SUBIECTE PENTRU EXAMEN

ANUL IV SILVICULTUR
2014
1. Caracteristicile culturilr i! "itr
S#re $ese%ire $e &ulti#licarea tra$i'i!al() u!$e se #erea*( cu se&i!'e sau #r'iu!i
&ari $e #la!t( +&arcte) %uta,i) alti-) la &ulti#licarea in vitro se .lsesc e/#la!te &ici)
$e r$i!ul &ili&etrilr sau c0iar &icrsc#ice +celule) #rt#la,ti-) e/#la!te care 1!
c!$i'ii !r&ale $e cultur( !u ar reu,i s( creasc( #u!2!$ re*iste!'( a3e!'ilr #at3e!i ,i
si!teti*2!$u4,i si!3ure su%sta!'ele !utriti"e !ecesare.
5i! acest &ti") #e!tru reu,ita culturii $e celule ,i 'esuturi se cer res#ectate ur&(tarele
c!$i'ii6
4#re#ararea u!ui &e$iu $e cre,tere care s( asi3ure %u!( !utri'ie 0etertr.( a
e/#la!tului) #ri! asi3urarea sursei $e car%! r3a!ic u,r accesi%il e/#la!telr7
4asi3urarea ,i c!trlarea .actrilr $e &e$iu +te&#eratur() lu&i!() u&i$itate- 1! li&itele
#ti&e #e!tru .iecare s#ecie) si ,i .a*( $e cre,tere) 1! .u!c'ie $e ceri!'ele acestra ,i
sc#ul ur&(rit7
4sti&ularea cre,terii ,i $i.ere!'ierii sau $e$i.ere!'ierii r3a!elr #ri! utili*area
cres#u!*(tare a su%sta!'elr sti&ulatare $e cre,tere7
4asi3urarea u!ei ase#sii $e#li!e #e tt .lu/ul $e #r$ucere a #la!telr in vitro) #ri!
$e*i!.ec'ia &aterialului "e3etal) sterili*area &e$iului ,i a "aselr $e cultur() #recu& ,i
e.ectuarea tuturr #era'iilr 1! 0ta cu .lu/ $e aer la&i!ar steril) .lsi!$ i!stru&e!tar
sterili*at #ri! .la&%are.
2. 5&e!ii $e a#licare a culturilr i! "itr
Su!t utili*ate 1! #re*e!t 1! a3ricultur() sil"icultur() .ar&acie) i!$ustria ali&e!tar() i!$ustria
u,ar() etc. 8! a3ricultur() 1! 3e!eral ,i 1! 0rticultur( 1! s#ecial) culturile $e 'esuturi ,i celule
su!t .lsite #e!tru &ulti#licarea u!r s#ecii) siuri sau cl!e "alrase) #e!tru a&elirarea
s#eciilr culti"ate) #e!tru c!ser"area 3er&#las&ei 0rticle) #e!tru %'i!erea $e &eta%li'i
secu!$ari.
9. 5i.ere!'ierea
Celulele &eriste&atice) $i"i*2!$u4se c!ti!uu) $au !a,tere la !i ,i !i celule care)
tre#tat) cresc ,i su.er( s#eciali*are &r..i*il3ic( ce #art( !u&ele $e difereniere.
8! #rcesul $e $i.ere!'iere se #ier$ caracterele citl3ice ,i .i*il3ice $e ti# e&%ri!ar
s#eci.ice celulelr &eriste&atice) e"lu2!$u4se s#re calit('i #r#rii s#eciali*(rii
.u!c'i!ale a $i.eritelr ti#uri $e 'esuturi sau r3a!e 1! alc(tuirea c(rra celulele &ature
"r i!tra. 8! #ri&ele .a*e $e $i.ere!'iere se re&arc( &$i.icare ultrastructural( ,i
.u!c'i!al( a celulelr) .e!&e! $e!u&it citodifereniere.
Pe &(sura $i.ere!'ierii) "lu&ul celulei cre,te) sca$e ra#rtul !ucle#las&atic) cit#las&a
$e"i!e #elicular( ,i #arietal() se e/ti!$e "acu&ul care 1&#i!3e cit#las&a ,i !ucleul la
#eri.eria celulei.
Plasti$&ul este c!stituit $i! clr#laste) cr&#laste sau a&il#laste) 1! .u!c'ie $e rlul
1!$e#li!it $e celule.
:$at( cu a"a!sarea #rceselr $e $i.ere!'iere #eretele celular #ate su.eri &$i.ic(ri
secu!$are $e 3e!ul $e#u!erilr $e celul*() li3!i!() &i!erali*are) 3eli.icare sau c0iar
lic0e.iere) care c!$uc tre#tat la 1!3reu!are a c&u!ic(rii i!tercelulare) i!ter"e!i!$ cu
ti&#ul u! $ecli! .i*il3ic sau c0iar &artea celulelr +$e e/e&#lu la sclere!c0i&-.
Celulele $at( $i.ere!'iate !u se &ai $i"i$. Celulele care c&#u! u! 'esut sau r3a! !u
#se$( acela,i rit& $e cre,tere ,i se a.l( su% u! #er&a!e!t e!$c!trl .it0r&!al.
Su%sta!'ele ela%rate $e celule #t $i.u*a 1!s#re celulele 1!"eci!ate e/ercit2!$ u! a!u&it
rl 1! $e*"ltarea acestra .e!&e! $e!u&it i!$uc'ie) ,i care st( la %a*a i!terrela'iilr
$i!tre 'esuturi) ce ser"esc la r3a!i*area acestra 1! .r&a'iu!i .u!c'i!ale) res#ecti" la
organogenez.
5u#( $i.ere!'iere ,i 3e!erarea $e !i celule se a;u!3e la situa'ia 1! care celulele
!e.r&ate ti!$ s( se rer3a!i*e*e structural ,i .u!c'i!al su.eri!$ cit$i.ere'iere)
0ist$i.ere!'iere) cu r3a!i*area $e 'esuturi +0ist3e!e*(-) $e r3a!e +r3a!3e!e*(- ,i 1!
.i!al re3e!erarea u!ei !i #la!te. 5i.ere!'ierea celular( in vitro !u este .arte "ariat()
u!ele .u!c'ii su!t re$use sau si&#li.icate 1! ti&# ce altele su!t a&#li.icate.
4. 5e$i.ere!'ierea celular(
5e$i.ere!'ierea c!st( 1! tra!s.r&area #r3resi"( a celulelr $i! starea $e celul(
s#eciali*at( 1! celul( &eriste&atic() rec2,ti32!$ a#titu$i!ea $e a se $i"i$e.
A#titu$i!ea celulelr e/#la!telr i!culate in vitro $e a se $e$i.ere!'ia este .arte i!e3al
r(s#2!$it( la s#ecii) r3a!e ,i 'esuturi "ariate.
<a*ele $e $e$i.ere!'iere celular( #t .i caracteri*ate ast.el6
1.#ri&a .a*a $e $e$i.ere!'iere6
4a&rsarea #rceselr $e $e$i.ere!'iere7
4#r$ucerea $e$i.ere!'ierii celulelr #2!( la $%2!$irea caracteristicilr citl3ice
s#eci.ice u!ui 'esut &eriste&atic $e ti# secu!$ar) cu celule a#lati*ate ase&(!(tare ca as#ect ,i
structur( cu ca&%iul.
2.a $ua .a*( $e $e$i.ere!'iere6
4 $e$i.ere!'ierea 1! c!ti!uare a celulelr #2!( la sta$iul $e celule cu caracter $e
&eriste& #ri&ar7
43e!erarea) $i! &eriste&ele !e.r&ate) $e #r&eriste&e sau &eriste&i*i +ce!tre
r3a!3e!e-) ri $e e&%ri!i s&atici) iar $i! acestea re3e!erarea $e #la!te7
43e!erarea) #ri! #rli.erarea celulelr $e$i.ere!'iate) a u!ui calus !er3a!i*at) structurat
&3e!. La !i"elul acestui 'esut calusal se #t a#i .r&a &eriste&i*i sau ce!tri e&%ri3e!i.
=. Re3e!erarea
Re3e!erarea este ca#acitatea r3a!is&elr "ii $e a4,i re.ace ricare #arte le4a .st $istrus(.
Pri! i!ter&e$iul te0!icilr $e culti"are in vitro a r3a!elr) 'esuturilr sau celulelr "e3etale se
e/#latea*( la &a/i& ca#acitatea re3e!erati"( a celulelr e/#la!telr) res#ecti" se #u!e 1!
"alare &a!i.estarea i!te3ral( a tti#te!'ialit('ii celulare.
Nu&(rul celulelr $i!tr4 ##ula'ie culti"at( in vitro care4,i e/#ri&( #te!'ialul
r3a!3e! sau e&%ri3e! se a.l( su% c!trlul &ai &ultr .actri.
Specia. E/ist( s#ecii la care re3e!erarea are lc 1! s#ecial #ri! r3a!3e!e*( ,i s#ecii
care re3e!erea*( #ri! e&%ri3e!e*() $ar ,i s#ecii care #t re3e!era at2t l(stari c2t ,i e&%ri!i in
vitro.
Genotipul. S4a c!statat c( !u tate siurile a#ar'i!2!$ u!ei s#ecii culti"ate au #te!'ial
re3e!erati". Ast.el) s4au e"i$e!'iat 3e!ti#uri >cultura%ile?) ce au #er&is re3e!erare u,ar( $i!
rice ti# $e 'esut) $ar ,i 3e!ti#uri recalcitra!te) la care sta%ilirea u!ui #rtcl $e re3e!erare s4a
.(cut cu &are $i.icultate ,i cu re*ultate sla%e.
Natura explantului. La u!ele s#ecii +lucer!a- tate ti#urile $e e/#la!te 3e!erea*( calus
re3e!erati". La altele 1!s( %'i!erea #la!telr in vitro este c!$i'i!at( $e utili*area a!u&itr
e/#la!te) $e e/e&#lu la 3ra&i!ee !u&ai e&%ri!ii i&aturi) i!.lresce!'ele .arte ti!ere ,i
&icrs#rii 3e!erea*( calusuri re3e!erati"e.
Vrsta explantelor. Calusurile i!i'iate $i! 'esuturi ti!ere re3e!erea*( &ult &ai %i!e
$ec2t cele #r"e!ite $i! e/#la!te &ature. 8! e&%ri3e!e*a s&atic( $irect() e/#ri&area
tti#te!'ei $e#i!$e $e sta$iul $e $e*"ltare al e/#la!telr. Su!t ca#a%ile sa #arcur3(
e&%ri3e!e*a $irect( celulele e&%ri!are) celulele e#i$er&ei 0i#ctilului) celulele !ucelei ,i
si!er3i$ele.
Al'i .actri care i!.lue!'ea*( re3e!erarea su!t6 starea .i*il3ic( a #la!tei $!r)
c&#*i'ia &e$iului $e cultur() "2rsta culturii) te&#eratura) .t#eria$a) i!te!sitatea ,i calitatea
lu&i!ii) stresul +%itic sau a%itic-.
@. Vitri.icarea sau sticl*itatea
<e!&e!ul $e "itri.icare sau sticl*itate este u! #rces $e tra!s#are!ti*are a .ru!*elr ,i
tul#i!ilr ,i a .st se&!alat la culturile $e salat( 1! ser( +Aaut0eret) 1BC0-. Se a#recia*( c() 1!
ca*ul acestui .e!&e!) 1! a!u&ite c!$i'ii +cu& ar .i e/ces $e u&i$itate-) r3a!ele aerie!e ale
#la!telr $e"i! tra!sluci$e ca c!seci!'( a i!.iltr(rii a#ei 1! s#a'iile i!tercelulare) 1!lcui!$u4se
aerul $i! ele.
D. Au/i!ele
Au/i!ele au .st $esc#erite 1! ur&a u!r e/#eri&e!te asu#ra cle#tilului la Gramineae.
Nu&ele $e au/i!e #r"i!e $i! 3recescul au/ei! E a cre,te) $eter&i!2!$ el!3area
celulelr +au/esis E cre,tere ce se re.er( 1! s#ecial la &(ri&ea celulei $ec2t la !u&(rul $e
celule-.
A. Pr#riet('ile .i*il3ice ale au/i!elr
Au/i!ele i!ter"i! 1! &ulte .e!&e!e .i*il3ice) iar ac'iu!ile lr $e#i!$ $e c!ce!tra'iilr ,i
$e i!terac'iu!ile cu al'i re3ulatri $e cre,tere. Stu$ii!$ c2te"a $i! e.ectele lr s4a #utut
c!clu*i!a c(6
4e/ercit( ac'iu!e clar( asu#ra el!3(rii celulare) aceste e.ect ur&ea*( cre,terii #lasticit('ii
#eretelui celular ,i #e!etr(rii a#ei 1! celul(. A#i re*iste!'a #eretelui sca$e ,i celula cre,te 1!
lu!3i&e7
4&$i.ic( #er&ea%ilitatea &e&%ra!ei #las&atice) ceea ce $uce la $esc(rcare $e i!i $e F
G
)
$eter&i!2!$ cre,tere a aci$it('ii res#!sa%il( $e $i&i!uarea re*iste!'ei #eretelui celular ,i
a%sr%'ie $e i!i $e H
G
7
4i!.lue!'ea*( 1! 3e!eral &eta%lis&ul celular ,i 1! #articular si!te*a ARN4ului ri%*&al
+ri%*&ii #artici#( la si!te*a #rtei!elr-7
4sti&ulea*( $i"i*iu!ea celulelr cu ri3i!e ca&%ial( +acest ti# $e ac'iu!e a $eter&i!at
i!succesele $i! #ri&ele 1!cerc(ri $e i!i'ierea a culturilr in vitro-7 Acest e.ect este $escris ca
0ist3e!ic $earece c!$uce la .r&area u!ui !u&(r $e celule ase&(!(tare) !u&ite calus7
4ac'i!ea*( asu#ra si!te*ei etile!ei 1!tr4 a!u&it( c!ce!tra'ie) etile!a i!ter"i!e 1! sc0i&% 1!
re3larea !i"elului $e au/i!( cel #u'i! la !i"elul "aselr c!$uc(tare7
4ac'i!ea*( asu#ra tr#is&ului #la!telr ,i asu#ra crela'iei $i!tre r3a!e) 1! #articular
asu#ra .e!&e!elr $e $&i!a!'( a#ical(7
4$eter&i!( 1!t2r*ierea c($erii .ru!*elr ,i a .ructelr7
B. Au/i!ele 1! #la!te
Tate #la!tele si!teti*ea*( au/i!e) si!te*( &$ulat( $e sta$iul $e $e*"ltare ale acestra.
Si!te*a au/i!elr are lc la !i"elul .ru!*elr ti!ere) a &u3urilr ,i 1! .lrile ,i .ructele ti!ere.
Au/i!ele circul( $e la "2r.ul s#re %a*a r3a!elr cu #laritate #uter!ic #r!u!'at( 1!
r3a!ele ti!ere) $ar 1! cursul tra!s#rtului lr su!t $esc&#use $e au/i!4/i$a*e) ceea ce
1!sea&!( c( au/i!ele su!t 1! c!ce!tra'ie &ai &are 1! a#r#ierea situsurilr $e si!te*(. Ast.el)
au/i!ele su!t #re*e!te 1!tr4 c!ce!tra'ie su.icie!t( 1! "2r.ul #la!telr 1! cre,tere) 1! &u3urii
.lrali sau .liari) #e!tru a asi3ura &ulti#licarea ,i el!3area celulelr.
C. Au/i!ele si!tetice
5e c2!$ au .st i$e!ti.icate au/i!ele) s4au si!teti*at c&#u,i c0i&ici si&ilari acestra) care
au 3e!erat 1! celulele "e3etale e.ecte si&ilare au/i!elr e!$3e!e) ceea ce c!.ir&( e/iste!'a
rece#trilr #e!tru au/i!e. Mai &ult) .ii!$ i!.lue!'a'i &ai #u'i! $e acti"itatea au/i!4e!*i&elr )
"r #utea a"ea u! e.ect #relu!3it 1! #la!te.
Pri!tre !u&erasele su%sta!'e .lsite) cele &ai i&#rta!te su!t6
4aci$ul.i!$lil %utiric +AIB-7
4aci$ul !a.tale! acetic +ANA E <i3.2- ,i $eri"a'ii s(i6 aci$ul !a.t/iacetic +AN:A- ,i
!a.tilacetila&i$a +NA5-7
4aci$ul 2)4 $iclr.e!/iacetic +2)4 5-.
C. Ai%ereli!ele
Ase&e!i au/i!elr) e.ectul 3i%ereli!elr a .st e"i$e!'iat 1!ai!te ca acestea s( .ie
i$e!ti.icate. Pri&ele %ser"a'ii +1B2@- au .st .(cute #e #la!te $e re* atacate $e
ciu#erc( +Giberella fujikuroi- care #re*e!tau i!ter!$uri &ult el!3ate ,i .ru!*e clrtice.
E/tractul a#s $i! ciu#erc( a #r"cat si&#t&e si&ilare la #la!tele testate) ceea ce a
c!$us la i$eea e/iste!'ei u!ei su%sta!'e res#!sa%ile $e aceste e.ecte.
Pri&a 3i%ereli!( i$e!ti.icat( a .st aci$ul 3i%erelic sau AA9 +u! c&#le/ i*lat 1! 1B9B ,i
!u&it >3i%ereli!a A?-. Aceast( #ri&( $esc#erire a .st ur&at( $e $esc#erirea altr
3i%ereli!e #2!( c2!$ 1! #la!te ,i 1! ciu#erci au .st i$e!ti.icate 1! ttal a#r/i&ati"
ci!ci*eci $e 3i%ereli!e. Ace,tia su!t t'i c&#u,i e!$3e!i. 8! #ractic() 3i%ereli!ele
.lsite su!t e/tracte #uri.icate.
Cea &ai .lsit( 3i%ereli!( este AA9 +<i3.9- ,i &ai #u'i! .lsite su!t a&estecul AA4GAAD
sau AAD. Este #si%il ca 1! ur&(trii a!i s( .ie .lsite 3i%ereli!e si!tetice) a"2!$ 1!
"e$ere c( #ri&ele 3i%ereli!e si!tetice au .st %'i!ute #ri! a!ii IC0.
A. Pr#riet('ile .i*il3ice ale 3i%ereli!elr
Pr#riet('ile .i*il3ice ce ur&ea*( a .i $escrise cres#u!$ aci$ului 3i%erelic +AA9-. Nu
tate 3i%ereli!ele au acti"itate si&ilar() u!ele su!t i!acti"e sau $ar .r&e i!ter&e$iare) ceea ce
le .ace $i.icil $e stu$iat) iar &ai &ult) !u tate #la!tele #se$( acelea,i 3i%ereli!e.
Pri!ci#alele #r#riet('i ale aci$ului 3i%erelic su!t6
4ac'i!ea*( asu#ra el!3(rii i!ter!$urilr) u!eri $eter&i!2!$ re*ultate s#ectaculase
+e/6 s4au %'i!ut #la!te $e "ar*( cu tul#i!a $e 9 &-) $ar !u asu#ra tuturr s#eciilr. 5ar u!ele
$i!tre "ariet('ile #itice ale u!r s#ecii #t ati!3e talii !r&ale 1! ur&a a#lic(rii $e AA9) 1! 3e!eral
"ariet('ile #itice !u reac'i!ea*( la e.ectul $e el!3are al aci$ului 3i%erelic. Aci$ul 3i%erelic
ac'i!ea*( ,i asu#ra #e$u!culilr .lrali) 1&#ie$ic( &aturi*area ti&#urie +cu 1= #2!( la 20 $e
*ile la Cyclamen- sau alu!3irea i!.lresce!'elr #rea $e*"ltate +e/6 la "i'ele $e "ie cu circ0i!i
$e!,i) aci$ul 3i%erelic a i!0i%at $e*"ltarea race&elr la/e-7
41! cultura in vitro 3i%ereli!ele ac'i!ea*( ,i la !i"elul &eriste&elr) care) 1! a%se!'a
acestra) #re*i!t( u! as#ect 3l%ular7
4sti&ulea*( &eta%lis&ul celular $earece .a"ri*ea*( si!te*a e!*i&elr 0i$rlitice. S4a
$"e$it c( la se&i!'ele $e r*) acu&ularea J4a&ila*ei) e!*i&( cu rl 1! tra!s.r&area
a&i$!ului 1! *a0aruri slu%ile) este $atrat( aci$ului 3i%erelic) care ac'i!ea*( $irect sau $u#(
ascierea cu u! rece#tr. Ai%ereli!ele ac'i!ea*() $e ase&e!ea) 1! #re*e!'a au/i!elr) ,i su!t
$eseri sti&ulate $e si!te*a sau i!0i%area si!te*ei au/i!4/i$a*elr7
4ac'i!ea*( asu#ra 1!.lririi) a"2!$ ca e.ect .ie i!0i%area i!$ucerii .lrale) cu& ar .i ca*ul
#&ilr .ructi.eri) sau sti&ulea*( 1!.lrirea s#eciilr ce !ecesit( te&#eraturi sc(*ute #e!tru a
1!.lri) ast.el 1!c2t 1! #re*e!'a 3i%ereli!elr aceste s#ecii 1!.lresc ,i .(r( te&#eraturi sc(*ute
+&rc"-. La alte s#ecii) ce !ecesit( $e ase&e!ea te&#eraturi sc(*ute #e!tru 1!.lrire) #re*e!'a
3i%ereli!elr i!$uce $ar alu!3irea tul#i!ii .(r( .r&area .lrilr +s.ecl(-. Aceste c!tra$ic'ii 1!
a#are!'( au e/#lica'ie si&#l(6 1! #la!tele #re*e!tate &ai sus .ri3ul ac'i!ea*( $ar asu#ra
cre,terii tul#i!ii) #e c2!$ 1! cel(lalt ca* asu#ra #rcesului $e 1!.lrire. Ast.el) 3i%ereli!ele) 1,i
e/ercit( $ar rlul $e sti&ulatri ai el!3a'iei !ei!.lue!'2!$) 1! acest ca*) #rcesele .i*il3ice
!r&ale7
4ac'i!ea*( asu#ra .r&(rii .ructelr #arte!car#ice la #(r) &a!$ari!) #ru!7
4e/ercit( ac'iu!e c&#le/( asu#ra 3er&i!(rii se&i!'elr sau #r!irii 1! "e3eta'ie a
&u3urilr $r&i!*i) atu!ci c2!$ c!$i'iile cli&aterice +te&#eraturi sc(*ute- !u #er&it acest
lucru) i!$uc2!$ ,i ra&i.icarea sau cre,terea ra&urilr la Hydrangea7
41! r3a!3e!e*() ac'iu!ea 3i%ereli!elr #ate .i a!ta3!ic(. Par a se #u!e .e!&e!ului
$e $e$i.ere!'iere) !e#ut2!$ .i .lsite in vitro 1! acest sc#) ac'i!2!$ 1!s( asu#ra &eriste&elr
a#icale sau a/ilare ,i asu#ra %ut!ilr .lrali) #ri! sti&ularea cre,terii ,i $e*"lt(rii acestra.
B. Ai%ereli!ele 1! #la!te
Ai%ereli!ele au .st $esc#erite at2t 1! #la!te c2t ,i 1! ciu#erci cu $istri%u'ie i!e3al(.
U!ele 3i%ereli!e se #t 1!t2l!i $ar 1! #la!te) altele $ar 1! ciu#erci ,i u!ele 1! a&%ele 3ru#e
+aci*ii 3i%erelici 1)9)4)D)B-. U!ele #la!te #se$( $ar u! .el $e 3i%ereli!e) 1! alte s#ecii se a.l( ,i
ac'i!ea*( &ai &ulte ti#uri $e 3i%ereli!e.
Lcurile $e si!te*( a 3i%ereli!elr se a.l( la !i"elul .ru!*elr .arte ti!ere) 1! &u3urii
.liari ,i .lrali) 1! l(starii acti"i) 1! "2r.ul r($(ci!ilr ,i 1! e&%ri!i.
Ai%ereli!ele circul( li%er #ri! #la!t( .(r( e/iste!'a u!ei #larit('i .ii!$ asciate $eseri
*a0arurilr) eli%er2!$u4se 1! situsurile 'i!t(.
B. Citc0i!i!ele
Citc0i!i!ele au .st $esc#erite 1! ti&#ul stu$iilr e.ectuate asu#ra 'esuturilr "e3etale culti"ate
in vitro. S4a $esc#erit ,i acu& este %i!e cu!scut .a#tul c( a$i'ia $e la#te $e !uc( $e ccs 1!
&e$iile arti.iciale $e cultur( are u! e.ect .a"ra%il asu#ra &ulti#lic(rii celulare ,i 1! l(st(rire.
Cercet(rile ce au 1!cercat s( $esc#ere .actrul res#!sa%il $e aceste e.ecte au $us la i*larea
u!ui c&#le/ c0i&ic acti" $e !atur( #uri!ic() care !u a #utut .i i!i'ial i$e!ti.icat. Aceste
re*ultate au $at #si%ilitatea c!ti!u(rii cercet(rilr asu#ra #uri!elr ,i 1! 1B=@) SK3 a i*lat)
$i! ARN $e!aturat) su%sta!'( acti"( !u&it( >c0i!eti!a?.
A. Pr#riet('ile .i*il3ice ale citc0i!i!elr
Citc0i!i!ele su!t .arte acti"e 1! #la!te ,i ase&e!i celrlalte $u( clase $e .it0r&!i
#re*e!tate a!terir au serie $e #r#riet('i $i!tre care6
4au u! e.ect .arte clar asu#ra $i"i*iu!ii celulare. 8! acest #rces citc0i!i!ele su!t
i!$is#e!sa%ile) $ar i!e.icie!te .(r( ac'iu!ea au/i!elr) cele $u( c&#le&e!t2!$u4se reci#rc.
Au/i!ele .a"ri*ea*( $u#licarea A5N) iar citc0i!i!ele #er&it se#ararea cr&*&ilr7
4au u! rl la .el $e i&#rta!t 1! r3a!3e!e*( sti&ul2!$ .r&area l(starilr) .ii!$ 1!s(
a!ta3!ice ri*3e!e*ei7
4e/ercit( u! e.ect $e sti&ulare a &eta%lis&ului celular) .a"ri*2!$ si!te*a #rtei!elr)
#ri! rlul ce4l ;ac( 1! c&#*i'ia ARN4ului $e tra!s.er ,i #rte;2!$ &eta%li'ii $e ac'iu!ea
e!*i&elr 0i$rlitice. Acest e.ect $eter&i!( 1!t2r*ierea se!esce!'ei #2!( la #u!ctul 1! care
.ru!*ele &ature tratate cu citc0i!i!e se c&#rt( ase&(!(tr celr ti!ere $i! #u!ct $e "e$ere
&eta%lic7
4e/ercit( u! e.ect a!ta3!ic asu#ra $&i!a!'ei a#icale sti&ul2!$ l(st(rirea a/ilar(7
Citc0i!i!ele #re*i!t( i&#rta!'( $ese%it( 1! $&e!iul culturii in vitro $earece au
#er&is %'i!erea u!r #r3rese i&#rta!te 1! &icr#r#a3area #la!telr. Pr#riet('ile
citc0i!i!elr #er&it re*l"area $i.icult('ilr e!u&erate &ai sus) cu& ar .i &e!'i!erea "ia%ilit('ii
celulelr "e3etale) sti&ularea $i"i*iu!ii celulare) rie!tarea celulelr s#re $e$i.ere!'iere.
B. Citc0i!i!ele 1! #la!te
Pri&a citc0i!i!( e!$3e!( a .st i$e!ti.icat( 1! 1B@9 1! e&%ri!i i&aturi $e #ru&%) $e
u!$e ,i !u&ele $e *eati!() ur&at( $e i*#e!te!il a$e!i!a +IPA-) $esc#erit( #u'i! &ai t2r*iu 1!
#la!te atacate $e %acteria Corynebacterium fasciens. Tate #la!tele c!'i! citc0i!i!e si!teti*ate
1! s#ecial 1! r($(ci!i ,i 1! e&%ri!i. A#licarea citc0i!i!elr #e .ru!*e $eter&i!( atra3erea
su%sta!'elr !utriti"e s#re aceste *!e $atrit( e.ectului $e sti&ulare a &eta%lis&ului e/ercitat
$e citc0i!i!e la acest !i"el. Cre,terea 1! $i&e!siu!i a tu%erculilr ,i .ructelr se $atrea*(
#re*e!'ei citc0i!i!elr e!$3e!e lcali*ate 1! aceste r3a!e.
Citc0i!i!ele se #t ascia cu *a0arurile ,i circula #ri! #la!te .(r( #laritate. Se
#resu#u!e ca ele circul( 1!tr4 .r&( i!acti"( ,i c( r(&2! lcali*ate la a!u&ite !i"ele u!$e "r .i
acti"ate ulterir) ca 1! ca*ul a#lica'iilr #e .ru!*e.
10. Selec'ia e/#la!telr 1! .u!c'ie $e sta$iul .i*il3ic ,i "2rsta #la!tei &a&(
8! .u!c'ie $e sta$iul .i*il3ic ,i "2rsta #la!tei $!r e/#la!tele #t reac'i!a $i.erit la
c!$i'iile culturii in vitro. 8! 3e!eral) #la!tele ti!ere su!t sursa cea &ai #tri"it( $e
e/#la!te) #te!'ialul $e a$a#ta%ilitate al e/#la!telr la c!$i'iile arti.iciale $e "ia'(
$i&i!u2!$u4se cu "2rsta #la!tei &a&(.
8! cursul e&%ri3e!e*ei) e&%ri!ii #t .i e/ci*a'i $i! "ul ,i i!cula'i #e &e$iul $e
cultur( $ac( se a.l( 1! sta$iul 3l%ular) #ut2!$ re#r$uce u! i!$i"i$ !r&al ,i c&#let.
Aceast( te0!ic( #re*i!t( u! i!teres sc(*ut atu!ci c2!$ se are 1! "e$ere &icr#r#a3area
+#te!'ialul 3e!etic al e&%ri!ilr este rareri cu!scut cu e/ce#'ia ca*ului strict $e
aut3a&ie-. Pe $e alt( #arte) aceast( te0!ic( #er&ite stu$ierea ceri!'elr s#eciale !ecesare
u!ui e&%ri! i*lat. 8! u!ele ca*uri) $e 1!cruci,are i!ters#eci.ic( sau i!ter3e!eric() c2!$
e&%ri!ii #t .i a"rta'i sau &r i&e$iat 1! "ul) aceast( te0!ic( #er&ite cre,terea ,i
$e*"ltarea !r&al( a acestr e&%ri!i.
Lesuturile e&%ri!are su!t u,r re3e!erati"e) $ar la u!ele s#ecii $ar $i! ctile$a!e s4au
%'i!ut re*ultate !ta%ile) ceea ce a #er&is s#eci.icarea ceri!'elr !utriti"e #e!tru cultura
'esuturilr s#eciilr stu$iate. Acesta #ate .i #ri&ul &$ $e a%r$are a culturilr in vitro
i!i'iate $i! e/#la!te %(tr2!e. 8! u!ele ca*uri aceasta este si!3ura cale cu!scut(.
5u#( 3er&i!area 1! sta$iul ;u"e!il) 'esutul #rele"at #re*i!t( u! r(s#u!s .a"ra%il in vitro
,i este sursa &ultr succese 1! $&e!iu. :$at( cu 1!ai!tarea 1! "2rst( a #la!tei $!r)
#te!'ialul $e cultur( in vitro a e/#la!telr #rele"ate $e la acesta se $i&i!uea*(. Acest
.e!&e! este s#eci.ic &ai ales #la!telr #ere!e) ,i 1! &$ $ese%it la ar%ri. La aceste
s#ecii) calitatea te0!ic( a le&!ului !u este &(sura%il() cu e/ce#'ia ar%rilr a$ul'i. 8!
acest sta$iu) ttu,i) #e!tru &ulte s#ecii) i!i'ierea culturii $ar $i! %uta,i !u &ai este
#si%il() $earece 1! sta$iul t2!(r ace,tia au ca#acitate ri*3e!ic( ri$icat(.
E/ist( $u( te0!ici ce #er&it %'i!erea $e #uie'i la s#eciile #&icle ,i ar%ricle6
4u!a ar .i utili*area l(starilr ti!eri $e la %a*a s#eciilr #&icle ,i ar%ricle. 8! acest ca*
l(starii #ar a a"ea caracteristici ;u"e!ile ,i 1!r($(ci!ea*( &ai re#e$e +$e e/e&#lu la !uc ,i
eucali#t-. La aceste s#ecii 'esuturile $e ri3i!e ale !ilr l(stari su!t 3e!etic a#r#iate $e
sta$iul ;u"e!il) #r%a%il $atrit( .a#tului c( se a.l( 1! a#r#ierea r($(ci!ilr7
4a $ua te0!ic( este a#licat( #e!tru &ulti#licarea s#eciilr #&icle ,i ar%ricle tr#icale
,i a c!i.erelr. Aceast( te0!ic( #er&ite re;u"e!ili*area ,i %'i!erea $e alti. U! alti
#rele"at $i!tr4u! ar%re sau #& este altit #e u! #rtalti crescut $i! s(&2!'(. Altiul
cre,te ,i este a#i 1!l(turat .ii!$ ulterir altit #e alt #rtalti. 5u#( &ai &ulte altiri
altiul 1!ce#e s( #re*i!te caracterele ;u"e!ile) ceea ce4l .ace a#i a#t #e!tru #r#a3are #ri!
%ut(,ire.
La culturile in vitro) s4au %ser"at .e!&e!e si&ilare la &eriste&e. Pri&a .ru!*uli'( ce se
.r&ea*( are caractere ;u"e!ile +#ri&a .ru!*uli'( a &eriste&ului la "i'( $e "ie are
caracteristici si&ilare celei $e*"ltate $i! s(&2!'() $e ase&e!ea) ,i la r0i$ee &eriste&ele
$e*"lt() 1! cultura in vitro) #rtcr& i$e!tic cu cel %'i!ut $i! s(&2!'(-. Re;u"e!ili*area
%ser"at( este $eseri %'i!ut( $i! #ri&a su%cultur() 1!s( u!eri su!t !ecesare &ai &ulte
su%culturi #e!tru a %'i!e aceste e.ect) 1! .u!c'ie $e s#ecie.
8!tarcerea la sta$iul ;u"e!il #ate .i $atrat( su#resiei $e i!.r&a'ii cit#las&atice sau
$atrit( $i&i!u(rii c!si$era%ile a acestra $eter&i!2!$ ast.el #si%ilitatea re3e!er(rii $e
!i celule. Meca!is&ele e/acte ce $eter&i!( aceste .e!&e! !u su!t 1!c( #e $e#li!
cu!scute. Se #are c( citc0i!i!ele su!t i&#licate) cel #u'i! #ar'ial) 1! acest #rces) $ar ele
!u ac'i!ea*( si!3ure.
Culti"area r3a!elr re#r$ucti"e in vitro) se #ate reali*a cu succes atu!ci c2!$ #la!tele
$!r su!t 1! sta$iul re#r$ucti". Se #are c( sc0i&%(rile ce a#ar 1! rit&ul $e .u!c'i!are
al &eriste&elr este .a"ra%il ,i $eter&i!( 1! 'esuturi u! ec0ili%ru #ti& culturii in vitro.
Se #t %'i!e culturi $i! 'esuturi #rele"ate $e la #la!te a.late 1! sta$iul $e se!esce!'() $ar
re*ultatele su!t 1! 3e!eral sla%e sau i!c&#lete.
11. Selec'ia e/#la!telr 1! .u!c'ie $e "2rsta e/#la!tului
Pr%le&ele le3ate $e "2rsta e/#la!tului a#ar la s#eciile #ere!e 1! care se #ate $isti!3e u!
sta$iu acti" ,i u!ul le!t) late!t) 1!tre care reac'iile .i*il3ice su!t $i.erite. Ast.el) #ri&ele
e/#eri&e!te) ce "i*au culti"area $e &eriste&e la #la!tele le&!ase) au e,uat atu!ci c2!$
s4a 1!cercat i!i'ierea u!ei culturi $e 'esuturi $i! &eriste&e #rele"ate $e #e ra&uri 1!
"e3eta'ie) $ar au a"ut succes atu!ci c2!$ s4a #r!it $e la &eriste&e #rele"ate $i! &u3uri
$r&i!*i.
5e4a lu!3ul u!ui ciclu a!ual) ec0ili%rul i!ter! al #la!telr se sc0i&%(. Pri&("ara r3a!ele
cresc ,i a!ali*ele rele"( #re*e!'a re3ulatrilr $e cre,tere $e ti#ul au/i!elr) 3i%ereli!elr
,i citc0i!i!elr. Vara tra!s#rtul .it0r&!ilr #ri! "asele c!$uc(tare se $i&i!uea*()
iar ta&!a se si!teti*ea*( i!0i%itrii cre,terii. 5e aceea) !u e sur#ri!*(tr .a#tul c(
e/#la!tele) #rele"ate $e la aceea,i #la!t( 1! #eria$e "ariate ale "e3eta'iei) "r $a
r(s#u!suri $i.erite c0iar $ac( "r .i #lasate #e acela,i ti# $e &e$iu.
5e aceste c!si$ere!te tre%uie s( se 'i!( sea&a atu!ci c2!$ se are 1! "e$ere
&icr#r#a3area s#eciilr le&!ase. U!ele e/#la!te au te!$i!'a $e a 1!r($(ci!a u,r
atu!ci c2!$ su!t #rele"ate 1! a!u&ite .a*e $e "e3eta'ie) 1! s#ecial $ac( su!t e/ci*ate 1!
#eria$a $e "e3eta'ie) c2!$ c!ce!tra'ia $e au/i!( este &a/i&(.
La s#eciile cu!scute $e;a ca >recalcitra!te? la cultura in vitro) #e!tru reali*area
re;u"e!ili*(rii se #ate su#u!e #la!ta &a&() #e!tru #eria$( scurt() u!ui trata&e!t cu
te&#eraturi sc(*ute) u!ui re3i& $e lu&i!( #articular sau u!ui trata&e!t cu .it0r&!i
#e!tru &$i.icarea ec0ili%rului lr i!ter! 1! "e$erea sti&ul(rii ri*3e!e*ei.
12. Selec'ia e/#la!telr 1! .u!c'ie $e a&#lasarea #la!tei $!r
5u#( $eter&i!area sta$iului ,i #eria$ei #ti&e e/#la!tele #t .i #rele"ate. 5u#( ti#ul $e
r3a!i*are a .ra3&e!tului ce ur&ea*( a .i culti"at in vitro se #t lua 1! c!si$erare $u(
ca*uri6
1.E/#la!tele ce au structur( ru$i&e!tar( sau r3a!i*at() cu& e ca*ul &u3urilr)
a#e/urilr cauli!are) &eriste&elr ,i a#e/urilr .lrale) su!t cele &ai utili*ate #e!tru
i!i'ierea u!ei culturi $e 'esuturi) $earece acestea su!t rece#ti"e ,i ri$ic( cele &ai #u'i!e
#r%le&e) 3e!er2!$ cu u,uri!'() 1! c!$i'iile u!ui &e$iu $e cultur( a$ec"at) structuri
r3a!i*ate +$e e/e&#lu) r3a!e-. 5ac( &e$iul $e cultur( !u este #tri"it #ate tul%ura
.u!c'iile e/#la!tului ,i c!$uce la $e$i.ere!'ierea celulelr) 3e!er2!$ calus.
Utili*area acestui ti# $e e/#la!te este si&ilar( u!ei &icr%ut(,iri ,i este te0!ica cel &ai
$es .lsit( atu!ci c2!$ se ur&(re,te &icr#r#a3area #e scar( lar3( a u!ei s#ecii.
I!teresa!t $e a&i!tit este .a#tul c( e/#la!tele #se$( u! .el $e &e&rie a ti#ului $e
cre,tere ce l4au #re*e!tat in vivo) acest .e!&e! .ii!$ 1! s#ecial 1!t2l!it la s#eciile
le&!ase. La &ai &ulte #la!te la care crela'iile $e cre,tere su!t #uter!ice) e/#la!tele
#r"e!ite $i! ra&uri laterale au 3e!erat #la!te cu r($(ci!i) $ar $e ti#ul lia!elr) su% .r&a
u!r #la!te culcate la #(&2!t ,i !u erecte. U!ele cercet(ri au e"i$e!'iat .a#tul c( aceast(
>&e&rie? a#ar'i!e celui &ai a#r#iat i!ter!$ $e l2!3( &eriste&.
2.E/#la!tele c!stituite $i! $i.erite ti#uri $e 'esuturi) cu& ar .i .ra3&e!te $e tul#i!()
.ru!*e) .lri ,i .ructe) c(rra) i!culate #e &e$iu $e cultur() li se i!$uce re"ersie
c&#let( cu sc#ul $e a restaura ca#acitatea celulelr $e a se $i"i$e ,i $e a4,i c2,ti3a $i!
!u ca#acitatea r3a!3e!ic(.
Pe!tru aceste e/#la!te) 1! .u!c'ie $e s#ecie) s4a $"e$it c( tate #(r'ile #la!tei su!t
ca#a%ile s( ur&e*e #rcesul $e$i.ere!'ierii c!$uc2!$ s#re !u( r3a!i*are structural(.
5ar) 1! acest ca*) $i.ere!'ele 1!tre s#ecii su!t uria,e. U!ele s#ecii) cu& ar .i "iletele $e
Par&a) su!t ca#a%ile s( re3e!ere*e $i! tate #(r'ile #la!tei +#e'il) li&%) r($(ci!i) #etale)
sta&i!e) #le!) "ule-) alte s#ecii su!t &ai recalcitra!te) cu& ar .i Actinidia sinensis) la
care re*ultate !ta%ile au .st %'i!ute $ar $i! .ra3&e!te $e tul#i!(. U!ele s#ecii su!t
ttal recalcitra!te) !ereu,i!$u4se i!i'ierea culturii $e 'esuturi $i! e/#la!tele a&i!tite) iar la
u!ele c!i.ere s4a reu,it %'i!erea $e #r#a3uli $ar $i! ctile$a!e.
8! 3e!eral) cele &ai %u!e re*ultate au .st %'i!ute) la cele &ai &ulte s#ecii) $i! .ra3&e!te
$e li&% .liar ,i tul#i!i ti!ere.
19. Selec'ia e/#la!telr 1! .u!c'ie $e &(ri&ea ,i !atura acestra
M(ri&ea e/#la!tului ce ur&ea*( a .i culti"at #re*i!t( cea &ai &are i&#rta!'(. Cu c2t
e/#la!tul este &ai &are cu at2t ec0ili%rul e!$3e!ic al acestuia este &ai $eter&i!a!t ,i
&e$iul $e cultur( "a a"ea i!.lue!'( li&itat(. 8! ca*ul e/#la!telr $e $i&e!siu!i &ici
$irec'i!area acestuia 1! se!sul $rit se .ace &ai u,r) $earece e/#la!tul este rece#ti" la
su%sta!'ele $i! &e$iul $e cultur() ,i a!u&e la re3ulatrii $e cre,tere e/iste!'i.
E/#la!tele r3a!i*ate cu#ri!$ 1! 3e!eral u! !$) u! a#e/ sau u! &u3ure +sl*ii #rtectri
su!t 1!l(tura'i-) .ii!$ u!itate su.icie!t $e c&#let( #e!tru care &e$iul "a .a"ri*a
cre,terea) sau 1! ca*ul $i.ere!'ierii a/ilare) "a %lca cre,terea a#ical(. Pe!tru &eriste&ele
ce tre%uie s( ai%( $i&e!siu!i .arte &ici) e/ist( &(ri&e &i!i&( ce c!'i!e $&ul
&eriste&atic cu $u( #ri&r$ii .liare. Su% aceast( &(ri&e su#ra"ie'uirea e/#la!tului
este .arte $i.icil( ,i #ier$erile su!t &ari) #este aceast( $i&e!siu!e) r(s#u!sul la cultura in
vitro este &ult &ai %u! ) 1!s( 1! $etri&e!tul eli&i!(rii "irusurilr.
5i&e!siu!ile e/#la!telr "aria*( 1!tre = ,i 10 &&) ceea ce cres#u!$e u!ei &a!i#ul(ri
u,are a &aterialului "e3etal) su% as#ectul e/ci*(rii sau #rele"(rii) .as!(rii ,i i!cul(rii
acestra. 5e e/e&#lu) #ri! culti"area #e acela,i &e$iu $e cultur() a &ai &ulte .ra3&e!te
$e #e'il $e Saintpaulia) $e 1)=7 97 = ,i D &&) s4a %ser"at c( $ar .ra3&e!tele $e #este 9
&& au 3e!erat #la!tule !r&ale. <ra3&e!tele $e 1)= && au 3e!erat $u( ti#uri $e
re*ultate6 u!ele e/#la!te s4au "e,te;it) iar altele au .r&at $ar r($(ci!i. <(r( 1!$ial() 1!
ulti&ul ca*) au/i!ele #re*e!te 1! &e$iu au ;ucat cel &ai i&#rta!t rl) #e c2!$ 1! ca*ul
.ra3&e!telr $e $i&e!siu!i &ai &ari au i!trat 1! ;c ,i .it0r&!ii e!$3e!i.
Se #t .as!a e/#la!te $i! $i.erite ti#uri $e 'esuturi6 e#i$er&al) crtical) #are!c0i&
&e$ular) $ar ,i r(s#u!surile "r "aria. Cel &ai re3e!erati" ti# $e 'esut este cel e#i$er&al.
Lesuturile crticale ,i ca&%iale #re*i!t( $e ase&e!ea re*ultate %u!e) $ar r(&2! $eseri 1!
sta$iul $e calus. Pare!c0i&ul &e$ular este 'esutul cel &ai #u'i! re3e!era!t) aceste 'esuturi
cer ar&!i*are #er.ect( 1!tre re3ulatrii $e cre,tere) u! e/e&#lu .ii!$ $at $e SK3) care
a .lsit &($u"( $e tutu! #e!tru a $eter&i!a rlul ec0ili%rului $i!tre au/i!e ,i citc0i!i!e.
5i! 'esuturi e#i$er&ale $e c2te"a straturi 3rsi&e a .st #si%il( rie!tarea re3e!er(rii
s#re sta$iul caul3e!ic +l(stari-) ri*3e!ic +r($(ci!i-) calus3e!ic sau re#r$ucti". Acest
e/#eri&e!t c!.ir&( i#te*a u!ei acti"it('i crescute a .it0r&!ilr asu#ra e/#la!telr
$e $i&e!siu!i re$use.
Cel &ai &ic e/#la!t este c!stituit $i!tr4 si!3ur( celul() cu& e ca*ul #rt#la,tilr i*la'i
&eca!ic sau e!*i&atic. Prt#la,tii su!t ca#a%ili $e a se $i"i$e ,i a re#r$uce #la!te) $ar
!u! su!t ca#a%ili $e i!$ucerea &eriste&elr .lrale.
14. Met$e $e i!i'iere a u!r ti#uri $e culturi $i! $i.erite e/#la!te 4 Cultura $e
r($(ci!i
Cultura $e r($(ci!i c!st( 1! cre,terea #e &e$ii ase#tice a r($(ci!ilr $eta,ate. Te0!icile
$e culti"are in vitro a r($(ci!ilr au .st reali*ate 1!c( 1! eta#a $e #i!ierat a cercet(rilr
e.ectuate 1! aceast( $irec'ie. Ast.el) M0ite a $"e$it c( r($(ci!i $eta,ate $e la #la!tule $e
t&ate #t .i culti"ate in vitro ti&# !eli&itat) #ri! su%culturi re#etate.
8! 3e!eral) se utili*ea*( r($(ci!a #ri&ar() e&%ri!ar() #rele"at( $e la #la!tulele .r&ate
#ri! 3er&i!area se&i!'elr 1! c!$i'ii ase#tice. Pri!ci#ala #r%le&( care se ri$ic() 1! acest
ca*) este aceea a reali*(rii u!ei #er.ecte sterili*(ri a se&i!'elr. S(&2!'a s(!(tas() cu
te3u&e!tele 1!tre3i) !ele*ate) are 'esuturi e&%ri!are !ei!.ectate. Se&i!'ele #t .i
$e*i!.ectate .lsi!$ a3e!'i #uter!ici $e sterili*are 1!truc2t #re*e!'a te3u&e!tului
#rte;ea*( .r&a'iu!ile e&%ri!are $e t/icitatea slu'iei $e sterili*are. Ast.el) u!
e/e&#lu $e reali*are a sterili*(rii) i*l(rii ,i culti"(rii in vitro #ate .i cel al u!ei r($(ci!i
#ri&are #rele"ate $e la #la!tul( $e &a*(re. A#r/i&ati" 20 se&i!'e $e &a*(re) cu
te3u&e!tul 1!tre3) se i!tr$uc 1!tr4u! "as Erle!&aNer) 1! a#r/i&ati" 2=0 &l alcl etilic
D0

7 se a3it( se&i!'ele) iar $u#( cca 10 secu!$e se $eca!tea*( eta!lul iar #este se&i!'e se
a$au3( slu'ie $e 0i#clrit $e calciu 10O) ti&# $e 20 &i!ute) tate #era'iu!ile
e.ectu2!$u4se 1! ca&era steril(. 5u#( cele 20 &i!ute se $eca!tea*( slu'ia $e 0i#clrit
$e calciu iar se&i!'ele se cl(tesc 1! trei re#ri*e $e a#( $istilat( steril(. 5u#( cl(tire se
1!$e#(rtea*( se&i!'ele $e"e!ite tra!sluci$e) ca ur&are a i!.iltr(rii a#ei su% te3u&e!t) iar
se&i!'ele 1!tre3i se i!culea*() tt 1! c!$i'ii sterile) 1! "ase Petri) 1! care a .st re#arti*at
u! &e$iu $e cultur( MS +Muras0i3e4SK3- si&#lu c!stituit $i! slu'ia stc $e
&acrele&e!te ,i a3ar @)=O. Se&i!'ele se i!cu%ea*( la 1!tu!eric) 1! c!$i'ii c!trlate)
ti&# $e 4C re) $u#( care) c2!$ r($(ci!i'a #la!tulei ati!3e lu!3i&ea $e a#r/i&ati" 20
&&) 1! c!$i'ii ase#tice) se $eta,ea*( "2r.ul r($(ci!i'ei +cca =410 &&- ,i se i!culea*( tt
1! "ase Petri) 142 e/#la!teP"as) #e u! &e$iu $e cultur( c!stituit $i! &acrele&e!te ,i
*a0ar*() #F4ul .ii!$ =)C +Rei!ert ,i Qe&a!) 1BC2-.
Se #ate c!stata c( &e$iul $e cultur( rec&a!$at este u!ul si&#lu li#sit $e
&icrele&e!te) "ita&i!e sau 0r&!i. Se #t utili*a ,i &e$ii &ai c&#le/e) clasice) iar ca
surs( $e car%! r3a!ic #ate .i .lsit( 3luc*a 1! lc $e *a0ar*(. Cre,terea r($(ci!ilr
in vitro are lc #e &e$ii $e cultur( lic0i$e !ea3itate. Ril!ic se #ate ur&(ri $e*"ltarea
ra$icelelr secu!$are) #ri! a#licarea su% cutia Petri a u!ei 02rtii &ili&etrice.
5e %icei) $u#( 21 *ile $e cultur( se c!stat( #la.!are a cre,terii) &&e!t 1! care se
rec&a!$( su%culti"area r($(ci!ilr) #ri! e/ci*area a#e/ului ,i tra!s.erarea lui #e &e$iu
#ras#(t. Su%cultura se #ate .ace ,i la i!ter"al $e D *ile. 5u#( a#r/i&ati" $u(
su%culturi) este #rtu!( i!tr$ucerea 1! &e$iul $e cultur( a tia&i!ei ,i a aci$ului
!icti!ic) 1! $*ele !r&ale) utili*ate #e!tru alte ti#uri $e e/#la!te.
Pri! cultura $e r($(ci!i s4a #utut cerceta e.ectul au/i!elr asu#ra celulelr ra$iculare.
Street #reci*ea*( c( au/i!a sti&ulea*( at2t cre,terea 1! lu!3i&e a .ra3&e!telr $e r($(ci!i
$e t&ate c2t ,i $i"i*iu!ea celulelr &eriste&ului a#ical. Utili*2!$ culturi $e r($(ci!i) #e
$i.erite ti#uri $e &e$ii) ca ,i c&#*i'ie ,i c!siste!'() s4a #utut sta%ili e.ectul $i.eri'ilr
.it0r&!i $e cre,tere) al ele&e!telr c0i&ice sau al u!r su%sta!'e r3a!ice) 1! .r&area
r($(ci!ilr) 1! cre,terea lr) #recu& ,i ur&(rile care!'(rii celulelr lr 1! a!u&ite
ele&e!te. Pri! e/tra#larea acestr re*ultate) s4a reu,it 1&%3('irea) a! $e a!) a
cu!,ti!'elr #ri"i!$ .u!c'i!area r($(ci!ilr ,i rlul lr 1! &eta%lis&ul 3e!eral.
5e ase&e!ea) $i! cultura $e r($(ci!i se #ate %'i!e u,r calus) &ai ales $i! cele
#ri!ci#ale sau $i! cele 1!3r,ate secu!$ar. Prcesele $e r3a!3e!e*() la !i"elul
r($(ci!ilr !etra!s.r&ate 1! calus) se re*u&( la ra&i.icarea acestra 1! ra$icele
secu!$are. Ae!e*a $e &u3ura,i ,i tul#i!i'e are lc la !i"elul 'esutului calusal) #r"e!it $i!
r($(ci!i) sau #e e/#la!te ra$iculare
1=. Te0!l3ii $e cultur( in vitro 4 Cultura $e &eriste&e
Meriste&ele su!t 'esuturi $e ti# .r&ati") cu celule ti!ere) ce4,i &e!'i!) 1! tt cursul "ie'ii
#la!telr) ca#acitatea $e a #rli.era) res#ecti" #r#rietatea $e a se $i"i$e) .r&2!$ &ereu
!i celule. Meriste&ele su!t lcali*ate 1! "2r.ul ra&i.ica'iilr r3a!elr +tul#i!i sau
r($(ci!i-) .ii!$ &eriste&e a#icale) $e ti# #ri&ar) cu rl 1! cre,terea 1! lu!3i&ea r3a!elr7
&eriste&e #ri&are 3(si& ,i 1! straturile #r.u!$e ale r($(ci!ilr ,i tul#i!ilr. La r3a!ele
ce su.er( #rcese $e &$i.icare secu!$ar( &r.4a!at&ic() 1!3r,(ri) 1!t2l!i& &eriste&e
secu!$are) res#ecti" ca&%iul ,i .el3e!ul. 5e re3ul() #ri! ter&e!ul $e cultur( $e
&eriste&e se 1!'ele3e culti"area in vitro a &eriste&elr a#icale) cauli!are.
Masi"ul $e celule care alc(tuie,te &eriste&ul a#ical se a#recia*( c( &(sar( &a/i&u&
=00 S +Mar3ara) 1BC2- sau alt.el s#us) cca 0)1 && $ia&etru ,i 0)2=40)90 && lu!3i&e
+Hart0a) 1BC1-. 8! ca*ul 1! care se $e#(,e,te aceast( $i&e!siu!e) "r%i& $es#re cultur(
$e a#e/.
Celulele &eriste&atice $e'i! caracteristici structurale #articulare) ce le c!.er( ca#acitatea
$e a se &e!'i!e 1!tr4 c!ti!u( stare $e #rli.erare) cu& ar .i6
4au #ere'ii celulari su%'iri) celul*ici) !e&$i.ica'i secu!$ar7
4su!t %3ate 1! cit#las&() au &itc!$rii !u&erase) !ucleul este &are) cu !ucleli %i!e
relie.a'i7
4"aculele su!t &ici ,i !u $e'i! &eta%li'i.
8! ra#rt cu celulele #are!c0i&atice sau cu cele #r*e!c0i&atice) celulele &eriste&atice
su!t &ici) str2!s u!ite 1!tre ele) .(r( s#a'ii i!tercelulare. Meriste&ele #ri&are au celule $e
.r&a #li3!al( iar &eriste&ele secu!$are au .r&( ta%ular(. Celulele $eri"ate $i!
&ulti#licarea &eriste&elr secu!$are au $is#*i'ie ra$ial() res#ecti" tate celulele
3e!erate $i!tr4 celul( &eriste&atic( &a&( su!t $is#use li!iar) #er#e!$icular #e celula ce
le4a $at !a,tere.
Celulele &eriste&ului a#ical) cauli!ar) su!t u!i.r&e $i! #u!ct $e "e$ere a!at&ic) $ar
ar%itrar) la a!3is#er&e) straturile $e celule c&#!e!te su!t su%1&#(r'ite 1! tu!ica ,i
cr#usul.
La &eriste&ul ra$icular #(turile celulare #re*i!t( structur( $i.erit( $e aceea $escris( la
tul#i!(.
<r&a) &(ri&ea ,i c!.r&a'ia &eriste&ului a#ical) cauli!ar "aria*( &ult la $i.eritele
s#ecii $ar) 1! &are) s4au $eli&itat trei ti#uri #ri!ci#ale structurale6 &eriste&ul
cri#t3a&elr "asculare) &eriste&ul la 3i&!s#er&e ,i &eriste&ul $e a!3is#er&e.
Meriste&ul cauli!ar ter&i!al este lcali*at 1! "2r.ul ra&urilr ,i $e re3ul() este #rte;at 1!
&u3ur. El #ate .i a#ical) a/ilar sau a$"e!ti".
Mu3urele este c!stituit $i!tr4u! a/) 1! a#e/ul c(ruia se a.l( &eriste&ul. Pri! $i"i*iu!ea
c!ti!u( a &eriste&ului re*ult( celule care) #e &(sur( ce se 1!$e#(rtea*( $e a#e/ se
$i.ere!'ia*( .u!c'i!al. Celulele e/ter!e ale &asi"ului tisular +!u&it c! $e cre,tere sau
"2r. "e3etati"- se #lia*() iar #rtu%era!'ele re*ultate c!stituie #ri&r$iile. Cu ti&#ul)
#ri&r$iile se $i.ere!'ia*( 1! #ri&r$ii .liare sau .lrale. 5e re3ul() 1! #ri&r$iile .lrale
se #r$uce cre,tere a i!te!sit('ii ratei $e &ulti#licare celular() ace,ti &u3uri $e"i! &ai
%&%a'i) &ai "lu&i!,i. Celulele $i! *!a ce!tral( se $i.ere!'ia*( 1! /ile&) .le& ,i
'esut #are!c0i&atic. Ce!tri.u3) $i!s#re ce!tru s#re #eri.eria &u3urelui) se 1!t2l!esc
#ri&r$ii tra!s.r&ate .ie 1! .ru!*uli'e) $i! ce 1! ce &ai &ari) .ie 1! %%ci) res#ecti" 1!
c&#!e!te .lrale. Mu3urii ,i %%cii au ca#acitate re3e!erati"( ri$icat() 3ra'ie .a#tului
c( $e'i! 'esuturi ti!ere) sla% $i.ere!'iate ,i celule &eriste&atice. Meriste&ele a#icale
#se$( relati"( aut!&ie) .a#t 1!c( i!su.icie!t ar3u&e!tat ,i $"e$it e/#eri&e!tal. 8!
e"lu'ia in vitro a e/#la!telr &eriste&atice) u! rl i&#rta!t 1l are sta$iul $e $e*"ltare
al #ri&r$iilr. Pri&r$iile .lrale recltate 1! .a*e #rea a"a!sate $e $e*"ltare) culti"ate
in vitro) se tra!s.r&( 1! .lare. A$eseri) .u!c'ie $e s#ecie) la !i"elul 1!"eli,urilr .lrale
se #ate i!$uce !e3e!e*a $e .r&a'iu!i &eriste&atice a$"e!ti"e.
Meriste&ele ra$iculare) .u!c'ie $e ri3i!ea lr se 1&#art 1! &ai &ulte cate3rii6
4&eriste& a#ical E situat 1! "2r.ul r($(ci!ilr7
4&eriste& lateral E .r&at #e r($(ci!a #ri!ci#al(7
4&eriste& a$"e!ti" E #r"cat 1! a se .r&a la !i"elul tul#i!ilr) .ru!*elr sau al altr
r3a!e) care 1! &$ !atural !u su!t #urt(tare $e r($(ci!i. I!$ucerea .r&(rii acestr &eriste&e
ra$iculare a$"e!ti"e c!stituie %a*a &ulti#lic(rii "e3etati"e #ri! %uta,i) &arcte sau r3a!e $e
re*er"(7
4&eriste&e !e.r&ate la !i"elul calusului) ca "arietate $e &eriste& a$"e!ti".
Meriste&ele cauli!are #t .i 1&#(r'ite ast.el6
4&eriste&e a#icale +ter&i!ale- E $eri"ate $i! &u3ura,ul e&%ri!ului7
4&eriste&e a/ilare E a.late la a/ila .ru!*elr7
4&eriste&e a$"e!ti"e E .r&ate #e $i"erse r3a!e7
4&eriste&e !e.r&ate E 3e!erate la !i"elul calusurilr culti"ate in vitro.
<r&area &eriste&elr ,i r3a!3e!e*a su!t #rcese care se #etrec tre#tat) su% c!trl
3e!etic ,i 0r&!al. <actrii $e &e$iu #t ,i ei sti&ula i!$ucerea ,i "ite*a $e $es.(,urare a
#rceselr $e r3a!3e!e*(. Fr&!ii sau re3ulatrii $e cre,tere $e si!te*( c!stituie .actri cu
rl 0t(r2tr 1! $irec'i!area #rceselr $e $i.ere!'iere a &eriste&elr) 1! &eriste&e ra$iculare
sau cauli!are. Au/i!ele i!ter"i! 1! re3larea .r&(rii &eriste&elr ra$iculare iar citc0i!i!ele 1!
!e3e!e*a $e &u3ura,i.
1@. Micr#r#a3area #la!telr 4 Cultura $e &eriste&e ,i a#e/uri
Meriste&ele cauli!are su!t .lsite 1! &$ !r&al #e!tru a .i culti"ate #e &e$ii ase#tice
in vitro.
5atrit( tti#te!'ei $e care $au $"a$( &eriste&ele cauli!are) ele "r .i ca#a%ile s(
3e!ere*e 1! .i!al #la!te 1!tre3i.
8! 3e!eral) se .lsesc #e!tru i!i'ierea $e culturi &eriste&atice) &eriste&ele ter&i!ale ,i
cele a/ilare +laterale-. Acestea su!t ca#a%ile s( 3e!ere*e in vitro #l(!tu'e care su!t .lsite
a#i #e!tru 1!&ul'irea ra#i$(.
Pri&ele 1!cerc(ri $e culti"are a &eriste&elr cauli!are ,i ra$iculare in vitro au .st .(cute
1! 1B22 $e c(tre Htte la &a*(re ,i $e c(tre R%%i!s la #ru&%. A%ia 1! 1B4@) Ball a reu,it
s( %'i!( #la!te $i! a#e/uri &eriste&atice $e Lupinus albus ,i Tropaeollum majus.
Ulterir) Met&re ,i Mrel) cita'i $e Cac0i'a4Cs&a +1BC4-) au stu$iat c&#rtarea
&eriste&elr #r"e!ite $e la $i.erite s#ecii) 1! $i.erite c!$i'ii $e cultur(.
E#ca #ti&( #e!tru #rele"area &eriste&elr "aria*( $e la ca* la ca*. 5e re3ul( se e"it(
#eria$ele $e late!'( a r3a!elr) c2!$ acti"itatea &eriste&atic( este re$us(.
La 3ara.e) cel &ai &are #rce!t $e su#ra"ie'uire l4au a"ut &eriste&ele recltate
#ri&("ara sau ta&!a $e"re&e) #e c2!$ cele recltate iar!a au 1!r($(ci!at &ai u,r) iar
cele recltate "ara au #re*e!tat cel &ai ri$icat 3ra$ $e $e"ir*are.
La cart.) &eriste&ele recltate #ri&("ara ,i "ara .r&ea*( #la!te care 1!r($(ci!ea*( &ai
%i!e $ec2t cele recltate 1! a $ua #arte a a!ului.
Prele"area &eriste&elr se .ace $u#( sterili*area #reala%il( a &aterialului "e3etal.
La s#eciile le&!ase care #re*i!t( &eriste&e #rte;ate $e cata.ilele &u3urilr) sterili*area
#ate s( se .ac( la c!ce!tra'ii &ai ri$icate ale a3e!'ilr sterili*a!'i.
Ulterir) #rele"area &eriste&elr se .ace la 0t( su% lu#( %i!cular. Se 1!l(tur( tre#tat
cata.ilele ,i #ri&r$iile .ru!*elr cu a;utrul %isturiului ,i a u!r ace s#atulate #2!( se
a;u!3e la $&ul &eriste&atic. E/ci*area acestuia se .ace #ri! u!a sau $u( t(ieturi
ur&(ri!$ $eta,area u!ei ca!tit('i c2t &ai re$use $i! 'esutul a.lat $e$esu%t.
Pe!tru u,urarea lucrului) la &u3urii "e3etati"i #r"e!i'i $e la s#eciile le&!ase 1!ai!te $e
>$e*"elirea? $&ului &eriste&atic) su% lu#() se #ate recur3e la eli&i!area #ri! #atru
t(ieturi #aralele cu &ar3i!ile &u3urilr a a#r/i&ati" =0O $i! "lu&ul acestra. T(ierea
se "a .ace a!tre!2!$ ,i scar'a a$iace!t( $e #e ra&ur( ,i 1!l(tur2!$ ast.el ,i e"e!tualele
riscuri $e i!.ec'ie.
5u#( $eta,are) &eriste&ul este a,e*at u,r $e #e la&a %isturiului #e &e$iul $e cultur(. Se
#ate #ractica) cu a;utrul "2r.ului %isturiului) u,ar( i!ci*ie 1! &asa &e$iului 1! care se
"a a,e*a &eriste&ul.
Me$iul $e cultur( .lsit este) $e re3ul() &e$iul sli$) #ut2!$u4se 1!s( .lsi ,i &e$ii
lic0i$e) &eriste&ele a,e*2!$u4se 1! acest ca*) #e #u!'i $e 02rtie $e .iltru.
<rec"e!t se rec&a!$( re$ucerea c!'i!utului $e &acrele&e!te la ;u&(tate +Sta!$ar$i)
1BC2-) iar #F4ul &e$iului "aria*( 1!tre =)= E =)C.
C!ce!tra'iile $e 0r&!i su!t re$use 0)140)= S&Pl) au/i!ele ,i citc0i!i!ele .ii!$ i!$icate
#e!tru sti&ularea $i"i*iu!ii celulare) iar 3i%ereli!ele #e!tru sti&ularea alu!3irii l(starilr.
I!te!sitatea lu&i!as( "aria*( $e la ca* la ca*) 1! 3e!eral rec&a!$2!$u4se 240042@00
luc,i) cu .t#eria$( $e 1@ re lu&i!( ,i C re 1!tu!eric. La u!ele s#ecii i!cu%area
&eriste&elr la 1!tu!eric ti&# $e c2te"a *ile +24@- are ca e.ect re$ucerea %ru!i.ic(rilr
+St(!ic( ,i cla%.) 1BB2-.
E/ist( situa'ii c2!$ i!te!sitatea lu&i!as( tre%uie s( ati!3( "alri cu#ri!se 1!tre 90004
4000 luc,i sau c0iar $e 10000 luc,i la c!i.ere. U!eri) se rec&a!$( su#li&e!tarea
lu&i!ii .luresce!te ) cu lu&i!( r,ie.
Te&#eratura #ti&( este $e 2242=

C) $ar la u!ele s#ecii +"i'a4$e "ie- i!cu%area

&eriste&elr la te&#eraturi &ai ri$icate #ate a"ea u! e.ect &ai $rastic 1! era$icarea
"irusurilr.
5u#( 1!ce#erea .r&(rii l(starilr $i! &eriste&e se trece la 1!&ul'irea acestra) .lsi!$
cel &ai a$ec"at #rce$eu 1! .u!c'ie $e s#ecie.
Ast.el) se #ate reali*a &i!i%ut(,irea l(starului #ri! sec'i!area lui 1! .ra3&e!te u!i!$ale
sau sti&ularea l(st(ririi a/ilare ,i i*larea l(starilr .r&a'i.
A"a!ta;ele .lsirii &eriste&elr su!t &ulti#le6
4#si%ilitatea 1!&ul'irii cl!ale a &aterialului %il3ic "alrs7
4eli&i!area %lilr ,i $(u!(trilr #ericul,i7
4%'i!erea u!ui &aterial ;u"e!ili*at cu ca#acitate &are $e &ulti#licare7
4c!ser"area la te&#eraturi sc(*ute a i!culir "alr,i #2!( 1! &&e!tul .lsirii7
4#si%ilitatea reali*(rii %(!cilr $e 3e!e.
Cultura de apexuri
Pe l2!3( .lsirea &eriste&elr ) i!i'ierea culturilr in vitro se #ate reali*a #ri! .lsirea
u!r a#e/uri $e l(stari. V2r.ul $e cre,tere al l(starului) 1!s'it $e 142 .ru!*e 1! .r&are)
este $eta,at $u#( #reala%il( sterili*are ,i i!culat #e &e$iul $e cultur(. Cel &ai %u!
&&e!t #e!tru i!culare este #eria$a $e cre,tere i!te!s( a l(starilr.
L(starii #t #r"e!i $e la #la!te culti"ate 1! c2&# sau 1! ser(. 8! aceste ca*uri 1!s( 3ra$ul
$e i!.ectare a &aterialului este ri$icat.
: slu'ie &ult &ai #ractic( este %'i!erea l(starilr 1! la%ratr #ri! #u!erea la .r'are a
u!r ra&uri a!uale. 8! acest sc#) ra&urile se .as!ea*( 1! %uta,i $e 1041= c&) se
#ara.i!ea*( la "2r. ,i e"e!tual se $e*i!.ectea*( #ri! 1&%(iere 1!tr4 slu'ie $e .u!3ici$e.
Se #u! a#i 1! "ase cu a#( la te&#eratur( ri$icat() 1! ca&era $e cre,tere) ur&2!$ ca 1! 104
14 *ile &u3urii s( se $esc0i$( ,i s( .r&e*e l(starii care "r .i .lsi'i #e!tru #rele"area
a#e/urilr.
8! ta%elele 11.1 ,i 11.2 su!t #re*e!tate c2te"a $i! reali*(rile %'i!ute #ri! cultura $e
&eriste&e ,i a#e/uri la #la!tele 0rticle le&!ase) #&i ,i ar%u,ti .ructi.eri) ar%ri ,i
ar%u,ti r!a&e!tali. Su!t i!$icate at2t &e$iile $e cultur( .lsite) c2t ,i re*ultatul
cercet(rilr.
1D. Micr#r#a3area #la!telr 4 Cultura $e .ra3&e!te u!i!$ale
Met$a c!st( 1! sec'i!area l(starilr crescu'i in vitro 1! #r'iu!i u!i!$ale ur&at( $e
culti"area acestra #e u! !u &e$iu $e cultur(.
5i! &u3urii a/ilari "r lua !a,tere !i l(stari care $u#( a!u&it( #eria$( $e ti&# "r .i
sec'i!a'i $i! !u.
Pri&ele e/#erie!'e #ri"i!$ cultura $e .ra3&e!te u!i!$ale) %'i!erea $e l(stari ,i
1!r($(ci!area acestra au .st e.ectuate $e Aalst! +1B4D) 1B4C- ,i Arter +1B@=- la as#ara3us.
Pe!tru reali*area acestei te0!ici se #t .lsi ca e/#la!te i!i'iale &eriste&e) "2r.uri $e
l(stari +a#e/uri-) &u3uri a.la'i la su%siara %racteelr la u!ele ti#uri $e i!.lresce!'e) #recu& ,i
alte r3a!e ca#a%ile s( 3e!ere*e l(stari in vitro.
5e re3ul() 1! &e$iul $e cultur() !u se a$au3( citc0i!i!e care s( a!ule*e e.ectul
$&i!a!'ei a#icale. Se ur&(re,te $e .a#t) alu!3irea l(starilr #e!tru a %'i!e u! !u&(r c2t &ai
&are $e !$uri.
I!i'ierea culturii este .arte i&#rta!t(. 8! "e$erea sta%ili*(rii tre%uie reali*at(
;u"e!ili*area &aterialului i!i'ial.
La s#eciile le&!ase u! alt as#ect i&#rta!t 1l re#re*i!t( !ecesitatea 1!treru#erii
$r&a!sului &u3urilr $u#( i!culare. Acest lucru este #si%il #ri! trata&e!te cu te&#eraturi
sc(*ute +04=

C-) &(rirea $uratei #eria$ei $e ilu&i!are +1@ 0-) asciat( cu te&#eraturi sc(*ute)
ur&at( a#i $e cre,terea te&#eraturii.
U!eri se rec&a!$( cre,terea c!ce!tra'iei $e citc0i!i!e ,i 3i%ereli!e.
La s#eciile er%acee) $r&a!sul se #ate 1!treru#e #ri! etilarea &aterialului.
Rata &ulti#lic(rii este $irect #r#r'i!al( cu "ite*a $e cre,tere a l(starilr) res#ecti" cu
!u&(rul $e .ru!*e care se .r&ea*(.
5e re3ul() l(starii .r&a'i $i! a#e/uri cresc ,i se alu!3esc &ai ra#i$ $ec2t cei .r&a'i $i!
&u3uri a/ilari. 5e aceea) ei su!t trecu'i 1! "ase $e cultur( se#arate.
<lsirea &e$iului $e cultur( 1! $u%lu strat +sli$ ,i lic0i$- a a"ut ca e.ect acce!tuarea
"ite*ei $e cre,tere a l(starilr $e 3utui BA42B +St(!ic( <. ,i cla%.) 1BB@-.
5e ase&e!ea) .lsirea a#ei structurate) ,i a u!r 3lic4steri*i !aturali +Ecsti&- a
sti&ulat cre,terea l(starilr $e &(r +S("ulescu A!ca ,i St(!ic( <.) 1BB@-.
La liliac +Syringa vulgaris-) sti&ularea cre,terii l(starilr este #si%il( #ri! .lsirea
*eati!ei sau a 2IP +PieriK ,i cla%.) 1BC@-.
La Araucaria cunningammii +Mtt) 1BC1-) la reali*area re3e!er(rii) #t .i .lsi'i !u&ai
l(stari rttr#i. La ca.ea) 1! sc0i&% are lc tra!s.r&are a l(starilr #la3itr#i 1! rttr#i
+PieriK) 1BCD-.
Met$a $e .a'( se .lse,te cu succes la .arte &ulte s#ecii +"i'(4$e4"ie) #(r) tra!$a.ir)
ie$er() salcie #letas(-) +ta%elele 11.9 ,i 11.4-.
5u#( &ai &ulte cicluri $e &ulti#licare este !ecesar( i!$ucerea 1!r($(ci!(rii l(starilr
%'i!u'i. Acest lucru este reali*a%il #ri! .lsirea u!r trata&e!te cu au/i!e c&%i!ate sau !u cu
i!cu%area la 1!tu!eric.
8! .a*a $e alu!3ire a r($(ci!ilr) c!ce!tra'ia $e au/i!e tre%uie re$us(.
1C. Micr#r#a3area #la!telr 4 Cultura $e l(stari a/ilari
Aceast( &et$( #resu#u!e) s#re $ese%ire $e cultura $e .ra3&e!te u!i!$ale) sti&ularea
cre,terii l(starilr a/ilari #ri! cre,terea c!ce!tra'iei $e citc0i!i!e) .(r( sti&ularea
alu!3irii l(starului &a&(.
Cre,terea c!ce!tra'iei $e citc0i!i!e are ca e.ect eli&i!area $&i!a!'ei a#icale a
&u3urelui. Acest lucru este #si%il ,i #ri! eli&i!area a#e/ului l(starului i!i'ial.
Pri!ci#iile acestei &et$e su!t cu!scute 1!c( $i! 1B2=. Ea a .st a#licat( #e!tru #ri&a
$at( $e c(tre FacKett ,i A!$ers! +1B@D- la 3ara.e) $e c(tre A$a&s +1BD2- ,i B/us
+1BD9) 1BD4- la c(#,u! ,i $e PieriK +1BD9) 1BD4) 1BD=- ,i Muras0i3e +1BD4- la 3er%era.
5u#( $esc#erirea c0i!eti!ei) eli&i!area $&i!a!'ei a#icale a .st #si%il( #ri! .lsirea
acesteia) iar ulterir #ri! utili*area altr citc0i!i!e.
<rec"e!t) aceast( &et$( $e &icr#r#a3are este .lsit( 1! ta!$e& cu cultura $e
.ra3&e!te u!i!$ale. Ast.el) 1! #ri&a eta#( $i!tr4u! e/#la!t u!i!$al se %'i!e u! l(star)
a#i acest l(star este trecut #e u! &e$iu cu u! c!'i!ut ri$icat 1! citc0i!i!e ,i este
sti&ulat( .r&area l(starilr a/ilari.
Cultura $e l(stari a/ilari are serie $e a"a!ta;e6
4este si&#l(7
4rata $e &ulti#licare este relati" ri$icat(7
4sta%ilitatea 3e!etic( este asi3urat(7
4este u!ica &et$( $e &ulti#licare in vitro e.icie!t( la #la!tele care cresc 1! r*et( +e/6
c(#,u!-.
Necesarul $e citc0i!i!e este $i.erit 1! .u!c'ie $e s#ecie. La &ulte s#ecii s4a %ser"at
sc($erea !ecesarului $e citc0i!i!e $at( cu cre,terea !u&(rului $e su%culturi $atrit(
acu&ul(rii acestra $ar) &ai ales $atrit( ;u"e!ili*(rii l(starilr.
C!ce!tra'ia citc0i!i!elr tre%uie crelat( ,i cu sta$iul $e $e*"ltare al &aterialului
%il3ic. Ast.el) &aterialul ;u"e!il !ecesit( ca!titate &ai re$us( $e citc0i!i!e 1! &e$iul
$e cultur( $ec2t cel #r"e!it $e la #la!te a$ulte +Se!uoia sempervirens" 5a"i$) 1BC2-.
<rec"e!t se rec&a!$( s( se .lseasc( &e$ii cu c!ce!tra'ii sc(*ute $e au/i!e ,i
c!ce!tra'ii ri$icate $e citc0i!i!e. Ra#rtul citc0i!i!e6au/i!e cel &ai rec&a!$at este
$e 1061.
<elul citc0i!i!elr .lsite este ,i el i&#rta!t. Cele &ai &ulte s#ecii reac'i!ea*( %i!e la
utili*area BAP +%e!*il a&i!#uri!(- ,i &ai #u'i! %i!e la c0i!eti!( sau 24iP.
Ti$ia*ur!ul ,i c&#u,ii $e su%stitu'ie ai #iri$il4.e!il4ureei sti&ulea*() u!eri) &ai &ult
l(st(rirea a/ilar( $ec2t citc0i!i!ele +Rea$ ,i cla%.) 1BC@-.
8! &ulte situa'ii se rec&a!$( $istru3erea &u3urelui a#ical ,i ascierea acestei &(suri cu
a#licarea citc0i!i!elr. Pe!tru cre,terea e.icie!'ei &et$ei) citc0i!i!ele tre%uie a#licate
$u#( ce l(starul s4a alu!3it.
Cre,terea c!ce!tra'iei $e citc0i!i!e a$uce) u!eri) .r&area calusului) ceea ce tre%uie
e"itat #e!tru a re$uce #r%a%ilitatea a#ari'iei "aria%ilit('ii s&acl!ale.
La u!ele s#ecii +Ananas-) .r&area l(starilr este u!eri sti&ulat( $e .lsirea &e$iului $e
cultur( lic0i$.
5e re3ul() ca#acitatea $e #rli.erare sca$e $at( cu cre,terea !u&(rului $e su%culturi)
acest .e!&e! .ii!$ .rec"e!t 1!s'it ,i $e .r&area calusului.
Ast.el) la c(#,u!) $e e/e&#lu) $e#(,irea u!ui !u&(r $e 12 su%culturi a a"ut ca e.ect
a#ari'ia u!r &$i.ic(ri .i*il3ice &a;re.
Met$a l(st(ririi a/ilare #ate .i .lsit( at2t #e!tru #la!tele care cresc 1! r*et( c2t ,i
#e!tru #la!tele care .r&ea*( l(stari !r&ali.
M(rirea c!ce!tra'iei $e citc0i!i!e $i! &e$iul $e cultur() 1! "e$erea sti&ul(rii l(st(ririi
a/ilare) #ate a"ea ca e.ect a#ari'ia .e!&e!ului $e >tu.(?) .e!&e! care #ate c!ti!ua ,i
$u#( su%culti"area e/#la!telr #e &e$ii li#site $e citc0i!i!e 1! "e$erea alu!3irii sau
1!r($(ci!(rii.
8! #re*e!t) &et$a este &ult .lsit( la &icr#r#a3area &aterialului s($itr #&icl) 1!
&ulte '(ri .ii!$ 3e!erali*at( +Italia) <ra!'a) A!3lia-.
1B. Micr#r#a3area #la!telr 4 :r3a!3e!e*a a$"e!ti"(
:r3a!ele ,i 'esuturile culti"ate in vitro 1! a!u&ite c!$i'ii au ca#acitatea $e a $i.ere!'ia
ce!tri &eriste&atici care ulterir $au !a,tere la l(stari sau r($(ci!i) iar u!eri la structuri
$e ti# e&%rii$.
<r&area a$"e!ti"( a l(starilr ,i r($(ci!ilr #art( $e!u&irea $e r3a!3e!e*(. Aceasta
#ate .i $e $u( .eluri6 $irect( sau i!$irect() $u#( cu& r3a!ele res#ecti"e se .r&ea*(
$irect $i! e/#la!tele i!culate sau se trece #ri!tr4 .a*( i!ter&e$iar( $e calus.
8! 3e!eral) .actrii care i!.lue!'ea*( #*iti" r3a!3e!e*a ,i .r&area l(starilr a$"e!ti"i
su!t !u&er,i6
4#la!tele ;u"e!ile au ca#acitate r3a!3e!etic( ri$icat(7 la 3i&!s#er&e re3e!erarea $e
l(stari a$"e!ti"i este #si%il( $ar .lsi!$ e&%ri!i) #uie'i ti!eri sau #(r'i ale acestra
+5a"i$) 1BC2-7
4*a0arurile sti&ulea*( r3a!3e!e*a $irect( cu .r&area $e l(stari7
43i%ereli!ele ,i aci$ul a%scisic i!0i%( r3a!3e!e*a7
4lu&i!a sti&ulea*() 1! 3e!eral) #rcesul $e r3a!3e!e*(.
E/ist( ,i serie $e s#ecii care !ecesit( #eria$( $e 1!tu!eric.
20. Cric!ser"area
C!ser"area #e ter&e! lu!3) la te&#eraturi sc(*ute sau cric!ser"area) a .st #si%il(
#ri! #er.ec'i!area #rce$eelr $e %'i!ere a te&#eraturilr sc(*ute ,i &e!'i!erea lr 1!
ti&# .(r( $i.icult('i. <lsirea te&#eraturilr sc(*ute) !e3ati"e 1! #(strarea &aterialului
"e3etal este $estul $e "ec0e) $ar $esc#eririle 1! $&e!iu $i! ulti&ii =0 $e a!i) $at( cu
i!tr$ucerea cri#rtectrilr) a $at certitu$i!e 1! #si%ilitatea utili*(rii &aterialului
c!3elat. Precu#(rile actuale su!t le3ate $e #(strarea i!te3rit('ii .u!c'i!ale $u#(
#eria$a $e #(strare. Tre%uie .(cute stu$ii .u!$a&e!tale #e!tru 1!'ele3erea ,i c!trlarea
#rceselr ce au lc la !i"el celular 1! ti&#ul cric!ser"(rii. Pri! sc($erea te&#eraturii
su% #u!ctul $e 1!30e') se .r&ea*( cristale $e 30ea'( 1! celule) care 1! .u!c'ie $e &(ri&e
a.ectea*( &ai &ult sau &ai #u'i! i!te3ritatea celulei #ut2!$ #r"ca &artea lr.
Pe!tru e"itarea .r&(rii cristalelr &ari se .lsesc trei &et$e $e re$ucere a te&#eraturii6
41!30e'are le!t() 1! care sc($erea te&#eraturii are lc cu 0)1410

CP&i!.7
41!30e'are ra#i$() 1! care sc($erea te&#eraturii are lc cu =04120

CP&i!.7
4c&%i!at() &et$( care #re"e$e sc($erea le!t( a te&#eraturii #2!( la 420

C $u#( care
te&#eratura se re$uce %rusc #2!( la 41B@

C) 1! a*t lic0i$.
Pe!tru cric!ser"are) te&#eratura $e stcare este cu#ri!s( 1!tre 4D0 ,i 41B@

C ,i $i.er( 1!
.u!c'ie $e $urata $e c!ser"are. Pe!tru c!ser"are $e $urat() te&#eratura este $e
41B@

C +te&#eratura a*tului lic0i$-) #e!tru c!ser"area #e ti&# &e$iu te&#eratura este

$e a#r/i&ati" 4D0

C) iar #e!tru c!ser"area #e ti&# scurt) $e c2te"a *ile) te&#eratura

este #*iti"() cu#ri!s( 1!tre 14B

C. E.ectul te&#eraturii asu#ra e/#la!telr $e#i!$e $e

starea .i*il3ic( a #la!tei $!r) $e 3e!ti# $ar ,i $e c!$i'iile $e &e$iu.
Cric!ser"area &aterialului %il3ic in vitro are serie $e a"a!ta;e6
4!ecesit( s#a'iu &ic $e $e#*itare7
4#ate .i ric2!$ $e*30e'at ,i .lsit ca &aterial i!i'ial #e!tru &icr#r#a3are7
4$atrit( st(rii lui 1! #eria$a $e c!ser"are) !u e/ist( riscul i!.est(rii cu a3e!'i #at3e!i7
4se #ate c!ser"a ti&# !eli&itat7
4se #(strea*( !ealterat( *estrea ere$itar(.
Pe!tru e"itarea #ier$erilr $e &aterial %il3ic) care #t sur"e!i la 1!30e'area ,i
$e*30e'area lui) se .lsesc su%sta!'ele cri#rtectare. Acestea &ic,rea*( !u&(rul ,i
&(ri&ea cristalelr $e a#() $i&i!uea*( e.ectul !e3ati" #r$us $e c!ce!trarea sucului
e!$ ,i e/tracelular) ec0ili%rea*( .r&area 30e'ii $e a&%ele #(r'i ale &e&%ra!ei ,i
#eretelui celular) $eter&i!( #ier$ere a a#ei $i! celule a!terir 1!30e'(rii #ri! &(rirea
#er&ea%ilit('ii celulare.
8!30e'area ra#i$( 1! a*t lic0i$ .(r( utili*area cri#rtectrilr #r"ac( $au!e &ari
celulelr) care $e re3ul( &r. Ca su%sta!'e cri#rtectare se .lsesc cele care au
#te!'ial s&tic &ai &are) su!t u,r slu%ile) !u su!t t/ice ,i #(tru!$ u,r 1! celule.
Ast.el $e su%sta!'e su!t ur&(tarele6 3licerlul) etil 3liclul) $ietil 3liclul)
$i&etilsul./i$ul +5MS:-) acestea .ii!$ cu e.icie!'( &a/i&(. Se &ai .lsesc) $ar cu
e.icie!'( &ai re$us(6 3luc*a) &a!*a) ri%*a) aceta&i$a +Ci!alt ,i Tlar) 1BD1-.
Pretrata&e!tul sau c!$i'i!area &aterialului %il3ic a#licat 1!ai!te $e cric!ser"are
#resu#u!e #arcur3erea a $u( eta#e6
4#recultura) ti&# $e c2te"a re #2!( la c2te"a *ile) 1! &e$iu 1&%3('it cu &a!itl) #rli!(
sau sr%itl7
4i&#re3!area) la 0

C) 1! &e$iul $e #recultur( a$i'i!at tre#tat cu slu'ii $e 5MS: sau

3licerl sau cu c&%i!a'ie a acestra7
5u#( a#licarea acestui #retrata&e!t se trece la c!3elare) eta#( care se #ate #arcur3e 1!
$u( &$uri6
4tre#tat ,i #r3ra&at) 0)=

CP&i!. #2!( la E 40

C7
4#ri! sc($erea ra#i$() 1!tr4u! i!ter"al scurt $e ti&#) a te&#eraturii 1! i!ci!ta 1! care su!t
#lasate .ilele.
C!3elarea #2!( la 440

C are ca e.ect $es0i$ratarea #ar'ial( a celulelr) ca ur&are a

$i.ere!'ei $i!tre #te!'ialele c0i&ice ale 30e'ii e/tracelulare) #e $e4 #arte ,i lic0i$elr
celulare #e $e alt( #arte. 8! .u!c'ie $e te&#eratura $e c!3elare) se sta%ile,te u! ec0ili%ru.
:$at( ati!s( te&#eratura $e c!3elare) #r%ele se #lasea*( 1! a*t lic0i$. 8! &&e!tul
c!3el(rii 1! a*t lic0i$) 1! celule se .r&ea*( cristale &i!uscule $e 30ea'() care !u #t .i
$ecelate $ec2t cu ra*e X.
C!ser"area se .ace 1! reci#ie!te s#eciale 1! care #t .i stcate &ai &ulte sute $e .ile.
Clec'iile se &e!'i! ti&# 1!$elu!3at) "eri.ic2!$u4se #eri$ic !i"elul a*tului lic0i$.
5e*30e'area
Pri! $e*30e'are e/#la!tele su!t rea$use 1! .a*a $e $i!ai!tea c!ser"(rii) cu #si%ilitatea $e
a c!ti!ua cre,terea ,i $e*"ltarea $e u!$e a .st 1!treru#ta. M$ul 1! care se .ace
$e*30e'area este .arte i&#rta!t #e!tru #(strarea i!te3rit('ii celulelr e/#la!tului ,i
&e!'i!erea "ia%ilit('ii lui.
5e*30e'area sau $ec!3elarea este) 1! 3e!eral ra#i$(. <ilele su!t tra!s.erate $irect $i!
a*t lic0i$ 1!tr4 %aie &ari!() la 40

C. 5e*30e'area ra#i$( are $re#t sc# e"itarea

recristali*(rii i!tracelulare) care ar #utea a.ecta structurile celulare. Celulele $ec!3elate
#t .i culti"ate $irect #e &e$iu $e cultur(.
Reluarea cre,terii se #r$uce $u#( 44D *ile. Pri&ele re*ultate e/#eri&e!tale au $e&!strat
c( #ri! c!3elare !u su!t a.ectate #r#riet('ile li!iilr celulare6
4acu&ularea #i3&e!'ilr a!tcia!ici7
4si!te*a alcali*ilr7
4ca#acitatea $e %itra!s.r&are7
4ca#acitatea $e re3e!erare a #la!telr #ri! r3a!3e!e*( s&atic(.
Prce!tul $e "ia%ilitate $u#( $e*30e'are $i.er( 1! .u!c'ie $e &$ul $e 1!30e' ,i $e*30e' ,i
$e s#ecie. Prce!tul $e re3e!erare a #la!telr $i! e/#la!tele "ia%ile) este i!.erir celui $e
su#ra"ie'uire.
21. Te0!icile .lsite #e!tru esti&area "ia%ilit('ii celulelr
Testul 5A< +$iacetat $e .lurescei!(-. 5A< este a%sr%it $e celulele "ii ,i 0i$rli*at $e
estera*e 1! aci$ &alic ,i .lurescei!() .luresce!t( 1! lu&i!( ultra"ilet(. Celulele &arte
#t .i clrate cu al%astru E"a!s sau .e!sa.ra!i!() ri $ecelate 1! c!trast $e .a*(.
Celulele "ii !u acu&ulea*( ace,ti clra!'i. Via%ilitatea) e/#ri&at( 1! #rce!te) este $at(
$e "alarea ra#rtului $i!tre !u&(rul celulelr "ii ,i !u&(rul ttal $e celule.
Testul TTC +tri.e!iltetra*liu&-. TTC este u! c&#us i!clr) slu%il 1! a#() ce #ate .i
re$us 1!tr4u! #r$us $e culare r,ie) !u&it .r&a*a!) slu%il 1! alcl B=O. I!te!sitatea
reac'iei se &(sar( #ri! a%sr%'ia la 4C= sau =90 !& a slu'iei alclice %'i!ute ,i este
#r#r'i!al( cu !u&(rul celulelr "ii.
Testul $e cre,tere. C!st( 1! #lasarea u!ei ca!tit('i cu!scute $e &aterial "e3etal #e u!
.iltru steril) a,e*at #e &e$iu !utriti". C2!t(riri succesi"e #er&it stu$ierea e"lu'iei
3reut('ii #ras#ete.
22. C!ser"area la te&#eraturi sc(*ute #*iti"e
C!st( 1! re$ucerea #rceselr "itale ,i !u %lcarea acestra) ceea ce i&#u!e e/ecutarea
u!r su%culti"(ri #eri$ice #e &e$ii #ras#ete. Este &et$a &ult &ai utili*at( #e!tru
c!ser"area &aterialului #&icl ,i "iticl. Asi3urarea !utri'iei #la!telr 1! "ase se .ace
.ie #ri! su%culti"area lr #e &e$iu #ras#(t) .ie #ri! a$(u3area &e$iului lic0i$ #este cel
e/iste!t) $ac( culturile se #re*i!t( %i!e ,i !u !ecesit( 1!$e#(rtarea u!r l(stari !ecr*a'i)
%ru!i.ica'i sau 1!3(l%e!i'i. <a*a $e cultur( 1! care se .ace stcarea cea &ai #tri"it( este
cea $e &ulti#licare. Pri! re$ucerea te&#eraturii la 44B

C) !u&(rul $e su%culturi se re$uce

la 142 #e a!) se i&#u!e cre,tere ,i &ulti#licare le!t( ,i se $is#u!e ast.el $e &aterial
i!i'ial #e!tru i!i'ierea u!ei culturi atu!ci c2!$ este !e"ie. La 4

C s4a reu,it &e!'i!erea

c(#,u!ului 1! cultur( ti&# $e ,ase a!i +Mulli! ,i Sc0le3el) 1BD@-. Reu,ita ,i $urata
c!ser"(rii este cu at2t &ai &are cu c2t s#ecia la care se lucrea*( re*ist( &ai %i!e la
te&#eraturi sc(*ute 1! c!$i'ii !aturale.
29. C!ser"area &aterialului "e3etal in vitro # C!si$era'ii 3e!erale) C!ser"area #ri!
cre,tere le!t(.
P(strarea &aterialului "e3etal ti&# 1!$elu!3at se #ate .ace #ri! &ai &ulte &et$e) 1!
.u!c'ie $e #si%ilit('ile e/iste!te) $e ti#ul e/#la!telr sau $e #eria$a $e c!ser"are. 8!
#eria$a c!ser"(rii tre%uie &e!'i!ut( !ealterat( *estrea ere$itar( a &aterialului "e3etal.
Pri! c!ser"are se %lc0ea*( sau se 1!ceti!esc #rcesele .i*il3ice) iar $u#( #eria$a $e
c!ser"are e/#la!tele tre%uie s( .ie ca#a%ile $e reluarea acti"it('ii 1!treru#te.
Ela%rarea u!r &et$e $e c!ser"are a celulelr) 'esuturilr ,i r3a!elr "e3etale este
!ecesar( $i! &ai &ulte &ti"e6
4$i.icultatea %'i!erii ,i &e!'i!erii a!u&itr li!ii celulare7
4riscul #ier$erii u!ui &aterial "alrs $atrit( errilr u&a!e sau $e.ect(rii u!r
ec0i#a&e!te7
4re$ucerea !u&(rului $e s#ecii s(l%atice) ce c!stituie a$e"(rate re*er"are $e 3e!e #e!tru
a&elirarea s#eciilr $e i!teres ec!&ic sau care !u au .st 1!c( testate ,i utili*ate 1!
selec'ie sau #ur ,i si&#lu ca !i #la!te culti"ate7
4c!ser"area resurselr $e 3er&#las&() 1! c!$i'iile e/ti!$erii #r3resi"e a culturilr
&!cl!ale sau a "ariet('ilr .arte selec'i!ate.
Se cu!sc ,i se .lsesc &ai &ulte &et$e $e c!ser"are a &aterialului %il3ic "e3etal6
4c!ser"area #e ter&e! lu!3) la te&#eraturi sc(*ute sau cric!ser"area +41B@

C-7
4c!ser"area la te&#eraturi sc(*ute) $ar #*iti"e7
4c!ser"area #e ter&e! &e$iu) #ri! 1!ceti!irea rit&ului $e cre,tere7
4c!ser"area #ri! cre,terea i!culilr 1! #resiu!e at&s.eric( sc(*ut(7
Conservarea prin cretere lent
Cre,terea le!t( a #la!telr in vitro se .ace #ri! &$i.icarea .actrilr $e &e$iu6
te&#eratur() ca!titate $e /i3e! ,i .lsirea su%sta!'elr i!0i%itare $e cre,tere sau su%sta!'e
ca#a%ile s( ri$ice #resiu!ea s&tic( a &e$iului.
Te&#eratura #ate .i re$us( la 144

C) c2!$ cre,terea se $i&i!uea*( .arte &ult sau se

&e!'i!e la te&#eraturi !r&ale 2@42C

C cu sc($erea ca!tit('ii $e /i3e! $i! "asele $e cultur()

care re$uce &ult &eta%lis&ul) re$uc2!$ cres#u!*(tr cre,terea.
24. Tra!s.erul #la!telr $e #e &e$iul $e cultur( 1! sl E acli&ati*area
: #la!t( #r"e!it( $i! cultura in vitro $i.er( $i! &ulte #u!cte $e "e$ere $e u!a #r"e!ita
$i! &e$iul in vivo +<ssar$) 1BDD7 Arut si Ast!) 1BDC7 Arut si 5e%er30) 1BC27 Sutter) 1BC=-
#ri! ur&(tarele as#ecte6
1. La #la!tele crescute 1! c!$i'ii in vitro stratul $e cear( +cuticular- $e la su#ra.a'a
.ru!*elr ,i tul#i!ilr este .arte sla% $e*"ltat $earece u&i$itatea relati"( 1!tr4u! "as $e cultura
este $e B04100O) iar #la!tele !u au a"ut !e"ie s( se #rte;e*e 1&#tri"a $es0i$rat(rii. Acest .a#t
are re#ercusiu!i !e.aste #e!tru #la!tulele tra!s.erate $irect in vivo) care "r su.eri #ier$erea u!ei
ca!tit('i &ari $e a#a $i! 'esuturi) $earece u&i$itatea aerului in vivo este &ult sc(*ut(
c&#arati" celei in vitro. <ru!*ele u!ei #la!te re3e!erate in vitro su!t &i) su%'iri ,i #re*i!t(
acti"itate .tsi!tetic( &ult re$us() $earece 1,i #t #rcura car%!ul !ecesar $i! &e$iul $e
cultur( ,i a!u&e $i! *a0arurile $i! &e$iul $e cultur() ast.el c() atu!ci c2!$ #la!tul( re3e!erat(
in vitro "a .i trecut( in vivo "a tre%ui s( se rea$a#te*e la acti"itate .tsi!tetic( i!te!s(. 5e
ase&e!ea) .ru!*ele #la!telr #r"e!ite $i! cultura in vitro #re*i!t() #e l2!3( u! !u&(r sc(*ut $e
celule #alisa$ice) !ecesare #e!tru ca#tarea e.icie!t( a lu&i!ii) ,i &ulte s#a'ii aeri.ere 1! &e*.il.
St&atele lr !u .u!c'i!ea*( !r&al) iar trecerea #la!telr $e la &e$iul in vitro la cel in vivo
c!stituie sursa cea &ai i&#rta!t( $e stres 0i$ric. 8! culturile $e celule c!e/iu!ile "asculare)
$i!tre l(stari ,i r($(ci!u'e) su!t sla% $e*"ltate) ceea ce $uce $e ase&e!ea la sla%( circula'ie a
a#ei $i!tr4 #arte a #la!tei 1! alta. Pla!tele in vitro au 0r(!ire 0etertr.() #e c2!$ cele in vivo
au 0r(!ire auttr.() acest .a#t c!stitui!$ u! alt .actr $e stres #e!tru #l(!tu'ele tra!s.erate 1!
sl. Ele tre%uie s(4,i $e*"lte acti"itatea .tsi!tetic( #e!tru a4,i #utea #rcura car%!ul !ecesar.
5i! cele $e &ai sus se #ate c!clu*i!a c( acli&ati*area #la!tulelr tre%uie s( .ie u!
#rces le!t) care s( #er&it( trecerea tre#tat( a #la!telr $e la c!$i'iile in vitro la cele in vivo)
ceea ce #resu#u!e a$a#tarea la u&i$itate relati" sc(*ut() la $e*"ltarea &eca!is&elr $e
1!c0i$ere ,i $esc0i$ere a st&atelr) la accelerarea #rcesului .tsi!tetic. Mar$le ,i cla%.
+1BC9- au $e&!strat c( sc($erea u&i$it('ii aerului in vitro la $rassica oleracea %$otrytis& a
$us la .r&area u!ei #elicule $e cear( &ai 3ras( #e stratul cuticular) ceea ce a c!$us la
e"a#rare cuticular( &ult sc(*ut( ,i la cre,terea #rce!tului $e #la!te acli&ati*ate.
Acli&ati*area #ate .i .(cut( #ri! 3e!erarea u!ei u&i$it('i crescute 1! &e$iul in vivo
u!$e "r .i tra!s.erate #la!tulele #r"e!ite $i! &e$iul in vitro) #ri! utili*area u!r a#arate
s#eciale) 3e!eratare $e cea'() ,i #ri! &e!'i!erea u!ei lu&i!*it('i ,i te&#eraturi relati"
c!sta!te ,i sc(*ute. : alt( &et$( $e acli&ati*are #re"e$e l(sarea "aselr $e cultur( $esc0ise)
1!tr4u! &e$iu steril) #e!tru a #er&ite acli&ati*area tre#tat( a #la!tulelr la c!$i'iile e/teriare.
5e ase&e!ea) &ai este #si%il( .lsirea u!r su%sta!'e a!ti#ers#ira!te) care su!t #ul"eri*ate #e
.ru!*ele #la!tulelr tra!s.erate 1! sl) re$uc2!$ ast.el #rcesul $e e"a#rare al a#ei $i! 'esuturi
+Sutter ,i Fut*el) 1BC=-) $e,i aceast( &et$( #ate a"ea ,i e.ecte a$"erse.
2. R($(ci!ile #la!telr #r"e!ite $i! cultura in vitro su!t &ai "ul!era%ile ,i !u
.u!c'i!ea*( .arte %i!e in vivo) #re*e!t2!$ .arte #u'i!i sau $elc #eri,ri a%sr%a!'i. Aceste
r($(ci!i "r &uri 1! scurt ti&# .ii!$ 1!lcuite $e altele 3e!erate $irect 1! sl. 5e*"ltarea
#eri,rilr a%sr%a!'i in vitro #ate .i $eter&i!at( #ri! &e!'i!erea culturilr) #e!tru #eria$(
$e ti&#) #e &e$iu lic0i$. Siste&ul ra$icular sla% $e*"ltat $eter&i!( su#ra"ie'uire sla%( a u!ei
#la!te 1! c!$i'iile $e &e$iu !atural) in vivo) &ai ales 1! c!$i'iile u!ei tra!s#ira'ii i!te!se.
Pe!tru #la!t( #r"e!it( $i! cultura in vitro este "ital( #ier$erea u!ei ca!tit('i c2t &ai &ici $e
a#( $i! 'esuturi.
9. Pla!tele care 1! c!$i'iile &e$iului lr !atural $e "ia'( tr(iesc 1! si&%i*( cu .u!3i
+&icri*e- sau %acterii +e/6 Leguminosae6'i(obium- si&t li#sa acestei si&%i*e atu!ci c2!$ su!t
tra!s.erate 1! c!$i'ii in vitro) $ar &ai ales $ac( su!t $i! !u tra!s.erate in vivo. Mai &ulte stu$ii
au ar(tat c( i!cularea u!r #la!te in vitro 1&#reu!( cu &icrr3a!is&ul si&%i!t a $eter&i!at
cre,tere ,i $e*"ltare &ai %u!( a e/#la!telr ,i su#ra"ie'uire crescut( atu!ci c2!$ s4a #rce$at
la acli&ati*area acestra.
50aTa! ,i cla%. +1BC@- au $e&!strat c( a$i'ia $e 'i(obium 1! ti&#ul acli&ati*(rii
#la!telr $e Leucaena a $us la .r&area !$ulilr la #este C0O $i!tre #la!tulele care au
su#ra"ie'uit tra!s#la!t(rii 1! sl) iar su#ra"ie'uirea acestra a a"ut rat( cu B0O &ai &are .a'(
$e cele care !u au !$ulat. Mra!$i ,i cla%. +1BDB- au ra#rtat c( #la!tele #r$use in vitro $e
'ubus idaeus au crescut &ult &ai %i!e $ac( au .st i!culate cu c2te"a &icrr3a!is&e $i!
s#ecia Glanus mycorri(a. 5e ase&e!ea) Struller ,i cla%. +1BC4- au ra#rtat c( &icri*ele ;ac(
u! rl i&#rta!t 1! &icr#r#a3area #la!tulelr $e #l#7 i!cularea e/#la!telr 1&#reu!( cu
&icri*e $i! s#ecia )a*illus involutus a $eter&i!at cre,tere cu D=O a #la!telr c&#arati" cu
cele i!culate .(r( &icri*e.
Atu!ci c2!$ se iau 1! c!si$erare #r%le&ele asciate cu siste&ele ra$iculare !e4
.u!c'i!ale tre%uie a"ut 1! "e$ere ur&(tarele &(suri s#eciale6
4#er&iterea .r&(rii r($(ci!ilr in vitro) ce "r #utea ulterir .ie s( se $e*"lte 1! r($(ci!i
su%tera!e #r#rii) .ie &(car s( asi3ure su#ra"ie'uirea #la!tulei #2!( la .r&area u!r r($(ci!i
su%tera!e #r#rii7
4#er&iterea $e*"lt(rii in vitro a r($(ci!ilr) atu!ci c2!$ e #si%il) #ri! &e!'i!erea culturilr)
#eria$( $e ti&#) cu r($(ci!ile 1! &e$iul lic0i$) acestea .ii!$ a#i ca#a%ile s( #reia tate
.u!c'iile u!ei r($(ci!i !r&ale) atu!ci c2!$ "a .i tra!s.erat( 1! sl7
4tra!s.erarea 1!tre3ii .a*e $e 1!r($(ci!are 1! &e$iu in vivo. 8!r($(ci!area 1! sl !u este
reali*a%il( la tate s#eciile $e cultur() $ar #ate .i sti&ulat( #ri! 1!&uierea %a*ei l(starilr 1!
slu'ie $e au/i!(. Ttu,i #e!tru &ulte s#ecii .a*a $e 1!r($(ci!are este %i!e s( ai%( lc in vitro
&ai ales #e!tru s#eciile care !u 1!r($(ci!ea*( u,r !ici 1! c!$i'ii !r&ale $e cultur() cu ar .i
s#eciile ier%ase.
Atu!ci c2!$ se recur3e la acli&ati*area u!r #l(!tu'e %'i!ute #ri! te0!icile $e re3e!erare
in vitro) tre%uie s( se 'i!( sea&a $e ur&(tarele6
1.Pe!tru a e"ita i!.ec'iile cu .u!3i sau %acterii6
4a3arul $e #e r($(ci!u'ele e/#la!telr +ce c!'i!e *a0aruri- tre%uie 1!$e#(rtat #ri! s#(larea
acestra cu a#( c(l$u'(7
4slul sau su%stratul sli$) 1! care "r .i trecute #l(!tu'ele re3e!erate in vitro) tre%uie s( .ie
sterili*at #ri! &e!'i!erea la te&#eraturi ri$icate +1! etu"( la 1C0

C #e!tru 9 re- sau #ri! ira$iere

cu ra$ia'ii 3a&a.
2.Asi3urarea u!r c!$i'ii c2t &ai si3ure $e "ia'() #ri! e/ecutarea trata&e!telr $e
c&%atere a i!sectelr) %acteriilr) .u!3ilr) &elcilr +li&a/-) $eter&i!( rat( &ai &are $e
su#ra"ie'uire a #la!telr tra!s.erate in vivo) care su!t $estul $e se!si%ile.
9.Pe!tru a se e"ita r(!irea r($(ci!u'elr se rec&a!$( .lsirea) #e!tru 1!ce#ut) a u!ui sl
u,r.
4.Pe!tru a 1&%u!(t('i acli&ati*area #la!tulelr la c!$i'iile in vivo) 1!r($(ci!area este
%i!e a a"ea lc #e &e$ii $e cultur( s(race 1! s(ruri &i!erale +MS E c!ce!trat la ;u&(tate sau
HN:P-.
=.U!eri este !ecesar u! trata&e!t cu te&#eraturi sc(*ute +44C s(#t(&2!i la =

C- in vitro
sau i&e$iat $u#( tra!s.erul in vivo) #e!tru a scate #la!tulele $i! #eria$a $e late!'(. Acest
#rce$eu este !ecesar &ai ales #la!telr cu %ul%i) ar%u,tilr ,i #la!telr le&!ase) $ar ,i
cerealelr care !ecesit( #eria$( $e "er!ali*are #e!tru a #utea #r$uce se&i!'e.
@.Pla!tele care .r&ea*( #rtcr& +cr&.itele- sau %ul%i) tre%uie tra!s.erate 1! sl 1!
aceast( .r&( +#rtcr&) %ul%i-) ceea ce "a cre,te ,a!sele $e acli&ati*are ,i su#ra"ie'uire ale
acestra.
D.Tra!s.erarea l(starilr 3e!era'i in vitro #e u! &e$iu .(r( *a0aruri ,i 1&%3('irea
&e$iului 1!c!;ur(tr cu C:2 #ate $uce la acli&ati*are &ai u,ar( a #la!telr +La!3.r$ ,i
Mai!Tri30t) 1BC@-.
Mai ;s su!t #re*e!tate #e scurt ulti&ele $esc#eriri 1! $&e!iu6
1.8! u!it('ile c&erciale) tra!s.erul #la!telr #e!tru acli&ati*are se .ace $irect 1! straturi
ac#erite cu .lie $e #lastic) ceea ce a;ut( la &e!'i!erea u&i$it('ii +u!eri se .lsesc ,i
#ul"eri*atare $e a#( 1! acest sc#-) iar lu&i!*itatea ,i te&#eratura tre%uie s( .ie relati"
sc(*ute.
2.L(starii %'i!u'i in vitro la u!ele s#ecii +Gerbera ,i 'ododendron- su!t tra!s.era'i
$irect #e u! su%strat arti.icial) care "a #er&ite 1!r($(ci!area acestra. La%ratarele TTN.r$ au
c!.ec'i!at u! ti# $e l($i'e $e #lastic #re"(*ute cu 400 $e ri.icii) care "r .i u&#lute cu
su%strat #e!tru 1!r($(ci!are. Acestea "r #er&ite scur3erea sur#lusului $e a#a ,i sus'i!erea
#ti&( a l(starilr. 8!r($(ci!area l(starilr 1! l($i'ele #er.rate "a a"ea lc 1!tr4 1!c(#ere
se&isteril() cli&ati*at() 1! care u&i$itatea aerului este &e!'i!ut( ri$icat(. I&e$iat ce
1!r($(ci!area este su.icie!t( ,i l(starii 1!ce# s( creasc() %uta,ii su!t tra!s.era'i $i! l($i'ele
#er.rate $irect 1! ser(.
S#eciile le&!ase su!t 1! #re*e!t 1!r($(ci!ate &ai &ult in vivo $ec2t in vitro) $earece
ast.el se ec!&ise,te &ai &ult ti&# ,i %a!i. La s#ecii ca 'ododendron" +almia" Amelancier"
$etula" ,accinium" Syringa vulgaris +Ri&&er&a!) 1BC=- ,i 1! 3e!eral la tate s#eciile le&!ase)
care su!t #r#a3ate c&ercial) se a#lic( acest ti# $e 1!r($(ci!are.
9.C&#a!ia Milc# $i! <ra!'a a #r$us u! su%strat arti.icial #e!tru 1!r($(ci!are) #e %a*(
$e #lN#r#ile!() autcla"a%il) sta%il %il3ic) i!ert c0i&ic) #er&i'2!$ aerare %u!(. Acest
su%strat este $is#!i%il su% .r&( $e .ul3i) .ii!$ #tri"it #e!tru 1!r($(ci!area in vitro. Pe!tru
1!r($(ci!are $irect() in vivo) e/ist( %lcuri +cu%uri- &ici) $i! acela,i &aterial) 1! care l(starii #t
.i #lasa'i cu u,uri!'(.
Pe %a*a celr #re*e!tate &ai sus) se #ate #resu#u!e c() 1! "iitrul a#r#iat) "r a#(rea
#e #ia'( tt &ai &ulte ti#uri $e su%straturi arti.iciale) ce "r .ace acli&ati*area #la!tulelr &ult
&ai e.icie!t( ,i &ai u,ar() $ec2t a .st 1! trecut. Trecerea $irect( a %uta,ilr in vivo este
i&#rta!t() #e!tru c( "a $uce la eli&i!area .a*ei $e 1!r($(ci!are in vitro) care este relati"
cstisitare ,i !ecesit( #eria$a $e ti&# su#li&e!tar() ceea ce cre,te #eria$a $i!tre $ua
3e!era'ii $e #la!tule) .a#t !e$rit $e c&#a!iile c&erciale #r$uc(tare $e &aterial se&i!cer.
Ast.el &icr#r#a3area "a $e"e!i te0!ic( u*ual( ,i &ai la 1!$e&2!() !ecesit2!$ $ar ca&ere
$e cre,tere s#ecial a&e!a;ate #e!tru acli&ati*area ,i 1!r($(ci!area %uta,ilr $irect #e
su%straturile arti.iciale.