Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Proteaze aspartice
Bucureşti, 2010
PROTEAZE ASPARTICE UTILIZATE LA FABRICAREA
BRÂNZETURILOR
Introducere
Utilizarea proteazelor aspartice în cadrul obţinerii brânzeturilor datează din anul 6000
Î.C. coagularea enzimatică a laptelui este un proces care se desfăşoară în două etape. În prima
etapă, AP hidrolizează legătura dintre restul fenilalanina şi metionină din caseina bovină,
rupând proteina în două părţi, o parte hidrofobă (para k caseină) şi o parte hidrofilă
(macropeptidă). A doua etapă constă în coagularea miceliilor de caseină care au fost
destabilizat de atacul proteolitic.
Enzimele de coagulare ale laptelui sunt extrase de la mamifere, plante si fungi.
Deasemenea ele pot fii produse utilizând tehnologia de recombinare genetica a ADNului. În
general sunt utilizate enzimele extrase din cel de+al patrulea stomac al viţeilor sugari. In plus,
cheagul convenţional conţine, deasemenea, niveluri mai scăzute de pepsină A, enzimă a carei
activitate proteolitică impiedică coagularea laptelui. Enzimele extrase din plante şi fungi
conţin proteaze nespecifice care au o stabilitate termică mare si a caror actiune prelungită
provoacă amărăciune branzeturilor după o perioada mai lungă de depozitare. Consumul
ridicat de branzeturi a determinat căutarea unor alternative pentru coagularea laptelui.
În 1988, a fost utilizată pentru prima dată chimozina (renina) obţinută prin
recombinare genetică. Câţiva ani mai târziu, a fost găsită o metodă prin care se imbunătăţea
producţia de chimozină în Aspergillus niger . În prezent sunt utilizate chimozine recombinate
genetic, ca de exemplu Maxiren si Chymogen, ce au o puritate ridicată si o activitate de
coagulare foarte mare.
Chimozina extrasă din alte specii de mamifere este utilizată pentru fabricarea unor
tipuri speciale de brânzeturi.
Cei doi lobi sunt omologi, rezultaţi în urma duplicării genelor. Centrul catalitic este
localizat între cei doi lobi si conţine resturi de aspartat, esenţiale pentru activitatea catalitică.
La majoritatea pepsinelor, restul aspartat este înglobat într-o strucutră de tip Asp-Thr-Ser sau
Asp-Thr-Thr. Aceste resturi activeaza o moleculă de apă care mediază atacul nucleofil asupra
legaturii peptidă-substrat. Centru activ este suficient de mare să înglobeze cel puţin 7 resturi
de substrat polipeptidic. Specificitatea este controlata de o structură flexibilă localizată la
intrarea în situsul catalitic. AP-urile sunt activare la pH acid, astfel încât, se presupune că pH-
ul optim pentru fiecare protează aspartică este determinat de potenţialul electrostatic al
situsului catalitic, care la rândul lui este determinat de poziţia si orientarea resturilor în
apropierea situsului.
Familia A a peptidazelor este inhibată puternic de catre peptatin produsă de
Streptomyces . peptadina se leagă de structura flexibilă a centrului catalitic.
Chimozină
Chimozina bovină
Alte chimozine
Chimozina este produsă şi de alte specii de mamifere cum as fii oile, bivolii , capre,
porcii, cămilele, oamenii, maimuţele si şoarecii. Recent a fost realizată clonarea ADN.ului
pentru prochimoza caprelor. A fsot observată prezenţa unei proteine de 381 de aminoacizi cu
un capăt N terminal su o regiune de proenzimă constituită din 16 si 42 de aminoacizi.
Secvenţele observate indică multe asemănări cu celelalte preprochimoze. Cele două resturi
active de aspartat şi prezenţa a 6 resturi de cisteină reprezintă cele mai importante asemănări
cu enzimele bovinelor. Se poate observa şi o neregularitate şi anume glutamatul ocupă în
prochimozele caprine poziţia 36 în propeptidă.
În India, datorită faptului că singura sursă sa lapte o reprezintă bivolii, a fost purificată
chimozina din stomacul acestora. Se observă diferenţe mici cu privire la stabilitate şi
activitatea proteolitică.
Utilizarea prechimozinei recombinate de la miel a fost testată deasemenea şi nu au fost
observate diferenţe legate de propietăţile de coagulare şi legate de calitatea brânzeturilor. O
caracteristică specifică a chimozinei recombinate din miel o reprezintă instabilitatea la
temperaturi mai mari de 45 grade Celsius.
Structura primară a unei proteaze aspartice din plante este formată din:
1. peptidă semnal responsabilă de translocaţia la reticulul endoplasmatic
2. presegment de 46-50 aminoacizi responsabili de plierea corectă
3. enzima matură care posedă 2 secvenţe catalitice ( Asp-Thr-Gly şi Asp-Ser-Gly)
4. inserţii specifice plantelor (PSI) reprezentate de aporximativ 100 de aminoacizi
PSI-ul este în general înlaturat în timpul procesului de maturare. Rolul acestor inserţii este
încă necunoscut dar se presupune că au rol în cadrul sistemului vacuolar.
Majoritatea AP-urilor din plante sunt localizate în seminţe, în fructe sau în flori.
Extractle din plante au fost utilizate de multe secole pe post de coagulant. Acestea, fata
de chimozină, desfac a,b şi k-caseină, fapt ce cauzează aciditate, amărăciune si defecte de
textură, ceea ce le limitează utilizarea.
Enzimele din plante sunt utilizate pentru obţinerea brânzeturilor cu arome, miros si
consistenţe speciale. Aceste tipuri de brânzeturi sunt fabricate în general în Sudul Europei şi
în Africa de Vest.
Extractele din Cynara şi Centaurea calcitrapa (cardosin, ciprosin şi cenprosin) sunt
utilizate în Spania si Portugalia pentu obţinerea brânzeturilor tradiţionale. În Nigeria se
folosesc extracte din Calotropis procera.
Proteazele aspartice din fungi au fost folosite în industrie de-a lungul ultimilor 30 de ani.
Enzimele produse de Mucor miehei, Mucor pusillus şi Cryphonectria (Endothia) parasitica
cunoscute sub denumirea de Rennilase®, Fromase®, Novoren®, Marzyme®, Hannilase®,
Marzyme® şi Suparen® sunt folosite pentru producerea brânzeturilor din lumea întreagă.
Specificitatea proteolitică a enzimelor extrase din fungi este diferită de cea a chimozinei
deoarece produc unele peptide responsabile de amărăciunea brânzeturilor.
Structura cristalină a acestora a fost determinată iar structura terţiară a acestora este
asemănătoare cu cea a altor AP.
Mucorpepsina