Universitatea Politehnica Bucureti Facultatea de Chimie Aplicat i tiina Materialelor

DETERMINAREA HIDROCARBURILOR AROMATICE POLICICLICE DIN PETE AFUMAT PRIN CROMATOGRAFIE DE GAZE

Bucureti
2012

1. Introducere
Petele reprezint unul dintre elementele importante n alimentaie , care furnizeaz substane nutritive eseniale, cu toate acestea, este evident c n corpul petelui pot fi acumulate, n reacie cu ali factori de mediu, diferite substane chimice, cum ar fi pesticidele, hidrocarburile poliaromatice sau ali contaminani organici, cele mai multe dintre ele fiind toxice, ca urmare a bioconcentrrii. Nivelul de concentraie la care astfel de substane toxice se acumuleaz n peti depinde de vrst, mrime, compoziia n grsimi i complexitatea lanului alimentar. n ultimii ani, producia de pete din accacultur este n cretere n ntreaga lume. n acest context, n scopul de a proteja sntatea public prin asigurarea unei alimentaii sigure, determinarea contaminanilor organici toxici, generic numit ca poluani organici persisteni (POP), din hrana, apa de acvacultur pete i produse din pete, reprezint att o int ct i o necesitate stringent. Sursele majore de poluare a apelor de suprafa sunt reprezentate de ape uzate industriale i menajere i ngrminte din agricultur, ceea ce conduce la creterea polurii apei prin ridicareaconinutului de nutrieni, pesticide, metale grele, hidrocarburi i alte substane care modific compoziia natural a apei. Prezena hidrocarburilor poliaromatice (PAH) n ap poate fi, de asemenea, atribuit att riscurilor naturale (de exemplu, incendii forestiere, erupii vulcanice) ct i activitilor antropice. Hidrocarburile aromatice policiclice constituie o categorie mare de compui organici care conin dou sau mai multe inele aromatice condensate. Sute de hidrocarburi aromatice policiclice individuale pot fi formate n timpul arderii incomplete sau piroliz a materiei organice, n procesele industriale, precum i prin gtit i prelucrarea alimentelor. o pondere nsemnat o reprezint hidrocarburile aromatice policiclice rezultate prin arderea combustibililor fosili la temperatur nalt i din prelucrarea petrolului. Hidrocarburile aromatice policiclice prezint pericol potenial datorit efectelor mutagene i cancerigene ale compuilor cu de la patru la apte inele aromatice sau efectelor extrem de toxice ale compuilor cu dou i trei inele. Datorit solubilitii lor sczute n ap i caracterului puternic hidrofob, hidrocarburile aromatice policiclice persist n mediul nconjurtor i tind s fie uor adsorbite pe materia organic, n special sedimente. Astfel, n sistemele acvatice, contaminanii organici tind s interacioneze cu pulberile n suspensie, sedimentele i biota prin ingestie i prin ci de acces la suprafaa corpului. Ca i n cazul altor poluani organici persisteni, hidrocarburile aromatice policiclice pot traversa diferite ecosisteme i pot fi dispersate n diferite componente ale mediului departe de sursele iniiale. Prin urmare, transferul i translocarea hidrocarburilor aromatice policiclice ctre compartimentele lanului trofic conduc la bioacumularea i bioconcentrarea acestor poluani foarte toxici, cu efecte periculoase asupra sntii organismelor contaminate. Pe piaa intern (eston) s-au realizat analize, n 2003-2004 petele afumat fiind analizat privind suma medie a coninutului de benzo [a] piren, benzo [a] antracen, benzo[k] fluoranthene, benzo[b] fluoranthene, benzo [ghi] perylene i indeno [1,2,3-cd] -piren), aceste niveluri ale

hidrocarburilor aromatice policiclice dovedindu-se a fi 12,37 gkg-1 , i n probele de pete proaspt nu s-au detectat. Nivelul maxim de hidrocarburi aromaice policiclice n carnea de pete afumat conform Directivei Comisiei 96/5/EC este 5 g/kg. Scopul prezentei anchete a fost de a determina hidrocarburile aromatice policiclice n eantioanele de produse din pete afumat cu ajutorul capilarelor GC-MS. Cuvinte cheie: Hidrocarburi aromatice policiclice; Cromatografie n faz gazoas; Spectrometrie de mas; Pete afumat; Produs alimentar.

2. Experimental
2.1. Eantioane
Probele de pete i de ulei au fost achiziionate de la supermarket-uri. Informaii privind condiiile de afumare, specia i tipul de pete, au fost colectate pentru fiecare prob i sunt prezentate n tabelul 1. Pielea i osul de pete au fost eliminate, iar eantionul a fost zdrobit i amestecat fr lichid. Ca o excepie, protul n ulei vegetal a fost utilizat cu piele i os. Probele de pete au fost depozitate la temperatura de - 20C nainte de analiz. Probele cu ulei vegetal sunt necesare pentru a stabili o comparaie cu ulei de prot. Probele de ulei s-au pstrat la 4C pn la analiz.

Rezultatele nivelurilor de hidrocarburi aromatice policiclice (g/kg) n

diverse produse din pete, n ulei i diferite fraciuni de prot afumat n ulei Produs PAH Pete proaspt Hering 8 nedetectat Merluciu 3 nedetectat Pete afumat la rece Macrou 6 nedetectat nedetectat Somon 3 0,40 Hering 4 nedetectat nedetectat Pete afumat la cald Macrou 10 0,70 Hering 4 0,72 Pstrv 3 0,50 Pltic 2 0,40 Cod 3 0,50 prot 4 0,42 Somon 3 0,81 Burbot 2 0,33 Merluciu 6 0,41 Biban de 2 0,53 mare tiuc 4 0,40 prot n 34 1,09 ulei prot n 4 0,90 sos de tomate Hering 3 0,81 n sos de tomate Frac iuni de prot afumat n ulei prot 34 0,65 afumat Ulei 34 7,70 Ulei vegetal Ulei de rapi Ulei de msline 14 18 0,27 0,20 B[a]P B]a]A nedetectat nedetectat nedetectat 0,94 nedetectat 2,64 3,41 1,60 2,50 1,71 1,23 1,12 1,58 1,89 1,76 2,11 5,77 3,82 3,43 3,25 24,78 5,20 4,80 B[b]F+B[k] nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat 0,60 0,65 0,50 0,52 0,53 0,61 0,30 0,67 0,56 0,41 0,65 3,16 1,41 1,38 1,75 15,21 0,23 0,18 I[cd]P nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat 0,40 0,40 0,40 nedetectat 0,35 0,40 nedetectat 0,80 nedetectat nedetectat 0,42 1,84 0,83 0,64 0,82 9,21 nedetectat nedetectat nedetectat B[ghi]P nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat nedetectat 1,34 nedetectat 4,64 5,48 3,00 3,42 3,09 2,96 2,23 3,78 2,86 2,70 3,58 12,37 7,46 6,67 6,65 58,06 5,70 5,18 Nr. de probe Concentraia medie de PAH (n = 3) Suma celor 6probe

0,30 0,30 nedetectat nedetectat nedetectat 0,30 nedetectat 0,40 nedetectat nedetectat nedetectat 0,51 0,50 0,41 0,18 1,16 nedetectat nedetectat

2.2. Reactivi chimici

Pentru pregtirea probei diclormetan, acetat de etil, ciclohexan au fost achiziionate din Scoia, hexanul, metanolul din Olanda i sulfatul disodic, pe baz de hidrogen carbonat de sodiu din Republica Ceh. Hidrocarburile aromatice policiclice B[a] P, B[a]A, B [k] F au fost obinute din Sigma-Aldrich (Germania) i B [b ]F, B [ghi] P, I [cd] P Germania. Toate soluiile de referin s-au dizolvat n metanol. toate soluiile de referin au fost dizolvate n metanol. Amestecurile au fost stocate la 4C i analizate la temperatura camerei. Heliul (99.9996%) a fost utilizat pentru analiza cromatografia de gaze.

2.2. Prepararea probei

Eantionul de pete (100,5 g) sau proba de ulei (30,5 g) a fost hidrolizat n 42mL de acid clorhidric concentrat. Dup 12 h, soluia de 40 mL diclormetan/hexan 25:75 a fost adugat i amestecat timp de 45 min. Dup aceea, 4 g Na2SO4/NaHCO3 1:1 au fost plasate la un filtru pe o plnie de sticl i eluate cu 20mL diclormetan/hexan 25:75. Eluatul a fost evaporat ntr-o baie de ap i au fost adugai 20ml soluie de acetat de etil /ciclohexan 50:50. Cinci mililitri de prob au fost injectati ntr-un cromatograf gel echipat cu o coloan si detector de raze UV. O fraciune a fost colectat ntr-un balon concentrator evaporndu-se. Dup evaporarea solventului, reziduul a fost dizolvat ntr-un ml de metanol. Soluia preparat a fost transferat la un flacon injector.

2.3. Cromatografia de gaze cu detector selectiv de mas (GC-MSD)

10 l de soluie de prob a fost injectat ntr-un cromatograf cu gaz care utilizeaz impulsuri de injectare splitless n modul de monitorizare a ionului-selectat. Un Hewlett Packard Model 6890 cromatograf de gaze echipat cu un detector selectiv Model 5973 n mas a fost folosit pentru analiz. Condiiile de operare care au fost folosite: 30 m x 0,25 mm coloana capilar cu grosimea statului de 0,25 m; gazul transportator, heliu, 0,9 mL/min; programul de temperatur: 80C (1 min), 80-115C (20C/min), 115C (1 min), 115-130C (10C/min), 130C (0 min), 130295C (25C/min), 295C (0,50 min), 295-300C (1C/min), 300C (0 min). Tensiunea de ionizare a fost de 150 V. Ionul-pozitiv, ionizarea chimic spectrometrie de mas a fost efectuat cu amoniac ca gaz reactiv. Nu a fost posibil s se separe B[b ]F i B[ k] F prin aceast metodologie. Aceti compui au fost stabiliti mpreun ca suma. Pentru a calibra spectrele GC-MSD, au fost pregtite ase soluii standard diferite care

acoper o gam de concentraie 0,1 - 60 ng/mL. Curba de calibrare permite s se calculeze concentraia de hidrocarburi aromatice policiclice folosind suprafaa vrfului de msurare GCMS (figura 1).

concentraie, ng/mL

Figura 1. Curba de calibrare pentru hidrocarburile aromatice policiclice

Figura 2. GC-MS a celor ase hidrocarburi aromatice policiclice extrase din eantioane de macrou afumat la rece (injectat cu 5 g/kg fiecare hidrocarbur aromatic policiclic)

2.4. Confirmarea rezultatelor

Pentru compararea rezultatelor metodei cromatografiei de gaze a fost folosit metoda cromatografie de lichide de nalt performan (HPLC). Cromatograful de nalt performan Hewlett Packard echipat cu un detector de fluorescen Agilent 1100 a fost folosit pentru analiz. Lungimea de und de excitare a fost stabilit la 254 nm i lungimea de und de emisie la 420 nm. Separarea de hidrocarburile aromatice policiclice s-a realizat la temperatura mediului ambiant prin utilizarea unei faze mobile (metanol), cu un debit de 1,5 ml/min. Vrfurile au fost identificate prin compararea timpilor de retenie cu cei ai standardelor cunoscute. Diferena dintre rezultatele obinut folosind GC-MS i metoda HPLC este nesemnificativ statistic. Variaia rezultatelor nu a depit nivelul de 0,5%, deviaia standard.

3. Rezultate i discuii
n aceast lucrare, cele ase hidrocarburi aromatice policiclice au fost determinate din 84 probe de pete afumat la cald, 13 probe de pete afumat la rece, 11 probe de pete proaspt, iar 32 de probe n ulei. Rezultatele au fost obinute prin GC-MS cu ionizare chimic ion-pozitiv. Probele cu coninut ridicat de hidrocarburi aromatice policiclice au fost analizate n mod repetat. n probele de pete proaspt, hidrocarburile aromatice policiclice nu au fost detectate. Date privind hidrocarburile aromatice policiclice n petele afumat i petele proaspt i probele n ulei sunt indicate n tabelul 1. Cele mai ridicate niveluri de hidrocarburi aromatice policiclice au fost gsite n eantioanele de prot afumat n ulei. n 20 din 84 probe de pete comercial afumat la cald, concentraia de B [a]P a depit 1 g/kg. Nivelurile de hidrocarburi aromatice policiclice n petele proaspt i afumat la rece sunt mai mici dect nivelurile n eantioanele de peti afumati la cald. Valorile medii ale B [a]P, B [a] A i concentraia total de hidrocarburi aromatice policiclice n peti afumai la cald variaz ntre 0,33-1,09 g/kg, 1,12-5,77 g/kg, i respectiv 2,70-12,37 g / kg. n acest studiu, cele ase hidrocarburi aromatice policiclice au fost investigate n 34 probe de prot afumat n ulei. n aceste probe, raportul de prot afumat n ulei vegetal a fost 7:3. n 15 din 34 de probe de prot afumat n ulei, conine B [a]P la niveluri care depesc 1 g /kg. Rezultatele analizei arat diferene foarte mari n concentraie de hidrocarburi aromatice policiclice n eantioanele de acelai tip. Probabil, efectul se datoreaz diferenelor n tehnologia de afumare. Este posibil ca hidrocarburile aromatice policiclice migreaz n ulei. Amploarea

migraiei depinde de caracterul lipofil al produsului i timpul de stocare. Probele de ulei, de msline i rapi, conin suma de hidrocarburi aromatice policiclice la niveluri de pn la maximum 6 g/kg, iar uleiul de prot conine n medie 58 g/kg de hidrocarburi aromatice policiclice. Al doilea scop al acestei lucrri a fost studierea i compararea metodelor de ionizare chimice cu diferite gaze ca reactiv. PAH au fost separate prin GC-MS folosind ion-pozitiv i negativ, ionizare chimic cu amoniac i metan, gaze reactiv i au fost testate pentru a evalua performana de fiecare dintre ele. n scopul comparrii, coninutul de hidrocarburi aromatice policiclice gsite n diverse produse de pete afumat s-a confruntat cu datele din literatura de specialitate.

4. Concluzii
n studiul de fa, cele ase hidrocarburi aromatice policiclice au fost separate prin cromatografie de gaze i difereniate n funcie de ionul pozitiv i negativ de ionizare chimic folosind dou gaze diferite ca reactiv, amoniac i metan. S-a constatat c ionizarea chimic ion pozitiv cu amoniac, ca gaz reactiv este tehnica cea mai selectiv pentru determinarea hidrocarburilor aromatice policiclice izomerice. Limita de detecie i limita de cuantificare pentru aceast metod au fost de aproximativ 0,3 i respectiv 0,9 g/kg. Recuperarea de hidrocarburi aromatice policiclice din produsele pescreti afumate variaz de la 75% la 87%. Concentraii totale de hidrocarburi aromatice policiclice n 97 de produse studiate de pete afumat au variat de la un nivel nedetectabil la 12,34 g/kg. Cele mai ridicate niveluri de hidrocarburi aromatice policiclice au fost gsite n eantioanele de prot afumat n ulei.

Bibliografie
Akpan, V., Lodovici, M., Dolora, P., 1994. Polycyclic aromatic hydrocarbons in fresh and smoked fish samples from three Nigerian cities. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology 53, 246-253; Drea, J.G., Sci. Total Environ., 400, 2008, p. 93; A strategi for the sustanaible development of European aquqculture: http://eurlex.europa.eu/LexUriServ.do?uri=COM:2002:0511:FIN:EN:PDF, 2002; The World Health Report 2006 - working together for health 2006; Journal of Food Composition and Analysis 18 (2005) 857-869;