Curs 2

Proceduri de baz n
laboratorul clinic
Colectarea probelor i variabile
preanalitice
Conservarea probelor
Reactivi

Curs 2

Colectarea probelor de snge

Colectarea i prepararea probelor necesit
msuri de protecie pentru personal
Glucoza i colesterolul se determin pe probe
colectate de la pacieni dimineaa, pe nemncate
Se fac analize pe probe de:
Snge total
Ser
Plasm

Curs 2

Sampling
Primul pas: colectarea adecvat a probei

Unless the complete history of any sample is known with

certainty, the analyst is well advised not to spend his time
analyzing it
(Thiers, 1957)

Curs 2

Prepararea probei de snge

Coagulare, Centrifugare
Snge

colectat ntr-un tub curat i

uscat pentru a preveni
contaminarea i hemoliza

Ser

Cheag (fraciunea
celular+fibrinogen)

Hemoliza: distrugerea celulelor roii cu eliberarea hemoglobinei i a altor

constitueni celulari n fluidul nconjurtor; serul devine din incolor roz

O substan poate fi prezent n concentraii diferite n ser i n fraciunea

celulal @ Hemoliza poate introduce erori semnificative
Ex.: K, Fe, Mg, Zn, uree, proteine
Centrifugarea trebuie realizat ct mai repede dup separarea serului

Curs 2

Prepararea probei de snge

Anticoagulant
Centrifugare

Plasm

Snge

(Ser+fibrinogen)
Fraciunea
celular

Cnd la analiz este necesar snge total

sau plasm, proba se colecteaz n tuburi
coninnd anticoagulant.

Curs 2

Anticoagulani
Heparina (sare de Na); efect temporar; este scump; d unele
interferene
Oxalat de potasiu (1 mg/mL) precipit Ca din snge, ceea ce perturb
coagularea; nu se determin n prob Ca sau alte metale care precipit
ca oxalai
Procedeu: se adaug n tubul de colectare o soluie ce conine
cantitatea necesar de Ca, apoi tubul se usuc la 1100 C pentru a evita
diluarea probei
Citrat , EDTA

Curs 2

Conservarea probei

Probe pstrate n condiii anaerobe (determinarea CO2)

colectarea probei pe ulei mineral

NaF+anticoagulant - conservarea probelor de snge pentru analiza

glucozei;
- este un inhibitor enzimatic al glicolizei; deoarece inhib i alte
enzime, nu se adaug, de ex. la analiza ulterioar a ureei (este
inhibat ureaza)

Refrigerare (ser, plasm) procesele enzimatice i bacteriene sunt

ncetinite; se recomand analiza ct mai rapid dup colectare

ngheare (ser, plasm) pstrare mai ndelungat: nu se aplic la

snge total deoarece se distrug celulele roii
Serul (plasma) sunt fracionate n timpul ngherii i trebuie
omogenizate dup dezgheare

Filtrat liber de proteine (PFF) precipitarea proteinelor n mediu

acid i filtrare (centrifugare)

Curs 2

Filtrat liber de proteine (PFF)

Proteinele din fluidele biologice interfer cu muli analii i trebuie
ndeprtate fr a fi distruse
Reactivi de precipitare (coagulare): acid tricloracetic, acid fosfowolframic
Vser + V reactiv

10 min

filtrare (fr splare) sau centrifugare

PFF n acest caz sunt acide dar adecvate pentru cele mai multe analize.
Reactivi de precipitare (coagulare): Ba(OH)2 +ZnSO4
PFF neutru
Avantaj: sunt eliminai muli interfereni pentru analiza glucozei; glucoza
este stabil n PFF deoarece enzimele glicolitice sunt ndeprtate

Curs 2

Liofilizare (freeze drying)

Diagrama fazelor

Transformarea direct lichid-gaz

Sistemul ocolete punctul triplu, evitndu-se transformarea
lichid-gaz

Curs 2

Liofilizare
(1) ngheare (ntre 50 C i 80 C). (etapa critic)
Proba plasat ntr-un recipient, rotit ntr-o baie rcit cu ghea
uscat i CH3OH sau N2 lichid sub punctul eutectic (fazele S i L
coexist).
(2) Uscare primar
presiunea este cobort lent i proba este nclzit pentru
sublimarea apei
Aprrox. 95% din apa prezent este ndeprtat
(3) Uscare secundar
urmrete ndeprtarea moleculelor de ap nengheat
se crete temperatura mai rapid dect n (2) pt. distrugerea
interaciunilor ntre moleculele de ap i mateerialul ngheat.
Vidul este eliminat prin purjare de N2 nainte de sigilarea probei.
Coninutul final al apei este 1-4%.

Curs 2

Probe de urin
& Colectare uoar

Proba recoltat dimineaa

Proba recoltat /24 ore (conservare cu HCl, HNO3, H3BO3, HAc, Na2CO3, timol,
toluen, xilen, CHCl3, etc.)
Rolul conservanilor : reduc activitatea bacterian i mpiedic descompunerea
probei ori precipitarea anumitor constitueni

Factori care afecteaz analiza:

Variabile preanalitice- afecteaz probele nainte de efectuarea
analizelor
controlabile
Necontrolabile (influene biologice, de mediu, ciclice pe termen lung)

Curs 2

Alte probe biologicice analizate

esuturi

Pr

Unghii

Saliv

Calculi

Dini

Curs 2

Pr (analiza de urme elementale)

Sngele i urina cele mai obinuite probe pentru analiza de urme n

studii de nutriie, evaluarea polurii, medicina muncii, etc.

Pr poate furniza indicaii despre expunerea la metale

& Uor de colectat

&

Uor de conservat

&

Uor de pregtit pentru analiz

Curs 2

Limitri n analiza urmelor elementale

n pr
Lipsa de metode standardizate n colectarea, prepararea
i analiza probelor
Lipsa de valori de referin
Probleme datorate contaminrii
Totui, analiza Pb, As, Hg n pr este o metod acceptat
pentru evaluarea expunerii la aceste elemente.

Surse de contaminare n analiz

Analist
Reactivi
Echipament
Ustensile

Curs 2

ntrebri
Care sunt principalele fraciuni ale sngelui?
Ce este hemoliza i ce importan prezint?
De ce se adaug adesea HF probelor de snge
colectate pentru determinarea glicemiei?
Care sunt cele mai frecvente dou analize clinice?
Ce este filtratul liber de proteine?
Ce este liofilizarea?