Metabolismul

nucleotidelor

Metabolismul
nucleotidelor

Digestia i absorbia
nucleotidelor
Acizii nucleici, RNA i DNA nutriionali sunt

supui modificrilor n tractul gastrointestinal.

Ribonucleazele i dezoxiribonucleazele
secretate de pancreas vor scinda
polinucleotidele pn la oligonucleotide.
Fosfodiesterazele pancreatice vor conduce la
formarea 3- i 5- mononucleotide.
n continuare, nucleotidazele vor hidroliza
fosfatul, genernd nucleozide. Ultimele pot fi
absorbite n celulele intestinale sau scindate
de nucleozidaze la bazele respective.
3

Purinele i pirimidinele alimentare nu sunt

utilizate n sinteza acizilor nucleici tisulari.
Purinele n celulele mucoasei intestinale
sunt transformate n acid uric, eliminat
apoi din circulaie prin urin.
n metabolizarea bazelor purinice e
implicat i flora intestinal.
Pirimidinele, riboza (dezoxiriboza) i o
parte din purine ptrund n circulaia
sanguin.
4

Digestia i absorbia nucleotidelor

5

Metabolismul general al organismului trebuie

s asigure existena unui fond, elucidnd
cantitatea i varietatea de nucleotide necesare
pentru participarea la procesele eseniale.
Acest fond se realizeaz prin: sinteza de novo,
interconversia nucleotidelor, conversia parial
a ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide.

Biosinteza de novo
a nucleotidelor purinice

Inelul purinic are ca precursori mai multe

substane.
Prin ulilizarea pecursorilor marcai s-a stabilit
originea fiecrui atom din acest nucleu.
Prima reacie const n activarea ribozil-5fosfatului cu ATP catalizat de PRPP sintetaz.
Produsul format 5-PR--1-PPi este un compuscheie n metabolismul nucleotidelor, fiind
precursor i la sinteza triptofanului i
histidinei.
7

CO2

Aspartat

C N

C
C N
N10
N
Formil-FH4

Glicina

N5-N10-metenil-FH4

Glutamina

Sursa de atomi pentru inelul purinic

8

Etapa cheie n sintez decurge n stadiul

urmtor, finaliznd cu formarea 5fosforibozil-aminei.
Enzima, amidofosforibozil-transferaza este al
2-lea punct de control al secvenei.
Fora motrice a procesului este hidroliza
pirofosfatului.
Glutamin amidotransferaza poate fi inhibat
de analogii structurali ai glutaminei ca:
azaserina i acivicina, ultima este un agent
chemoterapeutic n tratamentul cancerului.
9

Biosinteza de novo a IMP

P

OCH2

OH

AMP OCH2

ATP

OH PRPP sintetaza
OH

O
OH

OH

Ribozo -5-fosfat

Glu OCH2

Gln

NH2

P P
H2 O

OH

PPi

Glutamin PRPP
amidotransferaza

PRPP
AMP
GMP
IMP
Gln

OH

5-fosfo-betaD-riboxilamina
Gly

ATP
3

Glicinamid ribonucleotid
sintetaza

ADP + Pi
NH

CH2
O
P

OCH2

OH

CHO

OH

Formilglicinamid
ribonucleotid
ATP
5

ADP + Pi

FH4

Gln

N5N10-metenil-FH4
I

H2O

O
P

OCH2

NH

Glicinamid ribonucleotid
transformilaza

OH

OH

Glicinamid
ribonucleotid

Formilglicinamid
ribonucleotid
amidotransferaza

Glu

NH2

CH2

NH

10

NH

CH2
C

HN
P

OCH2

NH

OCH2

5-amidoimidazol
ribonucleotid
sintetaza

OH

N
CH

H2N
6
ATP ADP + Pi

OH

HC

CHO

H2N

CO2
7

OH
OH
5-amidoimidazol
ribonucleotid

Formilglicinamidin
ribonucleotid

OOC

5-amidoimidazol
ribonucleotid
carboxilaza

OCH2

OH
OH
5-amino-4-carboxiaminoimidazol ribonucleotid
Asp

O
5-aminoimidazol-4carboxiamid ribonucleotid
transformilaza
H2N

C
H2N

CH
C

OHC
P

NH
O CH2

OH

ATP
8

N-succinil-5-aminoimidazol-4carboxiamid ribonucleotid
sintetaza

FH4

N10-formil-FH4
OCH2
P

CH

O CH2

C
,

Inozin-5 - monofosfat
sintaza

H2O

H2N

HC

CH

NH
O CH2

OH
,
Inozin-5 -monofosfat
OH

(IMP)

OH

N-succinil-5-aminoimidazol -4carboxiamid ribonucleotid

O
11

OH

5-aminoimidazol -4carboxiamid ribonucleotid

CH

H2N

Fumarat
OH

NH

N-succinil-5-aminoimidazol-4carboxiamid ribonucleotid
liaza

OH

N-formilaminoimidazol -4carboxiamid ribonucleotid

HOOC
9

ADP + Pi
C

H 2N

OH

CH

C
CH

10

HOOC

CH

11

Urmeaz condensarea glicinei (ATP),

metenil-FH4, glutaminei (ATP), ATP, CO2,
aspartatul (ATP), formil-FH4, cu sinteza
acidului inozinic sau inozinmonofosfat.
Sinteza necesit 6 P, ioni de Mg2+, K+,
secvena este exergonic i ireversibil.
Procesul de sintez este modificat sub
aciunea unor preparate medicamentoase
cum sunt analogii acidului p-aminobenzoic
(APAB) i acidului folic.
Sulfonamidele, analogi dup structur cu
APAB, competitiv inhib sinteza de acid folic
la bacterii.
12

ntruct sinteza purinelor necesit FH 4

n calitate de coenzim, preparatele date
reduc aceast cale n bacterii.
n corpul omenesc acidul folic nu se
sintetizez i, deci, este nevoie de surs
extern.
De aceea, sulfonamidele, nu impiedic
sinteza purinelor la om.
Metotrexatul i compuii analogi inhib
reacia de reducere a dihidrofolatului n
tetrafolat.
13

Ele limitez cantitatea de FH 4 necesar

sintezei purinelor i astfel, diminueaz
replicarea DNA n celulele mamiferelor.
Aceti compui sunt utilizai n terapia
cancerului care se dezvolt rapid, ns
sunt toxici pentru toate celulele care
divizez.
Analogii structurali ai purinelor
(acicloguanozina aciclovir) sunt folosii
n tratamentul infeciilor herpetice.
14

Aceti antimetabolii sunt fosforilai de

enzimele celulare sau virale, rezultnd
derivai activi care blocheaz specific DNApolimerazele virale.
IMP este mai departe convertit n AMP i
GMP conform schemei de mai jos.
Consumarea diferitelor surse de energie
ofer posibilitatea controlului reciproc al
sintezei nucleotidelor cu adenin i guanin.

15

HOOC

CH

COOH

CH2

NH

NH 2

Adenilosuccinaza

N
N
Acid adenilo
,
succinic Riboza-5

Acid fumaric

N
,
Riboza-5

AMP (acid adenilic)

GDP + Pi

GTP

Acid aspartic
Adenilosuccinat
sintetaza

OH
N

NAD+

IMP - dehidrogenaza

Riboza-5

NADH + H

OH
N
HO

OH2

NH3 sau
Glutamina

ATP

IMP (acid inozinic)

OH
Glu
N

N
AMP + PPi

GMP - dehidrogenaza

,
Riboza-5
P
,
XMP (xantozin-5 -monofosfat)

H2N

N
,
Riboza-5

GMP (acid guanilic)

Conversia IMP n AMP i GMP

16
i reglarea acestor reacii

Reutilizarea purinelor

La hidroliza acizilor nucleici, nucleozidelor

se formez baze purinice libere, care pot fi
utilizate pentru sintez.
mpreun cu cele sintetizate de novo,
alctuiesc un fond metabolic comun
accesibil tuturor celulelor.
Sinteza din produse finite (rencorporarea,
reutilizarea) este mai eficace, mai ieftin
pentru celule, mai ales n celulele cu o
mare vitez de cretere, de regenerare
(embrionul, tumorile, reproducerea).
17

La prima etap are loc condensarea bazei

purinice cu PRPP i crearea direct a
ribonucleotidului, reacie catalizat de
fosforibozil transferaze.
Exist o enzim specific pentru adenin
(APRT) adenin-fosforibozil transferaza i
alta pentru guanin i hipoxantin (HGPRT
hipoxantin-guanin-fosforibozil transferaza ).

PPi

Adenin + PRPP Adenilat + PPi

Hipoxantin + PRPP Inozinat +
Guanin + PRPP Guanilat + PPi
18

O transformare la care sunt supuse purinele

libere sau derivaii lor este dezaminarea,
prin care o funcie NH2 este nlocuit cu
una oxigenat.
Reacia poate avea loc la nivel de nucleotid,
nucleozid sau baz purinic.
Dezaminarea AMP la IMP, sub aciunea
AMP dezaminazei, este calea cea mai
probabil de metabolizare a AMP.
Guanin dezaminaza (guanaza) transform
guanina xantin i inozina hipoxantin.
La mamifere lipsete enzima care
transform adenina n hipoxantin.
19

Reglarea biosintezei

Un mecanism asigur cantitatea de IMP i

altul repartizarea lui ntre AMP i GMP.
Transformarea lor n trifosfai este
dependent de sarcina energetic celular.
Nucleotidele acioneaz ca factori negativi
asupra PRPP sintetazei, amidofosfo-ribozil
transferazei, forma monomeric fiind activ,
iar dimeric inactiv.

20

21
Reglarea biosintezei nucleotidelor purinice

Creterea concentraiei PRPP provoac

depolimerizarea asociat, cu activarea
enzimei.
Nucleozidele acioneaz n mod invers,
drept activator servete glutamina.
Aici se mai nregistreaz un control
pozitiv reciproc din partea ATP i GTP.

22

Catabolismul purinelor

Bazele purinice endogene sau

exogene, care n-au fost ncorporate
n nucleotide sunt transformate n
acid uric i eliminate pe cale renal.
Nucleotidele pot fi transformate n
nucleozide prin hidroliz, catalizat
BA
Pi
deP 5OCH
nucleotidaze
H2O .
2O
O

E
OH

BA

OH

23

Nucleozidele sunt scindate la baze

printr-o reacie fosforolitic,
catalizat de o nucleozid fosforilaz
(E1), cu formarea R-1-P care poate fi
izomerizat sub aciunea fosforibozil
mutazei (E2) n R-5-P, substrat
Pi
pentru sinteza
PRPP.
E

BA

E1

BA + R

24

Acidul uric se formeaz din hipoxantin i

din xantin prin oxidare, cu participarea
xantin oxidazei.
Enzima este o flavoprotein dimer, ce
conine molibden i Fe++.
Psrile i reptilele elimin acid uric,
pstrnd apa n organism, deoarece
cristalele lui se elimin cu o minim
cantitate de ap.
Ureea leag cantiti mari de ap.
25

Aceste specii ce elimin acidul uric sunt

numite uricotelice fa de ureotelice (elimin
uree).
Acidul uric este un compus greu solubil n
ap, pe cnd monouratul de sodiu este ceva
mai solubil.
Pe msur ce procesul de acidifiere a urinei
progreseaz, uratul trece n acid uric.
La un pH = 5,75 uratul i acidul uric coexist n
cantiti egale, iar la pH < 5 predomin acidul uric mai
puin solubil.
26

n 24 ore excreia constituie 400-600 mg.

Acidul uric este o substan uor oxidabil
i, prin capacitatea sa de a capta radicali
liberi, este un factor protector contra
agresiunii oxidante continue la care sunt
expuse majoritatea esuturilor
organismului.

27

Patologia metabolismului
purinelor
Cteva tulburri afecteaz metabolismul
purinelor.
Ele sunt guta i sindromul asociat cu deficien de
HPRT, APRT, adenozin deaminaz, nucleozid
fosforilaz, monoadenilat deaminaz i xantin
oxidaz.

28

Guta

Este un grup heterogen de boli genetice

i dobndite caracterizate de nivele nalte
de urat n snge (hiperuricemia) i de
acid uric n urin (uricurie).
Hiperuricemia la brbai este definit ca
concentraie seric de urat mai mare de 7
mg/dL (420 mol/L) i la femei 6 mg/dL
(357 mol/L).
n gut hiperuricemia este un eveniment
biochimic frecvent, totui muli subieci
hiperuricemici pot s nu dezvolte clinic
guta (hiperuricemia asimptomatic).
29

Toate simptomele clinice de gut cresc de la

solubilitatea sczut a uratului n fluidele
biologice.
Solubilitatea maxim a uratului n plasm la
37C este de aproximativ 7 mg/dL.
Totui, n structuri periferice i la extremiti,
unde temperatura este mai mic dect 37C,
solubilitatea uratului se micoreaz.
Cnd uratul este prezent n soluii
suprasaturate, formarea cristalelor
monosodiului monohidrat de urat are loc mai
rapid.
30

Depozite de cristale agregate, cunoscute ca

tofus, n i mprejurul articulaiilor
extremitilor iniiaz o reacie inflamatoare
strin corpului (artrit acut) ce implic
leucocitele, complementul i ali mediatori.
Aceast reacie cauzez dureri severe,
umflturi, roea i fierbineal n locurile
afectate.
Atacurile iniiale sunt de obicei acute i
frecvent afecteaz articulaia
metatarsofalangian a degetului mare.
31

Tofusurile de asemenea pot fi prezente n

esuturile subcutanate, cartilaje, oase i
rinichi.
Formarea calculilor urinari (urolitiaz) de urat
este frecvent.
Guta este potenial cronic i disfigurativ.
Guta primar este o tulburare a
metabolismului purinic ce se ntlnete mai
des la brbai.
Condiia este multifactorial i implic factori
genetici i negenetici.
Frecvena la femei este joas, cnd apare de
obicei este identificat la femei dup
menopauz.
32

Concentraia normal de urat n snge la

brbai este ~1 mg/dL, mai nalt dect la
femei, dar aceast diferen dispare dup
menopauz.
Astfel, la femei creterea nivelului de urat n
ser dup menopauz poate mri riscul de
dezvoltare a gutei.
Guta se ntlnete rar la copii i adolesceni.

33

Guta primar poate fi cauzat de

supraproducia sau subexcreia acidului
uric sau a unei combinaii a acestora.
Frecvent, persoanele din aceeai generaie
sau alte rude apropiate a indivizilor afectai
au niveluri ridicate de acid uric n snge, dar
nu dezvolt guta, indicnd faptul c
hiperuricemia nu este unicul factor implicat.
Guta renal primar se datoreaz
subexcreiei acidului uric, cauzat de un
defect tubular renal n transportul acestui
compus.
34

Guta primar metabolic se datorea

supraproduciei de purine i acid uric.
Predominarea gutei este mai nalt n
anumite populaii (ex. 10% din aduli
masculini Maori din Noua Zeilanda).
n Europa i SUA, rata persoanelor
afectate este de 0,13%-0,37%.

35

Guta secundar se dezvolt ca o complicaie

a hipruricemiei cauzat de alte tulburri
(ex. leucemie, nefrit cronic, policetemia).
Acest tip de hiperuricemie, de obicei este
asociat cu o producie anormal de rapid de
acizi nucleici.
Cazurile rare de gut la adolsceni i copii
sunt de obicei de acest tip.

36

Supraproducia de PRPP

Mecanismul hiperuricemiei la muli indivizi

care au gut nu este cunoscut.
Se discut ipoteza leziunilor biochimice care
duc la hiperuricemie i pot eventual duce la
gut.
Sinteza mrit de PRPP rezult din mutaii la
nivelul cromozomului X-linkat a PRPP
sintetazei.
Cteva variante arat un Vmax mrit,
rezisten la inhibiia feed-back sau Km sczut
pentru ribozo-5-fosfat.
37

Niveluri PRPP pot fi de asemenea

crescute ca rezultat al subutilizarii
cii purinice recupertoare.
Astfel, deficiena HPRT (parial sau
total) cauzeaz hiperuricemia ca o
trastur X-linkat recesiv.

n situaiile cnd ATP-ul este consumat

mai rapid dect este sintetizat sau cnd
ATP-sintaza este afectat, ADP i AMP se
acumuleaz i eventual este convertit n
acid uric.
38

Hiperuricemia poate aprea n condiii

hipoxice (ex. sindromul adult al deficienei
respiratorii), deficiena glucozei-6-fosfat i
boal acut (ex. oc hemoragic sever).
Astfel hiperuricemia poate servi ca un
marker pentru crizele energetice celulare.

39

Ingestia de etanol cauzeaz hiperuricemia

datorat degradrii crescute a ATP-ului la
AMP.
Cel din urm, apare n metabolismul etanolic
n timpul conversiei acetatului la acetilCoA.
n toate aceste instane a produciei de acid
uric de ctre xantin-oxidaza, nivelul formrii
produselor citotoxice din aceste reacii ca
peroxidul de hidrogen i radicalul superoxid,
de asemenea este crescut.

40

Pacieniii cu dificien de glucoz-6-fosfat

(boala depozitrii de glicogen de tip I)
manifest hiperuricemie din copilrie i
unii dezvolt guta mai trziu.
Din cauza hipoglicemiei lor, aceti pacieni
dezvolt o acidemie hiperlactic marcat
i lactatul reduce eliminarea renal de acid
uric, supresnd secreia lui tubular.

41

Excreia renal de urat este comlex,

cuprinznd filtrarea glomerular,
reabsorbia tubular i secreia tubular.
Se presupune c uratul n urin este
crescut n urma secreiei tubulare.
Producia crescut de acid uric n
deficiena glucozei-6-fosfat a fost
atribuit produciei mrite de ATP i ca
urmare epuizarea nucleotidelor adenilice,
cu inhibarea feed-back-ului de ctre
amidofosforiboziltransferaz i a
accelerrii de novo a sintezei de
nucleotide purinice.
42

Nivelurile sczute de ATP i Pi rezult din

prezena nivelurilor crescute de
intermediari glicolitici fosforilai.
Un mecanism similar a fost propus pentru
hiperuricemia ce rezult la administrarea
intravenos a fructozei la oameni.
Producia excesiv de acizi organici duce
la niveluri ridicate de acid uric.

43

Lactatul, acetoacetatul i -hidroxibutiratul

(ultimele dou sunt cunoscute ca corpi
cetonici) concureaz cu acidul uric pentru
secreia efectuat de tubii renali.
Acidemia lactic poate aprea n deficiena
glucozei-6-fosfat i la ingestia alcoolului.
Cetonemia i cetonuria apar n diabetul
netratat, inaniie, deficiena de glucoz-6fosfat.

44

Tratamentul gutei

O serie de medicamente sunt folosite n

controlul gutei n 3 situaii clinice:
1. A trata guta acut artritic;
2. A preveni atacurile acute;
3. A scdea concentraiile serice de urat.

45

Atacurile de gut acut frecvent afecteaz

prima ariculaie metatarsian a piciorului.
n fluidele aspirate din articulaie, cristalele
de urat pot fi vzute la microscopul
luminiscent polarizant, ce este folosit la
diagnoza definitiv.
Tratamentul gutei acute include
administrarea de colchicine, medicamente
nesteroide antiinflamatoare (NSAIDs),
corticosteroizii, hormonul adrenocorticotrop
(ACTH) i analgezice.
Colchicina i NSAID de asemenea pot fi
folosite profilactic pentru a preveni atacuri
acute la pacienii cu gut.
46

Medicamentele folosite pentru a scadea

concentraiile serice de urat sunt
probenecidul, sulfinpirazon, allopurinol.
Colchicina depolimerizeaza microtubulii i
structuri ca fusul mitotic, constituit din
microtubuli.
Ea este efectiv pentru scderea durerilor
i frecvenei atacurilor, dar mecanismul
aciunii lui este necunoscut.
Allopurinolul, un analog al hipoxantinei,
inhib xantin-oxidaza i reduce formarea
xantinei i a acidui uric.
47

El este convertit de xantin-oxidaz la

alloxantin, ce leaga strns la centrul activ
Mo4+.
Aceasta reduce reoxidarea Mo4+ la Mo6+ i
afecteaza activitatea catalitic.
Acest tip de inhibitor n care un substrat
analog este convertit la un inhibitor i nu
sunt eliberate de la centrul activ, este
cunoscut ca inactivator enzimatic suicidal sau
ca mecanism bazat pe inhibitor.
Allopurinolul de asemenea este convertit de
HPRT la allopurinol ribonucleotid.
48

Producerea de acid uric este scazut prin

epuizarea de PRPP.
Allopurinolul ribonucleotid, de asemenea
inhiba alosteric PRPP-amido transferaza.
Att timp ct xantina este i un produs, i
un substrat pentru xantin-oxidaza, terapia
cu allopurinol poate cauza acumularea
xantinei n organism.
Xantina este puin solubil n urin (dar
mai solubil ca acidul uric), aceasta poate
cauza xantin cristaluria urinar sau
formarea de pietre.
49

Aceast complicaie nu a fost observat la

pacienii care au primit medicamente pentru
tratarea gutei sau a pietrelor acidului uric,
dar ea s-a manifestat la civa pacieni cu
sindromul Lesch-Nyhan, limfosarcoma.
Medicamentele ce cresc excreia acidului
uric includ probenecidul, ce este efectiv n
reglarea hiperuricemiei i n prevenirea
tofusului, i sulfinpirayon, ce are efecte
similare.
Ambii ageni sunt acizi organici slabi i
probabil acioneaza ca inhibitori competitivi
n reabsorbia tubulara a acidului uric.
50

Nivelurile serice a uratului pot scdea n urma

dietei i a schimbrilor n stilul de viaa.
Acestea includ corecia obezitii, evitarea
consumarii etanolului i evitarea alimentelor
cu nivel nalt de purine (ex. carnea).
Pseudoguta este o tulburare cauzat de
depozitarea pirofosfatului de calciu dehidratat
n articulaiile mari ca genunchii, incheietura
minii i glezna.

51

Sindromul Lesch-Nyhan

Acest sindrom este caracterizat de o

absen virtuala de HPRT, producie
excesiva de acid uric i anormalitai a SNC.
Aceste anormalitati includ retard mintal,
spasme (tensiunea muscular crescut ce
rezulta n continua cretere a rezistenei la
ntindere), horeoatetoz (caracterizat de
micri involuntare neregulate, explozive i
de zbateri, i agitatie ce implic orice
extremitate sau trunchi).
52

Tulburarile asociate cu deficiena parial de

HPRT de asemenea duce la hiperuricemie,
ns lipsesc trsturile devastrii
neurologice caracteristice sindromului
Lesch-Nyhan.
Ambele tulburari sunt X-linkate.
Hiperuricemia la pacienii cu Lesch-Nyhan
este explicat parial prin faptul acumulrii
intracelulare a PRPP care duce la creterea
biosintezei de novo a nucleotidelor purinice
i astfel crete producia de acid uric.
53

Astfel de pacieni nu dezvolt guta

artritica prematur, dar manifest
cristaluria acidului uric i formarea de
pietre.
La pacienii Lesch-Nyhan, toate esuturile
sunt lipsite de HPRT.
Aceste tulburri pot fi detectate prin orice
test de HPRT n eritrocite i fibroblati.

54

Testul anterior a fost folosit pentru

detectarea strii heterozigote.
HPRT este o enzima citozolica format
din 217 aminoacizi, codificata de o
singura gena din cromozomul X.
Cteva mutaii a genei HPRT sunt
cunoscute.
Mutaiile includ alterari majore a genelor
i mutaii missens cauznd sau guta
artritica, sau sindromul Lesch-Nyhan.
55

Un exemplu a mutaiei missens ce cauzeaza

sindromul este HPRT-Kinston, ce are
substituit asparagina n locul acidului
asparagic n poziia 194.
Enzima mutant prezent ntr-o concentraie
similar cu a unei enzime normale este
incompetenta catalitic din cauza valorilor Km
nalte pentru hipoxantin i PRPP.

56

Mecanismul prin care deficiena de HPRT

cauzeaza tulburari ale SNC rmne
necunoscut.
Pacienii cu Lesch-Nyhan nu manifest
anormaliti anatomice ale creierului.
La subiecii normali activitatea HPRT este
nalt n creier i n particular n ganglionul
bazal unde biosinteza de novo a purinelor
este sczut.
Aceasta sugereaza importana cii purinice
salvatoare n acest esut.
57

Cu toate acestea relaia dintre deficiena HPRT

i manifestrile neurologice nu este neleas.
Cea mai semnificativ anormalitate n sistemele
neurotransmitoare este n calea
dopaminergic.
Nu este cunoscut tratamentul tulburrilor SNC.
Allopurinolul a fost folosit n reglarea
hiperuricemiei.

58

Degradarea nucleotidelor purinice. Defectele

genetice i asociate cu aceast cale

59

Deficiena adenin
fosforiboziltransferazei

APRT izolat din eritrocite este un dimer,

fiecare subunitate avnd o greutate
molecular de 19481 Da, gena e localizat
pe cromozomul 16.
Aceast trstur autosomal recesiv rezult
n incapacitatea de a recupera adenina, care
se acumuleaz i se oxideaz la 2,8dihidroxiadenina de ctre xantin oxidaza.
Anormalitatea clinic principal este
excreia urinar a 2,8-dihidroxiadeninei ca
material nesolubil.
60

Aceste pietre pot fi confundate cu cele de

urat la o analiz de rutin.
Astfel analizele biochimice sunt necesare n
particular la grupa de vrst pediatric
pentru a identifica deficiena APRT la
indivizi.
Tulburrile neurologice caracteristice
deficienei de HPRT nu sunt gsite n
deficiena APRT, indicnd c APRT poate s
nu joace un rol semnificativ n toate reglrile
metabolismului purinic.
Deficiena APRT este tratat cu o diet ce
conine cantiti mici de purine i
allopurinol.
61

Deficitul de adenozin deaminaz (ADA)

i deficitul fosforilrii nucleotidelor
purinice (PNP)

Deficitul ADA i PNP sunt trasturi

autosomal recesive ce cauzez desfuncia
sistemului imun.
Ambele funcii enzimatice implicate n
conversia adenozinei i a dezoxiadenozinei
la hipoxantin.
PNP este de asemenea implicat n conversia
guanozinei i a dezoxiguanozinei n guanin.
n deficiena ADA i PNP substratele
potrivite se acumuleaz alturi de alte
produse care pot cauza un efect toxic asupra
celulelor sistemului imun.
62

Pacienii cu deficiena ADA nu au funcii

mediate de limfocitele T i B, numite
imunitate celular i umorala.
Se manifest o tulburare sever a
imunodeficienei (SCID).
Alte tulburri genetice pot cauza SCID,
dar tulburarea ADA este responsabil de
apariia SCID la aproximativ 1/3 din
pacieni.
63

Deficiena PNP este asociat doar cu

disfuncia limfocitelor T.
Mecanismele exacte responsabile de
disfuncia sistemului imun nu sunt
cunoscute.
n deficiena ADA limfocitele T sunt
crescute i e crescut concentraia de dATP,
similar deficiena de PNP manifest mrirea
limfocitelor T n majorarea concentraiei de
dGTP.
Ambele dATP i dGTP inhib ribonucleotid
reductaza, cauzeaz o reducere de alte
dezoxiribonucleotide (UDP, CDP) care sunt
necesare pentru sinteza DNA i inhib
diviziunea celular.
64

S-adenozilhomocisteina (SAH) de asemenea

se acumuleaz i inhib metilrile necesare
pentru funcionarea normal a celulei.
Acumularea de SAH rezult n inactivarea
SAH hidrolazei de dezoxiadenozin.
La hidroliza de SAH, substratul sufer o
oxidare temporar efectuat prin
intermediul NAD, care este strns cuplat la
enzim.
Aceast reacie eventual duce la hidroliza
substratului i la reoxidarea NADH.
65

Dezoxiadenozina se leag la enzim i

sufer iniial oxidarea la un intermediar
cetozaharic, ce este instabil i se
descompune cu eliminarea de adenin,
prsind enzima n form redus.
Cataliza este stopat i NAD/NADH+H
exogen nu poate afecta reacia.
Astfel, inactivarea de hidrolaza SAH prin
conversia enzimei leaga NAD la NADH
este o inactivare in care nici o modificare
covalenta a enzimei nu este implicat.
66

Disfuncia sistemului imun n deficiena ADA

a fost de asemenea atribuit inhibiiei
sintezei de nucleotide pirimidinice de ctre
adenozin, cunoscut sub denumirea de
foamete pirimidinic.
Aceasta poate duce de la inhibiia conversiei
acidului orotic la orotidin 5-monofosfat sau
prin inhibiia sintezei de PRPP prin sinteza
excesiv de nucleotide adenilice.

67

Deficiena ADA cauzeaz moarte prin

infecie masiv nainte ca pacienii s
implineasc vrsta de 2 ani.
Unii copii cu deficit ADA i PNP au
benificiat prin infuzie periodic de eritrocite
iradiate (care conine ADA i PNP).
Iradierea eritrocitelor este necesar pentru
inactivarea celulelor albe a sngelui ce pot
fi prezente i astfel a reduce riscul bolii.

68

Deficienta PNP de obicei cauzeaz

hipouricemia i hipouricozuria, i excreia de
inozin, guanozin, dezoxiinozin i
dezoxiguanozin.
Alt mod de terapie n substituirea enzimelor
este administrarea periodic a unei forme de
polietilen- glicol modificat, prin injecie
intramuscular.
Enzima modificat, ce este preparata prin
conjugarea la polietilen glicol cu ADA purificat
(PEG-ADA), posed o via mai lung.
Ca consecin are loc corecia a 2 anormaliti
biochimice, numite: acumularea de metabolii
toxici fosforilai i inhibiia de SAH hidrolaza.
69

Terapia prin substituirea genelor poate fi

posibil i n deficiena ADA, ct i de PNP.
Celulele T modificate sunt rentroduse n
fluxul sanguin a pacientului.
Pacienii au aratat mbuntiri clinice att
timp ct au continuat s primeasc
tratamentul cu
PEG-ADA.

70

Deficit de monoadenilat
deaminaza

Este o tulburare musculara benigna

caracterizat de o istovire.
Relaia dintre disfuncia muchilor
scheletici i deficiena de AMP deaminaza
se explic prin ntreruperea ciclului purinic.
Ciclul nucleotidelor purinice const din
conversia de AMP-IMP-ATP i necesit AMP
deaminaza, adenilosuccinat sintetaza i
adenilosuccinat liaza.
Fluxul prin acest ciclu creste n timpul
exerciiilor
71

Au fost naintate cteva mecanisme pentru

a explica cum creterea n flux este
responsabil de meninerea nivelurilor
energetice proprii n timpul exerciiilor:
1. n timpul contraciilor musculare
activitatea AMP deaminazei crete.
Nucleotidele trifosfatidice sunt modulatori
negativi, unde nucleotidele mono- i
difosfatidice sunt modulatori pozitivi a
enzimelor.
2. NH3 produs n reacia AMP deaminazei
i nivelurile sczute de ATP ca rezultat a
exerciiilor stimulate de fosfofructokinaza
pentru a spori rata de glucoz utilizat.
72

o
o

3. Concentraia crescut de IMP poate

activa glicogen fosforilaza.
4. Producia de fumarat poate spori ciclul
TCA cnd necesitatea de producie de ATP
crete.
5. Formarea de IMP poate intreine un
mijloc prin care fondul intracelular de
nucleotide purinice este meninut.
Deficiena AMP deaminazei ntrerupe ciclul
nucleotidelor purinice i duce la disfuncii
musculare n timpul exerciiilor.
Deficiena AMP deaminazei nu trebuie s
cauzeze disfuncii musculare n timpul
odihnei.
73

Metabolismul
nucleotidelor pirimidinice

Biosinteza de
novo

Primul metabolit carbamoil-fosfatul este

comun i pentru ureogeneza ce se sintetizeaz n
mitocondrii, n cazul pirimidinelor n citozol.
Enzimele utilizeaz surse diferite de azot NH 3
ureogeneza i glutamina n pirimidinogenez.
Enzimele sunt distincte (2-carbamoil-fosfat
sintetaze).
Consecutivitatea reaciilor e reprodus mai jos.
74

NH2

CO2

C
O
OH
Acid carbamic

NH3

O
CH

HOOC

(CH2)2

NH2
ADP + Pi Glutamina

Glutamin
sintetaza

CO2

2ATP

NH2
Carbamoil fosfat
sintetaza

ATP

(1)

ATP
2ADP

O
NH3

CH

HOOC

(CH2)2

NH2
Acid glutamic

Carbamoil kinaza

Pi

ADP

OH

NH2
O

Carbamoil fosfat
O
HN
C
O

O
Dihidroorotaza

CH2

HO

(3)

CH

N
H COOH

Acid dihidroorotic

H2O

+
O

Aspartat
transcarbamoilaza

CH2

HO

H2N C
CH
N
O H COOH
Pi
Acid carbamoil aspartic

(2)

H2N

CH2
CH

COOH
Acid aspartic

Sinteza pirimidinelor i
unele defecte metabolice

NAD+
Dihidroorotat
dehidrogenaza

(4)

NADH + H+

O
HN

HN
C

CH

CH
N
H COOH
Acid orotic
+
P
P
OCH2O
O
P
O

HN
C
O

(5)
OH
PRPP

OH
Orotat-fosfo-ribozil
transferaza

PPi

P
OCH2O

OCH2O
CH
CH
COOH

(6)
O

CH
CH

O
C

OH
OH
,
Uridin-5 -monofosfat (UMP)
CO2

OMP-decarboxilaza

OH
OH
,
Orotodin-5 -monofosfat (OMP)

75

Reacia-cheie este catalizat de aspartat

transcarbamoilaz cu sinteza N-carbamoilaspartat, apoi are loc ciclizarea lui, cu
eliminarea H2O.
Enzima dihidroorotaza catalizeaz formarea
acidului dihidroorotic, dup care
dehidrogenaza NADd formeaz acidul orotic.
Transferul restului P-ribozil de la PRPP,
graie unei transferaze succedat de
decarboxilarea acidului orotidilic, finalizeaz
ciclul de reacii, formndu-se UMP.
76

Enzimele 1-3 i 5-6 au o localizare

citozolic i numai E4 mitocondrial.
Enzimele citozolice formeaz 2 complexe
multienzimatice.
Primul complex duce la sinteza (1-3)
acidului dihidroorotic, care difuzeaz n
mitocondrii, unde este dehidrogenat de E 4
(pe membrana intern), apoi produsul
trece n citozol, unde este supus aciunii
complexului multienzimatic urmtor (5-6).
77

Enzimele n complexe se sintetizeaz n

cantiti echimolare.
La deficien de OMP-decarboxilaz i orotatfosfo-ribozil transferaza , care prezint
domenii separate ale aceluiai polipeptid,
apare orotataciduria.
Boala debuteaz timpuriu i se caracterizeaz
prin creterea anormal, anemie
megaloblastic i excreie excesiv de orotat
n urin.

78

Dieta bogat n uridin amelioreaz anemia

i diminueaz eliminarea orotatului.
Administrarea uridinei, a citadinei care sunt
convertite n derivaii respectivi reia
diviziunea celular i amelioreaz situaia.
UTP sintetizat stopeaz sinteza acidului
orotic (efect inhibitor asupra carbomoilfosfat sintetazei).

79

De la UMP, prin fosforilare se obin

celelalte nucleotide pirimidinice graie
enzimelor E1-nucleozidmonofosfo kinaza
i E2-nucleoziddifosfo kinaza:
UMP

ATP
E1

ADP

ATP
UDP

E2

ADP
UTP

CTP se obine din UTP conform reaciei:

UTP + Glutamina + ATP + H2O

CTP + Glutamat + ADP + Pi +
2H+
Enzima ce catalizeaz aceast reacie
este
CTP-sintetaz
80

Sinteza dezoxiribonucleotidelor are loc

prin reducerea ribonucleotidelor la 2 a
difosfailor.
Electronii sunt transferai pe substrat
prin SH grupe.
Tireodoxina reperezint o protein mic.
Enzima tireodoxin reductaza e o
flavoprotein ce reduce tireodoxina.
Enzima ribonucleotid reductaza, pentru
activitate, necesit vit. B1, vit. B2,Mg2+.
81

Reducerea ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide

82

Ea const din dou subuniti R1 i R2:R1 are

locusuri de fixare a substraturilor
ribonucleotidice, efectorilor alosterici,
conine grupe SH, donatori de electroni la
reducerea restului ribozil;
R2 e o protein ce conine Fe i S, participnd
la formarea unui radical liber al restului de
tirozin, funcioneaz n ansamblu.
n structura DNA e prezent i timina,
analog metilat al uracilului.

83

Structura i reglarea ribonucleotid reductazei

84

Cum se sintetizeaz acest

dezoxiribonucleotid ?
Se metileaz dezoxiribonucleozid
monofosfatul (dUMP).
Enzima e timidilat sintaz.
Donator de CH3 servete tetrahidrofolatul i
nu S-adenozil metionina.
N5,N10 metilen-FH4, cednd grupa CH3, se
oxideaz la dihidrofolat FH 2, pierznd H2
necesari pentru formarea grupei CH 3.
85

Regenerarea FH4 are loc sub aciunea

enzimei dihidrofolat reductazei, utiliznd
NADPH.
esuturile n diviziune, unde are loc o sintez
rapid de TMP, sunt foarte sensibile la
inhibiia dihidrofolat reductazei.
De aceea n chimioterapia cancerului ca
factor de inhibiie poate fi folosit i timidilat
sintaza.
Fluoruracilul (analog al uracilului) ireversibil
inhib timidilat sintaza, formnd legturi
covalente ntre componenii reactivi i
enzim.
86

Sinteza TMP

HN
O
P

OCH2

Fluoruracilul
P

O CH2

H
N

H
10

N ,N - metilen - FH4

O
HOCH2

PLP
Serina

O
H

Serin
hidroximetil
transferaza

H
N

HN

N
O

HN R

7,8-dihidrofolat

AZT
Dihidrofolat
reductaza

H2N

CH2

H
N N N

Glicina

H2N
CH3

HN

CH2
O H C N R
5

dTMP

HN

C H
N

OH

Timidilat sintaza

dUMP

H2N

HN
O

OH

NADP+

H
N

HN

NADPH + H+

H
CH2

HN R

O
Tetrahidrofolat

H2N

HN
NH2

H
N
N
H
CH3

Metotrexatul

COO- CH2

CH2
N

COO-

NH

CH

87

CH2

Aminopterina, ametopterina (metotrexatul)

sunt analogi ai acidului folic, inhibitori
competitivi ai dihidrofolat reductazei.
mpiedic diviziunea celular i 6mercaptopurina, 6- tioguanina.
Un analog structural al nucleotidelor
pirimidinice este azidotimidina (AZT),
utilizat n tratamentul infeciilor cu
virusul imunodeficienei umane

88

Reglarea metabolismului
pirimidinic

Reglarea este fin, alosteric.

dATP inhib reducerea sa i stimuleaz
reducerea pirimidinelor dUDP,dCDP.
TTT frneaz reducerea pirimidinelor
i stimuleaz reducerea purinelor.
Reglarea biosintezei poate fi redat n
felul urmtor:
E

CO2 + 2ATP + Gln

E1

Carbamoil fosfat

UMP

GTP

Glutamina

ATP

PRPP

Aspartat

Carbamoil aspartat

UMP

89

UTP

CTP

Aspartat transcarbamoilaza (ATS-E2)

reprezint o enzim compus din dou
subuniti catalitic i reglatoare.
Activarea ATS de ctre ATP are n
consecin:
1) echilibrarea vitezei de sintez a
nucleotidelor purinice i pirimidinice;
2) semnaleaz prezena ATP-ului n
concentraii suficiente ca substrat
pentru sinteza pirimidin nucleotidelor
(UMP i carbamoil fosfatului).
90

Sistemul de reglare e destul de complicat,

dar asigur sinteza unor cantiti echilibrate
ale tuturor celor 4 dezoxiribonucleotide.
Evident c ribonucleotid reductaza posed
stri conformaionale cu diferite proprieti
catalitice.

91

Reutilizarea i catabolismul
nucleotidelor pirimidinice

Fondul metabolic al acestor compui

include compui sintetizai de novo i cei
eliberai din acizii nucleici, acizii nucleici
exogeni nu contribuie la formarea acestui
fond.
n metabolismul pirimidinelor au loc
reacii similare
descrise
la
purine.
H2O
Pi cu cele
1
R
P
Pi
E1

Nucleotid

Nucleozid

E2

Baza pirimidinica

ADP
Nucleozidele pirimidinice
sunt reciclate
ATP
Nucleozid
Nucleotid
dup fosforilare.

Kinaza

92

O kinaz accept ca substrat uridina i

citidina, iar alta timidina.
La purine aceast cale metabolic este
de mic importan, nsi adenozina
fiind fosforilat n ATP.
Bazele pirimidinice nu sunt reutilizate, ci
degradate n compui cu molecul mic.
-alanina i acidul -amino-izobutiric
sunt excretai sau catabolizai n cile
respective
93

Metabolismul
cromoproteinelor

Structura hemoglobinei.
Reprezint proteine complexe, avnd ca
constituieni o protein simpl i un
component neproteic ionii metalici ai unor
heterocicluri diverse, dintre care cei mai
importani sunt hemul hemoproteidele cu
derivaii si: hemoglobina (Hb), mioglobina,
sistemul citocromic, catalaza, peroxidaza i
eritrocruorinele proteine situate n
sngele i esuturile unor nevertebrate.
O protein fieroporfirinic este i triptofan
pirolaza.
94

Patologia molecular a
hemoglobina

Spre deosebire de Hb-A (Hb omului adult),

exist i Hb patologice.
La anemia falciform se nregistreaz Hb-S
primul exemplu de boal molecular descris.
Hb-S se caracterizeaz prin prezena n
caten (n poziia 6, la captul N terminal),
n locul acidului glutamic, a valinei, la care
se diminueaz solubilitatea hemoglobinei
dezoxigenate.
Solubilitatea Hb S oxigenate nu se modific.
95

Aceast schimbare conduce la apariia unui

fragment capabil de agregare.
Dup eliberarea O2, are loc o transformare
conformaional, cu apariia la suprafa a
acestor zone ce conduc la agregarea
moleculelor de Hb, la care se formeaz
agregate mari, lungi, simultan deformnd
eritrocitul, care capt o form
drepanocitar.
Cinetica formrii fibrelor de
dezoxihemoglobin are o importan
primordial, cci de ea depinde
configuraia adevrat a eritrocitului care
trece prin capilare (timp de 1 secund).
96

Procesul depinde de concentraia Hb-S.

Scderea concentraiei de 2 ori (la
heterozigoi) micoreaz viteza de formare
a fibrelor de 1000 ori.
Indivizii heterozigoi sunt rezistente la
malarie, nu atest anemie drepanocitar
caz tipic de polimorfism balansat
adaptabil.
Sunt remarcate mai mult de 100 de Hb
defectate, fr influen sau cu efect nociv.
97

a)

b)

Se difereniaz cteva tipuri de anomalii ale

Hb:
Substituirile n partea exterioar a moleculei
de Hb, practic, sunt benigne, cu excepia Hb
S.
Se modific centrul activ. n Hb M histidina
proximal sau distal e substituit cu tirozina
ce conduce la stabilizarea formei oxidate (fieri)
complex al tirozinei cu Fe. Substituirea se
poate produce n catenele i . Au fost
depistate toate cele 4 variante mutante. Hb cu
dou hemuri n fieriform Hb M
(methemoglobin) se atest la heterozigoi;
la homozigoi duce la un sfrit letal;
98

c)

d)

Modificri n structura teriar. n cazul

dat formarea conformaiei normale a
moleculelor nu are loc i astfel de tipuri
de hemoglobin nu sunt stabile (glicina e
substituit cu arginina). Sunt nregistrate
Hb incapabile s rein hemul datorit
modificrilor conformaionale.
Modificri n structura cuaternar. Aceste
mutaii ating. Regiunea contactelor, ceea
ce cauzeaz pierderea proprietilor
alosterice nsoit de tulburri ale
afinitii fa de O2.
99

1)

2)

Modificrile n regiunea contactului 1,

2 conduc la cooperativitate joas,
concomitent sporind afinitatea la O 2.
Contactele ntre subunitile de acelai
tip sunt polare, iar ntre subunitile de
tip diferit mai intense i nepolare.
Se atest cteva cazuri:
Substituirea aspartatului n caten cu
asparagina micoreaz P50 de la 26 la
15 tori (Hb-Kempsey).
Substituirea n caten a aspartatului
cu treonin mrete afinitatea la P50
egal cu 50 tori (Hb-Kansas).
100

Sinteza
hemului

Experimentele cu administrarea atomilor

marcai, efectuate de David Shemin cu
colaboratorii, au demonstrat c
precursorul hemului se formeaz prin
condensarea glicinei cu succinatul activ la
sinteza amino-levulinatului.
Reacia este catalizat de -aminolevulinat sintaz (E1) dependent de vit.B6.
Amino levulinat sintaza este o enzim
mitocondrial reglatoare.
101

OOC CH2

CH2

N
H2N H2C H

CH2

COO-

Porfobilinigen
(condensarea a 4 molecule)

Cosintetaza
(uroporfirinogen sintaza)

4NH3
A

H2C

CH2

N
H

A
NH
P

A
HN
P

H
N

H2C
P

CH2
A

Uroporfirinogen

HC

HC
P

Fierochelataza

N
V

Fe (II)

2H+

CH

N
H
N

HC

CH

N
H

M
P

uroporfirinogen III
-cosintaza
-decarboxilaza
coproporfirinogen
oxidaza

Fe

M
N

V
HC

CH

Hem

Protoporfirina IX

Formarea hemului
V-vinil, M-metil, P-propionil

CH

102

Viteza de reacie crete n lipsa

hemului.
Apoi 2 molecule de -amino-levulinat se
condenseaz, cu formarea porfobilinogenului.
E o reacie catalizat de o dehidrataz (E 2).
Enzima este localizat n citozol, conine Zn i
este inhibat de ionii de plumb.
n consecin, 4 molecule de porfobilinogen se
condenseaz, formnd un tetrapirol, care,
dezaminndu-se, se ciclizeaz producnd
uroporfirinogenul.
103

Prin decarboxilare i oxidri succesive,

se produce protoporfirina IX.
O hemosintetaz, enzim mitocondrial,
introduce fierul; enzima conine grupa
SH.
Pentru sinteza hemului sunt necesari i
urmtorii compui: acidul tetrahidrofolic,
vit.B12, Cu2+.
Fierul este transferat de o transferin
Fe3+, ce reprezint o protein.
O alt protein l depoziteaz n esut
sub form de feritin.
104

Cavitatea interioar a acestei proteine

poate fixa pn la 4500 fierioni.
n organism se conin aproximativ 4,5-5,0
g de Fe; pe contul Hb = 60-70%;
mioglobinei = 3,5-5,0%; fieritinei = 20%;
transferinei = 0,18%, fierului funcional
din esuturi i revine 5%.
Firete, fierul cromoproteidelor
alimentare nu se utilizeaz pentru
sinteza fieroproteidelor din organism,
deoarece hemul se oxideaz n hematina
care nu se absoarbe n intestin.
105

Acest pigment se elimin prin masele

fecale.
Drept surs de fier pentru scopuri sintetice
servesc alimentele i, de asemenea, fierul
ce se elibereaz la degradarea eritrocitelor.
n procesul sintezei cele trei enzime
enumerate se regleaz prin retroinhibiie
de hem.

106

CH2 COO
NH3

OOC CH2 CH2 C

O

Succinil-CoA

Glicina

-amino
levulinat
sintaza

CoA

Hemina
CoA
NH3

OOC CH2 CH2 C CH COOO

CO2

Sinteza
porfobilinogenului

NH3
-

OOC CH2 CH2 C CH2

-aminolevulinat O
Condensarea moleculelor

-aminolevulinat
dehidrataza
-

2H2O
CH2 CH2 COO-

OOC CH2
H2N CH2

Plumb

N
H

Porfobilinogen

107

Degradarea hemului

Eritrocitele vieuiesc aproape 120 zile.

Zilnic se degradeaz i se sintetizeaz n
organism 6-7 grame de hemoglobin.
Celulele vechi sunt eliminate din
sistemul circulant i scindate n splin de
celulele sistemului macrofagal.
La prima etap hemoglobina eliberat
prin liza hematiilor mbtrnite formeaz
cu haptoglobina un complex Hbhaptoglobina (o 2-glicoprotein seric).
108

Complexul este supus oxidrii enzimatice

microzomale, cu formarea unor compui
intermediari ca coleglobina, verdoglobina,
care apoi pierd globina, transformndu-se n
hem.
Globina se hidrolizeaz pn la aminoacizi,
iar fierul din hem este fixat de transferina
plasmei, apoi poate fi depozitat n ficat i
reciclat.
Reacia de degradare a hemului const n
scindarea punii metenilice , cu deschiderea
ciclului tetrapirolic (fig.6,62, pag.432).
109

Verdoglobina

Bil
Bilirubin diglucuronid

Complexul
bilirubin-proteine

Snge

Formarea
110 bilirubinei

Reacia este catalizat de

hemooxigenaza numit i -metiniloxigenaza, care are dou particulariti:
a) se prezint drept o monooxigenaz
solicitant de O2 i NADPH.
b) carbonul punii metenilice se elimin
sub form de CO. Particip n calitate de
cofactori, vitamina C, Fe2+. Aceasta este
unica reacie n organism unde se
elibereaz CO.

111

Ulterior, puntea metenilic central n

biliverdin se reduce sub aciunea
biliverdin reductazei, utiliznd NADPH, cu
formarea bilirubinei.
Biliverdin reductaza este prezent n
numeroase esuturi, dar prioritar n ficat.
n mod normal, bila conine numai urme
de biliverdin, dar graie culorii sale
intense, ea imprim bilei o culoare verzuie.
Bilirubina liber n exces este un
decuplant al fosforilrii oxidative, ce duce
la inhibarea sintezei de ATP.
112

Bilirubina, n complex cu albumina seric,

e denumit bilirubina liber indirect, cu
o cot de 75% din toat cantitatea (2,5
12mg/L, 8,7 20,5 mol/L), fiind
transferat apoi n ficat.
Bilirubina indirect este toxic, nu trece
prin filtrul renal i nu se elimin prin bil.
Bilirubina liber este solubil n solveni
organici i numai apoi d reacie cu
diazoreactivul (reacie indirect).
Aici, n ficat, se modific n form mai
solubil, conjugat cu acidul glucuronic,
ce adiioneaz la catenele propionice.
113

Sub form de diglucuronid este

excretat prin bil bilirubina direct.
Un rol important n procesul de
eliminare a bilirubinei la nivelul celulei
hepatice i revine proteinei
transportatoare lingandina (masa
molecular aproximativ 44000 Da), ce
reprezint aproximativ 6% din totalul
proteinelor hepatice.
n intestine, sub aciunea enzimelor
bacteriene, ce scindeaz acidul
glucuronic, fiind redus (bilirubina) prin
mezobilirubin la mezobilirubinogen.
114

Aproximativ 4 mg este cantitatea diurn

de urobilinogen i aproximativ 300 mg
este cea de stercobilinogen.
Bilirubina fiind redus (2 vinil 2 etil i 2
metin 2 metilen), va fi transformat n
urobilinogen care, prin reducerea
legturilor duble din nucleele terminale,
se va transforma n stercobilinogen.
n continuare, dehidrogenarea acestor
compui la nivelul punii -metinice
rezult urobilina i stercobilina
principalii pigmeni ai materialelor fecale.
115

O mic parte din bilirubin,

urobilinogen i stercobilinogen se
reabsoarbe din intestin n circulaia
portal, ajungnd la ficat, de unde sunt
reexcretai prin bil ciclul enterohepatic al pigmenilor biliari.
Cantiti mici se elimin prin urin,
excreia prin urin a acestor compui
crete n insuficiena hepatic.
116

1.

Sunt atestate cteva tulburri genetice

ale metabolismului porfirinelor, ce se
caracterizeaz prin excreia crescut de
porfirine i precursori ai acestora.
Porfiria intermitent acut. Sunt afectate
celulele ficatului, reducndu-se activitatea
uroporfirinogen sintazei i, compensator,
amplificat de -amino levulinat sintaza,
crete concentraia amino levulinatului i
a porfobilinogenului n ficat, eliminnduse prin urin, ceea ce cauzeaz dereglri
neurologice, dereglri intermitente n
abdomen.
117

2.

3.

Porfiria eritropoetic congenital. E

diminuat de activitatea enzimelor
(cosintaz, izomeraz), provocnd
acumularea uroporfirinei, coproporfirinei.
Eritrocitele se distrug prematur. Urina
este de culoare roie, dinii roz, pielea
sensibil la lumin.
Sunt studiate i porfirinele hepatice
primare porfiria cutanea tarda ce se
caracterizeaz prin hipersintez i
eliminare urinar de uro- i coproporfirina
I. Pacienii sunt fotosensibili cauza este
deficiena de uroporfirinogen
decarboxilaza.
118

4.

5.

La deficiena coproporfirinogen oxidazei

(coproporfiria ereditar), se acumuleaz
i se elimin prin urin
coproporfirinogen III i alte intermediate
porfobilinogen, ac. -amino levulinic.
Manifestrile clinice sunt asemntoare
cu cele din porfiria acut intermitent.
La insuficiena ALA dehidratazei i a
fierochelatazei, se acumuleaz n urin
coproporfirina III i acidul -amino
levulinic. Deficitul fierochelatazei n
esuturi duce la protoporfirie
eritrocitele, plasma, fecalele cinin
cantiti mari de protoporfirina IX.
119

Bolnavii sunt fotosensibili, au ciroz i

urticrie prin expunerea la soare.
Creterea activitii amino levulinat
sintazei duce la porfirie toxic prin
urin se elimin ac. amino levulinic i
porfobilinogen, coproporfirina III.
Organismul reacioneaz vdit la
droguri, inclusiv la alcool.
Hepatitele i cirozele se caracterizeaz
prin coproporfirinii secundare cu
izomeri de tip I; intoxicaiile alcoolice
i ciroza etilic prin izomeri de tip III.
120

Metabolismul
proteoglicanilor
121

Proteoglicanii (PG) principalul

component al substanei fundamentale
din matricea extracelular.
Se caracterizeaz printr-o mare
diversitate tisular, precum i a
glucidelor (85-90%).
Sunt constituentele glicozoaminglicanilor
covalent legai cu proteinele (5-15%).
Glicozoaminglicanii (GAG) sunt catene
mari neramificate, compuse din elemente
dizaharidice repetabile.
122

Aceti compui se mai numeau

mucopolizaharide.
Denumirea actual e determinat de
faptul c n componena dizaharidic
se conine un aminozahr (N-acetilglucozoamin sau N-acetilgalactozoamin).
Prezena grupelor carboxil sau sulfat
(a ambelor grupri) la majoritatea
resturilor de zahr le aprovizioneaz
cu o sarcin electric negativ mare.
123

Dup tipul resturilor de zahr, tipul

legturii ntre ele, numrul i poziia
grupelor sulfat deosebim 7 grupe de
glicozoaminglicani (fig. 8.15).
Biosinteza are loc n fibroblati, cu
participarea a trei categorii de compui:
aminoacizi, glucoz i radicali sulfurici
(PAPS).
Se consider c activarea sulfului se
efectueaz n baza ATP, sub aciunea
ATP-sulfurilazei i APS (adenozil
monofosfosulfat) kinazei.
124

Prima enzim i intensific activitatea

n prezena retinolului, fapt ce explic
rolul favorizant al vit.A la anabolismul
esutului conjunctiv.
La fel ca i colagenul, PG, anterior
secretai sunt modificri n aparatul
Golgi (sulfatarea i epimerizarea) i
covalent se fixeaz de resturile de serin
sau treonin n proteina cor.
Moleculele proteoglicanilor se asociaz
cu fibrele de colagen, formnd o barier
pentru molecule o sit molecular.
125

Proteoglicanii se deosebesc de
glicoproteine, al cror component
glucidic e de circa 1-60% din masa
total i e reprezentat prin catene mici
ramificate de oligozaharide, care
deseori conin acid sialic.
Proteoglicanii au molecule mult mai
mari, componentul glucidic e
reprezentat printr-o mulime de
lanuri neramificate de GAG, normal
nu conin acid sialic i constituie pn
la 90-95% din masa total.
126

127

Funcionnd ca nite site moleculare,

PG regleaz ptrunderea prin ei a
moleculelor mari (proteine etc.).
n organism exist un echilibru dinamic
permanent ntre biosintez i degradare.
Degradarea PG se produce cu mult mai
rapid dect a colagenului, n majoritatea
esuturilor, n rinichi 3-8 zile.
Produsele scindrii se excret prin urin
cantitatea diurn 250 mg.

128

Proteoglicanaza ( o metalenzim cu
un pH cuprins ntr-un domeniu larg
5-9) are proprieti diverse i
scindeaz hidrolitic legturile ntre
condroitin sulfat i proteina central
n multe regiuni i n numeroi PG.
Enzima are i capacitatea de a proteja
peptidele de extensie, precum i de a
degrada glicoproteina matriceal.

129

Ulterior, intr n funciune endo- i

exoglicozidazele, sulfatazele; dintre
glicozidaze -glucuronidaza, iduronidaza, -acetil-hexozaminaza,
-galactozidaza, aril-sulfatazele (fig.
8.18).

130

Modificrile constituenilor
PG

Distingem modificri fiziologice

asociate, cu naintarea n vrst, i
patologice cauzate de funcionarea
anormal a unor enzime participante
la ana- sau catabolismul lor.
n funcie de vrst, e stabilit
majorarea cantitii de colagen, ca,
de altfel, i a keratan sulfatului n
esuturi, unde se localizeaz.
131

Coninutul condroitin sulfatului n

cartilaje, discuri intervertebrale i al
acidului hialuronic n piele se
micoreaz.
Aceste schimbri au efecte importante
pentru gradul de hidratare, precum i
pentru posibilitatea eventualei calcifieri
(n cartilaje, oase).
Hormonul de cretere (GH) stimuleaz
adiionarea prolinei n lanul
tropocolagenului.
132

Administrarea lui la orice vrst apropie

caracterul sintezei PG de procesele ce au
loc la animalele tinere amplific
proliferaia celulelor i stimuleaz
ataarea grupelor sulfat n PG.
Testosteronul amplific viteza sintezei
acidului hialuronic, la fel ca i insulina
(plus condroitin sulfaii).
La diabet sunt vdite consecinele
inhibiiei sintezei PG, amplificarea
degeneraiei vaselor, vindecarea tardiv
a rnilor, cnd pacienii sunt mai sensibili
la infecie.
133

Stimuleaz sinteza PG i mineralocorticoizii,

amplificnd proliferarea fibroblatilor.
Glucocorticoizii administrai conduc la
repolimerizarea acidului hialuronic i a altor
PG, inhib sinteza, reducnd aciunea
defavorizant a acestor hormoni n procesul
de tratare a rnilor.
Mucopolizaharidozele sunt o categorie de
boli genetice, ce se caracterizeaz prin
depozitarea n esuturi i excreia urinar a
GAG, ca rezultat al insuficienei unei sau
mai multe enzime lizozomale implicate n
degradarea lor.
134

Au loc modificri n structura scheletului,

n dezvoltarea organelor, afeciuni
mintale, tulburri cardiopulmonare de
diverse genuri i intensiti.
Defectul enzimatic specific se stabilete
prin fixarea activitii unor enzime n
lichidul amniotic.

135

Au fost detectate un grup de erori umane

nnscute de metabolism, implicnd
depozitarea de glicolipide, glicopeptide,
mucopolizaharide i oligozaharide.
Aceste boli sunt cauzate de defecte n
activitatea glicozidazelor, care mpiedic
catabolismul oligozaharidelor

136

Dereglrile implic acumularea n

esuturi i urin a compuilor derivai de
la degradarea incomplet a
oligozaharidelor i poate fi acompaniat
de anormaliti scheletale, renale,
hepatice sau defecte cardiovasculare, cu
retarduri mintale severe.

137

Exist un grup de dereglri genetice ce sunt

caracterizate printr-o acumulare excesiv i
excreie de oligozaharide ale
proteoglicanilor, numite
mucopolizaharidoze.
Bazele chimice pentru acest tip de dereglri
sunt similare, modul de motenire ca i
manifestrile chimice putnd s varieze.
Sindromul lui Hurler i cel al lui Sanfilippo
sunt motenite cu transmitere autosomal
recesiv, ns boala lui Hunter este
dependent de sex.
138

Att sindromul lui Hurler, ct i boala

lui Hunter sunt caracterizate prin
anormaliti scheletale i retard mintal,
care n cazuri severe pot cauza
moartea.
n contrast, sindromul lui Sanfilippo
(MPS III) defectele fizice sunt relativ
minore, n schimb dereglri severe ale
sistemului nervos cu retard mintal.
Per total, incidena pentru toate
mucopolizaharidozele este de 1 la 30
000 nateri.
139

n plus la cele menionate, mai sunt altele

puin nelese.
Sindromul lui Morquio implic degradarea
nepereche a keratin-sulfatului, probabil
datorat unei deficiene n 4-sulfataz;
deficiena multipl de sulfataz implic
deficiena n ultimele 6 sulfataze; i boala
i-cell (celul-i) implic o descretere n
cteva hidrolaze.

140

Aceste dereglri sunt posibil de diagnosticat

n perioada prenatal, din moment ce
modelul de metabolism patern obinut din
celulele afectate din lichidul amniotic este
extrem de diferit de normal.
Mai departe o terapie promitoare pentru a
corecta o parte din aceste boli, o contribuie
terapia prin nlocuirea de gene sau enzime.

141

Structura dermatan i heparan

sulfatului
2

Dermatan sulfat:

IdUA GalNAc

GlcUA GalNAc

OSO3H OSO3H

Heparan sulfat:

IdUA GlcNAc
1

OSO3H

OSO3H

GlcUA GlcNAc

OSO3H

OSO3H

142

Maladie
Hunter (MPS
II)

Produse
acumulate
Heparan
sulfat
Dermatan
sulfat

Deficiena
enzimei
Iduronat
sulfataza (1)

Hurler
Scheie
(dereglri
alele)

Heparan
sulfat
Dermatan
sulfat

-L-iduronidaza
(2)

Marateaux Lamy

Dermatan
sulfat

Nacetilgalactoza
min (3)
143
sulfataza

Maladie

Produse
acumulate
Heparan
sulfat

Deficiena
enzimei
Heparan
sulfamidaza (6)

Sanfilippo B

Heparan
sulfat

Nacetilglucozaminid
aza (9)

Sanfilippo C

Heparan
sulfat
Heparan
sulfat

N-acetil
transferaza
N-acetil
glucozamin -6sulfataza

Sanfilippo A

Sanfilippo D

144

Sinteza tetrahidrobiopterinei din GTP

145

Degradarea nucleotidelor purinice

146

Sursele de carbon i azot din pirimidine

(C4, C5, C6 i N1 din aspartat; N3 din glutamin; i C2 din CO2)
147

Sinteza de novo a
2-deoxiribonucleotidelor pirimidinice

148

Sinteza deoxitimidin nucleotidei

149

Degradarea uracilului i timinei n produse finale

150

Reglarea de ctre mucosa

intestinal a absorbiei fierului
151

Distribuia aproximativ a fierului

(la un adult de 70 kg) 152

Calea de biosintez a hemului

153