculate sunt prezentate n Tabelul 4.

Ye F10
6

Ye F15

Ye A10

Ye A15

Grad de grefare (%)

0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Nr. probei

Figura 1. Gradul de grefare (%) obinut experimental pentru estura pregtit prin tratare alcalin, fixat termic timp de 10 i 15 min (Ye F10 i Ye F15) i pentru estura albit (Ye A10 i Ye A15) n aceleai condiii Tabelul 4. Valorile coeficienilor de regresie Coeficient a0 a1 a2 a3 a11 a22 a33 a12 a13 a23 Valori pt. F10 3,134570 0,481838 -0,546405 1,072310 -0,153191 -0,416665 -0,305871 0,138238 0,266287 -0,536137 Valori pt. F15 3,260160 0,586361 -0,595256 1,183180 -0,131577 -0,293270 -0,277276 0,196813 0,167562 -0,510987 Valori pt. A10 1,979210 0,522669 -0,328451 0,883633 0,102695 -0,085349 -0,093973 -0,115162 0,115187 -0,197037 Valori pt. A15 2,026080 0,703701 -0,331514 0,928780 0,258401 -0,111749 0,047771 -0,111850 0,058000 -0,199875

Dup determinarea tuturor coeficienilor, modelele matematice pentru estura pregtit prin tratare alcalin i pentru estura albit se prezint sub forma:
Yc F10 = 3,134570+0,481838x1-0,546405x2+1,072310x3-0,153191x12-0,416665x22-

-0,305871x32+0,138238x1x2+0,266287x1x3-0,536137x2x3
2

(5)

Yc F15 = 3,260160+0,586361x1-0,595256x2+1,183180x3-0,131577x1 -0,293270x22-

-0,277276x32+0,196813x1x2+0,167562x1x3-0,510987x2x3
Yc A10 = 1,9792100+0,5226690x1-0,3284510x2+0,8836330x3+0,1026950x12-

(6)

-0,0853492x22-0,0939736x32-0,1151620x1x2+0,1151870x1x3-0,1970370x2x3 (7)

10

Yc A15 = 2,0196300+0,6940650x1-0,3265060x2+0,9325580x3+0,2593120x12-

-0,1108380x22+0,0486817x32-0,0933000x1x2-0,0744500x1x3-0,2084250x2x3 Valorile calculate pentru gradul de grefare(Yc) sunt redate in Tabelul 5. (8)

Tabelul 5. Valorile gradului de grefare calculat pentru estura pregtit prin tratare alcalin i pentru cea albit Nr.probei 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Yc F10 1,1195 1,2741 0,8225 1,5301 3,8038 5,0236 1,3622 3,1350 1,8907 3,5116 2,8748 1,0367 0,4656 4,0728 3,1346 3,1346 3,1346 3,1346 3,1346 3,1346 Yc F15 1,2371 1,6811 0,6750 1,9062 4,2904 5,4046 1,6842 3,5857 1,9017 3,8742 3,4317 1,4292 0,4856 4,4658 3,2602 3,2602 3,2602 3,2602 3,2602 3,2602 Yc A10 0,627719 1,673007 0,595215 1,179855 2,558685 4,064721 1,738033 2,783421 1,390618 3,148876 2,290201 1,185292 0,227076 3,199618 1,979210 1,979210 1,979210 1,979210 1,979210 1,979210 Yc A15 0,6658 2,1809 0,6262 1,6939 2,8071 4,5542 1,9680 3,2677 1,5735 3,9408 2,2675 1,1523 0,5990 3,7234 2,0261 2,0261 2,0261 2,0261 2,0261 2,0261

n scopul selectrii coeficienilor semnificativi, s-a realizat analiza statistic a ecuaiilor de regresie. Dispersia erorilor experimentale a fost calculat cu relaia (9) (Akhnazarova i Kafarov, 1982):

s e2 =

1 20 (Yei Y 0 ) 2 , n0 1 i =15

(9) pentru estimarea erorii

n care n0 este numrul de experiene repetate

experimentale iar Y0 este media aritmetic a rezultatelor obinute la aceste experiene i este definit prin:
Y0 = 1 6
20 i =15

ei

(10)

Pentru ecuaia (5), se obine Y0 = 3,1362 i s e2 = 0,007112.

11

Dispersia coeficienilor de regresie a este numrul total de experiene:

2 sb =

fost calculat cu relaia (11), n care N

s e2 = 3,56*104 N

(11)

Semnificaia coeficienilor de regresie a fost verificat cu testul Student (t) folosind relaia (12) :

ti =

ai sb

(12)

unde sb = 0,018868. Valorile variabilei t pentru fiecare coeficient se prezint n Tabelul 6. Valoarea critic a testului Student, pentru = 0,05 i = N l = 10 (unde l reprezinta numarul de coeficieni din ecuaia modelului) este t , =2,23 (Akhnazarova i Kafarov, 1982). Dac t > t , , se admite, cu o probabilitate de 95%, c acel coeficient este semnificativ

i i se atribuie semnul +. Coeficienii considerai nesemnificativi ( t < t , ) primesc

semnul minus. n ecuaia de regresie se pstreaz numai coeficienii semnificativi, respectiv termenii care influeneaz semnificativ randamentul reaciei.

Tabelul 6. Verificarea semnificaiei coeficienilor ecuaiei de regresie (5)

Coeficient
a0 a1 a2 a3 a11 a22 a33 a12 a13 a23

Valoare absoluta a coeficientului 3,134570 0,481838 0,546405 1,072310 0,153191 0,416665 0,305871 0,138238 0,266287 0,536137

t
166,1315 25,5373 28,9593 56,8322 8,1191 22,0832 16,2111 7,3266 14,1132 28,4151

t,

Semnificaie
+ + + + + + + + + +

2,228

n urma aplicrii testului Student i pentru ecuaiile (6), (7) i (8), toi coeficienii apar ca semnificativi i modelul matematic rmne cel descris de ecuaia (5).

12

Verificarea adecvanei modelului s-a realizat cu ajutorul testului Fisher. Dispersia regresiei fa de datele experimentale se calculeaz cu relaia (13) (Akhnazarova i Kafarov, 1982):
s2 =

1 N l

20

(Y
i =1

ei

Yci ) 2

(13)

unde N = 20, reprezentnd numrul total de experimente i l = 10, reprezentnd numrul de coeficieni. Pentru ecuaia (5), se utilizeaz valorile experimentale (Ye F10) din Tabelul 2 i cele calculate (Yc F10) din Tabelul 5 i rezult s = 0,0155. Valoarea testului Fisher se calculeaz cu relaia (14):
F= s2 s e2

(14)

nlocuind valorile n formula (14), se obine, pentru ecuaia (5), F = 2,18. ntruct valoarea tabelat a testului pentru = 0,05; 1 = N - l = 10 i 2 = n0-1 = 5 este F,1,2= 4,8 [20] i deci F < F,1,2 , adecvana pentru ecuaia de regresie este confirmat. Pentru ecuaiile (6), (7) i (8) se obin valori ale lui F de asemenea mai mici dect F,1,2 , confirmndu-se adecvana acestor ecuaii. Analiznd gradele de grefare determinate experimental i pe baza simulrilor efectuate cu ajutorul modelelor matematice (5-8), se observ c pentru estura pregtit prin tratare alcalin n comparaie cu estura albit, prima variant de pregtire a materialului textil este mai favorabil grefrii MCT--CD. Influena celor trei variabile independente asupra gradului de grefare s-a determinat prin utilizarea programului MODDE (Fig. 2). Pentru estura pregtit prin tratare alcalin cu timpul de fixare de 15 min, se constat o influen pozitiv a variabilelor independete x1 (concentraia de MCT-CD) i x3 (temperatura de fixare) i o influen negativ a lui x2 (concentraia carbonatului de sodiu) motiv pentru care este necesar stabilirea unui optim. Din Fig. 3 se mai observ c efectul temperaturii este de dou ori mai mare dect al concentraiei de MCT--CD iar efectul lui x2 este negativ. Aceleai influene se constat i la celelalte serii de ncercri.

13

a b Figura 2. Influena variabilelor independente x1, x2, pentru x3 =1 (a) i x2, x3 pentru x1 =1 (b) asupra gradului de grefare YF15

Figura 3. Efecte pentru YF15

n continuare, s-a abordat optimizarea gradului de grefare pentru sistemul ales. Problema de optimizare s-a formulat ca una de maximizare care s-a rezolvat prin metoda simplexului descendent (Racu i colab., 2010) n programul MODDE . Rezultatele obinute arat c gradul de grefare maxim YF15 = 5,4934 % se obine pentru x1 = +1 i x3 = +1 (valori maxime tehnologic acceptabile corespunztoare valorilor reale X1 = 129,72 g/L MCT--CD i X3 = 147,83C ) i x2 = 1,5487 care corespunde valorii reale X2 = 22,38 g/L Na2CO3. Verificarea experimental a confirmat acest rezultat. Analiznd gradele de grefare determinate gravimetric pentru

estura pregtit prin tratare alcalin n comparaie cu cele obinute pe estura albit,
se observ c prima variant de pregtire a materialului textil este mai favorabil grefrii MCT--CD. Prelungirea duratei tratamentului termic are un efect pozitiv la ambele variante de pregtire a materialului.

14

1.2. Evidenierea triazinilciclodextrinei grefate pe materialul celulozic prin metode instrumentale

Punerea n eviden a grefrii MCT--CD pe estura din bumbac s-a realizat

i prin spectroscopia n infrarou nsoit de tehnica de reflexie total atenuat (FTIRATR, FT-IR Affinity-1, Shimadzu, Japonia), adecvat suprafeelor textile, prin microscopie electronic de baleiaj (SEM, VEGA II LMH, TESCAN, Cehia) i spectroscopia de raze X dispersiv de energie (EDX, Bruker AXS tip Quantax, Olanda) ct i prin spectre UV-Vis realizate cu sfera integratoare cu ajutorul spectrofotometrului Cary 5E UV-Vis-NIR (Varian, SUA).

Tehnica spectroscopic FTIR-ATR

Aceasta permite analiza de suprafa a materialelor solide sau lichide, cu profunzimea de investigare ntre 10 i 0,1 m, n care radiaia sufer reflexii multiple pe suprafaa de investigat. n cazul de fa, pentru analiza materialului grefat, s-a utilizat un dispozitiv ATR cu cristal KRS-5 (bromura-iodura de taliu), cu 25 reflexii i un unghi de 45 grade, 250 scanri n domeniul 1800 600 cm-1 (SPECAC-SUA) ataat spectrofotometrului FT-IR Affinity-1, Shimadzu. Spectrele FTIR-ATR pentru estura martor albit, pentru cea tratat ct i pentru MCT--CD, sunt prezentate in Fig. 4. Pentru estura martor pregtit prin tratare alcalin, pentru aceeai estur grefat cu MCT-CD i pentru MCT-CD, spectrele FTIR-ATR sunt prezentate n Fig. 5.

Tehnica SEM-EDX

SEM este o metod folosit pentru analiza caracteristicilor microstructurale ale corpurilor solide, prin utilizarea proprietilor de propagare i focalizare a fasciculelor de electroni sub aciunea cmpurilor magnetice sau electrice (Ioanid i Ioanid, 2002). SEM examineaz probele prin reflexie: se bombardeaz suprafaa probei cu un flux de electroni rapizi i se analizeaz electronii reflectai cu un sistem electrono-optic, obinndu-se astfel imaginea suprafeei pe un ecran care se poate fotografia. Microscopul utilizat, controlat integral prin computer, permite variaia tensiunii de la 0,5 la 30 kV, rezoluia maxim fiind de 3,5 nm iar mrirea optic de la 20 la 500000 ori i este echipat cu un detector al electronilor secundari (detector de tip

15

100

MA

80

MCT-CD 754 755

20

Transmittance [%] 40 60

1693 1738

1600

1400

1200 Wavenumber cm-1

1000

800

600

Figura 4. Spectrele de absorbie FTIR-ATR pentru estura martor albit (MA), pentru estura abit, grefat cu MCT--CD (A) i pentru MCT-CD (n domeniul 1800 - 600 cm-1)
100 M F

80

MCT-CD Transmittance [%] 40 60 1738

754 755

1693

20

1600

1400

1200 Wavenumber cm-1

1000

800

600

Figura 5. Spectrele de absorbie FTIR-ATR pentru estura martor pregtit prin tratare alcalin (MF), pentru aceeai estur, grefat cu MCT--CD (F) i pentru MCT-CD (n domeniul 1800 - 600 cm-1)

16

Everhart-Thornley) iar pentru cei reflectai, cu monocristal de tip YAG avnd suprafaa conductoare. Presiunea de lucru necesar este mai mic de 5x10-3 Pa. Imaginile SEM (2500x) pentru testura pregtit prin tratare alcalin (negrefat) i estura pregtit prin tratare alcalin, grefatat cu MCT--CD, sunt redate n Fig. 6.

Figura 6. Imagini SEM (2500x): a) testura pregtit prin tratare alcalin, negrefat; b) testura pregtit prin tratare alcalin, grefatat cu MCT--CD

Din tabelele 7 i 8 se observ o cretere a numrului de atomi de azot ca urmare a grefrii MCT--CD (care conine nucleul triazinic). Cantitatea de azot nregistrat la proba martor poate fi pus pe seama aerului care nu a putut fi scos complet dintre fibre ct i pe seama unor impuriti (cum este i sulful, care la tratamentele ulterioare a fost eliminat). Prezena sodiului se datoreaz gruprii alcoxidice de la nucleul triazinic care rmne neschimbat n urma reaciei n mediu bazic (vezi reacia 1).
Tabelul 7. Analiza elemental pentru mostra martor de estur pregtit prin tratare alcalin Element Numr Strat [% de [% de [% numr Eroare [%] atomic electronic mas] mas, de atomi, norm.] norm.] Oxigen 8 K 55,1606 55,1623 48,4039 17,0777 Carbon 6 K 40,5920 40,5932 47,4478 12,4349 Azot 7 K 4,0564 4,0565 4,0659 1,5066 Sulf 16 K 0,1878 0,1878 0,0822 0,0353 Sum 99,9970 100,0000 100,0000

17

Tabelul 8. Analiza elemental pentru mostra de estur pregtit prin tratare alcalin i grefat cu MCT--CD Element Numr Strat [% de [% de [% numr Eroare atomic electronic mas] mas, de atomi, [%] norm.] norm.] Oxigen 8 K 46,6823 46,6837 41,1448 14,7084 Carbon 6 K 39,1899 39,1911 46,0111 12,2144 Azot 7 K 10,6260 10,6264 10,6980 3,8045 Sodiu 11 K 3,4986 3,4987 2,1459 0,2698 Sum 99,9970 100,0000 100,0000

Tehnica spectroscopic UV-Vis realizat cu sfera integratoare

Chiar dac nu se poate considera o metod cantitativ, metoda spectrelor UV realizate cu ajutorul sferei integratoare poate da informaii asupra veridicitii valorilor gradelor de grefare a MCT--CD pe estur determinate cantitativ, putnduse verifica cel puin o ierarhie a acestora (Fig. 7).

Figura 7. Spectre UV realizate cu sfera integratoare pentru estur grefat cu diferite procente de MCT--CD

1.3. Concluzii
Pentru stabilirea procedeului de pregtire adecvat operaiei de grefare a MCT-

-CD pe bumbac, s-a efectuat un studiu experimental pentru determinarea celui mai

18

nalt grad de grefare, i a rezultat c acesta este tratamentul alcalin. De asemenea, experimental s-a stabilit c durata fixrii termice influeneaz favorabil gradul de grefare, aceasta fiind ns limitat tehnologic. Modelele matematice elaborate au fost folosite pentru simulare n vederea cunoaterii ct mai complete a sistemului studiat pe domeniul investigat experimental. n acest mod s-au putut aprecia influenele variabilelor independente, constatndu-se n toate cazurile o cretere a gradului de grefare cu concentraia de MCT--CD i cu temperatura de fixare, ambele creteri fiind ns limitate tehnologic. S-a mai observat c depirea concentraiei optime a carbonatului de sodiu are ca efect o scdere a gradului de grefare. Optimizarea gradului de grefare pentru sistemul ales a artat c valoarea maxim a acestuia este
YF15 = 5,4934 % i se obine in condiiile x1 = +1, x2 = 1,5487 i x3 = +1

(corespunztoare valorilor reale X1 = 129,72 g/L MCT--CD, X2 = 22,38 g/L Na2CO3

i X3 = 147,83C ) lucru care a fost verificat i confirmat prin experiment.

Punerea n eviden a grefrii MCT--CD pe estura din bumbac s-a realizat

i prin spectroscopia n infrarou nsoit de tehnica de reflexie total atenuat (FTIRATR) ct i prin microscopie electronic de baleaj (SEM) i spectroscopie de raze X dispersiv de energie (EDX). Benzile de absorbie din spectrele FTIR-ATR dovedesc grefarea MCT--CD pe estura din bumbac. De asemenea, imaginile obinute prin microscopie electronic demonstreaz c estura tratat cu MCT--CD are o suprafa modificat, n sensul aparitiei unor microdepozite pe i ntre fibre, n comparaie cu cea netratat. Analiza elemental EDX evideniaz o cretere a numrului de atomi de azot ca urmare a prezenei nucleului triazinic din MCT--CD grefate pe materialul celulozic.

19

Capitolul 2. Includerea prometazinei n triazinilciclodextrina grefat pe bumbac

2.1. Constantele de stabilitate pentru produsul de incluziune PM/ MCT--CD n mediu apos acid i bazic
Verificarea rezultatului obinut prin calcul privind constantele de stabilitate s-a fcut experimental, prin intermediul spectrelor n ultraviolet. S-au imersat dou mostre identice de estur grefat cu MCT--CD n dou soluii de prometazin 16 mg/L, una la pH=7 i cealalt la pH=10,8, ambele tamponate. Hidromodulul s-a calculat n aa fel nct prometazina s fie n exces fa de ciclodextrina grefat pe

estur. S-a ales aceast concentraie pentru a evita apariia precipitatului, avnd n
vedere c limita superioar a solubilitii prometazinei la pH=10,8 este de 27 mg/L (Vlgyi i colab., 2010). In paralel, s-au pregtit i dou mostre de estur de acelai fel, grefate cu MCT--CD, care s-au imersat n soluii oarbe la cele dou valori ale pH-ului, fr prometazin, necesare pentru aducerea la zero a msurtorilor spectrale.
pH=7
1.6

1.4

1.2

A bs.

0.8

0.6

0.4

0.2

0 0 2 4 6 8 mg/L 10 12 14 16 18

pH=10.8
0.6

0.5

0.4

A b s.

0.3

0.2

0.1

0 0 2 4 6 8 mg/L 10 12 14 16 18

Figura 8. Dreptele de etalonare pentru prometazina la pH=7 i 10,8

20

Cele patru mostre s-au meninut n condiii identice (la ntuneric, la temperatura camerei, fr agitare) timp de 24 h. Dup ndeprtarea din soluii, acestea s-au stors pn la un grad de stoarcere de cca.100% pentru recuperarea soluiilor apoi s-au msurat absorbanele n UV, lund ca referin soluiile iniiale. Variaia absorbanei n cele dou medii ar trebui s indice n care dintre acestea a fost favorizat includerea. Utiliznd etalonrile absorban-concentraie pentru prometazina la cele dou valori ale pH-ului (Fig. 8) i spectrele UV (Fig. 9) realizate pentru soluiile reziduale indicate mai sus, se obin rezultate neateptate. Astfel, n mediu acid se realizeaz o reinere de 75% a prometazinei de ctre estura grefat cu MCT--CD iar n mediu bazic reinerea este de doar 49%.

Figura 9. Spectrele UV ale soluiei iniiale de prometazin (16 mg/L) i ale soluiilor reziduale la pH=7 i 10,8 n cazul esturii grefate cu MCT--CD

O explicaie a acestei anomalii a fost cutat n reinerea de ctre estura nsi a prometazinei, difereniat, la cele dou valori ale pH-ului. S-au efectuat deci aceleai probe cu estur negrefat cu MCT--CD i s-au msurat absorbanele soluiilor reziduale (Fig. 10). S-au calculat cu ajutorul etalonrilor absorbanconcentraie (Fig. 8) concentraiile soluiilor reziduale att la pH = 7, ct i la pH = 10,8. S-a obinut o scdere de concentraie a prometazinei de 46,8% n cazul PMHCl

i de 1,56% n cazul PM baz. Scznd aceste valori din valorile obinute iniial,
pentru estura grefat cu MCT--CD, rezult c n mediu bazic a fost inclus 47,44% din prometazin iar n mediu acid numai 28,20%.

21

Figura 10. Spectrele UV ale soluiei iniiale de prometazin (16 mg/L) i ale soluiilor reziduale la pH=7 i 10,8 n cazul esturii negrefate cu MCT--CD

2.2. Realizarea produsului de incluziune PMHCl / MCT--CD grefat pe bumbac n mediu de etanol
Se cntresc cte 0,5 g estur grefat cu 5 % MCT--CD respectiv negrefat (martor) i se trateaz la temperatura camerei cu cte 20 mL etanol n care s-a dizolvat n prealabil o cantitate echimolecular de prometazin clorhidrat (raportat la cantitatea de MCT--CD grefat pe materialul textil). Se las peste noapte la ntuneric (cca.16h ), la temperatura camerei, timp n care alcoolul se evapor complet. Se realizeaz spectrele UV-Vis cu sfera integratoare pentru ambele mostre ct i pentru

estura grefat cu MCT--CD dar netratat cu PMHCl (Fig. 11). Mostrele se cltesc
apoi de dou ori n cte 20 ml etanol i se repet msurtorile spectrale (Fig. 12).

Figura 11. Spectrele UV-Vis realizate cu sfera integratoare pe estura din bumbac tratat cu PMHCl n etanol (F+PMHCl), estura grefat cu MCT--CD i tratat cu PMHCl n etanol (F+MCT+PMHCl) i estura grefat cu MCT--CD (F+MCT)

22

Spectrul UV-Vis al esturii din bumbac grefat cu ciclodextrin i tratat cu PMHCl (Fig. 11, F+MCT+PMHCl) indic, n comparaie cu cel al esturii negrefate (F+PMHCl), prezena att a gruprii fenotiazinice din PM (301 i 253 nm) dar i a inelului triazinic legat covalent de celuloz (240 nm). Dup splare n etanol, spectrul

esturii negrefate (F+PMHCl din Fig. 12) se aplatizeaz foarte mult, indicnd
ndeprtarea prin splare a prometazinei de pe estur, n timp ce estura grefat cu MCT--CD reine circa jumtate din prometazin aplicat (F+MCT+PMHCl din Fig. 12) datorit includerii acesteia n cavitile hidrofobe ale ciclodextrinei.

Figura 12. Spectrele UV-Vis realizate cu sfera integratoare pe estura din bumbac tratat cu PMHCl n etanol (F+PMHCl), estura grefat cu MCT--CD i tratat cu PMHCl n etanol (F+MCT+PMHCl) i estura grefat cu MCT--CD (F+MCT), toate splate de dou ori n etanol

2.3. Concluzii
Comparnd cele trei situaii n care s-a realizat includerea prometazinei n MCT--CD grefat pe estura din bumbac, rezult c n mediu apos, la pH bazic a fost inclus mai puin de jumtate din prometazin iar la pH acid, sub 30%. n etanol, a fost reinut aproximativ jumtate din prometazina aplicat.

23

Capitolul 3. Obinerea in situ a nanoparticulelor de argint pe estura din bumbac

Exist n prezent o mare preocupare pentru argint, att n domeniul cercetrii

tiinifice ct i n domeniul aplicativ. O parte dintre preocupri abordeaz obinerea

nanoparticulelor de argint (AgNPs) prin reducerea ionului Ag+, altele analizeaz activitatea antibacterian a argintului sub diverse forme iar altele se refer la riscurile pentru mediu i pentru om ale acestuia. Relativ o mic parte dintre lucrrile publicate pe aceast tem au ca obiectiv aplicarea argintului ca antimicrobian pe materiale textile. Aici se deosebesc dou direcii: aplicarea argintului pentru protecia materialului textil nsui i aplicarea acestuia pentru protecia corpurilor care vin n contact cu materialul textil. n primul caz este vorba de reducerea sau eliminarea microorganismelor care deterioreaz materialul sau l infesteaz i se nmulesc la suprafaa acestuia (El-Shishtawy i colab., 2011). n acest caz nu este necesar ca argintul s fie eliberat din structura textil. n cel de-al doilea caz se pune problema eliberrii argintului, ca agent antibacterian activ la suprafaa pielii sau a rnilor. Exist

i o teorie conform creia ionii de Ag+ eliberai din AgNPs (R3) pot cataliza
producerea de radicali de oxigen (R4) care oxideaz bacteriile (Ibrahim i colab., 2012), nefiind necesar un contact direct al acestora cu Ag+, deoarece oxigenul activ difuzeaz din fibrele textile n mediul nconjurtor (Hebeish i colab., 2011). O2 + 4 H3O+ + 4 Ag0 4 Ag+ + 6 H2O H2O + 1/2 O2 H2O2 H2O + [O]

(R3) (R4)

Grefarea pe materialul textil (bumbac, n cazul de fa) a MCT--CD este util att n cazul protejrii materialului prin mecanismul ,,calul troian'' (Jaiswal et al., 2010) ct i pentru eliberarea lent, dac se ia n considerare mecanismul eliberrii ionilor Ag+ rezultai prin oxidarea AgNPs cu oxigenul din aer i prin aciunea

umiditii (Hebeish i colab., 2011). n al doilea caz, ciclodextrinele legate de materialul textil, fie prin intermediul unui agent de reticulare, cum ar fi acidul citric (Bajpai et al., 2010) sau prin intermediul gruprii triazinice, ca n cazul de fa, ar putea juca rolul de depozit pentru argintul sub form de Ag+ sau de AgNPs. Eliberarea argintului din produsul de incluziune ar trebui s se fac n ambele situaii

24

sub form de Ag+ (Bajpai i colab., 2010; Jaiswal i colab., 2010) i trebuie s se fac lent, pentru a menine ct mai mult proprietile antibacteriene ale materialului textil. Avnd n vedere c n orice situaie este important ca argintul s rmn ct mai mult pe materialul textil sau complexat de monoclortriazinil--ciclodextrina legat de acesta i c n cele mai multe cazuri acesta se pierde prin splare, prezena argintului pe materialul textil s-a urmrit cu ajutorul spectrelor UV-Vis efectuate prin intermediul sferei integratoare, al microscopiei electronice de baleiaj (SEM) i al spectroscopiei de raze X dispersiv de energie (EDX) iar distribuia particulelor n flota rezidual i n flotele de splare cu ajutorul tehnicii DLS (Dynamic Light Scattering). Deoarece exist posibilitatea includerii chiar a ionilor de argint (Bajpai i colab., 2010), se va studia posibilitatea includerii n ciclodextrina grefat pe bumbac a argintului sub form Ag+, comparativ cu posibila includere a acestuia n form redus (Ag0). De fapt, argintul sub form redus se gsete ca AgNPs care, din cauza dimensiunilor mari nu ncap n cavitatea ciclodextinelor i se presupune c are loc chimiosorbia AgNPs la nivelul coroanei de grupri hidroxil. n spectrul FT-IR al complexului format ntre AgNPs i ciclodextrin se remarc chiar dispariia benzii de vibraie caracteristic gruprii OH de la 3400 cm-1, ceea ce indic o deprotonare a acestei grupri (Jaiswal i colab., 2010). Elementul de noutate al acestor cercetri este complexarea argintului de ctre MCT--CD grefat pe bumbac prin intermediul gruprii triazinice, caz nentlnit n literatura de specialitate. Poate fi considerat noutate i reducerea in situ a ionilor Ag+, (fie inclui n cavitile ciclodextrinei grefate pe bumbac, fie complexai de gruparea triazinic) i obinerea AgNPs cu evitarea utilizrii agenilor de dispersare (bromur de cetil-trimetil amoniu, polivinilpirolidon etc.), procedeul fiind complet ecologic.

3.1 Analiza modului de formare a AgNPs pe estura grefat cu triazinilciclodextrin

Pentru a stabili locul unde are loc legarea ionilor de Ag+ nainte i n timpul reducerii in situ pe estura din bumbac tratat cu ciclodextrin, astfel nct particulele de Ag0 s rezulte suficient de mici ca s poat fi considerate nanoparticule, s-a efectuat reducerea (Fig. 13) pe o estur-martor (proba M2), o estur grefat cu MCT--CD (proba 10), o estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (proba CA2), estura tratat cu acizi poliaminocarboxilici (PACA), cu grad de carboxilare 25% (proba 1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% 25

(proba 4). Ultimele trei probe urmresc comportarea argintului n lipsa azotului (proba CA2) n molecula substanei cu care se grefeaz bumbacul i, respectiv, n prezena azotului sub form de amin primar sau/i secundar. Pentru probele M2, 10 i CA2, s-a utilizat estur din bumbac 100%, cu masa specific de 130 g/mp (Iaitex S.A., Romania), descleiat oxidativ i tratat alcalin cu auxiliari chimici de la firma Bezema, Elveia (Beisol DO ca agent de descleiere oxidativ, Contavan ARL ca stabilizator pentru peroxizi, Lavotan DSU ca amestec de surfactani pentru splare, emulsifiere i cltire iar pentru probele 1 i 4, s-a utilizat

estur standard din bumbac cu masa specific de 110 g/mp (Testex AG, Germania),
tratat cu polivinilamin carboxilat, obinut la DTNW Krefeld-Germania, prin amabilitatea domnului Vahid Ameri Dehabadi. Cele cinci mostre de estur, de cte 2 g fiecare, se introduc n flacoane cu volumul de 40 mL i se impregneaz cu cte 12 mL soluie de azotat de argint 0,01 M apoi se depoziteaz la ntuneric, la 50C, timp de o or; se trateaz apoi cu cte 12 mL soluie 0,01 M dextroz, la 50C, timp de o or. Se adaug apoi 12 mL soluie de hidroxid de sodiu 0,1 M i se depoziteaz nc o or la 50C. Se spal separat mostre timp de 30 min. n cte 100 ml ap distilat iar din soluiile rezultate se preleveaz cte 1 mL care se aduce la 100 mL ap distilat pentru analiza distribuiei mrimii particulelor cu ajutorul tehnicii DLS (Dynamic Light Scattering). Se repet operaia de patru ori. Soluiile reziduale de la reducere se pstreaz n acelai scop. Mostrele de estur tratate cu argint s-au analizat prin microscopia electronic de baleiaj (SEM) realizat cu microscopul Hitachi S3400N cu filament din tungsten (mostrele de estur au fost pulverizate cu aur nainte de examinare pe aparatul Emitech K500X) i spectroscopia de raze X dispersiv de energie (EDX), care s-a efectuat cu ajutorul unui detector Oxford X-Max SDD ( Oxford X-Max Silicon Drift Detector) i un software INCA (Oxford) . Reducerea argintului pe proba CA2 s-a fcut cu scopul de a stabili rolul azotului triazinic n aceast reacie. Ciclodextrina a fost legat de celuloz n alt mod dect prin utilizarea funciunii triazinice i anume prin utilizarea acidului citric, care nu conine atomi de azot. Proba CA2 s-a obinut prin imersarea esturii-martor ntr-o soluie cu coninnd 115g/L -ciclodextrin (Wacker Chemie, Germania) i 60 g/L acid citric (Kraemer&Martin, Germania) timp de cinci minute la 45C i stoarcerea pe un fulard (cu un grad de preluare de cca.100%) apoi uscare n aer liber urmat de fixare termic 26

pe o ram de uscat-termofixat timp de 10 min. la 160C. Grefarea -ciclodextrinei (HO-CD) la celuloz (Cel-OH) prin intermediul acidului citric se poate face conform reaciei (R5) sau reacia se produce ntre -ciclodextrin i acidul citric, nefiind implicat fibra celulozic, deci agentul de reticulare poate s nu realizeze legturi covalente cu fibra, cum se petrece n cazul fibrelor sintetice. Are loc doar o poliesterificare a HO-CD

i cu acidul citric, la utilizarea simultan a celor doi

reactani, rezultnd un polimer numit poliCTR-CD. Acesta interacioneaz cu fibrele formnd un film continuu, rezistent la ap fierbinte (Ghoul i colab., 2008). Cel-OH + HOOC-CH(COOH)-CH2-COOH + HO-CD

Cel-CO-CH(COOH)-CH2-CO-CD + 2 H2O

(R5)

Pentru ndeprtarea reactivilor nefixai s-au efectuat o splare cald abundent urmat de trei splri cu ap distilat. La sfrit, estura s-a uscat n aer liber. Cantitatea de substane fixate pe estur s-a determinat prin cntrirea mostrei condiionate, nainte i dup tratament i raportarea diferenei de greutate la greutatea iniial. Reducerea argintului pe probele 1 i 4 s-a fcut cu scopul de a stabili influena tipului de atomi de azot (din amin primar sau secundar) asupra formrii nanoparticulelor. Aceste probe s-au obinut prin tratarea esturii din bumbac cu polivinilamin carboxilat (PACA) cu dou grade de carboxilare diferite prin utilizarea a dou rapoarte molare ntre acidul bromacetic i polivinilamin (25% i 100%), conform reaciei (R6) (Dehabadi i colab., 2012). -[-CH(NH2)-CH2-]n- + BrCH3-COOH -[-CH(NH-CH2COOH)-CH2-]n- + HBr (R6) Reacia polivinilaminei carboxilate cu celuloza se desfoar conform schemei (R7) (Dehabadi i colab., 2012). Cel-OH + -[-CH(NH-CH2COOH)-CH2-]n-

-[-CH(NH-CH2COOCel)-CH2-]n- + H2O

(R7)

n Fig. 13 se observ diferene evidente de culoare ntre esturile care nu conin compui pe baz de azot (M2 i CA2) i cele care conin azot, fie sub form triazinic (proba 10), fie sub form de amin primar -75% i amin secundar - 25% (proba 1) sau amin secundar (proba 4). Totui, dup efectuarea n condiii identice a patru splri cu ap distilat (Fig. 14), probele M2 i CA2 difer, ceea ce ar putea conduce la ideea unei influene a gruprilor carboxilice din acidul citric, care nu a fost implicat n reacia cu celuloza i ciclodextrina, asupra reducerii argintului.

27

Figura 13. Aspectul esturilor i a flotelor de reducere a argintului la sfritul reaciei: estura-martor (proba M2), estura grefat cu MCT--CD (proba 10), estura grefat cu CD prin intermediul acidului citric (proba CA2), estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 25% (proba 1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% (proba 4)

M2

10

CA2

Figura 14. estura-martor (M2), estura grefat cu MCT--CD (10), estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (CA2), estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 25% (1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% (4), toate dup reducerea in situ a argintului i efectuarea a patru splri cu ap distilat.

28

Figura 15 reprezint spectrele UV-Vis realizate cu sfera integratoare, dup reducerea in situ a argintului i efectuarea a patru splri cu ap distilat, pentru

estura-martor, estura grefat cu MCT--CD, estura grefat cu -CD prin

intermediul acidului citric, estura tratat cu PACA cu grad de carboxilare 25% ct

i pentru estura tratat cu PACA, cu grad de carboxilare 100%. Se observ c forma

cea mai ascuit i mai simetric o are maximul de absorbie de la 439 nm aparinnd

esturii grefate cu MCT--CD. Aceasta nseamn c particulele de argint existente

pe estur au dimensiunile i distribuia dimensiunilor cele mai reduse (Guangnian i colab., 2010). Spectrul esturii negrefate (M2) din Fig. 15, are o alur foarte aplatiazat, aceasta nsemnnd formarea unor particule mari de argint, fapt confirmat

i de culoarea nchis a mostrei i de analiza DLS efectuat ulterior. Se poate face o

corelaie ntre culoarea eantioanelor din Fig. 14 i aspectul spectrelor din Fig. 15. Culoarea galben este caracteristic nanoparticulelor de argint (Ng i colab., 2008) i este datorat fenomenului de rezonana plasmonic de suprafa (El-Shishtawy i colab., 2011). Culoarea galben apare i la flotele de splare a esturilor cu coninut de AgNPs (Fig. 17 i 18). Aceste flote au fost studiate cu ajutorul aparatului Zetasizer Nano S de la Malvern Instruments (Fig. 16) care este capabil s efectueaza msuratori submicronice utilizand un procedeu numit DLS (Dynamic Light Scattering). Acest procedeu utilizeaz micarea brownian, oricum prezent la temperaturi peste 0K, i o coreleaza cu dimensiunea particuleor.

Figura 15. Spectre UV-Vis realizate cu sfera integratoare pentru estura-martor (M2), estura grefat cu MCT--CD (10), estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (CA2), estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 25% (1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% (4), toate dup reducerea in situ a argintului i efectuarea a patru splri cu ap distilat

29

Aceasta se realizeaza prin iluminarea particulelor cu lumin laser urmat de analizarea intensitii fluctuaiilor luminii imprtiate. Micarea browniana este deplasarea particulelor datorit coliziunii aleatoare cu moleculele lichidului care inconjoar particula. O trstura important pentru DLS a micrii browniene este faptul c particulele mici se mica repede, iar cele mari se mic mai ncet. Relaia dintre mrimea unei particule i viteza sa datorat micarii browniene este dat de ecuaia Stokes-Einstein. Aparatul Zetasizer Nano S msoar fluctuaiile intensitii luminii mprtiate i le utilizeaz n calcularea dimensiunii particulelor din prob. Dac sunt msurate particule mari, atunci, deoarece acestea se mic mai ncet, intensitatea luminii mprtiate variaz lent. Dac sunt msurate particule mici, care se mic foarte repede, intensitatea luminii imprtiate va fluctua repede. Msurtorile s-au fcut prin procedura standard de operare (SOP). Aceasta este un model care predefinete toate setrile msurtorii i asigur faptul c determinrile efectuate pe acelai tip de probe sunt realizate n aceleai condiii. Probele de flot rezidual de la reducerea argintului i de la splri s-au diluat cu ap distilat n raportul 1:100 cu scopul de a reduce turbiditatea.

Figura 16. Aparatul Zetasizer Nano S de la Malvern Instruments , utilizat pentru determinarea dimensiunilor nanoparticulelor prin tehnica DLS

30

Figura 17. Flotele de la prima splare pentru (de la stnga la dreapta): estura-martor (proba M2), estura grefat cu MCT--CD (proba 10), estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (proba CA2), estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 25% (proba 1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% (proba 4).

Figura 18. Flotele de splare pentru (de la stnga la dreapta): estura-martor (proba M2), estura grefat cu MCT--CD (proba 10), estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (proba CA2), estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 25% (proba 1) i estura tratat cu PACA, grad de carboxilare 100% (proba 4). Prima splare-n spate, a patra splaren fa

31

Rezultatele msurtorilor efectuate cu ajutorul aparatului Zetasizer Nano S (distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+) alturi de imagini obinute la microscopul electronic i analiza elemental pentru cele cinci experimente sunt prezentate n figurile 19, 20, 21 i 22. Presupunnd c particulele de argint din flota rezidual au aproximativ aceleai dimensiuni cu cele de pe estur, se poate observa din rezultatul msurtorii fcute prin DLS c dimensiunea medie a particulelor este de cca. 300 nm pentru

estura negrefat (Fig. 19) i cca. 10 nm pentru estura grefat cu MCT--CD i

pentru estura grefat cu -CD prin intermediul acidului citric (Fig. 20 i 21). Pentru

estura grefat cu PACA cu grad de carboxilare 25% (mostra 1), dimensiunea medie
a particulelor este de cca. 600 nm (Fig. 22), mult mai mare, cu toate c forma acestora este asemntoare celei din Fig. 20 (form cubic, semnalat n diverse lucrri (Chen

i colab., 2011; Akhavan, 2009)), n timp ce pentru estura grefat cu PACA cu grad
de carboxilare 100% (mostra 4), DLS conduce la dimensiuni medii mai mici (cca. 20 nm) dar cu o distribuie mai larg i cu forme rotunjite ale particulelor (Fig. 23). Analiza elemental indic prezena argintului att n cazul esturii-martor (2,51%) i, n cantitate mai mare, n cazul celei grefate cu MCT--CD (4,90%). Eantioanele de estur grefat cu -CD prin intermediul acidului citric i cea grefat cu PACA cu grad de carboxilare 25% nu prezint cantiti decelabile de argint, intensitatea culorii acestora fiind mai mic (fapt observabil i cu ochiul liber), pe cnd

estura grefat cu PACA cu grad de carboxilare 100% conine o cantitate crescut de

argint n comparaie cu martorul. Prezena unei cantiti mai mari de argint sub form de nanoparticule pe mostra 4 (care conine numai amin secundar) n comparaie cu mostra 1 (care conine 25% amin secundar i 75% amin primar) ar putea conduce la ideea c prezena gruprilor carboxilice suplimentare favorizeaz formarea AgNPs. Acest fapt este confirmat parial i de mostra grefat cu -CD prin intermediul acidului citric, pe care s-au format nanoparticule de argint cu dimensiunea medie de 10 nm dar n cantitate redus, nefiind decelabile prin analiza elemental EDX. ntruct nanoparticulele de Ag0 cu dimensiunile cele mai mici i mai uniforme s-au format totui n cazul mostrei grefate cu MCT--CD, se poate considera c triazinil-ciclodextrina a jucat un rol important. Literatura tiinific semnaleaz obinerea AgNPs cu ajutorul ciclodextrinelor ns acestea din urm nu sunt fixate pe material textil, avnd posibilitatea de a nconjura particulele de argint nou formate i 32

Figura 19. Analiza elemental (A), imaginea dup patru splri, mrit de 20 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C) pentru estura-martor M2 tratat cu argint

33

Figura 20. Analiza elemental (A), imaginea dup patru splri, mrit de 50 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+ (C) pentru mostra 10 grefat cu MCT--CD i tratat cu argint

34

Figura 21. Analiza elemental (A), imaginea dup patru splri, mrit de 40 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C) pentru mostra CA grefat cu -CD prin intermediul acidului citric i tratat cu argint

35

Figura 22. Analiza elemental (A), dup patru splri, mrit de 40 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C) pentru mostra 1 grefat cu PACA cu grad de carboxilare 25% i tratat cu argint

36

Figura 23. Analiza elemental pentru mostra 4, grefat cu PACA grad de carboxilare 100% i tratat cu argint (A), dup patru splri, mrit de 40 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C)

37

de a mpiedica creterea acestora (Ng i colab., 2008). n cazul de fa ns, ciclodextrina este legat covalent, prin intermediul gruprii triazinice, de materialul celulozic. Se poate lua n considerare un mecanism de protecie a nanoparticulelor de argint prin intermediul interaciunilor hidrofobe ntre cavitile ciclodextrinelor i particulele de argint, excluznd posibilitatea de includere a argintului n aceste caviti. Analiznd prin spectroscopie n UV-Vis flota rezidual de la reducerea argintului la proba grefat cu MCT--CD (Fig. 24), se constat prezena, n afar de cea a maximului de absorbie caracteristic fenomenului de rezonana plasmonic de suprafa datorat nanoparticulelor de argint la 429 nm, a unui pic la 267 nm care este foarte apropiat de maximul de absorbie al ciclodextrinei funcionalizate cu gruparea triazinic (267 nm). Existena n flot a ciclodextrinei funcionalizate poate explica protecia AgNPs prin mecanismul de mai sus i aceast existen se poate explica prin hidroliza legturii covalente formate de MCT--CD cu celuloza.

Figura 24. Spectrele UV-Vis al flotei reziduale de la reducerea argintului la proba 10 i al MCT--CD

3.2. Analiza modului de formare a AgNPs pe estura grefat cu sarea disodic a monoclortriazinei
Pentru a aprofunda mecanismul de formare i de protecie a AgNPs n cadrul reaciei de reducere in situ a ionilor Ag+, s-a efectuat reducerea conform procedeului

38

descris mai sus pe o estur din bumbac grefat cu MCT--CD (mostra 9), i o

estura grefat cu sarea disodic a monoclortriazinei (mostra T) obinut conform

reaciei (R8).

(R8)

Grefarea srii disodice a monoclortriazinei pe estura din bumbac a fost demonstrat prin intermediul spectrelor FTIR-ATR (Fig. 25) efectuate pentru estura grefat cu triazin (T), estura grefat cu MCT--CD (9) n comparaie cu esatura negrefat (M). Se observ apariia unei benzi de absorbie, caracteristic ciclului triazinic, la 1462 cm-1 att n cazul esturii grefate cu MCT--CD (9) ct i n cazul

esturii grefate cu triazin (T), band care nu apare n cazul esaturii negrefate (M)
dar apare n cazul MCT--CD deplasat spre lungimi de und mai mari (1478 cm-1).

Figura 25. Spectre FTIR-ATR pentru estura grefat cu triazin (T), estura grefat cu MCT--CD (9) n comparaie cu esatura negrefat (M); pentru orientare, s-a nserat i spectrul FTIR al MCT--CD (MCT-CD)

39

Mostrele de estur tratate cu argint (Fig. 26 i 27) s-au analizat prin intermediul spectrelor UV-Vis efectuate cu ajutorul sferei integratoare, prin microscopia electronic de baleiaj (SEM) i spectroscopia de raze X dispersiv de energie (EDX). Dup reducerea normal, ionii de argint au rmas n mare parte neredui (proba T, Fig. 26). Dup 24 de ore (proba T24), culoarea esturii a atins aproape aceeai intensitate ca la proba 9. Faptul c ionii de argint au rmas neredui la proba T dup scurgerea duratei normale de reducere se poate explica prin legarea mai puternic a acestora de atomii de azot ai triazinei grefate pe celuloz. Prin prelungirea timpului de reacie s-a reuit totui reducerea ns calitatea particulelor de Ag0 difer de cele de la proba 9, dac lum n considerare aspectul probei T24 din Fig. 27 i spectrul UV din Fig. 28, ct i imaginile SEM (Fig. 30 i 31). Spectrul esturii grefate cu MCT--CD (proba 9) indic dimensiunile mici ale particulelor i

repartizarea uniform a dimensiunilor acestora, prezentnd un pic nalt i ngust cu maximul la 439 nm, lungime de und caracteristic nanoparticulelor de argint de cca.10 nm, fapt confirmat i de rezultatul analizei fcute prin DLS (Fig. 29) pe cnd spectrele UV-Vis (Fig. 28) aferente probelor T i T24 au aspect aplatizat indicnd alt calitate a particulelor cu toate c analiza prin DLS indic aproximativ aceleai dimensiuni mici n flotele reziduale. Imaginile SEM sunt asemntoare pentru probele 9 i T (Fig. 29 i 30), ns analiza elemental nu indic prezena argintului la proba T (acesta fiind nedecelabil).

Figura 26. Reducerea in situ a argintului pe esatura grefat cu MCT--CD (proba 9), estura grefat cu triazin (proba T) i estura grefat cu triazin dup 24 h la 50C(proba T24)

40

Proba 9

Proba T

Proba T24

Figura 27. Argintul redus in situ pe esatura grefat cu MCT--CD (proba 9), estura grefat cu triazin (Proba T) i estura grefat cu triazin dup 24 h la 50C (Proba T24).

Figura 28. Spectrul UV-Vis realizat cu sfera integratoare al unei esturi grefate cu MCT-CD i tratat cu argint (9), al unei esturi grefate cu triazin (M) i spectrele esturii grefate cu triazin i tratat cu argint dup reducerea normal a argintului (T) i dup reducere timp de 24 de ore la 50C(T24)

41

Figura 29. Analiza elemental pentru proba 9 (A), mrit de 30 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C)

42

Figura 30. Analiza elemental pentru proba T (A), mrit de 30 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C)

43

Figura 31. Analiza elemental pentru proba T 24 (A), mrit de 30 de mii de ori (B) i distribuia dup numr i dup volum a dimensiunilor particulelor de argint n flota rezidual de la reducerea in situ a ionilor de Ag+(C)

44

3.3. Concluzii
Att prezena ciclodextrinei grefate pe materialul textil ct i prezena atomilor de azot din ciclul triazinic joac un rol deopotriv de important n formarea prin reducere in situ i apoi n protecia nanoparticulelor de argint. Dac se compar mostra 10 cu mostra CA2 (Fig. 14), se observ c, n ciuda faptului c amndou posed ciclodextrin grefat (prin dou procedee diferite), aspectul este foarte diferit, de aici rezultnd rolul azotului triazinic. Rolul azotului aminic n obinerea AgNPs (mostrele 1 i 4 din Fig. 14) apare diferit n funie de natura aminei (primar sau secundar) i respectiv de prezena gruprilor carboxilice suplimentare. Punerea n eviden a rolul singular al azotului triazinic s-a realizat prin al doilea experiment, la care s-a utilizat o estur din bumbac grefat cu triazin sare disodic. S-a constatat o ncetinire a procesului de reducere a ionilor de argint dar rezultatul final a fost inferior celui obinut pe proba 9 (estur grefat cu MCT--CD). De aici se poate trage concluzia c azotul triazinic joac rolul de ncetinire a reaciei de reducere iar ciclodextrina protejeaz particulele de Ag0 contra aglomerrii. Legarea argintului ionic de azotul triazinic a fost dovedita i prin titrarea poteniometric cu o soluie 0,01M de azotat de argint a unei esturi grefate cu triazin imersat n ap distilat. n cellalt compartiment s-a utilizat o soluie 0,001M de azotat de argint ca i n punte. Viteza de titrare: 0,1mL/10min. Curba de titrare (Fig. 32) permite calcularea unei constante de stabilitate a complexului format.

Figura 32. Curba de titrare poteniometric cu o soluie 0,01 M de AgNO3 a unei esturi grefate cu triazin, aflat n ap distilat

45

Considernd poriunea din curba de titrare din Fig. 32, cuprins ntre 9 i 10 ml de soluie de AgNO3 0,01 M titrat, se obin pentru Ks, pe baza relaiei (26) din Referatul nr.1, valorile din Tab. 9. Media valorilor calculate pentru Ks este 5,65102.
Tabelul 9. Potenialul electrochimic U [mV] pentru titrarea poteniometric a soluiei de ap distilat coninnd estura grefat cu triazina (V = 20 mL) cu o soluie de AgNO3 0,01 M i constanta de stabilitate Ks pentru complexul Ag+/triazin

V [ml] 9,0 9,1 9,2 9,3 9,4 9,5 9,6 9,7 9,8 9,9

U [mV] 32,9 32,9 33,1 33,4 33,7 34,1 34,5 34,8 35,1 35,4

Ks 5,615993102 5,528327102 5,519555102 5,549882102 5,580719102 5,650508102 5,720921102 5,753237102 5,786062102 5,819392102

Faptul c, dup realizarea reducerii ionilor de argint, ciclodextrina rmne disponibil pentru alte incluziuni indic faptul c AgNPs nu ptrund n interiorul cavitii acesteia. Figura 33 ilustreaz includerea prometazinei n ciclodextrina grefat pe materialul celulozic pe care s-a redus n prealabil argintul.

Figura 33. Spectrul UV-Vis al esturii negrefate cu MCT--CD i tratate cu prometazin (PM), al esturii grefate cu MCT--CD i tratate cu argint (Ag), respectiv argint i prometazin (AgPM)

46

Capitolul 4. Testarea activitii antimicrobiene a argintului

Investigaiile microbiologice au constat n testarea activitii antibacteriene a probelor, reprezentate de esturi din bumbac tratate cu Ag0 i cu Ag+ prin dou metode: metoda difuzimetric Kirby-Bauer (Wistreich, 2000) i metoda testrii cu tetrazoliu/formazan.

4.1. Metoda difuzimetric

Microorganismele utilizate pentru test au fost un coc Gram pozitiv
(Staphylococcus aureus ATCC 25923) i un bacil Gram negativ (Escherichia coli ATCC 25922) aflate n Colecia Laboratorului de Microbiologie de la Facultatea de

Biologie din Iai, Romnia. Culturile bacteriene de 18 ore s-a obinut din inoculul bacterian, care a fost standardizat conform scalei McFarland, obinndu-se 107-108 CFU/mL. Mediul de cultur utilizat (LB) a fost nsmnat cu inoculul respectiv, dup care, pe suprafaa mediului s-au aplicat discuri, cu diametrul de 1 cm, reprezentate de materialele textile, supuse unor tratamente diferite, conform Tabelului 10. Aprecierea activitii antibacteriene s-a realizat dup 24 ore de incubare la 370C, prin msurarea zonelor de inhibiie n jurul discurilor textile. S-a observat absena efectului antibacterian att n cazul esturilor negrefate cu MCD--CD, tratate cu Ag0 sau cu Ag+, ct i a corespondentelor lor splate de 10 ori, diametrele zonele de inhibiie fiind de 0 mm. De asemenea, n cazul probei martor, reprezentat de estur negrefat i netratat cu argint, nu s-a observat efect antibacterian, diametrul zonei de inhibiie fiind 0 (Figurile 34 i 35). Rezultatele testelor au demonstrat aciunea antibacterian a esturilor grefate cu MCD--CD, tratate cu Ag0 sau cu Ag+, dar i a celor splate de 10 ori. S-a evideniat o sensibilitate difereniat a celor dou microorganisme fa de esturile grefate, cu diametre ale zonelor de inhibiie ce au variat de la 8-15 mm n cazul speciei Escherichia coli ATCC 25922 i 10 -13 mm n cazul bacteriei Staphylococcus aureus ATCC 25923 (Figurile 34 i 35 i Tab. 1). n cazul ambelor microorganisme utilizate pentru test s-a constatat c efectul antibacterian a fost mai evident n cazul esturilor grefate cu MCT--CD tratate cu Ag+ fa de cele tratate cu Ag0. Meninerea aciunii antibacteriene i n urma splrii

esturilor grefate demonstreaz o bun fixare a argintului pe estura grefat.

Inhibarea difereniat a creterii i multiplicrii celor dou specii bacteriene sub aciunea probelor testate ar putea fi corelat cu compoziia i ultrastructura

47

diferit a peretelui celular la cele dou specii, care imprim un caracter hidrofil n cazul bacteriei Gram negative (Escherichia coli) i un caracter hidrofob n cazul bacteriei Gram pozitive (Staphylococcus aureus). Faptul c la esturile negrefate, tratate cu argint n cele dou stri de oxidare, nu s-a remarcat un efect antibacterian, ar putea fi consecinta ndeprtrii n mare parte a argintului la prima cltire.

Figura 34. Activitatea antibacterian a esturilor tratate cu Ag0 (a) i cu Ag+ (b) fa de Staphylococcus aureus ATTC-25923 (1, 3 - esturi negrefate cu MCT--CD; 1', 3'- esturile 1, 3, splate de 10 ori; 2, 4 - esturi grefate cu MCT--CD; 2', 4'- esturile 2, 4, splate de 10 ori; M-estura martor)

Figura 35. Activitatea antibacterian a esturilor tratate cu Ag0 (a) i cu Ag+ (b) fa de Escherichia coli ATTC-25922 (1, 3 - esturi negrefate cu MCT--CD; 1', 3'- esturile 1, 3, splate de 10 ori; 2, 4 - esturi grefate cu MCT--CD; 2', 4'- esturile 2, 4, splate de 10 ori; M-estura martor)

48

Tabelul 10. Testarea aciunii antibacteriene a esturii din bumbac tratat cu argint

Nr. probei 1 1' 2 2' 3 3' 4 4' M

Tipul probei

Diametrul zonei de inhibiie (mm) Staphylococcus Escherichia coli aureus ATCC-25922 ATCC-25923 0 0 10 11 0 0 12 13 0 0 0 8 9 0 0 15 11 0

estur negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0) estura 1, splat de 10 ori estur grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0) estura 2, splat de 10 ori estur negrefat cu MCT--CD, tratat cu azotat de argint (Ag+) estura 3, splat de 10 ori estur grefat cu MCT--CD, tratat cu azotat de argint (Ag+) estura 4, splat de 10 ori estura martor, negrefat cu MCT--CD, netratat cu argint

Totui rezultatul privind lipsa efectului antibacterian n cazul esturilor negrefate cu MCT--CD este discutabil ntruct, n cazul reducerii in situ pe estura negrefat, particulele de argint sunt vizibile cu ochiul liber chiar i n cazul mostrei splate de zece ori. Problema se pune i n cazul esturii tratate cu AgNO3 care nu a suferit tratamentul de splare repetat. De aceea s-a aplicat, pentru verificare, i o variant a acestei metode de testare. Varianta const n aplicarea discurilor de material textil pe suprafaa unei culturi bacteriene realizate n agar (1 mL cultur realizat n mediul StandardNhrmedium I fr Mikrobiologie, Carl Roth GmbH&Co.KG-Germania 25g/L n 100 mL Standard-Nhragar I fr Mikrobiologie, Carl Roth GmbH&Co.KG-Germania). Se aplic la cca. 37C peste primul strat de agar ntrit un al doilea strat de agar care conine bacteriile. S-au realizat teste privind activitatea antibacterian a esturilor din Tab. 10, utiliznd un coc Gram pozitiv (Micrococcus luteus ATCC 9341) ct i bacilul Gram negativ (Escherichia coli DSMZ 498) din cadrul DTNW Krefeld, utiliznd discuri de estur cu diametrul de 1,5 cm. Claritatea zonelor de inhibiie a fost net superioar n cazul acestui test (Fig. 36, respectiv 37). Se poate observa cu uurin c n cazul
Micrococcus luteus zonele de inhibiie sunt mai mari dect n cazul

Escherichia coli aceasta indicnd sensibilitatea mai mare la argint a cocului. In cazul

esturilor tratate cu argint din Fig. 36, se observ existena zonei de inhibiie pentru
Micrococcus luteus n toate cazurile, aceasta fiind ns mai redus la esturile

49

negrefate cu MCT--CD i n special dup splare (1i 3). De asemenea, se observ o mai bun activitate n cazul argintului ionic, care scade mult ns dup splare cnd

estura este negrefat (3, Fig. 36b).

Figura 36 . Activitatea antibacterian a esturilor tratate cu Ag0 (a) i cu Ag+ (b) fa de Micrococcus luteus ATCC 934 (1, 3 - esturi negrefate cu MCT--CD; 1', 3'- esturile 1, 3, splate de 10 ori; 2, 4 - esturi grefate cu MCT--CD; 2', 4'- esturile 2, 4, splate de 10 ori; M-estura martor) n cazul Escherichia coli (Fig. 37), efectul antibacterian cel mai puternic se

remarc la estura grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus dar i la cea tratat cu argint ionic. esturile negrefate prezint, n ambele cazuri o activitate slab, chiar inexistent la esturile splate. Rezultatele testului au fost centralizate n Tab. 11.

Figura 37. Activitatea antibacterian a esturilor tratate cu Ag0 (a) i cu Ag+ (b) fa de Escherichia coli DSMZ 498 (1, 3 - esturi negrefate cu MCT--CD; 1', 3'- esturile 1, 3, splate de 10 ori; 2, 4 - esturi grefate cu MCT--CD; 2', 4'- esturile 2, 4, splate de 10 ori; M-estura martor)

50

Tabelul 11. Testarea aciunii antibacteriene a esturii din bumbac tratat cu argint prin metoda cu agar

Nr. probei 1 1' 2 2' 3 3' 4 4' M

Diametrul zonei de inhibiie (mm) Tipul probei

Micrococcus luteus ATCC 934 Escherichia coli DSMZ 498

estur negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0) estura 1, splat de 10 ori estur grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0) estura 2, splat de 10 ori estur negrefat cu MCT--CD, tratat cu azotat de argint (Ag+) estura 3, splat de 10 ori estur grefat cu MCT--CD, tratat cu azotat de argint (Ag+) estura 4, splat de 10 ori estura martor, negrefat cu MCT--CD, netratat cu argint

19 17 23 23 22 18 23 23 0

16 0 21 21 17 0 20 20 0

ntruct aciunea antibacterian este condiionat de capacitatea de difuzie a substanei active, s-a fcut o analiz la microscopul Projectina tip 4002-Elveia (Fig. 38) privind zonelor de inhibiie i suprafeele adiacente (lng zona de inhibiie i sub

estur). Astfel, n cazul n care difuzia limiteaz activitatea antibacterian, zonele de

sub materialul textil rmn libere de colonii. n cazul n care i sub materialul textil apar colonii, proba este complet inactiv.

estur negrefat cu MCT--CD tratat cu argint redus (Ag0) prezint lng

zona de inhibiie o dezvoltare mrit a Micrococcus luteus (Fig. 40,a), rare colonii n zona de inhibiie i lipsa coloniilor sub estur (Fig. 40b i 40c) spre deosebire de

estura-martor (Fig. 39) la care apar dedesubt colonii. Dup splare, efectul
antibacterian scade astfel nct sub estur apar colonii (Fig. 41). In cazul esturii grefate, att nainte ct i dup splare zona de inhibiie i cea de sub estur rmn libere de colonii (Fig. 42 i 43).

esturile tratate cu argint ionic au un comportament asemntor cu cele

tratate cu argint redus: estura negrefat cu MCT--CD pierde din efectul antibacterian ilustrat n Fig. 44b i 44c astfel nct dup splare (Fig. 45) apar colonii iar estura grefat pstreaz efectul nealterat i dup splare (Fig. 46 i 47). n cazul Escherichia coli, se observ un comportament asemntor att pentru

estura-martor (Fig. 48) unde exist colonii, ct i pentru esturile negrefate cu

MCT--CD, tratate cu argint redus (Fig. 49 i 50) unde dup splare apar colonii,

51

respectiv grefate cu MCT--CD (Fig. 51 i 52) unde nici dup splare nu apar colonii. La fel i n cazul tratamentului cu ioni de argint, estura negrefat cu MCT--CD (Fig. 53) pierde prin splare efectul antimicrobian (Fig. 54), pe cnd cea grefat l pstreaz(Fig. 55).

Figura 38 . Microscopul Projectina

Figura 39. Colonii de Micrococcus luteus sub estura-martor

Figura 40. Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) rare colonii n zona de inhibiie (b) i absena acestora sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0)

52

Figura 41 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) rare colonii n zona de inhibiie (b) i prezena acestora sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0), dup zece splri

Figura 42 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) fr colonii n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0)

Figura 43 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) fr colonii n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus (Ag0), dup zece splri

53

Figura 44 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) fr colonii n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint

Figura 45 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) rare i mici colonii n zona de inhibiie (b) i prezena acestora sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT-CD, tratat cu ioni de argint, dup zece splri

Figura 46 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) lipsa coloniilor n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint

54

Figura 47 . Colonii de Micrococcus luteus n afara zonei de inhibiie (a) lipsa coloniilor n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint, dup zece splri

Figura 48 . Colonii de Escherichia coli sub estura-martor

Figura 49 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a) lipsa coloniilor n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus

55

Figura 50 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a), colonii dese n zona de inhibiie (b) i lipsa coloniilor sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus, dup zece splri

Figura 51 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a) lipsa coloniilor n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus

Figura 52 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a) lipsa coloniilor n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu argint redus, dup zece splri

56

Figura 53 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a) rare colonii n zona de inhibiie (b) i fr colonii sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint

Figura 54 . Colonii de Escherichia coli n imediata vecintate a esturii (a) i puine colonii sub estur (c) pentru estura negrefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint i splat de zece ori

Figura 55 . Colonii de Escherichia coli n afara zonei de inhibiie (a) fr colonii n zona de inhibiie (b) i sub estur (c) pentru estura grefat cu MCT--CD, tratat cu ioni de argint (idem pentru estura splat de zece ori)

57

4.2. Metoda testrii cu tetrazoliu/formazan(TTC)

Aceasta metod este utilizat n aceast lucrare pentru verificarea activitii antibacteriene constatate prin metoda difuzimetric. Metoda, aplicat n diverse ramuri ale biochimiei, n medicin, farmacologie etc., se bazeaz pe un sistem redox numit tetrazoliu-formazan. Reacia (R9) explic principiul de determinare a activitii hidrogenazei cu ajutorul clorurii de tetrazoliu. n prezena bacteriilor, clorura de tetrazoliu incolor este redus la formazan, care are culoare roie i indic prezena i viabilitatea bacteriilor. Absorbana formazanului la 480 nm este direct proporional cu numrul bacteriilor viabile (Seidler, 1991) .

(R9)

clorur de 2,3,5-trifenil-tetrazoliu (TTC)

1, 3,5-trifenil-formazan

Pentru realizarea acestui test se decupeaz discuri cu diametrul de 4 cm, att din estura-martor ct i din mostrele de analizat. nainte de incubare, mostrele se sterilizeaz la 110C apoi se introduc n cte 20 mL nutrient Standard-Nhrmedium I fr Mikrobiologie, Carl Roth GmbH&Co.KG-Germania (25g/L), care mai conine 50

L microorganisme (108 CFU/mL). Se realizeaz i o cultur fr estur (oarb).

Incubarea sub agitare (200 rpm) dureaz patru ore pentru Escherichia coli i cca. 20 de ore pentru Micrococcus luteus (pn la schimbarea clar a transparenei culturii oarbe). Temperatura la care s-a realizat incubarea este de 37C pentru Escherichia
coli i 30C pentru Micrococcus luteus. Dup terminarea incubrii, se preleveaz cte

1 mL din fiecare prob (inclusiv din proba-martor i din cea oarb), volume care se introduc n eprubete sterilizate coninnd cte 100 L TTC (MERK KGaA, Germania). Toate eprubetele se introduc la incubat pentru 20 min apoi se centrifugheaz la 4000 rpm timp de 3 min. Supernatantul se ndeprteaz prin decantare iar sedimentul se suspend ntr-un mL de etanol i se repet centrifugarea.

58

Pentru lichidul obinut, se msoar absorbana cu spectrofotometrul Cary 5E VARIAN, la 480 nm. La testarea viabilitii bacteriei Escherichia coli s-au obinut coloraii ale soluiei alcoolice conform Fig. 56. n prezena esturii martor netratate (0) i la cultura oarb de referin (Ref) bacteriile s-au dezvoltat asemntor. Culturile coninnd esturi tratate cu argint (1, 2, 3, 4, 1, 2, 4) nu s-au dezvoltat. estura negrefat ns, tratat cu Ag+ i splat de zece ori (3), a permis dezvoltarea bacteriilor.

Figura 56. Soluii alcoolice de formazan ale culturilor de Escherichia coli

Figura 57. Spectre UV-Vis ale soluiilor alcoolice de formazan ale culturilor de Escherichia coli

59

Considernd c proba de referin (Ref) are o dezvoltare microbian de 100% respectiv un efect antibacterian egal cu zero, rezult pentru toate probele tratate cu argint un efect antibacterian de cca. 97%, cu excepia probei 3 la care efectul antibacterian calculat este de 18,9% (Fig. 57). Explicaia acestui fenomen este c, n lipsa MCT--CD grefat pe fibra celulozic, argintul ionic este aproape complet ndeprtat de pe estur dup cele zece splri. In cazul Micrococcus luteus s-au obinut coloraii ale soluiei alcoolice conform Fig. 58. n prezena esturii netratate (0) i la cultura de referin (Ref) bacteriile s-au dezvoltat asemntor. Att n cazul esturii negrefate cu MCT--CD (1) ct i n cazul esturii grefate (2), tratate cu argint redus, bacteriile nu s-au dezvoltat (Fig. 58). esturile splate de zece ori au permis ns dezvoltarea microorganismelor numai acolo unde nu a fost grefat MCT--CD (1). La esturile tratate cu argint ionic, Micrococcus luteus s-a dezvoltat numai acolo unde estura nu a fost grefat cu MCT--CD (3 i 3).

Figura 58. Soluii alcoolice de formazan ale culturilor de Micrococcus luteus

Dac admitem c proba de referin (Ref) are o dezvoltare microbian de 100% respectiv un efect antibacterian egal cu zero , rezult pentru toate probele tratate cu argint un efect antibacterian de cca. 99,6%, cu urmtoarele excepii: proba 3 la care efectul antibacterian calculat este de 35,6% (Fig. 59), proba 3 la care efectul este de doar 10,6% i proba 1 la care efectul este de 31,1%. Ultimele dou probe sunt din estur negrefat, splat de zece ori, proba 3 fiind tratat cu argint ionic. Acesta a fost n mare parte ndeprtat la splare n cazul

esturii negrefate. Un efect antimicrobian sczut se constat ns i la proba 3, chiar

naintea celor zece spuniri. Aceasta este tot din cauza ndeprtrii uoare a argintului

60

ionic, chiar de la prima cltire, n situaia n care estura nu este grefat cu MCT-CD.

Figura 59. Spectre UV-Vis ale soluiilor alcoolice de formazan ale culturilor de Micrococcus luteus

4.3. Concluzii esturile tratate cu argint ionic au un comportament asemntor cu cele

tratate cu argint redus dar, n timp ce estura negrefat cu MCT--CD pierde din efectul antibacterian dup splare, estura grefat pstreaz efectul nealterat i dup splare.

61

BIBLIOGRAFIE Akhavan O., Silver nanocube crystals on titanium nitride buffer layer, J. Phys. D:
Appl. Phys. 42, 105305 (6pp) (2009)

Bajpai M., Gupta P., Bajpai S. K., Silver(I) Ions Loaded Cyclodextrin-Grafted-Cotton Fabric with Excellent Antimicrobial Property, Fiber. Polym. 11(1), 8-13 (2010) Chen D., Zhu G., Zhu X., Qiao X., Chen J., Controlled synthesis of monodisperse silver nanocubes via a solvothermal method, J Mater Sci: Mater Electron 22, 17881795 (2011) Dehabadi V. A., Buschmann H.-J., Gutmann J. S., Durable press finishing of cotton fabrics with polyamino carboxylic acids, Carbohydr. Polym. 89(2), 558563 (2012) El-Shishtawy R.M., Asiri A.M., Abdelwahed N.A.M., Al-Otaibi M.M., In situ production of silver nanoparticle on cotton fabric and its antimicrobial evaluation, Cellulose 18, 7582 (2011). GhoulY.E., Blanchemain N., Laurent T., Campagne C.A., Achari A.E., Roudesli S., Morcellet M., Martel B., Hildebrand H.F., Chemical, biological and microbiological evaluation of cyclodextrin finished polyamide inguinal meshes, Acta Biomaterialia 4, 13921400 (2008) Grigoriu A., Racu C., Diaconescu R., Grigoriu A.-M., Modelling of the simultaneous process of wet spinning-grafting of hemp fibres destined to medical textiles,
Ind. Textila, 61, (3), 112 (2010)

Guangnian X., Xueliang Q. , Xiaolin Q., Jianguo C., A Facile Method to Prepare Quickly Colloidal Silver Nanoparticles, Rare Metal Mater. and Eng. 39(9), 15321535 (2010) Hebeish A., El-Naggar M.E., Fouda M.M.G., Ramadan M.A., Al-Deyab S.S., ElRafie M.H., Highly effective antibacterial textiles containing green synthesized silver nanoparticles, Carbohyd. Polym. 86, 936 940 (2011) Ibrahim N.A., Abdalla W.A., El-Zairy E.M.R., Khalil H.M., Utilization Of Monochloro-Triazine

-Cyclodextrin

For

Enhancing

Printability

and

Functionality of Wool, Carbohyd. Polym., in press Ioanid A., Ioanid G., Microscopie electronic: tehnici i aplicaii n studiul materialelor polimere, Ed. Performantica, Iai, 2002

62

Jaiswal S., Duffy B., Jaiswal A. K., Stobie N., McHale P., Enhancement of the antibacterial properties of silver nanoparticles using -cyclodextrin as a capping agent, Int. J. Antimicrob. Agents 36, 280283 (2010) Ng C.H.B., Yang J., and Fan W.Y., Synthesis and Self-Assembly of One-Dimensional Sub-10 nm Ag Nanoparticles with Cyclodextrin, J. Phys. Chem. C, 112 (11), 41414145(2008) Racu C., Diaconescu R., Grigoriu A-M., Grigoriu A., Optimization of hemp yarn grafting degree for medical textiles during simultaneous wet spinninggrafting, Cell. Chem. Techn., 44(9), 365-368 (2010) Seidler E., The Tetrazolium-formazan system: design and histochemistry, Gustav Fischer Verlag, New York (1991) Wistreich G.A., Microbiology Laboratory, Pretince Hall, Upper Saddle River, New Jersey (2000).

63