08.11.

2009

Ce este Replicarea?
proprietatea unic a moleculelor bicatenare de ADN sinteza matricial, semiconservativ a moleculelor de

Replicarea ADN
1

ADN
dublarea IG mecanismul principal ce asigur transmiterea IG

Pentru ce se realizeaz Replicarea?

asigur transmiterea exact a IG; determin autoreproducerea materiei vii; reprezint suportul ereditii; asigur legtura material ntre generaii.

Cnd se realizeaz Replicarea?

!!!! Animaia ciclu celular

Cum se realizeaz Replicarea?

matricial; complementar; antiparalel; bidirecionat; semiconservativ; fidel; extrem de complex.

08.11.2009

Principiile replicaiei:
Monomerii (nucleotidele) sunt adugai la captul 3 al unei catene cu ajutorul enzimei ADNpolimeraza; Secvena de nucleotide din catena nou sintetizat este complementar cu catena matri; Sinteza are loc semiconservativ: n fiecare molecul bicatenar una dintre catene este veche (catena-matri), iar alta nou-sintetizat (catena fiic).

Complexitatea replicaiei este determinat de:

Necesitatea energiei pentru denaturarea / despiralizarea

ADN-ului;
Moleculele monocatenare tind de a forma regiuni bicatenare

prin unirea complementar a bazelor dintr-o caten palindroame; Orice enzim poate realiza doar un numr limitat de reacii fizice sau chimice, iar numrul de evenimente este mare, ceea ce presupune implicarea unui numr mare de factori n replicare; Necesitatea existenei unor mecanisme de prevenire i eliminare a erorilor pe parcursul replicrii Complexitatea conformaional a moleculelor mici circulare sau a celor mari liniare Regiunile de eu- i heterocromatina se replic asincron
10

11

12

08.11.2009

Care sunt etapele replicrii?

Iniierea Elongarea Terminarea

Iniierea R:
identificarea punctului ori; formarea ochiului de replicare cu dou furci antisens:
despiralizarea ADN denaturarea ADN liniarizarea matrielor

sinteza ARN-primerilor iniierea polimerizrii catenelor noi de ADN

13

14

Elongarea R:
mrirea ochiului de replicare; sinteza bidirecionat a catenelor noi de ADN: sinteza continu a catenei lider; sinteza discontinu a catenei ntrziate; fragmentelor Okazaki.

15

16

Terminarea R:
ntlnirea furcilor de replicare cu direcie opus; terminarea sintezei catenelor noi; nlturarea ARN-primerilor; completarea golurilor; sudarea fragmentelor din catena nou de ADN; renaturarea ADN-ului; 1 mol. ADN 2 mol. ADN.

17

18

08.11.2009

Cine realizeaz Replicarea?

Aparatul de replicare: Molecula iniial de ADN - matri Situsul ORI ADN-polimeraza + alte enzime (T,H,P etc.) + alte proteine (SSB)

19

20

ORI secvena de iniiere a Replicaiei

Repliconul segmentul de ADN capabil de replicare independent

const din 100-300 kb. conine secvena ORI formeaz dou furci de replicare

const din circa 300 p.n. conine situsuri de interaciune cu proteine speciale pentru iniierea replicrii
21

cromozomii eucariotici conin numeroi repliconi

22

Enzimele aparatului de replicare

Caracteristica ADN-polimerazelor la eucariote

ADN polimeraza

ADN-polimerazele Primaza ADN-helicazele Topoizomerazele ADNligaza

Localizarea

Nucleu

Nucleu

Nucleu

Nucleu

Mitocondrii

+
Proteinele SSB

Funcia sintetic

Extinderea primerilor

Sinteza ADN

Reparaie

Reparaie

Replicare

Funcii suplimentare

Exonucleaz

Exonucleaz

Exonucleaz

23

24

08.11.2009

Cine regleaz R?
situsul ORI + proteinele situs-specifice proteine reglatoare ale ciclului celular

Care sunt particularitile R la eucariote?

n nucleele celulelor eucariote replicarea are loc cu ajutorul a trei ADN-polimeraze n mitocondrii sinteza ADN se realizeaz cu ajutorul polimerazei . ADN cromozomial are multe situsuri de iniiere a R; Viteza de replicare la mamifere 20-100 baze pe secund; Genomul uman conine 60000 puncte de origine a replicaiei separate 100-150 kb.
Durata perioadei S (replicrii ADN cromozomial n celulele umane 6-9ore) 26

25

Exemplu:
Dac crs 1 ar avea un singur ORI replicarea ar dura 15 zile: Conine 260 000 000 p.b.; n fiecare furc de replicare ar fi 130 000 000 p.b. Viteza de replicare este 100 p.b./sec;

Particularitile replicrii capetelor ADN - cromozomial

Telomerii:
Secvenele de ADN de la captul cromozomilor; (GGGTTAA)n; formeaz bucle;

Telomeraza:
Enzim ADN-polimeraz ARN dependent; Conine ARNsn matri n sinteza telomerilor.

27

28

30 ani

26 ani
29 30