Sunteți pe pagina 1din 39

HISTOLOG

IE
Lucrare
practic 1

HISTOLOGIA

tiina care se ocup cu studiul structurii


microscopice a celulelor, esuturilor i
organelor

Compartimente:

Citologia
Histologia general: studiul esuturilor
Histologia special: studiul organelor: org. tubulo

cavitare, org. parenchimatoase

Legturi:

Biologia celular
Histopatologia

HISTOLOGIA

Ramuri:
Histologia de diagnostic
Obine continuu date privitoare la structura i
funcia unui anumit esut sau organ

Histologia de cercetare
Evideniaz i studiaz:
- o categorie celular / tisular nedescoperit nc
- modul de comportament al celulelor i
esuturilor n condiii fiziologice i patologice
neexplorate

HISTOLOGIA
ESUTURILE
Structuri supracelulare alctuite din
celule unite ntre ele printr-o
substan intercelular
Celulele ndeplinesc n organism aceeai
funcie sau acelai grup de funcii.
4 categorii de esuturi: epitelial,
conjunctiv, muscular, nervos
esuturile alctuiesc ORGANE

Metode de studiere a
celulelor i esuturilor

Metode utilizate n practica


clinic

Metode utilizate n cercetare

I. Metode utilizate n
practica clinic

Coloraia uzual Hematoxilineozin


Coloraiile speciale
Examenul microscopic extemporaneu
Coloraiile imunohistochimice

Preparatul microscopic
Totalitatea obiectelor pregtite pentru a fi
examinate la aparate optice mritoare n
vederea studierii structurii lor.
Componentele:
1. Obiectul
2. Suportul: lama
3. Lamela
Sunt de 2 tipuri: extemporanee i
permanente

Preparatul microscopic
I. Recoltarea

Biopsie
Necropsie
De la animale

Preparatul microscopic
Recoltarea

Excizia
Incizia
Rezecia
Puncia biopsie

Preparatul microscopic
II. Fixarea
Piesa e introdus n fixatori care previn degradarea enzimatic
(autoliza) i pstreaz intact structura tridimensional a esutului.
Formaldehida
Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi prin 3 mecanisme:
denaturare, coagulare i precipitare

Preparatul microscopic
Fixarea
Aspectul unui fragment de esut
dup fixare

Preparatul microscopic
III. Splarea

ndeprteaz excesul de fixator


Se face cu ap sau alcool
(deshidratarea)

Decalcificarea
Preparatele de os sau dinte
Se face cu acizi i rini schimbtoare
de ioni sau prin electroliz

Preparatul microscopic
IV. Includerea n parafin

Piesa e mbibat i nglobat ntr-o substan


solidificabil, denumit mas de includere.
Piesa devine rigid i poate fi secionat n
felii de ordinul m (5m).

Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s


treac prin preparatul microscopic i apoi s ajung la
ochiul obsevatorului, care va examina imaginea
microscopic a esutului

Preparatul microscopic
Includerea n parafin
Etape:
1. Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de
concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa
din esut;
2. Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen)
miscibili att n alcool ct i n parafin, vor
scoate alcoolul din esut
3. mbibarea cu parafin: parafina topit intr n
celule esutul va fi complet inclus n parafina
care se va ntri i va forma un bloc solid ce
conine esutul;
4. Includerea propriu-zis

Preparatul microscopic
Includerea n parafin

esuturi incluse n blocuri de parafin

Preparatul microscopic
V. Secionarea

Preparatul microscopic
Secionarea

Preparatul microscopic
VI. Colorarea

Evideniaz elementele structurale


Coloranii histologici se fixeaz pe anumite
componente structurale
Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi
aromatice i, n funcie de natura cromoforului, pot fi:
1. Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin,
fuxina bazic
2. Acizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange G
3. Neutri: eozinatul de azur de metilen
4. Indifereni: Sudan III, Scharlach Roth
Colorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina

Preparatul microscopic
Colorarea
Bazofilie
Acidofilie
Neutrofilie
Termeni care se refer la afinitatea
tinctorial (de coloraie) a diferitelor
elemente fa de baze, acizi sau
substane neutre.

Preparatul microscopic
Colorarea
Clasificarea coloraiilor
1. Dup electivitate: difuze i elective
2. Dup modul de aciune: directe i
indirecte
3. Dup procedeul de executare: progresive
i regresive
4. Dup numrul de colorani folosii : simple
i combinate: succesive sau simultane
Coloraia ortocromatic
Coloraia metacromatic

Preparatul microscopic
Coloraia HE

Coloraie uzual (95% din lame); e o metod direct,


progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic.

Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n


ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleiciADN-nucleu; ARN- ribozomi
Eozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile
acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm
i n matricea extracelular
Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice
(celule adipoase, mielina) rmn optic vide;

Preparatul microscopic
Coloraia HE
Celulele: funcia biochimic i distribuia
elementelor componente.
Nucleii
Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint
nucleii eucromi sau hipocromi (eucromatina
este palid).
Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate
metabolic redus, au nuclei hipercromi
(heterocromatina inactiv se coloreaz intens
bazofil)

Preparatul microscopic
Coloraia HE
Citoplasma
Celulele care sintetizeaz proteine conin numeroi
ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un
aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din
ribozomi n albastru)
Celulele implicate n transportul de ioni conin
numeroase mitocondrii i prezint un aspect
eozinofil al citoplasmei (E coloreaz proteinele
cationice: citocromii n rou).
Fibrele musculare au aspect intens eozinofil
datorit fixrii eozinei pe proteinele contractile din
miofibrile.

Preparatul microscopic
Coloraia HE

Preparatul microscopic
Coloraia HE

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Tricrom Masson,
tricrom Mallory
- pune n eviden
es. conjunctiv
Fibrele de colagen
se coloreaz n
verde, respectiv
albastru

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Rezorcin Fuxin Weigert: fibrele
elastice sunt colorate n violet nchis
Orcein: fibrele elastice sunt colorate n
maro nchis

RFW

Orceina

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Impregnarea argentic: pune n
eviden fibrele de
reticulin, neurofibrilele din neuroni
(maro/negru) i cimentul intercelular
n epitelii

Ficat-impregnare argentic esut nervos- impregnare


argentic

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Sudan III, Sudan negru, Scharlach
Roth- folosite pentru a pune n eviden
lipidele n esuturi, pe care le coloreaz
n galben, negru i respectiv rou.
!!! Fragmentele de esut
nu sunt preparate cu
solveni organici,
pentru a nu dizolva
subst. lipidice.

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Coloraia PAS (Periodic Acid
Schiff)
Coloreaz carbohidraii
n roz intens.
Evideniaz
membrana bazal
a epiteliilor.

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Acidul osmic- coloreaz n
brun/negru substanele lipidice
Evideniaz teaca de mielin

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Hematoxilina Feric Heidenheimcoloreaz n negru miofibrilele i
evideniaz aspectul striat al fibrelor
musculare.

Preparatul microscopic
Coloraii speciale
esutul osos compact lefuit, montat
n balsam de Canada !!! Preparat
necolorat

Preparatul microscopic
VII. Montarea

VIII. Etichetarea

Preparatul microscopic
Examenul extemporaneu (la
ghea)
Permite un diagnostic rapid (15-20
min), care orienteaz decizia
terapeutic chirurgical
Frecvent utilizat n chirurgia
oncologic
Nu are precizia examenului histologic
clasic

Preparatul microscopic
-examenul extemporaneu-

Imunohistochimia
-principiuUtilizeaz principiul antigen-anticorp
(Ag-Ac) pentru a identifica
prezena/absena unor proteine
specifice la nivelul esuturilor.

anticorp secund
(brun)

anticorp prim
(invizibil)

antigen cauta

Imunohistochimia
Imunoperoxidaz

Imunofluorescen

II. Metode utilizate n


cercetare
SEM - scanning electron
microscopy