Efectele expunerii mediului la DDT n creierul unui Songbird:

Schimbri n structurile asociate cu mperechere i cntat.

Abstract
Diclordifeniltricloretanul (DDT) este un compus organoclorurat persistent gsit in intreaga lume, care
provoac, anomalii fiziologice,anatomice i comportamentale semnificative la om i animale. Cu toate
acestea, putin se stie despre faptul c expunerea mediului la DDT-ul afecteaz creierul. Aici, ne arat c
expunerea mediului la DDT modific creierul psrilor American Robins (Turdus migratorius) n mai
multe moduri. Cresterea nivelului de DDT a dus la: (1) creier mai mic i volumele relative ale forebrain
mai mici; (2) o reducere a dimensiunii a dou nuclee, nucleul robust arcopallialis (RA) i HVC, i (3) o
reducere drastic in marime neuronal i volumul total al intercollicularis nucleului (ICO), o structur
care este critic pentru comportamentul sexual normal . Rezultatele noastre demonstreaz c, prin urmare,
expunerea mediului la DDT este corelat cu schimbri semnificative n creier i n special acele structuri
legate de mperechere. Avnd n vedere amploarea acestor schimbri n creier i faptul c expunerea
mediului la DDT a fost limitat la dezvoltarea timpurie, putem concluziona c att oamenii, ct i
animalele care triesc n medii contaminate cu DDT pot fii la risc de leziuni neurologice.
Introducere
DDT este un contaminant persistent al mediului gsit n cele mai multe regiuni ale lumii. Expunerea
cronic i acut a DDT afecteaz n mod negativ dezvoltarea, fiziologia, morfologia i comportamentul
att la animale ct i la om. DDT-ul provoac aceste efecte n primul rnd prin perturbarea functiei
endocrine normale, astfel nct animalul trie te un mediu hormonal anormal. De i ntregul sistem
endocrin este perturbat de DDT, efectele cele mai proeminente sunt cele privind reproducerea, deoarece
metaboliii DDT posed grade diferite de efecte androgenice, anti-androgenice, estrogenic si antiestrogenice i inhib secreia de gonadotropine.
Dei toate vertebratele sunt sensibile la perturbarea sistemului endocrin de ctre DDT, psrile par a fi
deosebit de sensibile.Efectele tulburrilor endocrine induse de DDT asupra reproducerii la psri sunt
bine documentate i includ infertilitatea, succesul redus de reproducere i comportamentul reproductiv i
ngrijire printeasc . Datorit sensibilit ii psrilor la schimbrile din mediul hormonalal al oului,
acestea sunt extrem de sensibile la tulburrile endocrine in timpul dezvoltarii timpurie i acest lucru a dus
la multe dintre anomalii comportamentale prezente la psrile expuse la DDT. Aa cum creierul este locul
principal de actiune hormonala pentru comportamentul hormonilor-sensibili, aceste comportamente
anormale rezult probabil din modificrile n structurile subiacente neuronale. Studii neuroendocrine
despre Songbirds i prepelie,au demonstrat c schimbrile din mediul hormonal sunt corelate nu numai
cu un comportament, dar, de asemenea,si cu dimensiunea regiunilor creierului de mediere ale acestor
comportamente.n cazul n care modificrile de comportament asociate cu expunerea la DDT sunt un
rezultat de perturbri endocrine, atunci este probabil c exist schimbri n creier, dar acest lucru a rmas
n mare parte neexplorat.
La Songbirds, exist mai multe regiuni ale creierului care ar putea fi afectate de DDT, dar sistemul de
cntec, intercollicularis nucleul (ICO) i septul sunt susceptibile de a fi afectate, deoarece acestea contin
receptori steroizi i mediaza comportamente care sunt depreciate de DDT . n cele din urm, septul
conine, de asemenea, receptorii de steroizi i joac un rol critic in medierea comportamentul social i la

fel ca nvare i memoria, toate acestea sunt afectate de expunerea la DDT. Avnd n vedere efectele
daunatoare pe care DDT-ului i degradantii si le pot avea asupra receptorilor androgeni si
estrogeni,tulburrile de comportament care rezult in urma expunerii la DDT i a efectelor pe care diferite
niveluri de hormoni o au asupra dimensiunilor regiunilor creierului, am prezis c cantitatea de DDT la
care au fost expuse Songbirds ar fi corelata cu dimensiunea regiunilor creierului. Concret, niveluri mai
ridicate de DDT ar trebui s fie asociate cu nuclee mai mici. Aici, vom testa aceasta ipoteza cu American
Robins (Turdus migratorius), care au fost expusi in mod natural la nivelurile mediului de DDT n ovo i n
timpul dezvoltarii precoce post-incubaie..
Metode
Nivelurile de contaminani-Pentru a determina nivelul de expunere la DDT i alti poluanii organici
persisteni (POP), oule au fost colectate de la cuiburile de American Robins din livezi din Valea
Okanagan (BC, Canada) n iulie 1997. Coninutul ou au fost omogenizate i contaminate, folosind un
gaz,cromatografia standard i masa spectrofotometriei de protocol. n plus fa de DDT i toti congenerii
i izomerii si, mai multe niveluri ale POP au fost analizate, inclusiv izomerii bifenili policlorura i (PCB).
Aa cum se arat n tabelul 1, nivelurile de POP s-au situat sub nivelul de test i DDT a fost prezent la
cele mai mari concentraii.
Substante

Concentrati (g/g)
Valoare medie

Serie

1,2,4,5-Tetraclorobenzen

<0.001

1,2,3,4-Tetraclorobenzen

<0.001

Pentaclorobenzen

<0.001

-Hexaclorociclohexan

<0.001

-Hexaclorociclohexan

<0.001

-Hexaclorociclohexan

<0.001

Hexaclorobenzen

<0.001

Octaclorostiren

<0.001

Heptaclor epoxid

<0.001

Oxichordan

<0.001

trans-Clordan

<0.001

cis-Clordan

<0.001

trans-Nonaclor

0.002

00.016

cis-Nonaclor

0.003

00.022

Dieldrin

<0.001

Photomirex

<0.001

Mirex

<0.001

Tris(4-clorofenil) metanol

0.050

00.233

p,p-DDT

11.530

0.07220.799

o,p-DDT

0.069

00.245

p,p-DDE

55.775

14.876151.224

o,p-DDE

0.006

00.012

p,p-DDD

1.048

0.0183.562

o,p-DDD

0.008

00.016

Total () DDT

68.408

14.956174.671

Total () PCBs

0.05800

0.01480.1570

Tabelul 1. Insemnatatea i intervalele de compui organici clorurati si bifenili policlorura i lui (PCB), gsiit n ou American
Robin (n = 18) colectate de la Valea Okanagan

Histologie
Creierele au fost inglobate in gelatina i serial sec ionate pe o scen microtom de congelare. Sec iuni
coronale de patruzeci de micrometri au fost colectate n 0,1 M fosfat-salin tamponat (pH 7,4), montate
pe diapozitive gelatinizate, ptate cu thionin, deshidratate printr-o serie de etanol, eliminat n Hemo-D i
coverslipped cu Permount.
Masuratori neuroanatomice
Pentru fiecare specimen, a fost luat o serie de fotografii digitale a fiecrei regiuni creierului.
Msurtorile au fost fcute direct din fotografiile cu ajutorul programului din domeniul fotografiei NIH .
Cele 3nuclee de cntec msurate au fost zona X, HVC i nucleul robust al arcopallium (RA). Nuclee de
cntec au fost toate uor definite de celulele intunecate care se coloreaz n raport cu esutul din jur i
laminele distincte care nconjoar fiecare nucleu (fig. 1A-C). Toate nuclee septal au fost incluse n
msurarea noastr de sept (fig. 1D). Tractul septomesencephalic i schimbrile n densitatea celular au
definit frontier ventral a septului. ICO a fost definit prin prezen a de celule relative mari,cu chip
ntunecos colorate n raport cu griul adiacent central i separate de nucleul mesencephalicus lateral, partea
dorsala (MLD)a unei lamina de-a lungul frontierelor ventro-laterale ale MLD (fig. 1E).

Fig. 1. Microfotografii arat cele trei nuclee cntec msurate, zona X (A), HVC (B) i nucleul robust al arcopallium (C), precum
i nucleu intercollicularis (D) i sept (E). Liniile punctate indic frontierele care delimiteaz fiecare regiune. Abrevieri se refer
la urmtoarele: A-arcopallium, ICO, DM-nucleu intercollicularis mediu dorsal; ICO, VL- nucleu intercollicularis ventrolateral;
M-mesopallium; MLD-nucleu mesencephalicus lateral, partea dorsal, MST-medial striatum, RA-nucleu solid al arcopallium, Ssept; St-striat; TEO-optic tectum; X-zona X, Scara bari=0.4 mm.

n plus fa de aceste regiuni, am msurat, de

asemenea, mai multe regiuni ale creierului n

cazul n care nu ne-am atepta s gseasc un

efect semnificativ de expunere DDT. Aceste

nuclee nu sunt implicate n comportamentul

reproductiv sau parental i nu ai receptori de
androgen si estrogen. Acestea au inclus
prospectul ventral al nucleului geniculat lateral
(GLV), nucleul rotund (Rt), becuri MLD i
olfactiv (BO), i sunt denumite n continuare
regiuni de control. Graniele acestor regiuni au
urmat descrieri prevzute n literatura de
specialitate.
Analize statistice
nainte de a toate analizele statistice, am evaluat
dac volumele de regiuni ale creierului au fost
afectate de alometrie. Efectele alometrice au fost
evaluate separat pentru fiecare sex din cauza
dimorfismului sexual proeminent n volumele de
la mai multe nuclee.. Dintre toate regiunile
creierului msurate, numai volumul forebrain a
fost semnificativ corelat cu volumul creierului la
barbati (F (1,8) = 17.62, P = 0,003).
Corelaii ntre DDT i ali poluani organici
persisteni i dimensiunea regiunii creierului atat
absolut i relativ au fost efectuate separat
pentru fiecare sex din cauza dimorfismului
sexual din unele regiuni i brbai au fost expusi
la niveluri de expunere DDT semnificativ mai
mari dect femelele .
Rezultate
Corelaii cu DDT .La barbati, dar nu femele, a
existat o reducere de volum semnificativ n
creier (15%) i forebrain relativ (13%), odat
cu creterea . O tendin negativ la femei a fost
observat n terenul volumelor relative i
forebrain DDT, care nu a reuit s ajung la o
semnificaie (P = 0,06) (fig.2)

Fig.2-Volum de creier (A)si volum relativ de forebrain

relativ(B)reprezentate grafic in functie de suma tuturor
izomerilor DDT i congeneri (DDT n g / g). Cercurile
deschise indic femele i cercurile nchise indic masculi.
Liniile solide indic corelaii semnificative.

Cum era de asteptat de la concentraie mare de receptori de androgeni si de estrogen din ICO,volumul de
ICO a fost, de asemenea, negativ corelat cu DDT. n ambele cazuri si la brba i i la femei a existat o
reducere dramatic n volumul absolut de ICO, cu 30% odt cu cre terea de DDT. Aceast scdere
semnificativ n mrime de ICO a reflectat o scdere n dimensiunea soma a neuronilor ICO (fig. 3). La
barbati, ICO dimensiunea neuron a sczut semnificativ odat cu cre terea DDT ( (10) = -0.58, p =
0,02). O tendin negativ a fost, de asemenea, prezent la femei, dar nu a atins semnificatie ( (8) =
-0.55, p = 0,16).

Fig. 3. Mrimea soma a neuronilor (ICO) (m2) reprezentat grafic in functie de sumai tuturor izomerilor DDT i congeneri
(DDT n g / g). Cercurile deschise indic femele i cercurile nchise indic masculi. Liniile solide indic corela ii
semnificative

Corelaiile cu congenerii si izomerii DDT p, p'-DDE reprezint cea mai mare parte a DDT n
American Robins i a fost n mod semnificativ i negativ corelat cu volumul relativ de forebrain i
volumul absolut de HVC, volumele de RA i ICO la masculi ivolumul de ICo la femele(fig.4) . Nici o
relaie semnificativ nu a fost prezenta ntre p, p'-DDE i dimensiunea neuronului RA la sexul masculin (
(10) = 0.00, p = 0,99) i femele ( (8) = -0.18, p = 0,53). Cu toate acestea, n ambele brba i i femei,
niveluri mai ridicate de p, p'-DDE au fost, de asemenea, asociate cu neuroni mai mici, n ICO.

Fig. 4.Volumul relativ de: forebrain (A), (B) HVC, (C) nucleul robustus arcopallialis (RA) si (D)nucleul intercollicularis(ICO)
reprezentat grafic in functie de p, p'-DDE ( g / g). Cercurile deschise indic femele i cercurile nchise indic masculi. Liniile
solide indic corelaii semnificative.

Corelaiile cu alte POP.Nu exist corelaii semnificative ntre volumele regiunilor creierului i alte
niveluri POP care s-au detectat (toate p> 0,06).
Discutii
Rezultatele noastre indic n mod clar faptul c expunerea timpurie la niveluri de mediu de DDT are
efecte semnificative asupra creierul American Robins.Desi studiul nostru s-a bazat pe un e antion relativ
mic (total n = 18), aceste efecte sunt uimitoare, mai ales atunci cnd expunerea la DDT a fost limitat la
embrionare i la dezvoltarea prematura dup-incuba ie i psrile au fost sacrificate n al doilea an. Acest
lucru sugereaz faptul c indiferent de efectele DDT-ului asupra creierului in timpul dezvoltarii, efectele
sunt de lung durat.Chiar dac aceste efecte sunt mediate strict de tulburrile endocrine sau de alte
mecanisme, cum ar fi o cretere a hormonilor de stres sau efecte neurotoxice directe ,totul este, incert. De
asemenea, este de remarcat faptul c am detectat n primul rnd efecte semnificative la masculi.
Nivelurile de expunere ale masculilor nu au fost doar semnificativ mai mari dect femelele, dar, de
asemenea, mai larg (brbai: 43.293-174.671 micrograme / g; femele: 18.431-75.115 g / g).

Efectele asupra creierului i volumelor de forebrain

Desi nu ne asteptam sa vedem un efect al expunerii DDT-ului asupra creierului i volumelor relative ale
forebrain, a fost totui prezent. La barbati, niveluri mai ridicate de expunere DDT au fost asociate cu
creiere mai mici si volume de forebrain mai mici.
Astfel de modificri pe scar larg,cu creierul fiind asociat cu niveluri de expunere DDT ar putea reflecta
perturbri endocrine, dar exist cel puin dou motive suplimentare: stres si de neurotoxicitate directa.
Expunerea DDT poate avea efecte semnificative asupra nivelurilor de hormoni de stres. DDT-ul poate
influena indirect, prin intermediul glandelor suprarenale efecte asupra tiroidei si hipofiza, ac ioneaz ca
un factor de stres n sine.
Nivelurile ridicate de hormoni de stres afecta supravie uirea neuronal i sunt adesea asociate cu retard
neuro-comportamental de dezvoltare.
DDT-ul poate avea, de asemenea, o serie de efecte directe neurotoxice. DDT-ul reduce expresia factorului
neurotrofic derivat din creier (BDNF) , perturba absorbtia Ca2 + in neuroni i interfereaz cu canale de
sodiu.
Concluzii
Expunerea mediulu la DDT in timpul dezvoltrii timpurie, duce n mod clar la schimbri semnificative
neuroanatomical.Mecanismul care st la baza acestor schimbri, cu toate acestea, rmne extrem de
speculativ. Dei exist un indiciu puternic c tulburrile endocrine, n special antagonismul androgenic, a
jucat un rol important n aceste schimbri, nu putem exclude efectele, eventual, de stres i de confuzie
efecte neurotoxice directe. . Ar trebui, de asemenea, subliniat c alte regiuni dect cele msurate pot fi, de
asemenea, afectate de expunerea la DDT. Nuclee hipotalamice (de exemplu: nucleu medial preoptic),
precum i alte regiuni ale sistemului de cntec (de exemplu: partea tracheosyringeal a nucleului hipoglos)
sunt nu numai conectate la sistemul de cntec i de ICO ,dar sunt, de asemenea, androgen-sensibile i
mediaza comportamente care sunt afectate de expunerea la DDT-ului, cum ar fi ngrijirea,cntatul,
precum i grija parentala. Indiferent dac regiunile suplimentare sunt afectate sau nu, rezultatele noastre
demonstreaz c expunerea mediului la DDT in timpul dezvoltarii timpurie are un efect semnificativ
asupra creierului psrilor Songbird. DDT este prezent n majoritatea mediilor i persist timp de decenii
dup utilizare, oferind astfel un anumit grad de expunere la majoritatea oamenilor si a vietii salbatice din
ntreaga lume. Rezultatele noastre sugereaz c aceast expunere trebuie s fie monitorizata cu aten ie,
deoarece expunerea mediului la DDT-ul nu va duce doar la deficiente de reproducere, dar ar putea duce,
de asemenea, la schimbri semnificative neurologice in ambele cazuri att la oameni ct i animale.

___________________________________________________________________________________
Nota! Forebrain=Partea anterioar a celor trei divizii principale ale creierului vertebrat n curs de dezvoltare sau
partea corespunztoare a creierului unui adult, care include n special emisferele cerebrale,thalamus, i hipotalamus
i care, n special la vertebratele superioare este centrul de control principal pentru informaii senzoriale i sociative.

Referine.Selectiv

Adkins-Regan E. Effect of sex steroids on the reproductive behavior of castrated male ring doves
(Streptopelia sp.). Physiol Behav 1981;

Alvarez-Borda B, Nottebohm F. Gonads and singing play separate, additive roles in new neuron
recruitment in adult canary brain. J Neurosci 2002;

Andrew RJ. Changes in visual responsiveness following intercollicular lesions and their effects
on avoidance and attack. Brain Behav Evol 1974;

Aurigi S, Focardi S, Hulea D, Renzoni A. Organochlorine contamination in birds eggs from the
Danube Delta. Environ Poll 2000;

Ball GF, Balthazart J. Hormonal regulation of brain circuits mediating male sexual behavior in
birds. Physiol Behav 2004;

Ball GF, Nock B, Wingfield JC, McEwen BS, Balthazart J. Muscarinic cholinergic receptors in
the songbird and quail brain: a quantitative autoradiographic study. J Comp Neurol 1990;

Ball GF, Riters LV, Balthazart J. Neuroendocrinology of song behavior and avian brain plasticity:
multiple sites of action of sex steroid hormones. Front Neuroendocrinol 2002;

Eriksson P, Nordberg A. The effects of DDT, DDOH-palmitic acid, and a chlorinate paraffin on
muscarinic receptors and the sodium-dependent choline uptake in the central nervous system of
immature mice. Toxicol Appl Pharmacol 1986;

Fry DM. Reproductive effects in birds exposed to pesticides and industrial chemicals. Environ
Health Perspect Suppl 1995;

Fukushima Y, Aoki K. Neural function of the mesencephalic dorsomedial nucleus (DM) on

distance call production in Bengalese finches. Zool Sci 2002;

Gahr M. Distribution of sex steroid hormone receptors in the avian brain:functional implications
for neural sex differences and sexual behaviours. Microscop Res Tech 2001; Garamszegi LM,
Eens M. Brain space for a learned task: strong intraspecific evidence for neural correlates of
singing behavior in songbirds. Brain Res Rev 2004;

Giesy JP, Feyk LA, Jones PD, Kannan K, Sanderson T. Review of the effects of endocrinedisrupting chemical in birds. Pure Appl Chem 2003;

Gill H, Wilson LK, Cheng KM, Elliott JE. An assessment of DDT and other chlorinated
compounds and the reproductive success of American Robins (Turdus migratorius) breeding in
fruit orchards. Ecotoxicology 2003.