1.

Notiuni generale despre microbiologie:

Microbiologie (mikros bios logos mic, viu, studiu). Microbiologia studiaz microorganismele i activitile lor.
Microorganisme / microbi organisme microscopice, cu dimensiuni de ordinul m
(10-6 m) sau nm (10-9 m).
Mi/o reunesc bacteriile i alte tipuri de organisme: alge, ciuperci microscopice (fungi, micete), protozoare,
virusuri i agenti subvirali, de ex. prioni.
Studiaza
forma mi/o
structura
nutriia
metabolismul
creterea i multiplicarea mi/o (pentru a le
identifica)
urmrete
a) relatia mi/o-gazda umana
b) capacitatile patogene mi/o
c) capacitatile antiinfectioase organism uman
d) metode de diagnostic etiologic al bolilor infectioase
e) metode de terapie/profilaxie antimicrobiana
Mi/o = organisme microscopice (micro-nano- metri) + alge, protozoare, virusuri, agenti subvirali (prioni), cipuerci
microscopice (fungi, micete)
Clasificari mi/o:
fenotipica (prima tentativa Carl von Linne)
genotipica
filogenetica (bazata pe studiul fosilelor sau al HLA)
Grupe taxonomice: domeniu regn increngatura clasa ordin familie gen specie
Taxoni infraspecifici din cadrul speciei, care prezinta anumite diferente:
biovar (activitate biochimica/fiziologica)
serovar (structura Ag)
patovar (grad de patogenitate)
lizovar (sensibilitate la bacteriofagi)
antibiovar (sensibilitate la AB)
Rolul taxonilor infraspecifici: markeri epidemiologici!
Clasificare mi/o:
forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni)
forme celulare:
bacteria = procariote, eubct
1) G2) G+
3) micoplasme (lipsite de PC)
archaea = procariote, PC fara peptidoglican, habitat in conditii extremale
eucarya = eucariote (fungi, protozoare)
2 Tipurile de laboratoare microbiologice si sarcinile lor. Regimul si regulile de lucru in laboratorul
microbiologic. Clasificarea laboratoarelor in functie de exigenta sigurantei antiinfectioase.
3 Reguli de protective a muncii in laboratorul de microbiologie

Este strict interzis accesul persoanelor strine n laborator

Intrarea n laborator i participarea la lucrrile practice se va face numai dup audierea i nsuirea
regulilor de protecie a muncii (dovedit prin semntur pe un proces verbal)

Intrarea n laboratorul de microbiologie necesit purtarea obligatorie a echipamentului de protec ie (halat

cu mneci lungi). Se recomand ca echipamentul de protecie s fie pstrat separat de hainele utilizate n
exterior.

Toate produsele biologice vor fi considerate ca potenial infectante

Consumarea de alimente i buturi, ducerea minilor la fa n timpul lucrului, fumatul n laborator sunt
strict interzise.

Este interzis introducerea n gur a oricrui obiect din laborator

Este interzis aducerea n laborator a obiectelor de uz personal

o

hainele, servietele, genile, vor fi lsate n vestiarul special amenajat

este permis aducerea n laborator a materialelor de scris i a lucrurilor de valoare, acestea din
urm fiind aezate n laborator n locuri special amenajate.

Este interzis intrarea n laborator n lipsa unui cadru didactic

Nu este permis fuga sau mersul rapid prin laborator

Lucrul n laboratorul de microbiologie implic contact cu material infec ios! Pentru a preveni accidentele
de lucru, este necesar urmarea strict a metodelor de lucru i a regulilor de dezinfecie i antisepsie:
o

nsmnrile se fac la flacr, flambndu-se gtul recipientelor la deschidere i la nchidere

ansa i acul de platin se sterilizeaz nainte i dup folosire prin nclzire la rou, iar portansa
se va flamba

pipetele i lamele de sticl contaminate nu se vor decontamina la flacr, ci se scufund dup

folosire n recipiente cu soluie dezinfectant existente la mijlocul fiecrei mese. Tot n aceste
recipiente se vor introduce lamele i lamelele de sticl folosite

pipetarea cu gura este interzis. n vederea pipetrii se vor folosi dispozitive de pipetare adecvate

cutiile Petri, eprubetele, sau alte recipiente i materialele contaminate se introduc dup lucru n
gleata de infecte care va fi autoclavat

manipularea aparatelor se va face respectnd instruciunile de folosire specifice

atenie la manipularea substanelor caustice i inflamabile

n cazul rspndirii accidentale a materialului infecios, va fi anunat cadrul didactic care

conduce lucrrile i care va indica msurile de dezinfecie

Dup terminarea lucrului minile se antiseptizeaz prin introducerea lor ntr-o substan antiseptic
(cloramin, bromocet) pentru cteva minute, apoi se spal cu ap cald i spun.

Fiecare student are obligaia de a-i supraveghea spaiul de lucru, pstrnd ordinea i curenia:
o

fiecare student i va alege locul de lucru la nceputul primei lucrri practice, loc pe care i-l va
pstra pn la ncheierea semestrului/anului universitar

orice alterare a suprafeei de lucru sau a diferitelor obiecte adiacente spaiului de lucru propriu
produs exclusiv din vina studentului, va fi penalizat prin amend i/sau absen nemotivat n
ziua respectiv

orice alterare existent a zonei de lucru va fi consemnat cadrului didactic la nceputul lucrrii
practice

5. Amenajarea si utilarea laboratorului de microbiologie

Laboratorul de microbiologie trebuie sa cuprinda doua compartimente:
- o sala de pregatire a mediilor si obiectelor de lucru si de decontaminare, continnd mese, un autoclav, o etuva, un
congelator si un frigider (care va fi utilizat si pentru pastrarea tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlaria,
mediile de cultura precum si reactivii.

- o sala de lucrari propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adapost de curentii de aer, dotata cu mese
cu suprafata neteda, rezistenta, impermeabila, cu conducte de gaz si prize electrice, un sistem de vid si de aer
comprimat si o hota sterilizabila, cu radiatii ultraviolete (eventual o hota cu flux laminar). n masura n care este
posibil, n legatura cu aceasta sala, ar trebui sa existe anexe prevazute cu termostate la diferite temperaturi ( 250C,
300C, 370C, 440C, 550C).
Manipularile de culturi microbiene sau de produse susceptibile sa contina microorganisme se efectueaza tinnd cont
de unele tehnici particulare prin care sa se evite cele doua tipuri de contaminare:
1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorita personalului sau mediului inconjurator;
2. contaminarea personalului sau a mediului nconjurator de catre microorganismele studiate.
In laboratorul de microbiologie, operatia de baza este transferul de microorganisme dintr-un recipient n altul,
lucrare ce se executa n zona sterila de protectie din jurul flacarii becului de gaz.
Sticlaria cel mai des utilizata n laboratorul de microbiologie consta n eprubete de diferite dimensiuni, flacoane
Erlenmeyer, placi Petri, pipete Pasteur si pipete gradate. n ultima perioada sunt din ce n ce mai mult utilizate
recipientele si pipetele din plastic, de unica folosinta. Pentru prelevarea si inocularea culturilor se utilizeaza ansa sau
firul metalic, fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit repartizarea uniforma a inoculului pe suprafata
mediilor solidificate si pot fi fabricate prin ndoirea unui tub sau a unei baghete din sticla. n afara acestor ustensile
curente de lucru, mai pot fi ntrebuintate o serie de alte instrumente, n functie de operatia efectuata.
Laboratorul de microbiologie trebuie sa aiba n dotare urmatoarele aparate si echipamente:
- robinet cu apa calda si rece, de preferinta actionat cu piciorul;
- hota cu flux laminar sau nisa sterilizabila, indispensabila lucrarilor de microbiologie
- bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul n zona sterila din jurul flacarii cu con albastru si pentru sterilizarea ansei
- etuva pentru sterilizarea sticlariei
- termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor
- autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultura si pentru decontaminarea obiectelor
- baie de apa termostatata
- frigidere pentru conservarea mediilor si a culturilor
- balante
- pH-metru
- microscoape