UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA

Facultatea Biologie i Pedologie

Catedra Biologie Vegetal

Cu titlu de manuscris
C.Z.U.: 575.222.78:582.982

Ozdemir Dogan

POLIMORFISMUL GENETIC N ASPECTUL

HETEROZISULUI LA CUCUMIS SATIVUS L.
03.00.15 Genetic
Tez de doctor n biologie

Conductor tiinific:
DUCA Maria, dr. hab.biol.______________
Autor:
OZDEMIR Dogan______________
Chiinu - 2008

SUMAR
INTRODUCERE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..4
Capitolul 1. CONSIDERAII PRIVIND DIVERSE ASPECTE ALE FENOMENULUI DE
HETEROZIS LA PLANTE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..6

1.1. Noiune de heterozis i perspectivele utilizrii practice a fenomenului . . . . . . . . . 6

1.2. Rolul aparatului genetic n manifestarea heterozisului. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..8
1.3. Aspecte fiziologice i biochimice ale heterozisului. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10
1.4. Utilizarea markerilor moleculari n ameliorarea la heterozis. . . . . . . . . . . . . . . . . 12
1.5. Capacitatea combinativ a liniilor i rolul ei n ameliorarea la heterozis. . . . . . . .13
1.6. Heterozisul la castravei (Cucumis sativus L.). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16
Capitolul 2. CARACTERISTICA MATERIALULUI I METODELE DE CERCETARE21
2.1. Caracteristica materialul utilizat n cercetare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21

2.2. Metode de cercetare. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21

2.2.1. Metode de determinare a unor indici fiziologici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .22
2.2.2. Determinarea cantitii de proteine prin metoda Bradford.. . . . . . . . . . . . . . . . .. .22
2.2.3. Electroforeza proteinelor. . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
2.2.4. Determinarea cantitativ a acizilor nucleici prin metoda spectrofotometric23
2.2.5. Analiza RAPD-PCR . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..25
2.2.6. Determinarea CCG i CCS. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
2.2.7. Prelucrarea statistic a datelor.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 26
Capitolul 3. VARIABILITATEA MORFOFIZIOLOGIC I EFECTUL DE HETEROZIS
LA CASTRAVEI. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .27

3.1. Limitele de variaie ale parametrilor morfofiziologici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

3.2. Limitele de variaie ale coninutului de proteine i acizi nucleici . . . . . . . . . . . ... 35
3.3. Manifestarea heterozisului dup indicii morfofiziologici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
3.4. Manifestarea efectului de heterozis dup indicii nucleo-proteici . . . . . . . . . . . . . 46
Capitolul 4. ESTIMAREA CAPACITII COMBINATIVE LA DIVERSE GENOTIPURI
DE CASTRAVEI . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . .52

4.1. Studiul CCG n cadrul diferitor genotipuri de castravei. . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . .56

4.2. Analiza CCS n cadrul diferitor genotipuri de castravei . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . . 59

Capitolul 5. POLIMORFISMUL PROTEIC LA DIFERITE GENOTIPURI DE CUCUMIS

SATIVUS L . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . 62

5.1. SDS-PAGE a proteinelor sumare, uor solubile la castravei n faza de plantul. . ..62
5.1.1. Analiza electroforetic a proteinelor la hibrizii cu productivitate nalt. . . . . . . . . 63
5.1.2. Analiza proteinelor n cadrul hibrizilor omologai i formelor parentale. . . . . . . . 67
5.1.3. Analiza electroforetic a proteinelor la hibrizii cu productivitate sczut. . . . . . . .70
5.2. Analiza electroforetic a extractului sumar de proteine uor solubile la faza de trei
frunze adevrate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . 73
5.2.1. Analiza calitativ a proteinelor la hibrizii cu productivitate nalt. . . . . . . . . . . . . .73
5.2.2. Analiza calitativ a proteinelor la hibrizii cu productivitate sczut. . . . . . . . . . . . 77
5.2.3. Aspecte comparative ale polimorfismului proteic la diverse genotipuri de
castravei. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . .78
Capitolul 6. STUDIUL COMPARATIV AL POLIMORFISMULUI GENETIC LA
PLANTELE DE CUCUMIS SATIVUS L. . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . 82

6.1. Optimizarea condiiilor de analiz RAPD la castravei . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 82

6.2. Analiza polimorfismului genetic la hibrizii cu productivitate nalt. . . . . . . . . . . . 85
6.3. Diversitatea genetic n cadrul hibrizilor omologai i formelor parentale . . . . . . 91
6.4. Analiza polimorfismului genetic la hibrizii cu productivitate sczut . . . . . . . . . .96
6.5. Aspecte comparative ale polimorfismului genetico-molecular la diverse genotipuri
de castravei . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . .100
SINTEZA REZULTATELOR . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . .102

CONCLUZII. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . . .104
RECOMANDRI PRACTICE . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . 105

BIBLIOGRAFIE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . . 106

INTRODUCERE

Actualitatea temei. Polimorfismul poate fi identificat la diverse nivele de organizare

a plantelor prin analiza caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice, citogenetice,
moleculare, etc. [23, 49, 63, 73, 94, 95, 112, 119, 122].
n aspect fundamental, cercetarea variabilitii caracterelor ce determin polimorfismul
poate contribui la identificarea markerilor genetico-moleculari utilizai n analiza genetic i
filogenetic i elucidarea limitelor de potenial a genofondului n scopul valorificrii
acestuia n agricultur.
n aspect practic, analiza polimorfismului genetic este primordial pentru rezolvarea
problemelor de conservare a biodiversitii, pentru ameliorarea la heterozis asistat de
markeri moleculari, etc.
Fenomenul de heterozis este larg rspndit n natur i rmne a fi n continuare una
dintre cele mai actuale probleme ale geneticii i ameliorrii contemporane. Succesul
seleciei la heterozis este determinat de identificarea i studierea caracterelor valoroase,
inclusiv analiza motenirii caracterelor complexe [28, 29, 31, 32, 36, 40, 41, 124, 108].
Din aceste considerente, relevarea constituiei genetice a organismului nemijlocit n
baza fenotipului, a analizei ADN-ului ca unitate structural a genei, precum i a proteinelor
ca produse ale activitii funcionale a acestora, evitnd ncruciarea i aciuni ndelungate
de testri n cmp, rmne a fi una dintre direciile de perspectiv n ameliorarea plantelor.
Scopul lucrrii const n identificarea unor particulariti morfofiziologice i genetice
specifice la diverse genotipuri de castravei - linii, soiuri i hibrizi F1 cu diferit
productivitate i corelarea acestora cu efectul de heterozis.
Obiectivele preconizate pentru realizarea scopului sunt:
analiza variabilitii unor indici morfo-fiziologici la faza ontogenetic de trei frunze adevrate;
evaluarea genetico-molecular (aspectul cantitativ i calitativ al proteinelor uor solubile i
acizilor nucleici) la diferite genotipuri de castravei;
determinarea capacitii combinative generale (CCG), a capacitii combinative specifice
(CCS) i identificarea gradului de corelaie a parametrilor morfofiziologici cu productivitatea;
analiza polimorfismului RAPD-PCR i corelarea specificitii genotipice cu vigoarea hibrid.

Noutatea tiinific a rezultatelor obinute. Cercetarea simultan a apte hibrizi de

castravei (F1) i formele lor parentale (linii homozigote sau soiuri) a permis de a elucida o
variabilitate specific nalt, corelat cu procesele metabolice dominante n manifestarea
vigorii hibride i de a pune n eviden anumii indici genetico-fiziologici i indici ai CCG
i CCS asociai cu heterozisul.
S-a constatat, c superioritatea hibrizilor de prima generaie la castravei este
determinat preponderent de dezvoltarea somatic sporit a acestora, adic de heterozisul
somatic. S-a stabilit, c productivitatea sporit, care relev un nalt grad de heterozis, este
determinat de capacitatea mai mare de a acumula masa verde i uscat, de o activitate
sporit a catalazei, rezultate care pun n eviden adaptabilitatea i vigurozitatea nalt a
plantelor.
n baza analizei electroforetice a proteinelor i analizei RAPD-PCR a fost identificat
un polimorfism nalt pentru genotipurile cercetate, care pune n eviden particulariti
specifice la grupele de hibrizi cu productivitate diferit.
Semnificaia

teoretic

valoarea

aplicativ

lucrrii.

Identificarea

particularitilor morfofiziologice i genetice ale liniilor de castravei cu CCG i CCS i

corelarea acestora cu efectul de heterozis lrgesc cunotinele teoretice n domeniul geneticii
i ameliorrii n general i contribuie la aprofundarea cunoaterii mecanismelor, care asigur
vigoarea hibrid la plantele de cultur. Materialele prezentate scot n eviden polimorfismul
genetic al materialului ameliorativ prin analiza caracterelor la nivel morfologic, biochimic i
molecular, rezultate ce pot fi valorificate n ameliorarea plantelor de cultur.
Rezultatele obinute pot fi cu succes utilizate n procesul de ameliorare, ntruct aceste
date ofer posibiliti de prognoz a efectului de heterozis la o etap incipient de cretere a
plantelor.
Tot odat, lucrarea n ansamblul ei constituie un suport metodologic i tiinific n
predarea cursurilor de Genetic i Ameliorare a plantelor, precum i a cursurilor speciale,
pentru o explicaie mai detaliat a fenomenului de heterozis i poate fi utilizat n instruirea
studenilor.
Liniile L 203 i L 371 au pus n eviden valori superioare ale capacitii combinative
dup majoritatea indicilor cercetai i sunt recomandate amelioratorilor pentru includerea lor
n procesul de ameliorare la heterozis.

Capitolul 1. CONSIDERAII PRIVIND DIVERSE ASPECTE ALE

FENOMENULUI DE HETEROZIS LA PLANTE
Fenomenul de heterozis este pe larg rspndit n ameliorarea diferitor culturi agricole,
fiind depistat la majoritatea organismelor cu reproducere sexuat. Cercetrile fundamentale
n vederea elucidrii bazelor moleculare ale efectului de heterozis au permis obinerea
hibrizilor cu o productivitate nalt de porumb [6, 63], sorg [28, 57, 94], orez [49], floareasoarelui [119], ct i la alte specii de plante [112, 113] inclusiv de castravei [30, 66, 68, 69,
70, 71, 72, 73, 76, 77, 80, 85, 95].
n plan funcional, prin exprimarea nsuirilor concrete ale organismului, se disting trei
tipuri de heterozis
- heterozis reproductiv - se manifest printr-o dezvoltare mai intens a organelor
reproductive, fertilitate sporit i o producie mai mare de semine, fructe etc.;
- heterozis somatic - asigur un habitus mrit, deci, o cretere intensiv a prilor
vegetative;
- heterozis adaptiv - se exprim prin sporirea vitalitii, rezistenei la condiiile
nefavorabile ale mediului, etc.
Ponderea economic a heterozisului poate fi considerabil, dar diferit n funcie de
tipul culturilor agricole. n practica agricol un interes deosebit l prezint heterozisul
reproductiv, care la plantele agricole poate asigura sporirea produciei n medie cu 30-50%
fa de formele parentale, iar la unele culturi chiar cu 50 -70% [70].

1.1. Noiune de heterozis i perspectivele utilizrii practice a fenomenului

Aprecierea potenialului genetic al heterozisului pentru selecie este una dintre
problemele actuale ale botanicii aplicate, geneticii i ameliorrii.
Prin heterozis (vigoarea hibrid) se nelege fenomenul ce const n creterea
vigurozitii, viabilitii, capacitii de producie, adaptabilitii i altor caracteristici
economico-valoroase la organismele hibride heterozigote F1 n comparaie cu formele
homozigote i celelalte generaii [124, 126].

Termenul de heterozis a fost introdus n tiin de geneticianul american G. H. Shull n

1914, care a studiat problema hibridizrii porumbului [144]. ns, fenomenul vigorii hibride
la plante a fost semnalat pentru prima dat la ncruciarea artificial a dou specii de tutun:
Nicotina tabacum i Nicotina glutinosa. Hibrizii obinui se caracterizau prin sporirea
vigurozitii n prima generaie, exprimat printr-o cretere a dimensiunii frunzelor [61,
100]. Efectul majorrii vigurozitii hibride a fost remarcat i de Ch. Darvin, care a studiat
influena autofecundrii i fecundrii ncruciate la diferite genuri de plante (Brassica,
Pisum, Primula, Zea) i a constatat o cretere evident a nlimii plantelor, fecunditii i
sporirii capacitii de producie la descendenii obinui prin fecundarea ncruciat i o
diminuare a nlimii i productivitii plantelor n rezultatul autopolenizrii. O intensificare
a acestor parametri s-a constatat n cazul autopolenizrilor repetate. Savantul a explicat
dezvoltarea luxurian a plantelor hibride (vitalitatea sporit) ca fiind determinat de
diferenierea biologic a gameilor, ce au participat n procesul de fecundare [109]
E necesar de menionat, c nu n toate cazurile hibridarea duce la apariia heterozisului,
de aceea, cercettorii studiaz capacitile combinative n hibridizarea perechilor parentale,
stabilind experimental nivelul heterozisului. n comparaie cu ncruciarea obinuit,
heterozisul se manifest cu intensitate maxim n F1 i se reduce simitor n generaiile
urmtoare, suprimndu-se total pn ce organismul atinge nivelul de homozigoie iniial
[61].
Heterozisul somatic este menionat n lucrrile lui I. V. Miciurin, care accentua
superioritatea hibrizilor din prima generaie i era categoric mpotriva folosirii n selecie a
hibrizilor din a doua sau a treia generaie. Heterozisul se fixa prin colectarea seminelor din
prima generaie, heterozigote fa de formele parentale, care n continuare se multiplicau
prin apomixie, ncercnd de a pstra heterozisul n ntregime [114, 141,142].
Heterozisul se evideniaz i dup intensitatea proceselor metabolice care sunt necesare
n biosinteza unor sau altor substane necesare vieii. Multiple cercetri au demonstrat, c
hibrizii ce manifest efectul de heterozis se deosebesc prin acumularea intensiv a
substanelor organice pn la etapa de fructificare, acestea mai apoi se utilizeaz ca surs
energetic pentru formarea seminelor i fructelor, ceea ce i asigur productivitatea nalt a
plantelor [116].

Efectul vigorii hibride se manifest, ndeosebi, prin particularitile cantitative majore

ale

unor

caractere

morfologice

(nlimea

diametrul

tulpinii,

dimensiunile

inflorescenelor, ale florilor, frunzelor, fructelor i seminelor) i prin superioritatea valorilor

unor caractere fiziologice (capacitatea fotosintetic, respiraia, presiunea osmotic, schimbul
energetic, acumularea substanelor pectice, activitatea fermenilor .a.), care caracterizeaz
n general productivitatea plantelor, dar puin reflect partea calitativ i raportul
componenilor chimici ai recoltei [127].
Perspectivele utilizrii practice a fenomenului de heterozis depind de elaborarea
metodelor eficiente i rapide de apreciere a liniilor dup capacitatea lor combinativ i
selectarea criteriilor de prognozare a heterozisului n scopul sporirii recoltei. n legtur cu
aceasta, biochimitii i fiziologii au propus anterior o serie de metode cum ar fi biotestul
[125, 148, 149], aprecierea heterozisului dup proprietile electrocinetice ale nucleelor
celulare [149] sau selectarea combinaiilor prin hibridizarea de concuren a ARNm cu
ADN n baza regiunilor genetic active ale genomului liniilor consangvinizate [107] etc.

1.2. Rolul aparatului genetic n manifestarea heterozisului

Studiul fenomenului de heterozis reprezint una dintre principalele probleme ale
morfogenezei plantelor de cultur. Acest fenomen constituie un proces biologic complex cu
largi perspective n ameliorarea plantelor. De obicei, el se caracterizeaz prin dominarea
genotipului hibrid asupra formelor parentale dup unul sau mai muli indici, cum ar fi masa
rdcinii, suprafaa foliar, nlimea plantelor etc.
Heterozisul apare i se esprim preponderent la hibrizii primei generaii (F1) i
diminueaz n generaiile urmtoare [99], astfel nct pentru utilizarea lui n practica
agricol este necesar de a reproduce anual hibrizii F1 prin diverse scheme semenologice
[105]. Pornind de la acest fapt se deosebesc cteva tipuri de heterozis:
heterozis stabil sau fixat ,
heterozis instabil.
Heterozisul instabil se manifest doar n prima generaie dup care efectul diminueaz,
pe cnd heterozisul stabil se include n constituia homozigot a organismului, se fixeaz n

sistemul genetic i devine o treapt a evoluiei. n viziunea amelioratorilor la plante cel

mai frecvent se ntlnete heterozis instabil [42]. Prin urmare preocuparea de baz a
savanilor este orientat spre posibilitatea de a fixa acest efect ntr-un ir de generaii [99].
Efectul de heterozis se identific la ncruciarea diferitor specii i soiuri, dar un efect
mai pronunat poate fi relevat doar n urma hibridrii liniilor consangvinizate, precedate de
procesul de inbreeding. Datorit acestui fapt heterozisul poate fi controlat i dirijat la nivel
genetic [36, 88]. Evident, c la baza apariiei heterozisului stau ansamblul proceselor
genetice precum ar fi interaciunile intergenice, plasmatice care, n aspect funcional
prezint efecte stimulatoare i inhibitoare ale manifestrii genelor, complimentarea i
compensarea genelor i poziia lor. La general, toate ipotezele de manifestare a heterozisului sunt
corecte i fiecare dintre ele explic n esen una din laturile acestui fenomen biologic complex [5].
Primele ipoteze, care au contribuit la explicarea teoretic a fenomenul de heterozis au
fost expuse concomitent i independent n anul 1908 de ctre savanii americani Shull i
East, care au menionat c vigoarea hibrid reprezint rezultatul heterozigoiei i noilor
interaciuni ntre gene la hibrizii din prima generaie. Ei considerau c hibridarea gameilor
cu seturi diferite de gene stimuleaz dezvoltarea mai rapid a embrionului i ulterior a
hibridului [121].
Ulterior, pentru explicarea mecanismului heterozisului i depresiei inbrede au fost
propuse un ir de ipoteze, care sunt discutate pe parcursul a mai multor decenii. Cele mai
frecvente din ele sunt: ipoteza dominaiei, supradominanei, combinrii factorilor dominani
favorabili i balanei genetice [42, 109, 115, 120].
n literatura de specialitate o atenie deosebit se acord aspectelor genetice ale
manifestrii heterozisului determinate nemijlocit de genomul nuclear - heterozisului
genomic. n manifestarea efectului de heterozis, caracterizat de indicii morfofiziologici, un
rol important i revine sistemului genetic citoplasmatic, crui i corespunde aa zisul
heterozis citoplasmatic. La baza lui st polimorfismul genetic, citoplasmatic, structura
plastidelor i a mitocondriilor, interaciunea genelor mitocondriale cu genele din nucleu interaciunea plasmonului cu genomul [44, 127, 138, 139].
n scopul elucidrii naturii heterozisului, pe parcursul anilor, s-au efectuat ample
cercetri fundamentale a proceselor ce au loc la nivel molecular, care furnizeaz date
importante cu privire la structura i funcionalitatea activitii genomice a hibrizilor

heterozigoi i a formelor lor parentale [146], inclusiv informaii referitoare la aprecierea

specificitii activitii genomice i a locusurilor lui dup intensitatea sintezei fraciilor
separate de ARN i ARMm [107] i care ar permite aprecierea efectului de heterozis dup
majorarea cantitii de ADN n celulele organismelor vegetale [126, 130], aprecierea
efectului de heterozis dup intensitatea replicrii ADN [150], a activitii mitotice,
aprecierea structurii i activitii locusurilor genomului dup proteine produs al expresiei
acestora [101, 102 ].
Aprecierea efectului de heterozis conform principiilor propuse, direct sau indirect,
reflect mecanismele moleculare ale proceselor genetice, care servesc ca etalon pentru
elaborarea metodelor de prognosticare a heterozisului n baza selectrii formelor parentale
cu o capacitate combinativ nalt.

1.3. Aspecte fiziologice i biochimice ale heterozisului

n elucidarea aspectelor funcionale ale heterozisului la plante o atenie deosebit
revine mecanismelor fiziologo-biochimice ale vigorii hibride. Reieind din aceasta,
numeroase cercetri au fost consacrate stabilirii rolului proceselor de fotosintez, respiraie,
activitii fermenilor, schimbului de energie, acumulrii substanelor nutritive de rezerv n
manifestarea heterozisului [5, 31, 137].
Prima interpretare fiziologic a fenomenului heterozisului a fost expus n teoria
Ashby, conform creia heterozisul la hibrizii F1 este determinat de sporirea volumului
embrionului, efectul dominant al vitezei de cretere, creterea intens a meristemei i
activitatea fotosintetic superioar. Dei exist numeroase cercetri care confirm sau neag
teoria dat, pn n prezent nu au fost descoperite legitile generale ale proceselor
metabolice ce explic heterozisul. Majoritatea savanilor susin c accelerarea proceselor de
cretere a hibrizilor, care duce la dezvoltarea puternic a organismului se datoreaz
intensificrii sintezei primare a acizilor nucleici i a proteinelor, modificrii statutului
hormonal al germenilor, activrii metabolismului fosforic inclusiv i a celui energetic [136].
Cercetrile fiziologice au demonstrat, c inbreeding-ul ndelungat cauzeaz depresia
fotosintezei - factorul principal al productivitii plantelor, n special, la liniile cu capacitate

10

combinativ joas. La unele culturi s-a constatat superioritatea hibrizilor fa de liniile

autopolenizante dup intensitatea fotosintezei [131].
Analiza comparativ a coninutului de clorofil, caroten, xantofil i licopin nu au pus
n eviden corelaii bine definite ntre indicii studiai la formele homo-i heterozigote. ns,
s-a stabilit, c potenialul fotosintetic i recolta nalt a hibrizilor de gru sunt asociate cu
coninutul nalt al clorofilei n frunze i balana moderat a 2 la aciunea temperaturilor
nalte [104, 140]. S-a depistat c coninutul relativ nalt al clorofilei n frunze este un
caracter dominant, care coreleaz cu culoarea roie a spicului, iar intensitatea
metabolismului 2 la temperaturi nalte reprezint un caracter recesiv. Aceti indici sunt
conjugai cu capacitatea combinativ nalt i sunt recomandai n calitate de criterii n
selectarea formelor parentale [77, 130]. Productivitatea nalt a hibrizilor este determinat i
de suprafaa foliar mare. De obicei, plantele hibride formeaz suprafaa foliar de 1,5 ori
mai mare dect formele iniiale [104, 117, 118]. Totodat s-a demonstrat c la hibrizii cu un
efect nalt al heterozisului raportul fotosintez/respiraie este mai mare [104].
Substanele fiziologic active auxinele, giberelinele, citochininele, inhibitorii etc. au o
importan deosebit n manifestarea heterozisului. Cercetrile efectuate de Kefeli V. I. au
artat c aceti compui sunt componeni importani ai sistemului de reglare genetic i c la
hibrizii cu heterozis pronunat se creeaz un raport echilibrat al acestor substane ca rezultat
al formrii la hibrid a unui genotip mai balansat, demonstrnd lipsa superioritii hibrizilor
heterozigoi dup coninutul unei sau altei substane fiziologic active [118].
Hotleva L.B. i Titoc V.V. [147], analiznd dependena dintre masa seminei,
variaiile biomasei plantulelor i coninutului componenilor metabolismului fosforic
fitinei, fosfatului neorganic, nucleotidelor adenilice i a acizilor nucleici la stadiile timpurii
ale germinrii seminelor, au constatat, n baza indicilor cercetai superioritatea hibrizilor
comparativ cu liniile homozigote. Totodat, hibridul se caracteriza prin acumularea
intensiv a biomasei i hidroliza activa a fitinei la germinare. Dup patru zile de cultivare, n
seminele germinate, la hibridul F1 indicii integrali ai metabolismului energetic (coninutul
ATP, suma nucleotidelor adenilice, sarcina energetic i potenialul fosfatic invers) au fost
mai mari, dect la liniile iniiale.
n majoritatea cazurilor plantele hibride posed activitatea enzimatic intermediar
ntre formele parentale. Totodat, s-a atestat o activitatea nalt a unor oxidoreductaze i

11

transferaze i intensificarea sintezei grupelor macroergice la hibrizi [141, 142]. Unii savani
au demonstrat c mitocondriile formelor hibride posed un nivel mai nalt al fosforilrii
oxidative i sintezei grupelor macroergice, asigurnd condiii prielnice pentru procesele
biosintetice i servesc ca un stimul pentru apariia heterozisului. S-a stabilit c potenialul
redox nalt al organelor generative la formele parentale poate servi un criteriu de selectare a
acestora dup capacitatea combinativ [118].

1.4. Utilizarea markerilor moleculari n ameliorarea la heterozis

Efectul de heterozis este determinat de motenirea caracterelor complexe
(codominana i pleiotropia). Din aceste considerente fenomenul poate fi studiat cu
ajutorul markerilor, care sunt distribuii destul de uniform n genom i care pot fi
reprezentai de markeri discrei, astfel ca: izoenzimele, fragmentele de restricie a ADNului, ADN microsatelit, proteinele de rezerv .a. [125, 129].
O etap nou n perfectarea tehnologiei de ameliorare la heterozis ar fi implementarea
metodelor bazate pe utilizarea markerilor moleculari, care relev variabilitatea genetic,
nefiind supui influenelor mediului [35, 82]. Analiza direct a genelor, detectarea i
secvenierea fragmentelor de ADN nuclear, cloroplastic sau mitocondrial sunt metode de o
precizie i vitez de diagnostic fr precedent, reprezentnd instrumentele cele mai valoroase
pentru studiul diversitii genetice, dar i pentru cercetarea filogeniei, taxonomiei, fluxului genic
n populaii. Aceti markeri au nceput s fie utilizai pentru analiza efectelor seleciei n
populaiile de plante [65, 69, 100, 103]. Activitatea funcional a genomului poate fi evideniat
prin analiza produselor primare ale expresiei genelor - proteinele (fig. 1.1) [15, 16, 122, 128].
GENOTIP
Procese genetice
ADN ADN ARN PROTEIN
_______________

sonde
genetice

____________________

caractere
proteice

markerii proteici
__________________________
markeri moleculari

FENOTIP
Procese morfogenetice
METABOLISMUL N
FORMAREA FENOTIPULUI
________________________________________________

caracterele
biochimice i morfologice

markerii biochimici i morfologici

Figura 1.1. Reprezentarea schematic de manifestare a caracterelor genotipice

12

Avantajele markerilor proteici constau n faptul ca ei pot fi utilizai de la specii pn la

categorii taxonomice mari. Totodat, pentru aprecierea variabilitii genetice n limitele
speciei este mai convenabil electroforeza proteinelor multiple (codificate de mai multe gene
diferite) i genetic polimorfe, codificate de gene polialele [16, 122, 128]. Ca regul, combinaiile
hibride cu efect de heterozis sunt create n baza liniilor parentale cu deosebiri eseniale dup
spectrele componentelor proteinelor markeri. Cercetarea lor creeaz sperane pentru
elaborarea criteriilor efective de alegere a perechilor i metodele de prognozare a
heterozisului.
n calitate de markeri, de obicei sunt utilizate proteinele de rezerv din semine i
izoenzimele. Proteinele de rezerv sunt nalt polimorfe i reflect ntocmai polimorfismul
alelic, contribuind la evidenierea variabilitii la nivelul familiei, genului, speciei, soiului i a
populaiilor hibride [126, 130]. Pe lng proteinele de rezerv, care reprezint fracia proteic
major, n semine sunt puse n eviden proteine biologic active i structurale. Proteinele
implicate n metabolism sau protecia plantei, adesea, sunt n cantiti minore n semine.
Electroforeza proteinelor polimorfe i analiza seminelor, permit aprecierea exact i total a
componenei populaiilor de orice complexitate i reprezentarea lor sub form de formule
proteice ale elementelor populaiei cu indicarea frecvenei acestora, fiind utilizate ulterior n
paaportizarea soiurilor, biotipurilor i a liniilor. Izoenzimele, la rndul su, sunt considerate
markeri biochimici foarte importani, care reprezint compui primari ai activitii genelor i
au un control alelic simplu, bialelic sau codominant [84, 86, 87]. Influena mediului nu se
reflect la nivelul izoenzimelor, ceea ce face din aceti markeri instrumente precise i rapide,
foarte mult utilizate pentru estimarea variabilitii genetice a plantelor [1, 37, 45, 47, 98].
Astfel, elucidarea mecanismelor moleculare ale fenomenului de heterozis, n baza celor
mai noi realizri ale geneticii, fiziologiei i biochimiei plantelor, vor permite evidenierea
legitilor manifestrii vigorii hibride i elaborarea metodelor de pronosticare a nivelului de
heterozis, utilizarea practic i dirijat a acestui proces.

1.5. Capacitatea combinativ a liniilor i rolul ei n ameliorarea la heterozis

n ameliorarea liniilor consangvinizate a diverselor culturi agricole un interes deosebit
l prezint posibilitatea determinrii indirecte a capacitii combinative a formelor iniiale pe

13

baza corelaiilor indicilor agronomici ntre liniile consangvinizate i hibrizii din prima
generaie. Alegerea liniilor, soiurilor ca componente pentru ncruciare depinde
preponderent de capacitatea acestora de a asigura obinerea hibrizilor cu valoroase caliti
economice, capacitatea combinativ a materialului iniial determinnd efectul de heterozis
Efectul heterozis este studiat folosind hibridarea ciclic i hibridarea dialel pentru
determinarea capacitii combinative generale i capacitii combinative specifice a
formelor parentale [2, 18, 19]. Scopul ncrucirii dialele este de a identifica formele
parentale n rezultatul ncrucirii crora se manifest heterozis major [144]. Capacitatea
combinativ general (CCG) reprezint capacitatea liniilor de a manifesta o anumit
productivitate n dependen de combinrile posibile, caracterizndu-se prin valorile medii
ale indicilor cercetai ale tuturor genotipurilor obinute. CCG a liniilor reprezint criteriul de
baz pentru ncruciare n procesul de selecie, reflectnd comportarea medie a unei linii n
cadrul tuturor ncrucirilor. Oriice ncruciare are o valoare previzibil, care este suma
abilitilor combinative generale a liniilor parentale. Rezultatul ncrucirii poate atinge
valori mai mari sau mai mici comparativ cu valoarea ateptat i este numit capacitate
combinativ specific.
Capacitatea combinativ specific (CCC) reprezint capacitatea liniilor de a realiza, n
cazul combinrii concrete, rezultate superioare sau inferioare ale indicilor cercetai,
comparativ cu valoarea medie, obinut la analiza tuturor combinrilor posibile ale acestor
linii. Reieind din nivelul de manifestare al unui caracter anumit la organismul heterozigot,
se consider c poate fi evideniat heterozisul pozitiv, atunci cnd gradul de manifestare este
superior comparativ cu formele parentale homozigote i heterozis negativ, atunci cnd
valoarea indicelui este inferioar formelor iniiale.
Pentru determinarea capacitii combinative generale ale liniilor consangvinizate sau
soiurilor, n scopul aprecierii lor, la ncruciare se utilizeaz un hibrid, soi, linie, cu baz
ereditar larg i cunoscut (un tester). Algoritmul determinrii CCG implic stabilirea
sumei productivitii tuturor hibrizilor i liniilor (soiurilor), determinarea mediei
experimentului topcross, stabilirea abaterii produciei a hibridului sau a unei linii (soi)
pentru fiecare combinaie hibrid fa de producia medie n q/ha sau n procente.
Numeroase cercetri au demonstrat c caracteristicele cantitative i calitative ale hibrizilor
din prima generaie sunt ntr-o dependen direct de particularitile individuale ale liniilor

14

iniiale, la ncruciarea crora se obin urmai heterozigoi cu expresivitate nalt a efectului

de heterozis. Planificarea tiinific a procesului de selecie n scopul obinerii hibrizilor F1
nalt productivi, impune necesitatea determinrii caracterului de interaciune a genelor, a
capacitii combinative a liniilor parentale i a posibilitii prognozrii capacitii
combinative reieind din manifestarea fenotipic a indicelui la liniile iniiale [106, 147 ].
S-a stabilit, c liniile consangvinizate de floarea-soarelui care cresc viguros au, n
general, o capacitate bun de combinare. Autorii au observat o corelaie pozitiv
semnificativ a procentului de ulei, nlimii plantei, numrul de zile pn la nflorit i
toleranei la rugin a liniilor consangvinizate i aceleai caractere la hibrizii lor n topcross,
dar nu au gsit o corelaie clar ntre linii i capacitatea combinativi general
corespunztoare pentru semine. Datele obinute de Cloczowski n 1972 [13] au demonstrat
corelaii strnse ntre capacitatea general de combinare a liniilor consangvinizate de
floarea-soarelui cu producia lor de semine.
Unii autori [62] au comunicat c hibrizii F1 au evideniat o corelaie mai mare pentru
producia de semine i coninutul de ulei cu liniile materne dect cu cele paterne. Ali
autori, ns, au concluzionat c performana liniilor consangvinizate n privina produciei
de semine nu prezice performana lor n hibrizi [46].
Astfel, cu toate c se recunoate o corelaie general ntre produciile de semine ale
liniilor consangvinizate i ale hibrizilor lor, datele din literatur sunt contradictorii, deci o
decizie complet satisfctoare asupra valorii combinative a unei linii consangvinizate poate
fi luat numai prin testarea ei n combinaii hibride experimentale.
Capacitatea combinativ specific se determin prin hibridare dialel a celor mai bune
linii (soiuri) stabilite dup capacitatea combinativ general, care permite aprecierea
heterozisului ipotetic, real i de concurs. Litun [133] menioneaz c capacitatea
combinativ este o particularitate genetic determinat a organismelor cu nmulire sexuat,
se supune legilor ereditarii genetice i reprezint un subiect de cercetare pentru genetica
cantitativ. Se consider c capacitatea combinativ general este determinat de aciunea
aditiv (sumar) a genelor, iar capacitatea combinativ specific de supradominan i/sau
epistazie [18, 19].
Date recente referitor la aciunea genelor implicate n fixarea azotului au relevat efecte
genetice predominant nonaditive. Numeroase cercetri au demonstrat c indicii agronomici

15

sunt determinai att de variaiile efectelor genetice aditive, ct i de cele neaditive. S-a
stabilit c valori ale CCS sunt mai expresive n cazul ncrucirii formelor ndeprtate,
comparativ cu cele genetic nrudite [64].

1.6. Heterozisul la castravei (Cucumis sativus L.)

Explorarea fenomenului de heterozis n scopul obinerii hibrizilor cu valoare
comercial nalt reprezint prerogativa procesului de selecie dirijat la castravei. Analiza
productivitii hibrizilor F1 a demonstrat, n cele mai multe cazuri, superioritatea acestora
dup indicii cercetai fa de genitori, raportul procentual al valorii indicelui cercetat la
hibridul F1 fa de valoarea medie a parametrului obinut la analiza ambelor forme
parentale purtnd denumirea de heterozis [52, 56, 83].
Castravetele (Cucumis sativus L.) este un membru al familiei Cucurbitaceae, care
include aproximativ 90 genuri i 700 - 760 specii. Genul Cucumis, la care aparin
castraveii, include aproximativ 70 specii. Cucumis sativus L este originar din India sau
Asia de Sud [39]. Cucumis sativus L se deosebete de alte Cucurbitaceae prin prezena a
apte perechi de cromozomi (2n=2x=14) [8]. Comparativ cu alte culturi agricole,
castravetele are dimensiuni relativ mici ale ADN-ului, ceea ce face foarte atractiv analiza
genomului la aceast plant cultivat [23]. Astfel, majorarea productivitii castraveilor
rmne pn n prezent un obiectiv important pentru practica agricol [73].
Productivitatea castraveilor a fost majorat considerabil pn n 1940 (~5% cretere
anual). Utilizarea tehnicilor de cultivare n procesul de ameliorare - modificarea sexului
florilor masculine, creterea numrului de flori feminine i introducerea genelor
responsabile pentru rezistena la boli de la varietile exotice (spre exemplu din China,
India, Japonia) a permis majorarea roadei de trei ori, de la 4,076 (kg/ha) n 1920 pn la
12,550 (kg/ha) n 1980 i pn la ~13,400 kg/ha n 1997 [70].
n ultimii ani, productivitatea castraveilor n unele ri (de exemplu, n SUA) a crescut
considerabil (aproximativ 100%) ca rezultat al mbuntirii condiiilor de cultivare [9, 50]
i seleciei plantelor n baza caracterelor responsabile de productivitate [87, 78], ct i

16

utilizrii tehnicilor moleculare ce au permis majorarea rezistenei castraveilor la factorii

nefavorabili i la boli [53, 78, 79].
In India au fost descoperite specii slbatice de castravei cu ncruciare liber. Aceste
specii au o proprietate de a produce mai multe fructe pe plant i se deosebesc esenial de
varietile de castravei utilizai n prezent n diferite ri. Este oportun de a transfera genele
responsabile de productivitate de la speciile slbatice la cele comerciale. Pentru a realiza
aceast sarcin dificil este necesar de a determina care dintre aceste varieti sunt cele mai
bune pentru ncruciarea cu speciile slbatice n scopul realizrii transferului iniial [70].
Trei linii de castravei Cucumis sativus var. sativus L. i o linie derivat de la C.
sativus var. hardwickii (R.) Alef. au fost incluse n ncruciri dialele pentru determinarea
capacitii lor combinative i evidenierea caracterelor corelate cu productivitatea [38].
S-a stabilit c pentru majoritatea indicilor cercetai capacitatea combinativ a fost
semnificativ influenat (p < 0.05) de condiiile de mediu. Capacitatea combinativ general
a fost semnificativ pentru toate caracterele n fiecare an. Capacitatea combinativ specific
a fost semnificativ pentru caracterele examinate, cu excepia numrului de lstari laterali i
numrul de flori feminine pe plant. Datele au demonstrate c C. sativus var. hardwickii derivat a liniei imbrede WI 5551 poseda capacitate combinativ specific pentru caracterele
responsabile de productivitate i poate fi utilizat pentru ameliorarea castraveilor
comerciali [40].
Studiul fenomenului de heterozis la castravei a demonstrat c majoritatea caracterelor
care condiioneaz productivitatea au un determinism poligenic, aceasta face imposibil
analiza i descrierea efectului fiecrei poligene n parte, ci numai la nivelul ntregului
complex de gene care condiioneaz caracterul respectiv. Pentru practica ameliorrii
expresia fenotipic a unui caracter cantitativ depinde ntr-o msur mai mare de efectul
cumulat al interaciunii genelor cu mediul i mai puin de efectul unor gene individuale [73].
Cercetrile fiziologo-biochimice i genetice au evideniat unele criterii eficiente pentru
majorarea productivitii plantelor n baza unor indici relevani. S-a stabilit c dintre toi
parametrii cercetai, numrul de fructe este un indice mai stabil ce determin productivitatea
plantelor, comparativ cu dimensiunile fructelor i valoarea recoltei de pe o singur plant.
Productivitatea unei singure plante a corelat preponderent cu recolta plantelor n anii
urmtori, indicnd asupra necesitii testrii acestui indice n serie [77]. De menionat c
17

experimentele n vase de vegetaie, bazate pe determinarea numrului de fructe de pe o

singur plant nu au corelat pozitiv cu productivitatea general n cmp. Avnd n vedere
complexitatea capacitii de producie, care la rndul su este influenat de numeroase
componente (numrul de fructe pe plant, dimensiunile fructului, numrul de flori
feminine), se menioneaz c nu exist gene pentru capacitatea de producie ca nsuire
intrinsec, ci numai gene care condiioneaz expresia fenotipic a acestora [27].
Capacitatea de producie este un caracter foarte complex care prezint valori reduse ale
iritabilitii n primele generaii, datorit prii considerabile din variana genetic
reprezentat de dominan i epistazie. n generaiile avansate iritabilitatea crete datorit
contribuiei majore pe care o are variana aditiv asupra varianei genetice.
Cercetarea ADN-ului la castravei cu ajutorul ADN-markerilor reprezint un
instrument biotehnologic eficient n cercetarea fenomenului de heterozis [69, 96, 97].
Markerii moleculari au fost utilizai pentru studiul complex al relaiilor dintre gene, fiind
detectate asocieri ntre unele gene, implicate n obinerea recoltelor nalte de castravei
[25]. Au fost efectuate cercetri pentru atestarea implicrii acestor gene marker n
obinerea roadei i majorarea eficienii cultivrii culturii de castravei [97]. Cercetrile
efectuate anterior au relevat posibilitatea utilizrii markerilor genetici pentru majorarea
eficienii cultivrii castraveilor i respectiv pentru majorarea roadei [26, 69]. n urma
unor cercetri recente bazate pe o tehnic de investigare foarte performant (metoda
QTL), au fost identificate locusuri situate pe cromozomi diferii care au influen direct
asupra capacitii de producie [15, 59].
Pentru majorarea produciei de castravei s-a utilizat un program special de ameliorare
a plantelor n baza markerilor fenotipici (PHE) i markerilor moleculari ce asist selecia
(MAS) pentru obinerea castraveilor de dimensiuni mari cu fructificare precoce [24, 26].
Aceste componente importante ce determin productivitatea plantelor sunt sub controlul
genetic al ctorva loci cantitativi (QTL). Dup trei cicluri de analiz a markerilor fenotipici,
selecia ulterioar n baza MAS a permis identificarea hibrizilor cu efect de heterozis major,
care au fost folosii pentru obinerea generaiei backcross, iar markerii moleculari au permis
evidenierea locilor caracterelor cantitative (QTL), care contribuie la manifestarea vigorii
hibride [60].

18

Analizele statistice nu au demonstrat diferene semnificative (p < 0.001) dintre

resursele fenotipice (BC2PHE = 3.02, BC3PHE = 3.29) i selecia marker-asociat
(BC2MAS = 3.12, BC3MAS = 3.11) pentru MLB (ramuri laterale multiple).

Datele

obinute au relevat c ciclul vital scurt al castraveilor (4 luni), markerii lincai cu MLB i
utilizarea MAS-markerilor pot servi ca mijloace eficiente pentru ameliorarea castraveilor.
Ameliorarea n baza indicilor MAS a fost foarte eficient pentru evaluarea liniilor, conform
indicilor selectai, ai productivitii plantelor [22, 56, 68]. S-a stabilit c astfel de factori,
precum inhibiia formrii fructelor, relaiile interdependente i corelaiile dintre caractere
responsabile de productivitate determin cantitatea de road obinut. Corelaii strnse
exist ntre numrul de lstari laterali (MLB), expresia sexului feminin, precocitate, raportul
lungimii la diametrul fructului, care reprezint caracteristice importante ale productivitii
castraveilor [56, 67]. Heterozisul reproductiv la castravei este asociat cu descreterea
corelrii negative dintre numrul de fructe pe plant i greutatea fructelor i majorarea
valorii corelaiei negative ntre procentajul de fructe pe plant i ramuri pe plant, ct i
ntre procentajul de flori feminine, cu majorarea valorii corelaiei negative ntre numrul de
noduri pe ramur i greutatea total a fructelor. Depresia imbred a fost asociat cu valoarea
sczut a corelaiilor strns negative ntre procentul de fructe i numrul de ramuri pe
plant, de asemenea ntre numrul de noduri pe ramur i masa total a castraveilor
recoltai. Corelaiile stabilite au fost asociate cu vigurozitatea formelor parentale i cu
depresia imbred doar n cazul ncrucirii simple [56, 67].
Hibridarea simpl poate duce la obinerea unor recombinri de gene valoroase pentru
ameliorare. Pe aceast cale au fost obinute numeroase soiuri [25, 81, 91].
Hibridarea complex este des folosit n ameliorarea castraveilor, deoarece permite
utilizarea unei germoplasme foarte vaste ntr-un timp scurt i cu cheltuieli minime, existnd
o experien vast n aceast direcie. Astfel, [48, 56, 75, 89] s-a aplicat aceast metod
combinnd o serie de hibrizi simpli ntr-un amestec complex care a fost denumit hibrid
complex sau populaie mixt [56].
Primii hibrizi compleci s-au obinut din hibrizi simpli folosindu-se un numr ct mai
mare de combinaii ntre un numr limitat de prini, ns numrul recombinrilor rezultate
au fost limitate de posibilitile genetice ale celor doi prini. Ulterior, aceast schem a fost
modificat, crendu-se astfel posibilitatea reunirii genelor valoroase de la toi prinii
19

utilizai [11, 74]. Backcrossul cu toate variantele sale, dar mai ales cel n trepte este folosit
frecvent n ameliorarea castraveilor, deoarece permite introducerea n anumite soiuri
valoroase a unor nsuiri n care acestea sunt deficitare. Aceast metod se folosete cu
succes pentru caracterele care au un determinism genetic simplu, controlate de una sau dou
gene [37].
Hibridarea ndeprtat reprezint o cale de lrgire a variabilitii genetice necesar
pentru atingerea unor obiective de ameliorare cum ar fi rezistena la boli i factori
nefavorabili de mediu [12]. Hibridarea interspecific devine o component de baz ale
proceselor de ameliorare, numai atunci cnd variaia n cazul speciei cultivate este epuizat,
sau atunci cnd anumite gene importante (rezisten la boli, adaptare fiziologic sau
ecologic) nu sunt prezente in aceast specie [96]. Astfel, heterozisul implic multiple
procese biologice, care permit de a interpreta fenomenul dat, reieind din natura funcional,
genetic, biochimic, evolutiv, etc. [74, 143]. Esena fenomenului de heterozis poate fi
elucidat prin cercetarea comparativ a structurii i activitii genomului hibrizilor
heterozigoi, ct i a formelor parentale [23]. Succesul n obinerea prin hibridare a unor
variaii genetice utile pentru procesul de ameliorare, este determinat de alegerea formelor
parentale. n acest sens au fost elaborate mai multe metode analitice de alegere a genitorilor,
cum sunt: metoda "celor mai mici ptrate" (least squares), metoda geometric i metoda
analizelor canonice. Principiul de baz al acestor metode const n prognosticarea valorii
viitoarelor combinaii n funcie de valoarea printelui intermediar [10]. De asemenea s-a
propus alegerea genitorilor printr-o hibridare dialel ntre un set de soiuri cu anumite
caracteristici particulare i un set de soiuri cu performane adaptative ridicate [74].
Cu toate acestea, relevarea naturii fenomenului de heterozis la castravei necesit i n
continuare realizarea unor cercetri fundamentale, la nivel molecular, celular, la nivel de
organism, att a hibrizilor, ct i a formelor parentale.

20

Capitolul 2. CARACTERISTICA MATERIALULUI I METODELE DE

CERCETARE
Investigaiile efectuate n scopul determinrii gradului de corelare a unor indici
fiziologici i moleculari pentru utilizarea acestora n ameliorarea castraveilor i
pronosticarea heterozisului, au fost realizate pe parcursul anilor 2003-2007 n cadrul
laboratorului Securitate Biologic din Centrul de Cercetare tiine ale vieii, catedra
Biologie Vegetal, Universitatea de Stat din Moldova.

2.1. Caracteristica materialul utilizat n cercetare

n calitate de material de cercetare au servit apte hibrizi de castravei (Cucumis sativus
L.) i formele parentale ale acestora. Material experimental a fost oferit de Institutul de
Legumicultur i Irigaie din Tiraspol (tab.2.1).
Tabelul 2.1
Structura genotipic a hibrizilor de castravei utilizai n cercetare
Hibrizi cu productivitate
nalt

Forma
parental

Varianta martor

Hibrizi cu productivitate joas

H 273

H 275

H 274

Vzglead

Epilog

H6

H7

L 222

L 226

L 203

L 371

L 371

L 222

L 222

L 203

L 203

L 216

Beregovoi

Favorit

Beregovoi

Favorit

Linia L203 reprezint o form parental a celor trei hibrizi nalt heterozigoi mpreun
cu linia L216 i L222, ultima fiind i form matern pentru hibrizii H6 i H7 mpreun cu
soiurile Beregovoi i Favorit, care reprezint forma patern a hibrizilor omologai. Aceste
linii formeaz o schem dialel incomplet.

2.2. Metode de cercetare

Pentru atingerea scopurilor i obiectivelor propuse n lucrarea dat s-au studiat diferii
parametri fiziologici (biomasa verde i

uscat; suprafaa foliar; volumul sistemului

radicular) i biochimici (activitatea catalazei, aspectul cantitativ i calitativ al proteinelor

21

totale i acizilor nucleici).

n investigaiile fiziologice a fost cercetat materialul biologic pn la faza de 3 frunze
adevrate, iar analizele biochimice i moleculare s-au efectuat pe plantele etiolate de cinci
zile. Experienele s-au realizat n trei repetiii biologice.

2.2.1. Metode de determinare a unor indici fiziologici

Indicii morfo-fiziologici s-au determinat n conformitate cu metodele standard [17].
Materialul experimental a fost crescut n vase de vegetaie de 0,5 kg pe ciornoziom tipic.
Pentru asigurarea alimentaiei optime a plantelor la 10 kg sol s-a introdus 7,3 g KCl; 2,1 g
NH4NO3 i 21,4 g superfosfat. Umiditatea solului a fost meninut la nivelul de 80 %.
Determinarea biomasei verzi i uscate s-a efectuat prin cntrirea materialului vegetal
proaspt i uscat la temperatura de 100 - 105C pn la o greutate constant.
Determinarea activitii catalazei a fost realizat prin metoda gazometric [17].

2.2.2. Determinarea cantitii de proteine prin metoda Bradford

Proteinele au fost precipitate din 0,1 ml de extract cu 0,05 ml de acid tricloracetic de
15% (n trei repetiii) la rece i separate prin centrifugare timp de 10 min. la 8000
rotaii/min. Precipitatul purificat cu ATA de 5% a fost dizolvat n 0,5 ml NaOH (0,3N).
Excesul de baz a fost neutralizat cu 0,5 ml de HCl (0,3N). Amestecul de 0,06 ml soluie
proteic, 0,24 ml NaOH (0,15N) i 3 ml reactiv Cumassi dup 20 min de reacie a fost
colorimetrat la = 595nm. Concentraia proteinei din soluie s-a determinat dup curba
etalon a albuminei serice bovine [7, 55].

2.2.3. Electroforeza proteinelor

Extracia

proteinelor

solubile

totale

destinate

studiului

prin

intermediul

electroforezei unidimensionale s-a realizat n soluie tampon de extracie apoas, Tris-HCl

pH=6,8 (n raport de 1g prob:5 ml). Supernatantul a fost supus unor operaii de precipitare
cu acid tricloracetic (ATA) i splri repetate cu soluie de 5% rcit, alcool etilic, aceton i
22

eter, fiecare dintre aceste operaii fiind urmat de o centrifugare de 10 minute pe o

centrifug tip MPW-310 (Polonia) la o turaie de 10000 rotaii/min. Precipitatul obinut a
fost uscat n curent de aer i dizolvat (n raport de 10:1) n soluie tampon Tris-HCl
(pH=6,8) coninnd SDS 4,24%, zaharoz (cca 20%), -mercaptoetanol de 6% (v/v),
albastru de bromfenol 0,004%.
Pentru electroforeza proteinelor totale s-a utilizat metoda electroforezei n condiii de
disociere, n prezena SDS. Concentraia gelului de separare a proteinelor a fost de 12,5%.
Pentru o prob (godeu) au fost utilizate 15-20 l soluie proteic [54]. Separarea
electroforetic s-a realizat la 30 mA, 180 V utilizndu-se aparatul de electroforez model
Himifil AVG-2 (Estonia). Dup electroforez gelul a fost supus operaiilor de fixare,
colorare i fotografiere.

Pentru determinarea masei moleculare relative a fraciilor

polipeptidice separate s-a efectuat electroforeza a dou tipuri de probe cu martori n condiii
identice cu cele ale probelor luate n studiu, avnd mase moleculare cunoscute: Protein
Laders, Fermentas, Germania (14 martori proteici cu masele moleculare cuprinse n
limitele 10 200 kDa) i SDS Molecular Weight Markers, Sigma (lizocima - 14,3 kDa, lactoglobulina 18,4 kDa, tripsinogen 24,0 kDa, pepsina 34,7 kDa, ovalbumina 45,0,
albumina seric bovin 66,0 kDa). Pe baza electroforegramei obinute n fiecare caz am
realizat o curb de calibrare n coordonate Rf/ln Mr cu ajutorul creia s-au determinat
logaritmii maselor moleculare relative ale fraciilor n funcie de indicele mobilitii
electroforetice.

2.2.4. Determinarea cantitativ a acizilor nucleici prin metoda

spectrofotometric
Acizii nucleici au fost extrai din materialul biologic cu acid percloric, deoarece
constituie un bun precipitant al acizilor nucleici i al majoritii proteinelor i poate fi uor
eliminat din extract n form de sare de potasiu, fiind insolubil, urmat de hidroliza
polinucleotidelor. Toate operaiile se efectueaz la temperatura de 0-40C.
Materialul de cercetat (0,5 g mas vegetativ) omogenizat a fost transferat cantitativ cu
5 ml soluie HClO4 0,2N ntr-o eprubet de centrifugare i centrifugat timp de 10 min. (8000

23

rpm). Precipitatul se purific cu HClO4 0,2 N, de dou ori cu amestec de alcool i aceton
(1:1) i cu eter, fiecare operaie urmat de centrifugare. Precipitatul se usuc ntr-un exicator
sub vid [17]. Precipitatul este hidrolizat n KOH 0,5 N (10 ml la 100 mg mas rmas n
precipitat) la 37C timp de o or. Dup hidroliz, suspensia se rcete i se centrifugheaz
10 min la 8 000 rpm. Supernatantul se colecteaz, iar sedimentul se mai spal de dou ori cu
5-10 ml KOH 0,5 N, centrifugndu-se de fiecare dat timp de 10 min. la 8000 rpm.
n centrifugate se adaug HClO4 concentrat pn la concentraia final a acidului
percloric de 5% i se las la rece 20-30 min. Precipitatul format conine ADN, KClO4 i
unele impuriti, iar ARN-ul rmne n supernatant. Dup 30 min., probele se
centrifugheaz 15 min. la 8 000 rpm. Supernatantul se colecteaz ntr-un balon de 50 ml, iar
precipitatul se mai spal de dou ori cu cte 10 ml HClO4 5%, colectnd supernatantele n
acelai balon. Balonul se unete cu un refrigerent, se pune la baia de ap (+ 70C) pentru 15
min., se rcete, se filtreaz prin filtrul de sticl nr. 4, se msoar volumul total al
supernatantului i se folosete pentru determinarea ARN-ului spectrofotometric la =270
nm i =290 nm. Ca martor servete soluia HClO4 5%.
Precipitatul care conine ADN se suspend n 10-15 ml soluie HClO4 5%, se introduce
ntr-un balon cu refrigerent i se hidrolizeaz la baia de ap (+ 90C) timp de 30 min., dup
rcire se centrifugheaz. Supernatantul se colecteaz ntr-o eprubet gradat, iar precipitatul
se supune nc o dat operaiilor descrise anterior. Supernatantele se unesc, se completeaz
pn la un anumit volum, apoi se msoar densitatea optic la =270 i =290 nm.
Concentraia fosforului nucleic (C) se calculeaz dup formula:
C AN

( E 270 E 290 ) 10,3

,
190

CAN concentraia acizilor nucleici (mg/ml); E densitatea optic a hidrolizatului.

Pentru a transforma concentraia fosforului nucleic n concentraia acizilor nucleici, se
folosete coeficientul de corecie care este egal cu 10,1 pentru ADN; 10,5 pentru ARN i
10,3 pentru suma AN.
( E 270 E 290 ) 10,5 V
(mg / g ) ;
190 masa ( g )
( E E 290 ) 10,1 V
(mg / g ) .
270
190 masa ( g )

C ARN
C ADN

V volumul total al hidrolizatului (ml)

24

2.2.5. Analiza RAPD-PCR

ADN-ul utilizat n calitate de matri n analiza RAPD-PCR, a fost izolat cu reagentul - kit
DNAzol (Gibco BRL) conform protocolului propus de productor i prin metoda standard cu
utilizarea CTAB-lui. Coninutul a fost cuantificat prin electroforez i msurare spectrofotometric,
utiliznd spectrofotometrul NCT 60 (Anglia) [58]. Raportul 260/280 a fost n limita valorilor 1,6

-1,9 iar coninutul ADN n proba a variat de la 238-455 ng/l.

Reacia PCR a avut loc n 25l mediu de reacie: 50 ng ADN, amestec de nucleotide
dNTP, 200M de fiecare tip, 1 M de primer (decameri, MWG-Biotech AG, Germania),
1,25 uniti/pe reacie GoTaq Flexi ADN-polimeraza n soluia tampon corespunztoare cu
pH 8,5 i MgCl2 2,5 mM. Amplificarea a fost efectuat, utiliznd amplificatorul Corbett,
Palm Cycler gradient block (Australia) cu urmtorul program de amplificare: denaturarea la
95C - 3 min urmat de 45 cicluri: 95C 1 min., 36C 1 min., 72C 2 min. i elongarea
final 72C 5 min.
Ampliconii au fost analizai prin electroforeza n gel de agaroz de 1,6% n prezena
bromurii de etidiu 0,5 g/ml n soluie tampon de migrare 1x TAE la intensitatea de 93 V n
camera de electroforez Biocom (Rusia). Pentru determinarea maselor moleculare relative
ale produselor de amplificare au fost utilizate probe cu martori - 100 bp DNA Ladder
(Promega).
Ampliconii obinui au fost notai conform denumirii primerului asociat cu
dimensiunea ampliconului, de exemplu: P36800 amplicon cu dimensiunea de 800 pb
obinut n rezultatul PCR cu primerul P36.

2.2.6. Determinarea CCG i CCS

Capacitatea combinativ general i cea specific a fost calculat dup metode
standard [92, 93].
Capacitatea combinativ general (CCG) a ambelor forme a fost calculat dup
formulele (1) i (2):
(1)

F1

CCG = X

F1 -

X , unde:

media general a valorilor medii a parametrului observat la hibrizii rezultai

de la ncruciarea formei materne cu formele paterne;

X - media general a parametrului la toi hibrizii.

25

(2)

M1

CCG = X

M1 -

X , unde:

media general a valorilor medii a parametrului observat la hibrizii rezultai

de la ncruciarea formei paterne cu formele materne;

X - media general a parametrului la toi hibrizii.

Capacitatea combinativ specific (CCS) a fost calculat dup formula:
CCS11 = x - (CCGF1 + CCGM1 + X ), unde
x - valoarea medie a parametrului observat la hibrid;
CCGF1 - capacitatea combinativ general a formei materne;
CCGM1 - capacitatea combinativ general a formei paterne;

X - media general a parametrului la toi hibrizii.

2.2.7. Prelucrarea statistic a datelor

Prelucrarea statistico-matematic a datelor experimentale (rezultate din trei repetiii)
s-a efectuat prin metoda standard [111]. S-au calculat urmtorii parametri statistici:

media aritmetic; abaterea medie ptratic; V variaia (%); m x eroarea experienei;

Smx% eroarea total.

26

REZULTATE I DISCUII
Capitolul 3. VARIABILITATEA MORFOFIZIOLOGIC I EFECTUL DE
HETEROZIS LA CASTRAVEI
Fenomenul de heterozis reprezint una din problemele principale ale geneticii i
seleciei contemporane. Succese remarcabile au fost obinute referitor la utilizarea n
practic a acestui fenomen biologic, totodat un ir de aspecte rmn a fi puin elucidate.
Din cele trei tipuri de heterozis (somatic, reproductiv i adaptiv), n lucrarea dat s-a
studiat primul tip de heterozis, cel somatic, care include intensificarea proceselor de cretere
a prilor vegetative ale hibrizilor. Esena fenomenului de heterozis poate fi elucidat n
rezultatul cunotinelor fundamentale nu doar a proceselor genetice, dar i a celor
morfogenetice. n acest context o importan deosebit i revine analizelor structurale
genetice i particularitilor morfogenetice implicate n manifestarea fenomenului de
heterozis. nsemntatea acestui fenomen const n faptul, c particularitile menionate
reprezint aspecte primordiale n studiul genofondului speciei.

3.1. Limitele de variaie ale parametrilor morfofiziologici

Acumularea biomasei verzi i uscate la castravei. Pentru a determina cota
heterozisului somatic, adic creterea intensiv a prilor vegetative se folosete
prognosticarea lui prin metoda de determinare a biomasei verzi i uscate, acesta fiind un
important parametru care determin sporirea productivitii plantelor.
Rezultatele cercetrilor efectuate au confirmat ideea c intensitatea manifestrii
heterozisului este diferit de la o combinaie la alta. Din datele prezentate n tabelul 3.1. se
observ c n cadrul liniilor homozigote, genotipurile paterne att ale hibrizilor cu cea mai
nalt productivitate, ct i al celor cu productivitate joas au valori maxime ale coninutului
de biomas verde.

27

Tabelul 3.1.
Acumularea biomasei verde i uscate la plantele Cucumis sativus L.
Nr.

Indexului

Biomasa

Biomasa

genotipului

verde (g)

uscat (g)

22,52 1,5

3,57 0,2

0,158

L 226

17,40 1,6

1,92 0,1

0,110

L 203

18,12 1,3

2,52 0,1

0,139

26,66 1,2

4,35 0,3

0,163

L 203

18,12 1,2

2,52 0,2

0,139

L 216

18,30 1,0

2,5 0,2

0,136

18,96 1,4

4,24 0,4

0,224

L 222

9,38 1.2

1,40 0,1

0,149

L 203

18,12 1,3

2,52 0,2

0,139

Vzglead
L 371

19,30 1,3
18,66 1,2

2,75 0,1
1,82 0,2

0,142
0,091

Beregovoi

14,94 1,2

1,22 0,1

0,082

22,38 1,5

4,26 0,4

0,190

L 371

18,66 1,5

1,82 0,1

0,098

Favorit

14,24 1,1

1,52 0,1

0,108

H6

15,02 1,3

1,60 0,1

0,107

L 222

9,38 1,2

1,40 0,1

0,149

Beregovoi

14,94 0,8

1,52 0,1

0,102

H7

14,98 1,1

1,40 0,1

0,093

L 222

9,38 0,7

0,82 0,1

0,087

Favorit

14,24 1,5

1,22 0,1

0,086

H 275
1

H 274
2

H 273
3

Epilog
5

Raportul biomasa
verde/uscat

Genotipul matern al hibrizilor omologai se caracterizeaz prin valori maxime ale

coninutului de biomas verde, i respectiv uscat. Dintre toate liniile homozigote materne,
indicele maxim al biomasei verzi a fost nregistrat la genotipul L 237, care reprezint forma
matern comun pentru cele dou combinaii, ce includ hibrizii omologai. Valoarea minim
a parametrului cercetat a fost nregistrat la linia matern L 222.
Ambii hibrizi

cu productivitate joas au forme parentale care se deosebesc

28

semnificativ ntre ele, diferena depind 37%. Acest lucru nu s-a nregistrat la ceilali cinci
hibrizi cercetai, la care formele parentale, prezint valori mai mult, sau mai puin apropiate
(fig. 3.1.).
Studiul comparativ al coninutului de biomas verde i cea uscat la cei apte hibrizi, a
demonstrat c hibridul H 274 se caracterizeaz prin valori maxime att ale biomasei verzi
(26,66 g), ct i a celei uscate (4,35 g). Dup cum era i de ateptat, hibrizii cu capacitate
combinativ joas (H 6 i H 7) se caracterizeaz prin valorile cele mai mici ale celor doi
parametri studiai. ntruct formele parentale ale hibridului H 273 au n mediu valori mai
reduse i hibridul H 273 a nregistrat valori semnificativ mai mici (18,96 g) fa de ceilali
hibrizi (H 275, H 274, Vzglead i Epilog). Totui, hibridul H 273 prezint valori
semnificative mai mari, dac este comparat cu hibrizii cu productivitate joas (H 6 i H 7).
35

Hibridul

Forma materna

Forma paterna

30
25
20
15
10
5
0

Figura
3.1.1. Acumularea
la plantele
de Cucumis
sativus
1
2
3 biomasei verzi
4
5
6
7 L.

Figura 3.1. Acumularea biomasei verzi (g) la plantele de Cucumis sativus L.

[1 7] Hibrizii i liniile parentale sunt prezentate n tabel.
Toi cei apte hibrizi de Cucumis sativus L. supui cercetrilor au demonstrat heterozis
pozitiv, indicii parametrilor studiai avnd valori maxime, comparativ cu formele lor
parentale. La 60% din formele parentale i hibrizii studiai, hibridul posed valori ale
biomasei verzi i uscate mai apropiate de forma patern, dect cea matern. La celelalte
40% (hibrizii Vzglead, Epilog i formele lor parentale), valorile hibrizilor referitor la cei doi

29

indici morfologici sunt mai apropiai de formele lor materne i nu de cele paterne. Aceast
legitate a fost observat doar la genotipurile, care formeaz hibrizii omologai.
nlimea plantulelor. Rezultatele obinute n cadrul cercetrilor referitor la nlimea
plantulelor liniilor homozigote (tab. 3.2) au demonstrat c genotipurile paterne au valori
maxime ale parametrului dat. Excepie face doar genotipul patern L 216, care a nregistrat
valori medii a nlimii plantulelor semnificativ mai mici fa de genotipul matern al L 203.
Valoarea maxim depistat (19,47 cm) i revine genotipului patern Favorit, care reprezint
forma parental patern pentru doi hibrizi - hibridul H 7 i Epilog (fig. 3.2.).
Tabelul 3.2.
Variaia unor parametri morfofiziologici la plantele de Cucumis sativus L.
Nr.
1
2
3

Indexul
genotipului
H 275
L 226
L 203
H 274
L 203
L 216
H 273
L 222
L 203

18,83 1,5
14,51,3
17,131,6
17,351,5
17,131,5
16,7 1,1
14,731,2
11,431,1
17,131,2

Volumul sistemului
radicular (cm3)
2,50,2
1,50,1
2,00,2
3,50,2
2,00,2
2,60,2
3,00,1
1,50,1
2,00,1

Vzglead
L 371
Beregovoi
Epilog
L 371
Favorit

18,351,5
15,731,2
16,781,4
16,971,3
15,731,1
19,471,2

2,51,2
2,01,2
2,51,2
2,31,2
2,01,2
1,51,2

H6
L 222
Beregovoi
H7
L 222
Favorit

19,21,7
11,431,1
16,781,2
16,791,2
11,431,1
19,471,0

2,00,2
1,50,1
2,50,2
2.00,1
1,50,1
1,50,1

nlimea plantulelor (cm)

Valori minime ale nlimii plantulelor (11,43 cm) revin genotipului matern L 222,
care reprezint forma parental matern pentru trei hibrizi H 6 i H 7 cu productivitate
joas i H 273 cu productivitate nalt (fig. 3.2.). Comparnd valorile indicelui menionat

30

ntre formele homozigote parentale s-a constat c acestea sunt cele mai apropiate la forma
matern L 203 (17,13 cm) i cea patern L 216 (16,7 cm), care genereaz hibridul cu
productivitate nalt H 274. Cele mai semnificative diferene au fost depistate la formele
parentale care formeaz hibrizi cu productivitate joas.
Studiul comparativ al nlimii plantulelor la cei apte hibrizi, nu a scos n eviden o
legitate, care ar asocia valorile parametrului dat cu productivitatea hibrizilor. De asemenea
nu a fost depistat o legitate bine determinat referitor la manifestarea heterozisului la nivel
de nlimea plantulelor. Totui, patru din cei apte hibrizi posed valori mai mari ale
acestui indice comparativ cu formele

parentale. Acetia sunt hibrizii H 275, H 274,

Vzglead i H 6. n majoritatea cazurilor, hibrizii posed valori mai apropiate cu cele ale
genotipului patern, excepie face H 274 i Epilog.
25
cm

Hibridul

Forma materna

Forma paterna

20

15

10

0
1

Figura 3.2. Variaia nlimii plantulelor (cm) de Cucumis sativus L.

[1 7] hibridul i formele parentale menionate n tabel.
nlimea medie a plantulelor (16,1 cm) la cele trei familii cu productivitate nalt i la
genotipurile care alctuiesc hibrizii omologai (17,17 cm) este mai mare comparativ cu
media parametrului dat (15,54) calculat la hibrizii cu productivitate joas (tab. 3.2).
Volumul sistemului radicular. Unul din factorii principali, care influeneaz
productivitatea sunt condiiile de alimentare a plantelor cu ap i elemente minerale, care n
mare msur depinde de volumul sistemului radicular. Condiiile de alimentare radicular

31

reprezint factorul, care influeneaz fotosinteza, intensitatea proceselor de cretere i,

respectiv, randamentul folosirii asimilatelor de ctre plante, care se reflect n final asupra
recoltei plantelor de castravei.
Sistemul radicular ndeplinete nu numai funciile de asimilare a apei i substanelor
minerale. A. L. Kursanov i colab. au demonstrat c sistemul radicular particip activ n
producerea aminoacizilor, utilizai n biosinteza proteinelor n diferite alte organe ale plantei
[132, 134]. n rdcini au loc transformri ale compuilor minerali ai fosforului, care sunt
utilizai n sinteza nucleoproteidelor i lipidelor, care cu circuitele aferente sunt transmise n
diferite organe. Unii autori au stabilit c n sistemul radicular se sintetizeaz alcaloizii i ali
compui. Activitatea sistemului radicular este reflectat n mare msur de creterea n
lungime i ramificarea lui, adic de volumul lui.
Determinarea volumului sistemului radicular la genotipurile de castravei, a demonstrat
c n cadrul liniilor homozigote n cinci cazuri, forma patern a nregistrat valori
semnificativ mai mari, comparativ cu cea matern. Liniile homozigote, care genereaz
hibridul Epilog posed o legitate invers, i anume linia patern are valori semnificativ mai
mici, comparativ cu cea matern. O alt excepie este caracteristic liniilor parentale ale
hibridului H 7, care se caracterizeaz prin aceleai valori ale sistemului radicular (fig. 3.3.).
4,5
4

cm

Hibridul

Forma materna

Forma paterna

3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
1

Figura 3.3. Variaia valorilor volumului sistemului radicular (cm3) la plantulele de

Cucumis sativus L.
[1 7] hibridul i formele parentale menionate n tabel.
Comparnd liniile homozigote ntre ele, se observ c valoarea maxim (2,6 cm3) a
parametrului studiat este caracteristic formei paterne L 216, iar cea minim (1,5 cm3)

32

liniilor materne L 226 i L 222 i a celei paterne Favorit, care este comun pentru hibrizii cu
productivitate sczut (tab. 3.2.).
Studiul comparativ al volumului sistemului radicular la cei apte hibrizi a scos n
eviden legitatea conform creia valorile maxime sunt caracteristice hibrizilor cu
productivitate nalt, dup care urmeaz hibrizii omologai. Cei doi hibrizii cu productivitate
joas au nregistrat valori semnificativ mai mici. Valorile caracteristice hibrizilor H 273, H
274 i H 275 precum i hibridului omologat Vzglead sunt mai apropiate de valorile ce le
posed formele paterne dect a celor materne. Un alt tablou a fost observat la ceilali trei
hibrizi. Astfel, hibridul omologat Epilog are valoarea volumului sistemului radicular mai
apropiat de cea a formei materne. Hibridul H 6 a nregistrat o valoare intermediar ntre
cele dou forme parentale, iar hibridul H 7 posed aceeai diferen comparativ cu formele
parentale, ntruct acestea au aceleai valori.
Calculnd media sistemului radicular pentru fiecare hibrid i pentru fiecare categorie
de hibrizi, se poate constata c genotipurile care formeaz hibrizi cu productivitate nalt
posed valori maxime (2,29 cm3), dup care urmeaz cele care formeaz hibrizii omologai,
care de asemenea posed capacitate combinativ nalt (2,12 cm3), iar acestea la rndul lor
sunt urmate de hibrizii cu productivitate joas (1,83 cm3).
Modificarea activitii catalazei la plantele de Cucumis sativus L. Catalaza este o
enzim prezent n toate organismele aerobe, avnd funcia primordial de a descompune
peroxidul de hidrogen. Reacia decurge conform ecuaiei:
2H2O2 2H2O+O2
Este important de remarcat, c catalazele de diferit origine au proprieti fizicochimice similare. Toate sunt hemoproteide i conin ca grupare prostetic hemina (fierprotoporfirina IX). Coninutul n fier este de 0,09%, iar o molecul de catalaz conine patru
grupri prostetice i are masa molecular de cca. 240 kDa.
Pn nu demult, catalazelor li se atribuia doar funcia de descompunere a peroxidului
de hidrogen, ns cercetrile mai recente au demonstrat c aceste enzime pot s
ndeplineasc i funcia peroxidazelor, n deosebi atunci cnd concentraia apei oxigenate n
mediul de reacie este mic.
Oxido-reductazele descompun peroxidul de hidrogen cu eliberarea oxigenului atomar
activ, mecanismul de aciune a crui nc nu este elucidat pe deplin. Se consider c prin
33

formarea compuilor compleci intermediari, cu trei radicali liberi peroxidazele asigur

oxidarea unor compui biologici ca: acizi dicarbonici, acidul indolilacetic, glutation etc.
Peroxidazeze sunt enzimele de baz implicate n degradarea AIA, reglnd nivelul de auxine
n esuturi.
Din datele prezentate n tabelul 3.3. se observ c n cadrul liniilor homozigote nu
exist o legitate strict.
Tabelul 3.3.
Determinarea activitii catalazei la Cucumis sativus L.
(ml2/1min)
Nr.
1
2
3

Indexul
genotipului
H 275
L 226
L 203
H 274
L 203
L 216
H 273
L 222
L 203

V%

S%

19,70,97
18,60,76
18,40,86
22,10,24
18,40,86
19,40,86
18,70,27
19,00,75
19,40,86

1,68
1,32
1,51
0,42
0,14
1,51
0,47
1,3
1,51

8,54
7,10
7,76
2,08
7,4
7,76
2,54
6,84
7,76

4,93
4,10
4,48
1,2
4,3
4,48
2,46
3,95
4,48

Vzglead
L 371
Beregovoi
Epilog
L 371
Favorit

20,60,18
20,10,24
19,40,86
21,30,09
20,10,24
18,70,71

0,32
0,42
1,51
0,14
1,25
1,22

1,57
2,08
7,76
7,4
6,44
6,54

2,91
1,2
4,48
4,3
3,72
3,77

H6
L 222
Beregovoi
H7
L 222
Favorit

18,10,71
19,00,75
19,40,86
18,30,09
19,00,75
18,70,71

1,22
1,3
1,25
0,14
1,3
1,22

6,08
6,84
7,54
7,4
6,84
6,54

3,51
3,95
4,35
4,3
3,95
3,77

Astfel, la patru din cele apte genotipuri valori mai mari ale activitii catalazei sunt
caracteristice liniilor materne, iar trei genotipuri paterne posed activitate enzimatic mai
mare comparativ cu cele materne. Dintre toate liniile homozigote, indicele maxim al
activitii enzimatice (20,1 ml O2/1 min.) a fost nregistrat la genotipul matern L 371, care
reprezint forma matern comun pentru hibrizii omologai. Valoarea minim a

34

parametrului cercetat (18,4 ml O2/1 min.) a fost nregistrat la linia matern L 203, comun
pentru dou grupuri de genotipuri cu productivitate nalt (fig. 3.4.).
30
ml O2/1min

Hibridul

Forma materna

Forma paterna

25
20
15
10
5
0

Figura
3.4. Activitatea
catalazei
(ml O4 2/1 min.) la5 plantulele 6de castravei
1
2
3
7
[1 7] hibridul i formele parentale menionate n tabel.
Analiza comparativ a activitii catalazei la gama selectat de hibrizi, a demonstrat

valoare maxim (22,1 ml O2/1 min.) la hibridul H 274 i minim (18,1 ml O2/1 min.) la
hibridul H 6. Ambii hibrizi cu productivitate sczut au activitate enzimatic mai redus
comparativ cu hibrizii nalt productivi i cei doi hibrizi omologai.

3.2. Limitele de variaie ale coninutului de proteine i acizi nucleici

Analiza cantitativ a proteinelor totale la Cucumis sativus L. Markerii moleculari
se caracterizeaz printr-o serie de proprieti care i recomand ca instrumente deosebit de
utile n studiul variabilitii genetice a speciilor, cartarea genomului, studii filogenetice i
taxonomice. Printre aceste proprieti se numr: polimorfismul nalt, motenirea
codominant (care permite discriminarea strilor de homo- i heterozigoie la organismele
diploide), frecvena mare la nivelul organismului vegetal, reproductibilitatea mare a
rezultatelor.
Determinarea coninutului de proteine totale la cele genotipurile analizate de castravei
a stabilit un interval cuprins ntre 119,17 i 210,83 mg/g biomas uscat (tab. 3.4.).

35

Tabelul 3.4.
Coninutul proteinelor totale la Cucumis sativus L.
(mg/g biomas uscat)
Nr.
1
2
3

Coninutul de proteine
m
137,52,01
210,833,02
174,172,84
256,673,21
192,502,92
174,172,84
192,502,92
128,331,97
174,172,84

0,60
11,30
2,30
10,00
4,50
2,30
4,00
13,30
2,30

Vzglead
L 371
Beregovoi
Epilog
L 371
Favorit

155,832,59
119,171,80
165,002,71
229,173,10
119,171,80
146,672,56

1,50
18,00
11,70
1,00
18,00
10,10

H6
L 222
Beregovoi
H7
L 222
Favorit

155,832,59
128,331,97
165,002,71
137,502,01
119,171,80
146,672,56

11,70
13,30
11,70
1,00
13,30
10,10

Indexul
genotipului
H 275
L 226
L 203
H 274
L 203
L 216
H 273
L 222
L 203

V%

Valoarea maxim a acestui parametru este caracteristic genotipului matern L 226, iar
cea minim genotipului L 371, care este forma matern a celor doi hibrizi omologai:
Vzglead i Epilog. Dac la primii doi hibrizi cu productivitate nalt , formele materne au
coninut proteic mai mare comparativ cu formele paterne, atunci toate celelalte genotipuri au
nregistrat un tablou invers, i anume toate formele paterne se caracterizeaz prin coninut
mai sporit de proteine totale comparativ cu genotipurile materne (tab. 3.4.). Diferenele cele
mai semnificative dintre formele parentale s-au pus n eviden la genotipurile care
genereaz hibridul H 273 i Vzglead.
Comparnd cele cinci genotipuri materne, coninutul maxim de proteine (210,83 mg/g)
a fost depistat la L 226, iar minim (119,17 mg/g biomas uscat) la dou genotipuri i
anume L 371 i L 222. Acelai studio a demonstrate c dintre cele patru genotipuri
paterne, coninutul maxim de proteine (174,17 mg/g biomas uscat) a fost determinat la

36

genotipurile L 203 i L 216, iar minim (146,67 mg/g biomas uscat) la genotipul
Favorit, care este comun pentru doi hibrizi).
Dintre cei apte hibrizi, coninutul cel mai mare al proteinelor totale (256,67 mg/g
mas uscat) a fost depistat la hibridul H 274, iar cel mai mic (137,5 mg/g biomas uscat)
la hibrizii H 275 i H 7. La ase din cele apte grupuri de genotipuri, hibridul posed
valori ale parametrului biochimic studiat mai apropiate de forma patern, comparativ cu cel
al formei materne. Excepie face hibridul H 274. Diferenele cele mai semnificative dintre
hibrid i genotipurile parentale au fost atestate la genotipurile care formeaz hibridul H 274
i Epilog. Coninutul proteic total este mai mare la genotipurile care formeaz hibrizi cu
productivitate nalt, dup care urmeaz genotipurile hibrizilor omologai, iar ultimele sunt
genotipurile care formeaz hibrizi cu productivitate joas.
Coninutul acizilor nucleici. Cantitatea de material genetic (ADN) i structura
acestuia la organismele vii variaz n limite mari. n general la organismele evoluate
cantitatea de ADN i, respectiv, de informaie genetic este mult mai mare comparativ cu
organismele mai simple.
Rezultatele cercetrilor noastre au relevat un coninut al ADN-ului n cadrul liniilor
homozigote cuprins n limitele 0,02 0,07 mg/g biomas proaspt, cu valoarea maxim
caracteristic formei paterne L 216, iar cea minim genotipului patern Beregovoi (tab.
3.5.). Comparnd hibrizii ntre ei, se observ c H 275 a nregistrat cel mai nalt coninut de
ADN (0,1 mg/g biomas proaspt), iar hibridul H 273 cel mai sczut coninut (0,06 mg/g
biomas proaspt). ns n comparaie cu genotipurile parentale, toi cei apte hibrizi
posed cantiti semnificativ mai mari ale ADN-ului (fig. 3.5.).
Determinarea coninutului de ARN n genotipurile homozigote de castravei la faza de
trei frunze adevrate a demonstrat c valoarea maxim (0,84 mg/g biomas proaspt) este
caracteristic genotipului L 216, iar cea minim (0,72 mg/g biomas proaspt)
genotipurilor L 203 (forma patern comun pentru doi hibrizi) i L 203 (tab. 3.5.).
Estimarea aceluiai parametru biochimic la hibrizi, a permis s stabilim c H 273
posed coninutul cel mai nalt de ARN (1,01 mg/g biomas proaspt), urmat foarte
aproape de hibridul H 274 (1,002 mg/g biomas proaspt). Ceilali doi hibrizi (H 275 i
Vzglead) au un coninut de ARN semnificativ mai redus, dar valori foarte apropiate (0,87
mg/g biomas proaspt i 0,86 mg/g biomas proaspt, respectiv). Hibridul omologat

37

Vzglead reprezint hibridul cu valorile coninutului de ARN cele mai apropiate de

genotipurile parentale. Ceilali trei hibrizi se deosebesc semnificativ fa de formele
parentale. Legitile stabilite pentru fiecare tip de acid nucleic n parte se respect i pentru
coninutul total de acizi nucleici (tab. 3.5.).
Tabelul 3.5.
Coninutul acizilor nucleici la Cucumis sativus L.
Nr.

Indexul

ADN (mg/g m.p.)

ARN (mg/g m.p.)

genotipului

H 275

0,10,008

L 226
L 203

S%

0,870,02

0,970,08

2,5

0,030,007

0,830,01

0,8580,07

3,3

0,050,001

0,720,08

0,780,07

2,8

0,080,001

1,0020,02

1,0820,09

3,5

L 203

0,050,001

0,720,08

0,9150,08

3,8

L 216

0,070,002

0,840,12

0,910,07

4,2

0,060,002

1,010,03

1,070,09

3,7

L 222

0,050,001

0,790,02

0,850,08

3,6

L 203

0,050,001

0,720,08

0,6450,006

2,9

0,070,002

0,860,02

0,9250,09

4,4

L 371

0,050,001

0,800,06

0,850,08

4,7

Beregovoi

0,020,001

0,820,07

0,8450,07

4,9

Epilog

0,06 0,001

0,92 0,03

0,980,09

3,2

L 371

0,05 0,001

0,80 0,06

0,850,08

4,2

Favorit

0,04 0,001

0,59 0,01

0,630,07

2,9

H6

0,06 0,002

0,86 0,01

0,920,08

3,8

L 222

0,05 0,001

0,79 0,02

0,840,08

4,1

Beregovoi

0,02 0,001

0,82 0,07

0,8450,07

2,8

0,050,001

0,810,02

0,860,06

3,1

L 222

0,050,001

0,790,02

0,840,08

4,0

Favorit

0,040,001

0,590,01

0,630,07

2,9

H 274
2

H 273
3

Vzglead
4

H7
7

ADN + ARN (mg/g m.p.)

m.p. - biomas proaspt.

38

0,12
mg/g

Hibridul

Forma materna

Forma paterna

0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0
1

Figura 3.5. Coninutul de ADN (mg/g biomas proaspt) n plantule

[1 7] hibridul i formele parentale menionate n tabel.
Din rezultatele obinute la acest capitol putem meniona c n cazul majoritii
parametrilor morfofiziologici analizai, primele trei combinaii i hibrizii lor posed valori
mai mari comparativ cu formele martori i hibrizii cu productivitate joas. Astfel, studiul
comparativ al coninutului de biomas verde i cea uscat la cei apte hibrizi, a demonstrat
c hibridul cu productivitate nalt H 274 se caracterizeaz prin valori maxime att ale
biomasei verzi (26,66 g), ct i a celei uscate (4,35 g). Dup cum era i de ateptat, hibrizii
cu productivitate joas (H 6 i H 7) se caracterizeaz prin valorile cele mai mici ale celor doi
parametri studiai. nlimea medie a plantulelor (16,1 cm) cei trei hibrizi cu productivitate
nalt i a celor doi hibrizi omologai (17,17 cm) s-a dovedit a fi mai mare comparativ cu
media parametrului dat (15,54), calculat la cei doi hibrizi cu productivitate joas. Studiul
comparativ al volumului sistemului radicular a scos n eviden legitatea conform creia
valorile maxime sunt caracteristice hibrizilor cu productivitate nalt, dup care urmeaz
hibrizii omologai. Cei doi hibrizii generai din liniile cu capacitate combinativ joas au
nregistrat valori semnificativ mai mici, comparativ cu ceilali hibrizi.
Analiza comparativ a activitii catalazei la gama selectat de hibrizi, a demonstrat
valoare maxim (22,1 ml O2/1 min.) la hibridul H 274 i minim (18,1 ml O2/1 min.) la
hibridul H 6. Genotipurile care formeaz genotipuri cu productivitate joas au nregistrat
valori mai mici ale parametrului biochimic cercetat n comparaie cu ceilali hibrizi, care
posed productivitate nalt.

39

Dintre cei apte hibrizi supui cercetrilor, coninutul cel mai mare al proteinelor totale
(256,67 mg/g biomas uscat) a fost depistat la hibridul H 274, iar cel mai mic (137,5 mg/g
biomas uscat) la hibrizii H 275 i H 7. La ase din cele apte grupe de genotipuri,
hibridul posed valori ale parametrului studiat mai apropiate de forma patern, n raport cu
cel al formei materne. Dup coninutul proteic total pe primul loc se situeaz primele trei
combinaii hibride i formele lor parentale, dup care urmeaz hibrizii omologai, iar
ultimele sunt genotipurile, care genereaz productivitate joas. Astfel, studiul parametrilor
morfofiziologici a relatat superioritatea valorilor pentru primii trei hibrizi de castravei,
dup care urmeaz hibrizii omologai i hibrizii cu productivitate sczut.

3.3. Manifestarea heterozisului dup indicii morfofiziologici

Aspectele funcionale ale heterozisului la plante, n deosebi au fost studiate de ctre
biochimiti i fiziologi n raport cu fotosinteza, respiraia, activitatea diferitor enzime, ale
substanelor biologic active, metabolismul energetic, acumularea substanelor de rezerv i
altele. Totui actualmente, exist multe ntrebri privind heterozisul.
Manifestarea heterozisului dup coninutul de biomas verde i uscat.
Acumularea biomasei verzi sau uscate reprezint unul din particularitile morfologice de
baz ale productivitii plantelor. Analiza rezultatelor obinute n cadrul cercetrilor
efectuate a permis de a stabili la hibrizi valori ale coninutului de biomas verde cuprinse
ntre 14,98 26,66 g i a celei uscate 1,4 4,37 g (tab. 3.6.).
Valoarea maxim n ambele cazuri i revine hibridului H 274, care face parte din
hibrizii nalt productivi, iar cea minim hibridului H 7, care reprezint un hibrid cu
productivitate joas.
Comparnd valorile fiecrui hibrid cu media celor dou forme parentale din cadrul
fiecrei grupe de genotipuri s-a putut stabili c diferena cea mai mare a nregistrat-o
hibridul H 274, care astfel indic procentul maxim de heterozis dup indicele menionat.
Tabloul invers stabilit, adic diferena minim, dar pozitiv, dintre hibrid i media prinilor
este caracteristic hibridului H 6.

40

Tabelul 3.6.
Acumularea biomasei verzi i uscate la plantele de Cucumis sativus L.
Indexul
genotipului
H 275

Biomasa
verde (g)
22,52

Heterozisul
ipotetic
(dup media
prinilor)

21,14

Heterozisul real
(dup cel mai
performant printe)

Biomasa
uscat (g)

19,53

3,57

L 226

17,40

1,92

L 203

18,12

2,52

H 274

26,66

31,70

31,36

4,35

L 203

18,12

2,52

L 216

18,30

2,5

H 273

18,96

27,48

3,48

4,24

L 222

9,38

1,40

L 203

18,12

2,52

Vzglead

19,30

12.95

3.32

2,75

L 371

18,66

1,82

Beregovoi

14,94

1,22

Epilog

22,38

26.50

16.62

4,26

L 371

18,66

1,82

Favorit

14,24

1,52

H6

15,02

19.04

0.53

1,60

L 222

9,38

1,40

Beregovoi

14,94

1,52

H7

14,98

21.16

4.94

1,40

L 222

9,38

0,82

Favorit

14,24

1,22

Heterozisul
ipotetic
(dup media
prinilor)

Heterozisul real
(dup cel mai
performant printe)

37,82

29,41

42,30

42,07

53.77

40.57

44.73

33.82

60.80

57.28

8.75

5.00

27.14

12.85

Dintre formele parentale, la cinci din cele apte combinaii, mai productive s-au
dovedit a fi formele paterne, excepie fcnd genotipurile care formeaz hibrizii omologai
Vzglead i Epilog, la care formele materne posed valori mai mari comparativ cu genotipul
patern referitor la coninutul de biomas verde. Fcnd o analiz comparativ dintre valorile
hibrizilor i cel mai productiv genotip parental, atunci se observ c procentul de heterozis
este maxim de asemenea la hibridul H 274, iar minim la hibridul H 6, care are un coninut
foarte apropiat de mas verde (15,02 g) comparativ cu valoare acestui parametru la forma sa
patern (14,94 g).
Coninutul de biomas uscat a nregistrat la formele parentale valori cuprinse n limitele

41

0,82 g ( L 222) i 2,52 g (L 203, L 203), iar la hibrizi, valoarea maxim a fost nregistrat la
hibridul H 274, iar minim la hibridul H 7. Procentul cel mai nalt al heterozisului ipotetic
(60,80) a fost determinat la hibridul omologat Epilog, pe cnd procentul cel mai sczut de
heterozis (8,75) la hibridul cu productivitate joas H 6 (tab. 3.7.).
Dup cum era i de ateptat toi hibrizii au manifestat heterozis pozitiv pentru ambii
parametri studiai (biomas verde i uscat), iar primii trei hibrizi i cei omologai n comparaie
cu hibrizii cu productivitate sczut (H 6 i H 7) au reprezentat un procent de heterozis
semnificativ mai mare att dup media prinilor, ct i dup cel mai productiv printe (fig. 3.6.).

A
35

35

30

30

25

25

20
%

20
%

15

15

10

10

0
H 275
H 274
273

H
275 H
274 HH273
Vzglead
Epilog
H 6H 6 H 7 H 7

H 275 H 274 H 273 Vzglead Epilog H 6

H 274
273 Vzglead

H 6
H6
H 275 H
274 HH273
Epilog
H 7H7

H 275

H7

70

60

60

50

50
40

40
%

% 30

30
20
20
10

10

H 274
273 Vzglead

H 6
H6
H 275 H
274 HH273
Epilog
H 7H 7

H 275

H 275
273 Vzglead
Epilog
H 6H 6 H 7
H
275 HH 274
274 H H273

H7

Figura 3. 6. Heterozisul ipotetic (A) i real (B)

1 biomasa verde; 2 biomasa uscat;

Unul din parametrii morfofiziologici analizat a fost nlimea plantulelor de castravei

crescute pn la faza ontogenetic de 3-4 frunze adevrate. Analiza acestui parametru la
formele parentale, a demonstrat c cele mai nalte (19,47 cm) sunt caracteristice genotipului
patern Favorit, care este comun pentru doi hibrizi: unul omologat Epilog i altul cu
productivitate sczut hibridul H 7 (tab. 3.7.).
Cele mai mici dup nlime (11,43 cm ) s-au nregistrat plantulele formei materne

42

L 222, care este comun pentru trei hibrizi unul cu productivitate nalt (H 273) i cei doi
hibrizi cu productivitate joas (H 6 i H 7). Dintre hibrizi, plantulele H 6 au demonstrat
valori maxime (19,2 cm) ale parametrului dat, nectnd la faptul c acesta este un hibrid cu
productivitate sczut, iar valorile minime (14,73 cm) s-au nregistrat la hibridul H 273.
Tabelul 3.7.
Variaia unor parametri morfofiziologici la plantele de Cucumis sativus L
Indexul
Lungimea
genotipului
(cm)

% de
heterozis
ipotetic

% de heterozis
real

H 275
L 226
L 203
H 274
L 203
L 216
H 273
L 222
L 203

18,83
14,50
17,13
17,35
17,13
16,70
14,73
11,43
17,13

16,01

9,03

2,51

1,27

3,05

-16,29

Vzglead
L 371
Beregovoi
Epilog
L 371
Favorit

18,35
15,73
16,78
16,97
15,73
19,47

11,42

8,56

-3,71

-14,73

H6
L 222
Beregovoi
H7
L 222
Favorit

19,20
11,43
16,78
16,79
11,43
19,47

26,54

12,6

7,98

-15,96

Volumul
sistemului
radicular
(cm3)
2,5
1,5
2,0
3,5
2,0
2,6
3,0
1,5
2,0
2,5
2,0
2,5
2,3
2,0
1,5
2,0
1,5
2,5
2.0
1,5
1,5

% de heterozis
ipotetic

% de
heterozis
real

30,0

20.0

34,29

25,71

41,67

33,33

10,0

0,00

23,91

13,04

0,00

-25,00

25,00

25,00

Manifestarea pozitiv a heterozisului dup nlimea plantulelor s-a dovedit a fi

pozitiv la ase din cei apte hibrizi (excepie fcnd hibridul Epilog) n comparaie cu
media prinilor i la patru hibrizi (H 273, Epilog i H 7) n comparaie cu cel mai productiv
printe. Astfel, dup nlimea plantulelor nu s-a nregistrat o dependen strict de
manifestare a heterozisului (fig. 3.7.).

43

30

15

25

10

20

15
%

0
%

10

-5

-10

-15

-20

-5
274
H 273

HH 275
275 HH274
H 273
Vzglead
Epilog
H6

H6

H7

H
H275
275

H7

45

274 H 273
H 273 Vzglead
Epilog

HH 274
H6

HH
6

H7

H 275
274 H 273
H 273 Vzglead
Epilog

H
275 HH 274
H6

HH
6

H7

40

40

30

35
20

30

10

25
%

%
20

15
-10
10
-20

5
0

275
274 H 273
H 273

HH 275
H H274
Vzglead
Epilog
H6

H 67
H

-30
H7

Figura 3.7. Heterozisul ipotetic (A) i real (B)

1 nlimea plantulelor; 2 volumul radicular.
Un alt parametru studiat n scopul stabilirii modului de manifestare a heterozisului a
fost volumul sistemului radicular, care a nregistrat valori cuprinse n limitele 1,5 2,6 cm3
n cadrul genotipurilor parentale i 2,0 3,5 cm3 la hibrizi. Procentul de heterozis dup
media prinilor este minim (0) la hibridul cu productivitate joas H 6 i maxim (34,29 cm3)
la unul din hibrizii cu productivitate nalt, i anume hibridul H 274. Astfel, ase hibrizi au
dovedit un heterozis pozitiv fa de media prinilor, iar hibridul H 6 menionat nu a
manifestat heterozis, ntruct valorile lui au fost aceleai (2,0 cm3) ca i media dintre
formele sale parentale ( L 222 i Beregovoi). Comparat ns cu cea mai productiv
form parental, acest hibrid a manifestat heterozis negativ (- 25,0 %) Hibridul omologat
Vzglead nu a manifestat heterozis avnd valoarea volumului sistemului radicular (2,5 cm3)
egal cu cea a genotipului patern Beregovoi (tab. 3.7., fig. 3.7.).
Determinarea activitii catalazei a fost un alt parametru morfofiziologic analizat.
Conform datelor obinute nu au fost observate diferene semnificative ntre formele
parentale i ntre acestea i hibrizii lor. Limitele valorilor pentru acest indice a constituit

44

18,4 20,1 ml O2/1 min. pentru formele parentale i 18,1 22,1 ml O2/1 min. pentru hibrizi.
Nectnd la valorile destul de apropiate, totui, procentul maxim de heterozis dup media
prinilor a constituit 16,7 pentru hibridul Vzglead i 14,5 pentru hibridul H 274, ambii
fiind hibrizi cu productivitate nalt (tab. 3.8, fig. 3.8).
Tabelul 3.8.
Activitatea catalazei la Cucumis sativus L.
Indexul
genotipului
H 275

m
(ml 2 / 1 min)
19,70,97

L 226

18,60,76

L 203

18,40,86
H 274

22,10,24

L 203

18,40,86

L 216

19,40,86
H 273

18,70,27

L 222

19,00,75

L 203

18,40,86
Vzglead

20,60,18

L 371

20,10,24

Beregovoi

19,40,86

Epilog

21,30,09

L 371

20,10,24

Favorit

18,70,71
H6

18,10,71

L 222

19,00,75

Beregovoi

19,40,86

H7

18,30,09

L 222

19,00,75

Favorit

18,70,71

% de heterozis ipotetic

% de heterozis real

6,09

5,58

14,5

11

-1,02

16,7

10,56

8,92

-5

-5

3,01

-3,83

Hibridul H 273 cu formele parentale L 222 i L 203 nu a manifestat heterozis real

i posed activitate catalazic intermediar (18,7 ml O2/1 min.). Hibridul H 6 a nregistrat
heterozis negativ att dup media prinilor (19,2 ml O2/1 min.), ct i dup cel mai
productiv printe Beregovoi (19,4 ml O2/1 min.). De asemenea, heterozis negativ (-1,02 i
-3,83%) dup cel mai productiv printe au manifestat hibrizii H 273 i H 7 (tab. 3.8, fig.

45

3.8). Hibridul omologat Epilog se caracterizeaz prin cel mai mare procent (8,92) de
heterozis dup cel mai productiv (20,1 ml O2/1 min.) printe (L 371).

B
12

20

10
8

15

6
10

4
%

2
5

0
-2

0
-4
-6

-5
H 275
H 274
H 273

H
275 H
274 H
273 Vzglead
Epilog HH6 6

H7
H
7

H 275
H 273

6
H
275 HH274274 H
273 Vzglead
Epilog HH
6

H7

H7

Figura 3.8. Efectul de heterozis n F1 la nivelul activitii catalazei fa de:

A media prinilor; B cel mai performant printe

Generaliznd datele obinute referitor la manifestarea heterozisului dup indicii

morfofiziologici, putem constata c n majoritatea cazurilor, hibrizii cu productivitate nalt
au manifestat heterozis pozitiv semnificativ, iar hibrizii H 6 i H 7 heterozis slab pozitiv
sau negativ. Dintre toi parametrii morfofiziologici cercetai, nlimea plantelor reprezint
indicele cel mai semnificativ n manifestarea heterozisului.

3.4. Manifestarea efectului de heterozis dup indicii nucleo-proteici

Activarea sintezei proteinelor la hibrid, n comparaie cu genotipurile parentale iniiale,
este unul dintre mecanismele care asigur la nivelul molecular manifestarea efectului de
heterozis. Proteinele, n deosebi cele de rezerv, influeneaz creterea i dezvoltarea
organismului la etapele iniiale ale ontogenezei.
Pentru depistarea legitilor dintre coninutul de proteine i efectul de heterozis, s-a
determinat coninutul proteinelor sumare extrase din frunzele plantulelor de Cucumis
sativus L, ajunse la faza de 3 frunze adevrate. Conform datelor obinute au fost observate
diferene semnificative ntre formele parentale i ntre acestea i hibrizii lor. Limitele
valorilor pentru acest indice a constituit 119,7 192,5 mg/g biomas uscat pentru formele
parentale i 137,5 256,97 mg/g biomas uscat pentru hibrizi (tab. 3.9.).

46

Tabelul 3.9.
Coninutul proteinelor totale la Cucumis sativus L., (mg/g biomas uscat)
Indexul
genotipului
H 275

m
(mg/g)
210,831,02

L 226

174,172,84

L 203

192,52,92
H 274

256,673,21

L 203

192,52,92

L 216

174,172,84

H 273

207,172,84

L 222

119,171,8

L 203

192,52,92
Vzglead

177,89 2,01

L 371

119,331,97

Beregovoi

155,832,59

Epilog

229,171,54

L 371

119,331,97

Favorit

146,672,01

H6

155,832,59

% de heterozis ipotetic

% de heterozis real

13,04

8,69

28,57

25,0

24,78

7,08

23

12,40

42

36

12

3.3

-6,67

119,171,8

L 222
Beregovoi
H7

165,12 2,71
137,52,01

L 222

119,171,8

Favorit

146,672,56

Rezultatele cercetrilor au demonstrat, c toi cei apte hibrizi supui cercetrilor au

manifestat dup media prinilor heterozis pozitiv. Valoarea maxim a acestui indice a
nregistrat-o hibridul omologat Epilog (42,0%), iar cea minim hibridul cu productivitate
joas H 7 (3,3%). Dup procentul heterozisului comparativ cu cel mai productiv printe,
hibridul cu productivitate nalt s-a situat pe primul loc (25,0%), dup care urmeaz hibridul
omologat Vzglead (12,4%). Hibrizii cu productivitate sczut H 6 i H 7, care au genotipul
matern comun ( L 222) posed un coninut proteic intermediar n comparaie cu formele
lor parentale (fig. 3.9.).

47

Hibridul H 6 cu coninutul proteic de 137,5 mg/g a nregistrat heterozis negativ

(-0,67%) dup cel mai productiv printe Favorit (146,67 mg/g).

A
40
45
35
40
30
35
25
30

20

25

% 15

20

10

15

10

-5

-10
0
H 275
273

H
275 HH 274
274 H H273
Vzglead
Epilog
H 6H 6 H 7 H 7

H 275
273 Vzglead
Epilog
H 6H 6 H 7 H 7
H
275 HH 274
274 H H273

Figura 3.9. Efectul de heterosis la nivelul coninutului de proteine sumare:

A - dup media prinilor; B - dup cel mai performant printe

Un alt parametru din indicii nucleo-proteici a fost coninutul de acizi nucleici (ADN i
ARN). Muli cercettori relateaz faptul c formele parentale ale hibrizilor heterozici difer
dup intensitatea sintezei ARN ribosomal i neribosomal. Astfel, ahbazov [149]

estopalova [150] au determinat c activitatea nucleolului este mai ridicat n celulele

hibrizilor animale i vegetale, care manifest efectul de heterozis.
Rezultatele cercetrilor noastre referitor la coninutul sumar de acizi nucleici (tab.
3.10.), de asemenea, confirm c la majoritatea hibrizilor cu productivitate nalt se observ
efectul de heterozis. Astfel, hibrizii H 275, H 274 i H 273 au nregistrat valorile maxime
ale procentului de heterozis dup cel mai productiv printe, dup care urmeaz hibrizii
omologai Vzglead i Epilog (fig. 3.10.). Hibridul cu productivitate sczut H 7 posed
valori foarte apropiate de cele ale formei materne, constituind astfel o diferen
nesemnificativ (tab. 3.10.).
Legitatea observat pentru coninutul sumar al acizilor nucleici se pstreaz i pentru
coninutul de ADN i ARN separat (tab. 3.9.). Astfel, dup media prinilor, toi cei apte
hibrizi au manifestat heterozis pozitiv. Valorile coninutului de ADN se situeaz ntre 0,02
i 0,07 mg/g biomas proaspt pentru formele parentale i ntre 0,05 i 0,12 mg/g biomas
proaspt pentru hibrizi. Hibridul cu coninutul maxim de ADN s-a dovedit a fi H 275, iar

48

minim H 7. n comparaie cu media prinilor, diferena maxim i minim au nregistrat-o

cei doi hibrizi menionai. Dup cel mai productiv printe, hibridul cu productivitate joas H
6 nu a manifestat heterozis i s-a caracterizat prin acelai coninut ca i forma matern (0,05
mg/g biomas proaspt).
Tabelul 3.10.
Coninutul acizilor nucleici la Cucumis sativus L.
Indexul
genotipului
H 275
L 226
L 203
H 274
L 203
L 216
H 273
L 222
L 203

m
(mg/g s. pr.)
0,990,08
0,8580,07
0,780,07
1,0820,09
0,780,07
0,910,07
1,070,09
0,850,08
0,780,07

Vzglead
L 371
Beregovoi
Epilog
L 371
Favorit

0,9250,09
0,850,08
0,8450,07
0,980,09
0,80,08
0,630,07

H6
L 222
Beregovoi
H7
L 222
Favorit

0,920,08
0,840,08
0,8450,07
0,860,06
0,840,08
0,630,07

% de heterozis ipotetic

% de heterozis real

17,17

13,13

22

14,81

24

20,56

8,11

8,60

24,49

13,27

8,70

8,70

14,53

2,33

S.pr biomas proaspt.

Dup cum era i de ateptat, cantitatea de ARN depete semnificativ coninutul de

ADN la toate genotipurile de castravei supui cercetrilor. Astfel, formele parentale au
nregistrat valori cuprinse n limitele 0,59 0,84 mg/g biomas proaspt, iar hibrizii 0,81
1,01 mg/g biomas proaspt. Hibridul cu coninutul maxim de ARN a fost H 273, care a
manifestat cel mai nalt nivel de heterozis att dup media formelor parentale, ct i dup
cel mai productiv printe (fig. 3.10., tab. 3.11).

49

Tabelul 3.11.
Coninutul ADN i ARN la Cucumis sativus L.
Indexul
genotipului
H 275

ADN
m
(mg/g subst.
pr.)
0,12 0,008

% de
heterozis
ipotetic

% de heterozis
real

66,67

58,33

ARN
m
(mg/g subst.
pr.))
0,87 0,02

L 226

0,030,007

0,830,01

L 203

0,050,001

0,720,08

H 274

0,08 0,001

25,0

12,5

1,00 0,02

L 203

0,050,001

0,720,08

L 216

0,070,002

0,840,12

H 273

0,06 0,002

16,67

16,67

1,01 0,03

L 222

0,050,001

0,790,02

L 203

0,050,001

0,720,08

Vzglead

0,07 0,002

50,0

28,57

0,86 0,02

L 371

0,05 0,001

0,80 0,06

Beregovoi

0,020,001

0,820,07

Epilog

0,06 0,001

25,0

16,67

0,92 0,03

L 371

0,05 0,001

0,80 0,06

Favorit

0,04 0,001

0,59 0,01

H6

0,06 0,002

41,67

16,67

0,86 0,01

L 222

0,05 0,001

0,79 0,02

Beregovoi

0,02 0,001

0,82 0,07

H7

0,050,001

10,0

0,810,02

L 222

0,050,001

0,790,02

Favorit

0,040,001

0,590,01

% de
heterozis
ipotetic

% de
heterozis
real

10,92

5,7

22,0

16,0

25,25

21,78

5,81

4,65

24,46

13,04

6,40

4,65

14,81

2,47

25
70

60

20

50

15
40

%
30

10

20

5
10

0
H 275
H 274

H6
H
275 H
274 HH 273
273 Vzglead
Epilog H
6

HH 77

H 275
H 273

H6
H
275 HH274274 H
273 Vzglead
Epilog H
6

H7
H
7

Figura 3.10. Efectul de heterosis n F1 la nivelul coninutului de acizi nucleici:

A - dup media prinilor; B - dup cel mai performant printe.

50

Concluzionnd rezultatele obinute la acest capitol, putem meniona c toi cei apte
hibrizi au manifestat heterozis pozitiv n dependen de coninutul de biomas verde i
uscat, iar hibrizii primelor trei hibrizi cu productivitate nalt i cei omologai n
comparaie cu hibrizii cu productivitate sczut (H 6 i H 7) au reprezentat procent de
heterozis semnificativ mai mare att dup media prinilor, ct i dup cel mai productiv
printe.

B
60

25
50
20

15

40

% 30

%
10

20

10

6 6
H 275 HH274274 HH273273
Vzglead
Epilog H H

H 275

0
H 275
H 274
H 273

H
275 H
274 H
273 Vzglead
Epilog HH6 6

H7

H7

H7

H7

25

30

25

20

20

% 15

15
%
10

10
5
5

0
H 275
H 273

6 6
H
275 HH274274 H
273 Vzglead
Epilog HH

H7

H7

H6
HH 275
275 HH 274
274 HH 273
273 Vzglead
Epilog H
6

H7
H
7

Figura 3.11. Procent de heterosis dup:A - media prinilor; B - cel mai

performant printe
1 cantitatea ADN; 2 cantitatea ARN.
La nivel de coninut proteic sumar, toi hibrizii de Cucumis sativus L. supui
cercetrilor au manifestat dup media prinilor heterozis pozitiv, constituind valori maxime
pentru hibrizii cu productivitate nalt i cei omologai, dup care urmeaz hibrizii cu
productivitate sczut.
Trebuie de menionat c, probabil, manifestarea heterozisului la plantele de castravei
este determinat de nivelul diferit de expresie a genelor i de aceea particularitile legate de
coninutul acizilor nucleici n combinaiile hibride poate fi considerat ca o cauz din cele
mai importante a acestui fenomen.

51

Capitolul 4. ESTIMAREA CAPACITII COMBINATIVE LA DIVERSE

GENOTIPURI DE CASTRAVEI
Identificarea i selecia liniilor parentale este necesar n programele naionale de
ameliorare n scopul obinerii hibrizilor productivi i n mbogirea potenial a
germoplasmei cu diverse gene din cadrul liniilor utilizate n selecie. Informaia despre
diferite tipuri de interaciune a genelor, magnitudinea relativ a varianei genetice i a
capacitii combinative este reprezentat de parametri importani i vitali n scopul de
elabora noi genotipuri de castravei [20, 21]. Aceast informaie preioas ar putea
reprezenta o strategie esenial pentru amelioratorii genotipurilor de castravei n cutarea
combinaiilor parentale optime pentru obinerea unei descendene mai performante.
Explorarea efectului de heterozis depinde n primul rnd de testarea i selectarea
germoplasmei disponibile care ar putea produce combinaii mai bune de caractere noi
importante. Multe soiuri sau hibrizi comerciali de o performan agronomic nalt sunt
obinui foarte anevoios datorit barierelor genetice n diferite combinaii la ncruciare.
Astfel, ncruciarea n schem dialel este unica tehnic exact de apreciere a materialului
ameliorativ n scopul identificrii i selectrii materialului genetic ameliorat [33, 34].
Hibridarea reprezint metoda de baz a ameliorrii plantelor, fiind urmat de selecia
direcionat a plantelor i aprecierea ei n funcie de descendena obinut. O importan
deosebit prezint identificarea din cadrul materialului iniial divers a formelor
caracterizate, att printr-un complex de caractere preioase, ct i prin capacitatea de a
transmite acest complex descendenei. Astfel de ncruciri vor conduce la formarea
transgresiilor dorite. Una dintre aceste metode de analiz top-cross, care permite aprecierea
proprietilor genetice ale soiurilor i const n determinarea capacitii combinative [43].
Noiunile de capacitate combinativ general i specific au fost formulate pe
parcursul obinerii hibrizilor de porumb. Din punct de vedere experimental a fost
demonstrat c capacitatea combinativ a soiurilor reprezint un caracter ereditar [14, 90].
Capacitatea combinativ general (CCG) reprezint valoarea medie a soiului (liniei)
n combinaiile hibride i se modific n funcie de valoarea medie a deviaiei caracterului la
toi hibrizii obinui cu ajutorul acestei forme parentale de la media comun (dup toi
hibrizii).

52

Capacitatea combinativ specific (CCS) este noiunea care caracterizeaz

ncrucirile separate, atunci cnd unele combinaii se dovedesc a fi mai bune sau mai puin
bune, n comparaie cu cele ateptate n baza calitii medii ale liniilor parentale, stabilit
prin determinarea capacitii combinative generale [110].
Capacitatea combinativ reprezint criteriul de baz care permite aprecierea gradului
de utilitate a formelor parentale n scopul ameliorrii la heterozis. Perspectivele descoperirii
naturii fenomenului de heterozis sunt asociate cu tendina de a elabora metode rapide i
exacte de apreciere a capacitii combinative a liniilor i de prognozare a efectului de
heterozis.
Eficacitatea muncii n direcia dat depinde n primul rnd de disponibilitatea
materialului iniial cu caractere importante biologice, agricole i tehnologice. Importana
liniilor i a soiurilor este determinat de capacitatea lor de a produce prin ncruciare cu alte
linii o descenden cu un grad de heterozis mai mare sau mai mic. Aprecierea capacitii
combinative a liniilor parentale permite cercettorului de a prognoza rezultatele viitoarelor
ncruciri i de a se axa asupra materialului de perspectiv, concomitent evitnd consumul
suplimentar de timp i finane pentru obinerea i testarea repetat a hibrizilor acelor linii
parentale, care nu prezint importan practic.
Exist diverse metode de determinare a capacitii combinative ale formelor de
perspectiv, astfel ca ncruciarea urmat de testarea urmtoare a descendenei hibride,
analiza dialel dispersional etc.
De asemenea, a fost elaborat un aparat programabil i metodologic [145], care
caracterizeaz eficacitatea modelelor genetico-matematice de apreciere i prognozare a
efectului de heterozis n baza determinrii capacitii combinative generale (CCG),
capacitii combinative specifice (CCS) i a potenialului efectului de heterozis a
combinaiilor (PEHC) la ncruciarea a diverselor linii. A fost elaborat i implementat un
produs software pentru aprecierea i prognozarea productivitii plantelor n baza metodelor
de apreciere calitativ a CCG i CCS, fapt care a sporit considerabil eficacitatea obinerii
hibrizilor nalt productivi cu un efect garantat de heterozis.
La studierea particularitilor fiziologice i biochimice a procesului de creare a
hibrizilor productivi i a formelor parentale de Pisum sativum L. a fost elaborat o cale de
dirijare a proceselor de inducere a heterozisului n hibrizi i de elaborarea a unui sistem de

53

criterii de prognozare precoce a superioritii efectului de heterozis. A fost elaborat un

model static, care servete drept baz pentru aprecierea obiectiv a materialului iniial n
selecia practic la heterozis [135].
Destul de bine este studiat i analiza dispersional dialel, care permite de a
descompune variana genotipic n variana capacitii combinative generale, care este
determinat n general de efectul aditiv al aciunii genelor, variana capacitii combinative
specifice, care depinde de genele cu efecte de dominan i epistazie, i de variana efectelor
reciproce.
Pentru hibrizii de prima generaie valoarea medie este determinat printr-o metod mai
complicat i depinde de urmtorii parametri:
1) de efectul mediu al heterozisului (midparents heterosis) sau al dominrii medii
(incomplete) (h), care este determinat ca fiind diferena dintre valorile medii dup
toate combinaiile hibride F1 i nivelul mediu al formelor parentale;
2) de efectele capacitii combinative generale ale liniei i, egale cu manifestarea
medie a caracterului n acele combinaii hibride, unde este prezent genotipul dat;
3) de capacitatea combinativ specific, egal cu deviaia n sumele reciproce, care nu
sunt descrise prin efectele capacitii combinative generale;
4) de efectele reciproce. Ultimele sunt descompuse n dou efecte: efectul reciproc
mediu al liniei i, care este egal cu diferenele dintre manifestarea medie a efectului
de heterozis n combinaiile hibride, unde linia dat este utilizat n calitate de linie
patern i matern, i efectul reciproc rezidual egal cu deviaiile, care nu sunt luate n
consideraie n efectele reciproce medii [133].
Capacitatea combinativ reprezint criteriul de baz, care permite aprecierea gradului
de utilitate a formelor parentale n scopul ameliorrii la heterozis. Perspectivele descoperirii
naturii fenomenului de heterozis sunt asociate cu tendina de a elabora metode rapide i
exacte de apreciere a capacitii combinative a liniilor i de prognoz a efectului de
heterozis.
Este colectat i prelucrat materialul experimental, care caracterizeaz efectul de
heterozis n funcie de diverse caractere morfologice, fiziologice i biochimice ale unor
combinaii hibride de castravei (Cucumis sativus L.) cu productivitate diferit (tab. 4.1.).

54

Tabelul 4.1.
Productivitatea medie, comercial i standard la diferite genotipuri de castravei
Productivitatea
Comercial

Medie

Hibridul
H 275

310

H 274

240

110,6

120,0

214

108,1

1245,9

194

104,9

121,3

H 273

260

119,8

130,0

212

107,1

124,7

189

102,2

118,1

Vzglead

217

100,0

108,5

198

100,0

116,5

185

100,0

115,6

Epilog

200

92,2

100,0

170

85,9

100,0

160

86,5

100,0

H6

195

89,9

97,5

170

85,9

100,0

160

86,5

100,0

H7

185

85,3

92,5

160

80,8

94,1

145

78,4

90,6

C/ha

% fa de
St2
155,0

Standard

% fa de
St1
142,9

223

% fa de
St1
112,6

% fa de
St2
131,2

C/ha

C/ha
212

% fa de % fa
St1
de St2
114,6
132,5

Vzglead - standard 1 (St1); Epilog standard 2 (St2).

Trei dintre cei apte hibrizi studiai (hibrizii H275, H274, H273) se caracterizeaz
printr-un nivel sporit al recoltei (143%, 111%, 120% fa de hibridul Vzglead i 155%,
120%, 130% fa de hibridul Epilog - hibrizi omologai, care au servit n calitate de martor),
iar doi hibrizi (H6 i H7) printr-o recolt sczut (89%, 85% fa de hibridul Vzglead i
97%, 92% fa de hibridul Epilog).
Important de menionat, c linia L203 reprezint o form parental a celor trei hibrizi
nalt heterozigoi mpreun cu linia L216 i L222, ultima fiind i form matern pentru
hibrizii H6 i H7 mpreun cu soiurile Beregovoi i Favorit, care reprezint forma patern a
hibrizilor omologai. Reieind din cele menionate, rezult o capacitate combinativ
general (CCG) i o capacitate combinativ specific (CCS) diferit a liniilor parentale.
Pornind de la aceste date, indicii variabilitii genetice, constatai la analiza fiecrui
caracter au fost ncadrai ntr-o serie de analize matematice, care au permis punerea n
eviden a CCG i CCS precum i efectele reciproce pentru toate cele dousprezece
caractere morfofiziologice i biochimice la diferii hibrizi de prima generaie care pot fi
reprezentai printr-o schem dialel incomplet (tab. 4.2.).

55

Tabelul 4.2.
Schema analizei dialele incomplet, utilizat n experien
Indexul
liniei
L 222

L 222

L 371

L 203

Beregovoi

Favorit

H273

H6

H7

Vzglead

Epilog

L 371
L 203

Beregovoi

Favorit

4.1. Studiul CCG n cadrul diferitor genotipuri de castravei

Pe parcursul anilor 2005-2007 a fost studiat capacitatea combinativ a soiurilor i
hibrizilor de castravei dup 11 caractere morfologice i 4 biochimice.
Rezultatele referitoare la efectele capacitii combinative generale a diverse genotipuri
de castravei a indicilor morfofiziologici a unor astfel de parametri ca volumul sistemului
radicular (0,38), masa uscat (0,94) a relevat cele mai mari valori la genotipul L203, fiind
urmat de L371 n funcie de CCG a volumului sistemului radicular (0,03) i masa uscat
(0,54) (tab. 4.3.).
Tabelul 4.3.
CCG la diverse genotipuri de castravei dup indicii morfofiziologici
Indexul
liniei

Volumul sistemului
radicular

Masa verde

Masa
uscat

Lungimea
plantei

Activitatea
catalazei

L 222

-0,04

-2,41

-0,55

-0,47

-1,18

L 371

0,03

2,12

0,54

0,28

1,39

L 203

0,38

2,02

0,94

-0,60

-0,35

Beregovoi

-0,12

-1,56

-0,78

1,39

-0,20

Favorit

-0,22

-0,04

0,13

-0,50

0,24

Capacitatea combinativ general pentru masa verde, activitatea catalazei i lungimea

plantei a fost mai nalt la genotipul L371, astfel CCG pentru masa verde (2,12), activitatea
catalazei (1,39), lungimea plantei (0,28), fiind urmat de L203 cu CCG respectiv pentru
56

masa verde (2,02), activitatea catalazei (-0,35) i lungimea plantei (-0,60). Valorile negative
ale capacitii combinative generale pentru lungimea plantei la genotipurile L203 (-0,60),
L222 (-0,47) i Favorit (-0,50) prezint aspecte pozitive, deoarece n prezent este favorizat
ameliorarea plantelor de lungime redus.
Cele mai reduse valori ale CCG a caracterelor morfofiziologice au fost nregistrate la
L222 pentru volumul sistemului radicular (-0,04), masa uscat (-0,55), masa verde (-2,41),
activitatea catalazei (-1,18), nlimea plantei (-0,47) i la genotipul Beregovoi pentru
volumul sistemului radicular (-0,12), masa uscat (-0,78), masa verde (-1,56), activitatea
catalazei (-0,20), nlimea plantei (1,39), care probabil nu prezint o importan deosebit
pentru ameliorare. Studiul caracterelor morfologice ale liniei L371 a demonstrat
superioritatea acestuia dup efectele CCG a dou caractere, anume dup masa verde i
activitatea catalazei (tab. 4.3.). Linia L203 a demonstrat un efect nalt al CCG dup volumul
sistemului radicular i biomasa verde. Soiul Beregovoi, care a servit n calitate de martor, a
fost caracterizat prin efect nalt al CCG dup nlimea plantei.
Efectele capacitii combinative generale pentru coninutul de proteine, genotipurile L203
(23,21) i L371 (17,74) au demonstrat valori pozitive, iar L203 (23,21) a depit toate
genotipurile referitor la acest indice. Analiza detaliat a linilor de castravei utilizate n
ameliorare a relevat valori negative ale efectului CCG la genotipurile L222 (-18,95), Beregovoi
(-18,93) i Favorit (-2,45).
n cazul CCG dup cantitatea acizilor nucleici, L203 i-a demonstrat superioritatea (0,08),
fiind urmat de celelalte linii cu valori apropiate de zero. Acestea pot fi reprezentate n ordine
descresctoare astfel L222 (0), L371 (0), Beregovoi (-0,03) i Favorit (-0,03).
Analiza capacitii combinative generale a coninutului ADN indic prezena unor indici
foarte apropiai ntre ei, totui fiind posibil clasificare acestora n urmtoarea ordine:
L203(0,03), L371(0), Beregovoi (0), L222(-0,01) i Favorit (-0,01).

Efectul capacitii

combinative generale dup coninutul de ARN, de asemenea a relevat prezena unor valori
apropiate ntre genotipurile ameliorate.
Capacitatea combinativ general dup coninutul constant al acizilor nucleici, ADN i
ARN la diverse genotipuri, valorile fiind apropiate de zero, probabil c indic asupra
identitii speciei de castravei (Cucumis sativus L.), fiind demonstrat stabilitatea
genomului la diverse varieti i soiuri a acestei culturi agricole.

57

Referitor la CCG a cantitii de protein s-au constatat valori sporite la liniile L203 i
L371, care probabil se datoreaz proceselor de reglare a transcripiei i translare a proteinelor.
De asemenea, efectul sporit al CCG dup coninutul de protein sugereaz abilitatea liniilor de a
crea genotipuri noi, valoroase din punct de vedere al coninutului proteic.
Linia 203 s-a dovedit a fi lider i n grupul de studiul al parametrilor biochimici de
baz (tab.4.4.), deoarece valorile acestui parametru dup CCG au fost cele mai bune dup
coninutul proteinei sumare, dup coninutul valorilor sumare a ADN i ARN, fiind relevate
valori de 23,21 i 0,08. Efectul nalt al CCG dup coninutul sumar al proteinelor a
demonstrat linia 371 (17,74). Soiul Beregovoi, care a servit n calitate de martor, a
demonstrat un efect redus al CCG dup majoritatea caracterelor (tab.4.4. i 4.5.).
Tabelul 4.4.
Indicii CCG la diverse genotipuri de castravei dup indicii biochimici
Indexul liniei

Proteine

Acizii nucleici

ADN

ARN

L 222

-18,95

0,00

-0,01

0,00

L 371

17,74

0,00

0,00

0,00

L 203

23,21

0,08

0,03

0,05

Beregovoi

-18,93

-0,03

0,00

-0,03

Favorit

-2,45

-0,03

-0,01

-0,02

Din cele menionate anterior putem conchide c linia L203 prezint cel mai mare
spectru de efecte favorabile ale CCG dup majoritatea caracterelor morfofiziologice,
biochimice i indicii aparatului fotosintetic utilizai n ameliorare. Iar liniile L222 i
Beregovoi sunt caracterizate prin majoritatea efectelor CCG dup indicii aparatului
fotosintetic, indicii biochimici i morfofiziologici defavorizate de ameliorare.
Cele mai bune din punct de vedere ameliorativ au fost liniile L203 i L371, care au fost
marcate prin parametri nali ai CCG dup caractere preioase morfologice, fiziologice i
biochimice i acestea pot s serveasc n calitate de componeni de sintez la crearea
hibrizilor nalt heterotici de castravei. Deoarece liniile L203 i L371 au demonstrat cea mai
bun capacitate combinativ dup majoritatea caracterelor morfologice, fiziologice i
biochimice, din aceste considerente, cele mai bune forme parentale ar putea fi utilizate
pentru ameliorarea castraveilor n diferite combinaii hibride [3, 4, 51, 92, 93].

58

4.2. Analiza CCS n cadrul diferitor genotipuri de castravei

Analiza capacitii combinative specifice (CCS) a fost efectuat la diverse genotipuri
de castravei dintre care la 5 hibrizi, forme materne i paterne la care a fost studiat CCG.
Analiza detaliat a CCS a caracterelor morfologice i fiziologice (tab. 4.5.) a relevat
cel mai sporit indice al volumului sistemului radicular la hibridul L222L203 (0,29), fiind
urmat de hibriziiL371Beregovoi (0,22) i L371Favorit (0,12). ncruciarea liniilor
L222Beregovoi i L222Favorit au fost caracterizate prin valori negative (-0.20 i -0,10;
corespunztor).
Genotipul hibrid obinut n rezultatul ncrucirii liniilor L371Favorit a dovedit o
performan excepional dup masa verde (1,58) fa de ceilali hibrizi, fiind urmat de
L222L203 (CCS=0,62). Cele mai reduse valori au fost nregistrate pentru hibridul
L222Favorit cu o valoare negativ (-1,31) al efectului CCS pentru caracterul observat.
Cel mai sporit efect al capacitii combinative specifice pentru masa uscat (0,89) a
fost demonstrat la hibridul L222L203, fiind urmat de hibridul L371Favorit (0,63) i
L371Beregovoi (0,03). Genotipurile L222Favorit (-1,14) i L222Beregovoi (-0,02) sunt
caracterizate prin valori negative i reflect cele mai slabe rezultate ale capacitii
combinative specifice pentru masa uscat.
Capacitatea combinativ specific dup nlimea plantei a prezentat valori pozitive
pentru hibrizii L222Favorit (0,38) i L222Beregovoi (0,89), iar hibrizii L222L203 (1,57), L371Beregovoi (-0,70) i L371Favorit (-0,19) au fost caracterizai prin valori
negative ale CCS. Valorile negative ale CCS dup lungimea plantelor ne indic asupra
avantajului genotipurilor date n automatizarea cultivrii genotipurilor hibride.
Hibrizii L222L203 (0,69) i L371Favorit (0,10) au demonstrat valorile cele mai
sporite ale CCS dup activitatea catalazei. Valorile negative ale capacitii combinative
specifice ale acestui caracter au fost caracteristice genotipurilor L222Beregovoi (-0,06),
L222Favorit (-0,31) i L371Beregovoi (-0,14). Studiul rezultatelor (tab. 4.6.) a relevat c
combinaia hibrid L222L203 a demonstrat o valoare maxim dup efectul CCS al
volumului sistemului radicular (0,29), al biomasei uscate (0,89) i al activitii catalazei
(0,69), iar parametrul biomasei verzi - un efect nalt al CCS (0,62).
L371, care este caracterizat prin prezena valori nalte ale CCG, iar n combinaia

59

hibrid L371Favorit au demonstrate valori medii al CCS dup volumul sistemului

radicular (0,12), a biomasei uscate (0,63) i a activitii catalazei (0,10), dar dup biomasa
verde au fost evideniate valori maxime (1,58).
Din cele expuse anterior se poate conchide c hibridul L222L203 este caracterizat
prin setul cel mai favorabil de valori al CCS dup toi indicii morfofiziologici analizai.
Hibrizii L371Beregovoi i L371Favorit, de asemenea, vor caracterizai printr-un numr
sporit de caractere morfofiziologice favorabile. Astfel, genotipurile noi obinute vor fi
caracterizate printr-un volum al sistemului radicular sporit, prin mas verde i uscat
considerabil, printr-o activitate majorat a catalazei i dimensiuni reduse ale lungimii
plantelor, fapt care va permite automatizarea cultivrii acestora (tab. 4.5.).
Tabelul 4.5.
CCS la diverse genotipuri de castravei dup indicii morfofiziologici
Indexul liniei n
combinaiile:
L 222 L 203

Volumul
sistemului
radicular
0,29

Masa
verde

Masa
uscat

Lungimea
plantei

Activitatea
catalazei

0,62

0,89

-1,57

0,69

L 222 Beregovoi

-0,20

0,26

-0,02

0,89

-0,06

L 222 Favorit

-0,10

-1,31

-1,14

0,38

-0,31

L 371 Beregovoi

0,22

0,02

0,03

-0,70

-0,14

L 371 Favorit

0,12

1,58

0,63

-0,19

0,10

Studiul CCS dup indicii biochimici (tab. 4.6.) a relevat cel mai sporit indice al
coninutului de proteine la hibridul L371Favorit (20,09), fiind urmat de hibrizii
L222L203 (17,12) i L222Beregovoi (7,92). Hibrizii L371Beregovoi (-6,71) i
L222Favorit (-26,88) sunt caracterizate prin valori negative. Valorile CCS dup coninutul
acizilor nucleici s-au clasat n urmtoarea ordine cresctoare: L222Favorit (-0,05),
L222Beregovoi (0,00), L371Beregovoi (0,004), L222L203(0,04), L371Favorit (0,06).
CCS dup coninutul de ADN s-a clasat n jurul valorilor de 0. Capacitatea combinativ
specific dup coninutul de ARN a relevat valori pozitive ale acesteia la hibrizii
L222L203 (0,06) i L371Favorit (0,05), la celelalte genotipuri hibride au fost nregistrate valori
mai reduse: L222Beregovoi (-0,00), L371Beregovoi (-0,00) i L222Favorit (-0,05).
60

Studiul indicilor biochimici (tab. 4.6.) a demonstrat legiti similare, care constau n
efecte nalte ale CCS ale combinaiei hibride L371Favorit, care reprezint 28,09 dup
coninutul de protein sumar i 0,06 dup coninutul de acizi nucleici. Puin mai redus este
efectul CCS al combinaiei hibride L222L203 i sunt reprezentate de valorile de 17,12 i
0,04. La genotipurile hibride (L222L203 i L371Favorit) cu un efect mai sporit al CCS
dup coninutul de ARN au fost nregistrate i valori mai sporite ale CCS dup coninutul de
protein.
Tabelul 4.6.
CCS la diverse genotipuri de castravei dup indicii biochimici
Indexul liniei n
combinaiile:

Proteine

Acizii nucleici

ADN

ARN

L 222L 203

17,12

0,04

-0,02

0,06

L 222Beregovoi

7,92

0,00

0,00

-0,00

L 222 Favorit

-26,88

-0,05

0,00

-0,05

L 371Beregovoi

-6,71

0,004

0,00

-0,00

L 371Favorit

28,09

0,06

0,01

0,05

Acest fapt probabil poate fi explicat prin motenirea de la genotipurile parentale a

factorilor implicai n reglarea expresiei genelor, iar genotipurile hibride obinute
reprezint-hibrizi valoroi cu un coninut sporit de proteine. La liniile care au fost
caracterizate printr-un efect al CCG deosebit, astfel ca liniile L203 i L371, coninutul de
protein sumar a fost determinat de interaciunea aditiv i dominant a genelor,
deoarece aceste linii sunt caracterizate i printr-un efect nalt al CCS, ceea ce indic
asupra posibilitii apariiei transgresiilor pozitive n generaiile urmtoare.
A fost relevat rolul aciunii genelor aditive i neaditive n determinarea caracterelor
studiate, fapt ce presupune posibilitatea ameliorrii acestora prin intermediul seleciei a
celor mai preioase forme parentale pentru selecie.

61

Capitolul 5. POLIMORFISMUL PROTEIC LA DIFERITE GENOTIPURI DE

CUCUMIS SATIVUS L.
Investigaii privind structura i activitatea locusurilor n genom dup proteine ca
produse de expresie a acestora, aplicate n analiza efectului de heterozis, direct sau indirect
relev acele mecanisme moleculare ale proceselor genetice care-l determin. Astfel de
informaii pot servi ca baz n elaborarea unor metode de pronosticare a heterozisului i
selectare a combinaiilor de forme parentale cu capacitate de combinare nalt.

5.1. SDS-PAGE a proteinelor sumare, uor solubile la castravei n faza de plantul

Analiza fraciilor proteice a pus n eviden o diversitate molecular a componenilor
cu un anumit grad de specificitate determinat att de genotipul plantei (linii homozigote,
hibrizi i soiuri), ct i de caracteristica diferit a productivitii acestora. n aspect general,
spectrele electroforetice ale tuturor genotipurilor studiate au relevat prezena a trei grupe de
polipeptide n funcie de intensitatea i grosimea benzilor proteice:
-

polipeptide cu Mr: 63-99 i 34-42 kDa de o intensitate medie a benzilor poziionate n

regiunea superioar i de mijloc a diapazonului de mase moleculare.

-

benzi minore ca intensitate i grosime reprezentate att de fracii cu greutate molecular

mare Mr: 100-134 kDa, ct i de cele cu greutate molecular mic 19-31 kDa.
-

polipeptide cu o pondere cantitativ mare, reprezentate de fraciile cu masa molecular

relativ medie i mic 52 i 15 -18 kDa.

SDS-PAGE nsumeaz 30 polipeptide repartizate ntr-un diapazon cu Mr 15-134 kDa,
relevnd 12 fracii comune pentru toi hibrizii i liniile parentale: patru compui de o
intensitate slab a colorantului cu Mr: 81,5; 115,6; 127,7; 134,3 kDa, patru de o intensitate
medie: 34,8; 40,4; 60,3; 99,5; kDa i patru fracii majore dup dimensiunea zonei i a
intensitii colorantului 15,6; 16,4; 18,2; 51,9 kDa. Polimorfismul apreciat prin
prezen/absen a fost constatat la nivelul a 18 fracii proteice incluse n intervalul maselor
moleculare relative de 19-121 kDa.

62

5.1.1. Analiza electroforetic a proteinelor la hibrizii cu productivitate nalt

Studiul comparativ al hibrizilor H 273, H 274 i H 275 cu un efect nalt de heterozis n
raport cu liniile parentale a elucidat unele particulariti distinctive n pattern-ul polipeptidic
privind complexitatea i polimorfismul spectrelor electroforetice.
Hibridul H 274 i formele parentale. Analiza a 18 benzi polimorfe prezente n
electroforegrama liniilor parentale experimentale L 216 i L 203, i a hibridului H 274 a
relevat un nivel nalt de specificitate genotipic. Forma paterna s-a evideniat printr-un
spectru polipeptidic mai variat comparativ cu genotipul matern determinat de prezena a 8
fracii. Linia matern conine trei componeni, iar genotipul hibrid -14, depind astfel

15,6

16,4

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

36, 6

40,4

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

115,6

121,5

127,7

134,3

203

216

F1

Mr, kDa

ambele linii homozigote dup numrul de polipeptide (fig. 5.1).

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.1. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor parentale i

hibridului H 274
Complexul fraciilor proteice al genotipurilor parentale au prezentat o similaritate n 40
% cazuri i doar la nivelul polipeptidelor comune pentru toate genotipurile studiate (fig.
6.2). Dac de la forma patern toate cele 8 fracii specifice cu Mr: 121,5; 86,6; 70,1; 42,5;
31,5; 28,5 i 24,5 kDa se regsesc n genotipul heterozigot atunci din cele trei fracii cu Mr:
90,0; 63,4 i 19,1 kDa caracteristice formei materne doar ultimele dou sunt prezente n
profilul proteic al F1.

63

Mr, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.2. Spectrul electroforetic al liniilor parentale (linia 216 X linia 203)
i hibridului H 274
Paternul electroforetic al genotipului heterozigot indic prezena tuturor polipeptidelor
evideniate la linia patern i dou de la cea matern, majoritatea fiind de o intensitate mai
mare a colorantului n comparaie cu acestea la liniile parentale, demonstrnd manifestarea
efectului de heterozis. Hibridul de prima generaie se caracterizeaz i printr-un ir de
polipeptide caracteristice doar acestei forme. Spre exemplu, a fost pus n eviden prezena
a patru polipeptide dintre care dou din zona medie (Mr 77,5; 68,3 kDa) i dou din zona cu
greutatea molecular mic (Mr: 22,2 i 20,1 kDa) absente la formele homozigote. Toate
aceste patru fracii noi sunt minore de o intensitate slab a colorantului.
Hibridul 275 i formele parentale. Fracionarea extractului proteic sumar obinut din
plantulele liniilor parentale experimentale: L 203, L 226 i hibridului H 275 a rezultat
un profil general, deosebit de grupul de genotipuri, analizate anterior prin lipsa
polipeptidelor cu greutatea molecular mare i concentrarea numeric n zona medie a
spectrului electroforetic (fig. 5.3 i 5.4). Astfel, linia matern s-a evideniat printr-o varietate
mai mare determinat de 10 benzi polimorfe (90,0; 85,6; 77,5; 68,0; 63,4; 42,5; 36,6; 28,5;
27,1; 25,8; 24,5 kDa) iar linia 203 - utilizat n aceast combinaie de ncruciare ca linie
patern este remarcat prin cele trei fracii (90; 63,4; 19,1 kDa) analizate anterior n cadrul
genotipurilor, care formeaz hibridul H 274.

64

15,6

16,4

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

36, 6

40,4

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

115,6

121,5

127,7

134,3

Mr, kDa

F1
203
226

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.3. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor parentale i

hibridului H 275
M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.4. Spectrul electroforetic al liniilor parentale ( linia 203 x linia

226) i hibridului H 275
Componenii cu Mr 90,0 i 63,4 kDa sunt prezeni n ambele linii parentale i n hibrid,
iar cel cu greutatea molecular mic de 19,1 kDa nu se regsete n hibrid similar hibridului
H 274. Paternul genotipului heterozigot prezint un nivel nalt de similaritate cu cel al
genotipului homozigot matern prin prezena a nou benzi polimorfe depistate i la linia
matern. Lipsete la forma heterozigot componentul proteic cu Mr 70,1 kDa i sunt
65

prezente n plus dou benzi noi de intensitate slab a colorantului cu greutate molecular
mic de 36,3 kDa i 25,8 kDa (fig. 5.4.).
Hibridul 273 i formele parentale. Profilul polipeptidic al proteinelor sumare al
liniilor parentale: L 203, L 222 i a hibridului H 273 demonstreaz un polimorfism
genotipurile hibridului H 274. Analiza

foarte asemntor cu cel constatat pentru

comparativ a paternelor proteice ale liniilor parentale a pus n eviden pentru forma
matern nou fracii repartizate n tot diapazonul de mase moleculare: patru cu greutate
molecular mare - 121,5; 104,6; 85, 6 i 70,1 kDa, dou cu greutate molecular medie -

15,6

16,4

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

36, 6

40,4

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

121,5

115,6

134,3

127,7

222

203

F1

Mr, kDa

63,4; 42,5 kDa i trei cu greutate molecular mic 31,5; 28,5 i 19,1 kDa (fig. 5.5 i 5.6).

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.5. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor parentale i

hibridului H 273

Genotipul patern al formei heterozigote H 273 este acelai ca i la H 275, caracterizat

prin prezena a trei fracii polimorfe (90; 63,4; 19,1 kDa). Spectrul proteic al genotipului
hibrid care nsumeaz 12 fracii se deosebete de genotipurile homozigote parentale prin
lipsa unui polipeptid cu Mr 90,0 kDa depistat la forma patern, dou fracii cu Mr 121,5; i
104,6 kDa observate la forma matern i prezena a 5 polipeptide specifice cu Mr 77,5;
36,6; 24,5; 22,2kDa i 20,1 kDa, (fig. 5.6).

66

M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.6. Spectrul electroforetic al liniilor parentale( L 203 , L 222) i

hibridului H 273

Diferenele cele mai elocvente dintre spectrele polipeptidice ale genotipurilor homo- i
heterozigote au fost relevate la nivelul polipeptidelor cu un coninut redus n paternul
electroforetic.

5.1.2 Analiza proteinelor n cadrul hibrizilor omologai i formelor parentale

Linia L 371 n combinaie cu soiurile Beregovoi i Favorit i respectiv hibrizii de
prima generaie cu productivitate nalt, inclui n schema experimental n calitate de
sistem de referin au prezentat o heterogenitate polipeptidic, care spre deosebire de
hibrizii experimentali studiai a avut un caracter de clasterizare a fraciilor n regiuni
similare unei sau altei forme parentale.
Hibridul Vzglead i formele parentale. Soiul Beregovoi i linia L 371 utilizate
n obinerea hibridului nalt productiv Vzglead se caracterizeaz prin prezena a 12 i
respectiv 10 componeni proteici polimorfi (fig. 5.7 i 5.8). Spectrul formei paterne n afar
de faptul c prevaleaz numeric fa de cel al liniei materne este mai uniform n repartizarea
maselor moleculare. Regiunea polipeptidic cu greutate molecular mare include fraciile cu
Mr 121,5 i 104,5 kDa. Regiunea cu greutate molecular medie nsumeaz trei benzi cu Mr
85,6; 70,1 i 42,5 kDa iar regiunea fraciilor cu greutate molecular mic 7 componeni:

67

36,6; 31,5; 28,5; 24,5; 22,2; 20,1; 19,1 kDa. Un alt aspect important l constituie prezena a
doi componeni minori specifici cu Mr 36,6 i 20,1 kDa care sunt abseni la genotipul

16,4
15,6

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

36, 6

40,4

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

115,6

121,5

127,7

134,3

371

Beregovoi

F1

Mr, kDa

heterozigot i n cel matern.

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.7. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor

parentale i hibridului Vzglead

M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.8. Spectrul electroforetic al liniilor parentale i hibridului Vzglead

68

Genotipul homozigot matern conine mai puine benzi, toate concentrate n zona de
mijloc i inferioar a spectrului electroforetic. Astfel profilul genotipului matern include 7
fracii cu mase moleculare similare celor prezente la genotipul patern: 85,6; 70,1; 42,5;
28,5; 24,5; 22,2; 19,1 kDa i trei componeni din zona medie care lipsesc la forma patern:
77,5; 68,0 i 63,4 kDa (fig. 5.8.).
Genotipul heterozigot prezint un spectru polipeptidic cu 13 componeni polimorfi care
pot fi grupai n regiuni similare ambelor genotipuri homozigote. De exemplu, componenii
polimorfi 121,5 i 104,6 kDa din regiunea cu masa molecular mari este motenit de la
genotipul patern ca i fraciile minore cu Mr incluse in intervalul de: 20 -31 kDa, pe cnd 6
fracii din regiunea medie cu Mr: 40- 85 kDa sunt similare celor depistate la genotipul
matern. O alt particularitate relevat de analiza SDS - PAGE reprezint faptul c genotipul
hetrozigot nu conine nici un component nou care s nu fie prezent la formele parentale (fig.
5.8.).
Hibridul Epilog i formele parentale. Spectrele proteice ale formelor parentale
(Favorit i L371) ale hibridului cu productivitate nalt includ 7 benzi polimorfe cu
greutate molecular similar din regiunea medie a spectrului (85-30 kDa). Forma patern se
deosebete de cea matern doar la nivelul componentului 27,1 kDa. Linia matern conine
n total 10 benzi polimorfe dintre care trei cu mase moleculare mici lipsesc la linia patern

15,6

16,4

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

40,4

36, 6

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

115,6

127,7

121,5

134,3

371

Favorit

F1

Mr, kDa

(fig. 5.9. i 5.10).

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.9. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor parentale

i hibridului Epilog

69

Hibridul Epilog similar hibridului Vzglead prezint succesiuni de fracii cu Mr similare

ambelor forme parentale. De exemplu, regiunea cu opt componeni inclui n intervalul de
68-28 kDa este similar liniilor homozigote i genotipului heterozigot. Regiunea fraciilor
cu greutate molecular mic a hibridului este asemntoare formei materne cu excepia
benzii cu Mr 25,8 kDa specific, care lipsete la genotipurile parentale.
M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.10. Spectrul electroforetic al liniilor parentale i hibridului Epilog

De asemenea dou polipeptide cu Mr 70,1 i 77,5 kDa prezente la ambele genotipuri
homozigote nu se regsesc la forma hetrozigot. Caracteristic pentru aceast grup de
genotipuri este lipsa fraciilor polimorfe cu greutatea molecular mare, ponderea fraciilor
variabile revenind zonei medii i inferiore a spectrului electroforetic.

5.1.3. Analiza electroforetic a proteinelor la hibrizii cu productivitate sczut

Hibridul H 6 i liniile parentale. Linia 222 cu CCG nalt n combinaie specific cu
soiul Beregovoi manifest capacitate de combinare joas rezultnd hibrizi de prima
generaie cu productivitate sczut. Fracionarea proteinelor sumare indic o omogenizare a
zonei superioare a spectrului de mase moleculare 68-134 pentru genotipul heterozigot,
indicnd prezena fraciilor de la ambii prini. O microheterogenitate apare n zona

70

componenilor minori determinat de lipsa unor benzi atestate la genotipurile homozigote i

nu de prezena unor fracii noi (5.11.).

n spectrul polipeptidic al hibridului H 6 nu au fost depistate urmtoarele benzi

polimorfe: una cu Mr 63,4; coninut de genotipul matern i trei benzi cu Mr 36,6; 22,2;
20,1 prezente la forma patern i una cu Mr 42,5 kDa prezent la ambii prini. O
particularitate deosebit a paternului polipeptidic heterozigot const n faptul c din toate
opt fracii polimorfe pe care le conine apte sunt prezente la ambele genotipuri homozigote
cu excepia doar a fraciei cu Mr 24,5 care a motenit-o doar de la genotipul patern (5.12.).
M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.12. Spectrul electroforetic al liniilor parentale i hibridului H 6

71

Hibridul H 7 i liniile parentale. Genotipul heterozigot H 7 prezint un spectru

polipeptidic cu apte componeni polimorfi i o repartizare asemntoare cu cea a hibridului
Epilog determinat de prezena fraciilor n zona medie i lipsa celor cu mase moleculare

15,6

16,4

18,2

19,1

20,1

22,2

24,5

25,8

27,1

28,5

31,5

34,8

36, 6

40,4

42,5

51,9

60,3

63,4

68,0

70,1

77,5

81,5

85,6

90,0

99,5

104,6

115,6

121,5

127,7

222

Favorit

F1

134,3

Mr, kDa

mari i mici (fig. 5.13. i 5.14.).

Fracii proteice nespecifice

Fracii proteice specifice

Absen

Figura 5.13. Reprezentare schematic a spectrului electroforetic al liniilor parentale i

hibridului H 7
M, kDa

66,0__

45,0__
34,7__

.
24,0__
18,4__
14,3__

F1

Figura 5.14. Spectrul electroforetic al liniilor parentale i hibridului H 7

72

Cinci componeni polimorfi cu Mr 85,6; 70,1; 63,4; 42,5 i 28,5 kDa sunt prezeni n
profilul ambelor forme parentale inclusiv cel al hibridului. Diferenele calitative dintre
liniile homozigote i forma heterozigot se rezum la absena n spectrul hibridului a unei
fracii cu Mr 77,4 atestate la lina patern, trei cu Mr:121,5; 104,6; 31,5; prezente la forma
matern i una de 19,1 kDa depistat la ambii prini (fig. 5.13 i 5.14).

5.2. Analiza electroforetic a extractului sumar de proteine uor solubile la faza de

trei frunze adevrate
Spectrele polimorfe identificate la genotipurile heterozigote analizate, reflect starea
integral a genomului cu caracter adaptiv ca rezultat al variaiei de expresie i interaciunii
genelor n anumite combinaii generale i specifice a formelor parentale. Dup cum se
cunoate hibrizii cu efect de heterozis sunt superiori formelor parentale dup intensitatea
replicrii ADN-lui din primele etape ale dezvoltrii, reprezentnd att un indice al
intensitii de dividere a celulelor, ct i un criteriu de apreciere a metabolismului n
general.

5.2.1. Analiza calitativ a proteinelor la hibrizii cu productivitate nalt

Particularitile observate n analiza variabilitii polipeptidice la liniile, soiurile i
hibrizii de castravei n faza de plantul au motivat o investigarea ulterioar a spectrelor
polipeptidice n aspect comparativ a unui hibrid cu productivitate nalt H 274 i unul cu
productivitate sczut H 6 n raport cu hibridul omologat Vzglead la faza de trei frunze
adevrate. Includerea acestei faze ontogenetice n studiu a fost cu scopul de a pune n
eviden prezena/lipsa unor particulariti similare observate la nivelul proteinelor ca
produse ale activitii genelor la o etap mai intens a metabolismului i morfogenezei.
Separarea electroforetic monodimensional n condiii denaturante a extractului sumar
de proteine uor solubile obinut la aceast faza de cretere i dezvoltare a plantelor a pus n
eviden un spectru cu un numr mare de benzi constituind aproximativ 40 de fracii cu un
interval larg de greuti moleculare 10 - 200 kDa. Unele din ele prezente n concentraie
mare n zona medie i altele cu un coninut comparativ redus din regiunea superioar i

73

inferioar a spectrului face dificil analiza calitativ, necesitnd suplimentar i o analiza

densitometric, (fig. 5.16, 5.18, 5.20). Aceste profiluri electroforetice se deosebesc de cele
obinute din plantule etiolate printr-o pondere cantitativ nalt i o superioritate numeric a
fraciilor demonstrnd intensitatea i complexitatea proceselor metabolice determinat de
nutriia autotrof i intensitatea dezvoltrii la aceast etapa ontogenetic.
Au fost evideniate 15 fracii comune pentru hibrizi i ambele linii parentale n
combinaiile de ncruciare studiate cu Mr: 13,0; 17,3; 25,3; 27,6; 33,0; 35,6; 38,0; 50,0;
60,0; 69,2; 75,4; 78,0; 131,5; 188,5; 198,6 kDa ceea ce constituie aproximativ 40% din
numrul de benzi depistate, demonstrnd identitatea genetic a speciei.
Hibridul H 274 i liniile parentale. Densitograma i electroforegrama spectrului
electroforetic al hibridului i liniilor parentale indic o pondere cantitativ mai mare a
componenilor proteici cu mase moleculare mici 13 - 40 kDa la genotipul heterozigot n
comparaie cu aceast regiune la formele parentale. Linia patern n aceste zone ocup o
poziie intermediar iar la nivelul componenilor cu greutate molecular medie i mare 50200 kDa linia matern cantitativ este superioar att formei heterozigote ct i formei
paterne (fig. 5.15 i 5.16).
M, kDa
200__
120__
100__
70__
50__
40__
30__
25__
20__

15__

Martor F1

Figura 5.15. Electroforegrama proteinelor uor solubile totale a hibridului H 274 i

a liniilor parentale
Hibridul conine opt benzi polimorfe, dintre care trei (15,0; 18,5; 30,5 kDa) prezente i
la forma patern, dou (40,8; 98,3 kDa) - i la cea matern iar trei - specifice (12,0; 28,5;
74

80,1 kDa).

0,000

0,200

_____ - F1

0,400

_____ -

0,600

0,800

Rf
1,000

_____ -

Figura 5.16. Densitograma spectrului electroforetic la H 274 i liniile parentale

Liniile paterne au mai puine fracii polimorfe, n special linia matern, care conine
doar patru polipeptide: dou prezente i la hibrid, una comun cu linia patern i una
specific cu greutatea molecular mic 34,8 kDa. Linia patern se caracterizeaz prin cinci
benzi dintre care una 57,2 kDa nu se regsete n genotipul heterozigot (tab. 5.1).
Tabelul 5.1.
Variabilitatea fraciilor polipeptidice la hibrizii de castravei cu productivitate nalt i
sczut la faza de trei frunze
Modul de

Variabilitatea molecular a polipeptidelor la hibrizi cu:

motenire

F1

+
+
+
+

efect de heterozis

productivitate nalt,

productivitate sczut,

superior, 274

omologat, Vzglead

H6

198,6; 188,5; 131,5; 78,0; 75,4; 69,2; 60,0; 50,0; 38,0; 35,6; 33,0; 27,6; 25,3; 17,3; 13,0

15,0; 18,5; 30,5

18,5; 68,0;

15,0

34,8

67,0; 137,7

19,5

40,8; 98,3

26,0

58,0

39,0

23,5

12,0; 28,5; 80,1

28,5; 37,5

57,2

24,0

24; 68,0; 18,5

75

Este important de menionat c majoritatea benzilor polimorfe depistate la aceast

combinaie de linii parentale i la hibridul acestora la faza de trei frunze au greutatea
molecular medie i mic: 12 - 60 kDa (tab. 5.1).
Hibridul Vzglead i formele parentale. Formele parentale: soiul Beregovoi i linia
L371 se caracterizeaz prin prezena a cte trei componeni proteici polimorfi (tab. 5.1.,
fig. 5.17; 5.18.).
Mr, kDa
__200
__120
__100
__70
__50
__40
__30
__25
__20

__15

F1

Martor

Figura 5. 17. Electroforeza proteinelor totale la hibridul Vzglead

i liniile parentale
.

0,000

_____ - F1

0,200

_____ -

0,400

0,600

0,800

Rf
1,000

_____ -

Figura 5.18. Densitograma spectrului electroforetic a proteinelor totale

la hibridul Vzglead i liniile parentale

76

Genotipul heterozigot conine n spectru doi componeni cu Mr 28,5; 37,5 kDa, care
lipsesc la liniile parentale, doi cu Mr 18,5; 68,0 kDa motenite de la forma patern i doar
una din fraciile polimorfe cu Mr 26,0 kDa motenit de la mam (tab. 5.1).
Aceast microheterogenitate polipeptidic relevat n electroforegrame este evident i
din densitogram care denot lipsa unor diferene cantitative eseniale att ntre linii, ct i
n comparaie cu hibridul. Doar n regiunea fraciilor cu Mr 20-40 kDa se constat o variaie
a intensitii colorantului cu valori mai mari pentru hibrid (fig. 5.18).

5.2.2. Analiza calitativ a proteinelor la hibrizii cu productivitate sczut

Hibridul H 6 i liniile parentale. Fracionarea proteinelor sumare a genotipului
heterozigot indic un complex polipeptidic care include doi componeni polimorfi. De la
forma patern hibridul a motenit fracia de 15,0 kDa iar de la cea matern de 58,0 kDa (fig.
5.19.).
Mr, kDa
__200
__120
__100
__70
__50
__40
__30
__25
__20

__15

F1

Martor

Figura 5.19. Electroforeza proteinelor totale la hibridul H 6 i liniile parentale

77

Densitograma polipeptidelor fracionate indic o poziie intermediara a spectrului

electroforetic heterozigot n regiunea fraciilor cu Mr mare i mic i valori mai mici ale
intensitii benzilor cu greutatea molecular medie, (fig. 5.20).

0,000

_____ - F1

0,200

_____ -

0,400

0,600

0,800

Rf
1,000

_____ -

Figura 5.20. Densitograma spectrului electroforetic a proteinelor totale la hibridul H 6

i formele parentale

Linia matern se caracterizeaz printr-un coninut al benzilor mai mare n regiunea

greutilor moleculare de 100-200 kDa i aproximativ similar la nivelul greutilor
moleculare medii i mici. Aceast linie conine o fracie polimorf motenit i de hibrid
58,0 kDa, - una similar cu cea a liniei paterne de 23,5 kDa - i un compus specific de 19,5
kDa.

5.2.3. Aspecte comparative ale polimorfismului proteic la diverse genotipuri de

castravei
Abordarea polimorfismului din punct de vedere biochimic la nivel proteic la cinci linii
i dou soiuri, utilizate n diferite combinaii de obinere a hibrizilor de prima generaie la
dou faze ontogenetice a pus n eviden un tablou diferit de manifestare a acestora,
determinat de interaciunea i expresia difereniat a genelor. Profilul proteic al formelor
homozigote i heterozigote n faza de plantul a prezentat similitudine n greutate
molecular i coninut doar la nivelul a 12 fracii electroforetice din cele 30 depistate n

78

spectru, relevnd astfel un nivel nalt de heterogenitate polipeptidic. Modul de motenire a

celor 18 benzi polimorfe n combinaiile hibride indic o capacitate combinativ divers a
formelor homozigote, care se asociaz cu cea cuantificat la analiza diferitor indici ai
productivitii, relevat la nivelul caracterelor morfologice.
Prin nsumarea numrului total de cazuri (exprimat n %) n care s-a depistat prezena
componenilor electroforetici comuni pentru genotipurile homo- i heterozigote sau
caracteristici doar unora n cadrul unei combinaii de ncruciare s-a reuit evidenierea
anumitor particulariti specifice, relevnd valoarea diferit a capacitii combinative a
formelor parentale conjugate cu manifestarea efectul de heterozis (tab. 5.2).
Astfel, analiza comparativ a spectrelor polipeptidice demonstreaz un grad nalt de
heterogenitate polipeptidic la hibrizii experimentali H 273, H 274 i H 275, comparativ cu
cei omologai.
Tabelul 5.2.
Motenirea componenilor polipeptidici de ctre hibrizii de prima generaie
Modul de
motenire

Hibrizi cu:
efect de heterosiz superior
(H273, H274 i H275)

F1

+
+
+
+

productivitate nalt,
omologai
(Vzglead i Epilog)
*Nr. de cazuri n %

productivitate sczut
(H6 i H7)

7,41

33,3

33,3

18,5

8,3

8,3

5,6

2,8

11,1

27,8

11,1

11,1

5,6

20,4

5,6

3,7

8,3

11,1

* n analiz nu sunt incluse benzile comune (n numr de 12) pentru toate liniile, soiurile i hibrizii
investigai.

Numrul mare de fracii specifice genotipurilor heterozigote (n 20,4% cazuri) pe de o

parte i polimorfismul pronunat al liniilor parentale: L 222, L 226, L 216 i L 203,
79

determinat de un decalaj numeric esenial (primele trei linii conin 8-10 benzi polimorfe n
spectru iar ultima linie doar trei) pe de alt parte, indic asupra unui efect nalt al
CCG al liniilor conjugat cu heterozis superior celui constatat la hibrizii-martor.
Un nivel nalt de codominant este observat la hibrizii cu productivitate nalt
omologai - Vzglead i Epilog, rezultai prin ncruciarea liniei L371 cu soiurile
Beregovoi i respectiv Favorit relevat prin prezena benzilor cu greutate molecular
similar la formele homozigote i heterozigote. Motenirea codominanta a benzilor
polimorfe este constatat i la hibrizii experimentali cu productivitate sczut.
Acetia nu se deosebesc de hibrizii omologai nici dup valoarea procentual a
cazurilor de prezen a componenilor motenii de hibrid doar de la forma patern 8,3 % care constituie un indice a naturii hibride a plantei. n acelai timp spectrele
electroforetice ale hibrizilor cu productivitate nalt se deosebesc de cele ale
hibrizilor omologai i experimentali cu productivitate sczut dup un numr mai
mare de cazuri -18,5% unde s-a depistat motenirea de ctre hibridul de prima
generaie a componenilor electroforetici doar de la linia patern.
Liniile parentale luate n diferite combinaii de ncruciare se deosebesc prin
capacitatea combinativ general sau specific diferit la nivelul caracterelor
morfologice (cap. 4.). Acest efect al capacitii combinative se observ i la nivelul
spectrului polipeptidic care indic n 27,8% din cazuri fracii motenite de la linia
matern de ctre hibrizii experimentali cu productivitate nalt comparativ cu 11,1
% din cazuri constatate la hibrizii omologai. Important este faptul c la hibrizii cu
productivitate sczut nu s-a depistat nici un caz de prezen a unor benzi doar la
linia matern i hibrid. De asemenea, aceti hibrizi nu conin fracii specifice. O alt
deosebire relevant dintre hibrizii experimentali cu productivitate nalt i sczut
este faptul c doar n 5,6% / 3,7% din cazuri hibrizii nalt productivi nu motenesc
toi componenii prezeni la unul din prini - forma matern/patern. Pe cnd, n
11,1% din cazuri unele fracii sunt prezente doar la forma matern sau patern i
lipsesc la hibrizii cu productivitate sczut.
Linia 203 utilizat n trei combinaii de ncruciare cu L 222, L 226 i L 216
manifest CCG i CCS nalt. Este important de menionat i faptul c aceast linie
utilizat n calitate de linie matern sau patern relev anumite caracteristici

80

electroforetice specifice. De exemplu, fiind ncruciat n calitate de linie matern

cu linia L 216 genotipul heterozigot motenete de la aceast linie dou fracii cu
Mr 63,4 i 19, 1 kDa din cele trei benzi polimorfe prezente n profilul proteic al
acestea. Fiind combinat n calitate de linie patern cu L 222 genotipul heterozigot
conine de asemenea aceste benzi care de altfel sunt prezente i la linia matern iar
ncruciat cu linia L 226 hibridul conine o band caracteristic pentru toi aceti
trei hibrizi cu productivitate nalt 63,4 i banda cu Mr 90 kDa care lipsete n
primele dou combinaii. Componentul cu greutatea molecular mic de 19,1 kDa
nu se regsete n hibridul H 275 similar hibridului H 274 i H 273.
Linia L 222 cu CCG nalt manifest un efect redus al capacitii combinative
n combinaii specifice cu soiurile Beregovoi i Favorit, rezultnd hibrizi cu
productivitate sczut. Aceast linie conine 8 benzi polimorfe dintre care n cazul
ncrucirii cu soiul Beregovoi dou cu Mr 63,4; 42,5 kDa nu sunt motenite de
hibrid H6 iar n combinaie cu soiul Favorit patru cu Mr: 121,5; 104,6; 31,5; 19,1
kDa nu sunt depistate la genotipul heterozigot H7.
Analiza fraciilor electroforetice a proteinelor la faza de trei frunze a
demonstrat n linii generale aceleai particulariti privind heterogenitatea
polipeptidic a liniilor parentale i hibridului corelat cu manifestarea unui efect
superior de heterozis n cazul unor combinaii asociative a genelor. Faptul c
spectrul hibridului H6 pare similar dup complexitate cu cel al hibridului Vzglead,
iar efectul de heterozis este mic nu este surprinztor deoarece complexitatea
polipeptidic reprezint n primul rnd un indice a heterozigoiei i nu a unui efect
de heterozis.
n concluzie o particularitate general distinctiv dintre hibrizii experimentali
cu productivitate nalt i sczut este gradul nalt al diferenelor dintre liniile
parentale precum i capacitatea combinativ general i specific nalt relevat
prin lipsa cazurilor n care componenii prezeni la ambii prini s nu fie depistai
la genotipul heterozigot.

81

Capitolul 6. STUDIUL COMPARATIV AL POLIMORFISMULUI

GENETIC LA PLANTELE DE CUCUMIS SATIVUS L.
Identificarea polimorfismului genetic n scopul clasificrii diferitor genotipuri,
aprecierii diversitii genetice, selectrii caracterelor calitative i cantitative i alegerii
formelor parentale prezint o importan deosebit n procesul de obinere a hibrizilor nalt
productivi.

6.1. Optimizarea condiiilor de analiz RAPD la castravei

Analiza RAPD reprezint o tehnic rapid de identificare a polimorfismului genomic
prin utilizarea unei oligonucletide primer pentru secvene de ADN arbitrare ntr-o reacie
de polimerizare n lan (PCR -Polymerase Chain Reaction). Aceast tehnic este pe larg
utilizat datorit analizei unui numr considerabil de loci n diferite regiuni ale genomului
fr o cunoatere prealabil a secvenelor din genom i avnd la dispoziie cantiti foarte
mici de matri (nanograme). Prin PCR-RAPD poate fi analizat oricare genom dac ADN-ul
izolat este de calitate bun, nedegradat.
ADN-ul din castravei extras cu reagentul- kit DNAzol i prin metoda standard cu
utilizarea CTAB-lui a fost cuantificat prin electroforez i msurare spectrofotometrtic,
prezentnd o calitate mai bun a probelor de acizi nucleici, izolate cu kit (fig. 6.1). Raportul
260/280 a fost n limita valorilor 1,6 -1,9 iar coninutul ADN n proba a variat de la 238-455
ng/l.
Pentru analiza RAPD a polimorfismului genetic au fost luate n studiu doi hibrizi
experimentali cu productivitate nalt H 273 i H 274 n raport cu doi hibrizi omologai i
experimentali cu productivitate sczut respectiv i formele parentale . S-a decis de a
investiga polimorfismul genetic la aceste combinaii de ncruciare deoarece au forme
parentale comune (fig. 6.2).

82

Favorit

Beregovoi

L 371

L 216

L 226

L 203

L 222

Formele parentale

H7

H6

Epilog

Vzglead

H274

H 275

H 273

Hibrizii F1

Figura 6.1. Electroforeza n gel de agaroz de 1% a ADN-lui izolat din plantule de

castravei cu DNAzol

Hibrizi omologai cu
productivitate nalt

Hibrizi experimentali
cu productivitate nalt

H 274

L 216

/ L 203

Hibrizi experimentali
cu productivitate joas

Vzglead

H6

Beregovoi
L 371

L 222
H 273
H7

Favorit
Epilog

Figura 6.2. Reprezentare schematic a combinaiilor dintre formele parentale

n calitate de amors n reacia de amplificare au fost utilizai opt primeri-decameri cu

un coninut nalt al bazelor G i C de 60 80% (tab. 7.1.) Experimentarea mai multor
raporturi cantitative matri/ primeri (100ng/250 pmol; 100ng/150 pmol i 50ng /25 pmol)
i a trei temperaturi de aliniere: 36, 37i 390 C a demonstrat rezultate mai bune la utilizarea

83

a 50 ng ADN i amplificat cu 25 pmol de primer arbitrar la o temperatur de aliniere 360 C

n volum total de reacie - 25 l.

Tabelul 6.1.
Secvenele primer utilizate n analiza RAPD

Primer

Secvena nucleotidic
5`-3`

Coninutul % GC

P28

GACCGCTTGT

60

P36

CCGAATTCGC

60

P37

CTGACCAGCC

70

P43

AGTCAGCTGC

60

P44

GGACCCCGCC

90

P46

GGTTGGGGAG

70

P48

GCGGTGCTCG

80

P49

GACAGCCTA

60

Toi primerii testai au prezentat amplificare, rezultnd un numr variabil de

ampliconi. Prin amplificarea cu primerii P28, P36, P37 i P44 s-au obinut 6-12 benzi n
funcie de primer i genotip. Primerii P43, P46, P47, P49 au generat un profil cu cte 1-4
benzi comune pentru toate genotipurile homo- i heterozigote studiate: P43 470; P46500;
P46290; P46180; P47480; P47290; P47150; P49920; P49800; P49750; P49600; (fig. 6.3. A; B; C;
D).
n paragrafele ulterioare for vi analizai doar produsele de amplificare obinui cu
primerii care au manifestat specificitate de genotip fiind mai informativi.

84

6.2. Analiza polimorfismului genetic la hibrizii cu productivitate nalt

Analiza produselor RAPD cu primerii: P28, P36, P37 i P44 a pus n eviden profile
electroforetice heterogene att dup greutatea molecular a ampliconilor, ct i dup
intensitatea fluorescenei determinat de bromura de etidiu, sugernd cantiti diferite ale
produsului de amplificare.
Profilul hibrizilor experimentali cu productivitate nalt obinut n rezultatul reaciei
PCR cu primerul P28 (5`-GACCGCTTGT-3`) a prezentat 12 ampliconi cu lungimi de 130830 pb (fig. 6.4. i 6.5). Genotipurile formelor parentale ale hibrizilor H 274 i H 273
conin trei ampliconi comuni: P28480, P28500 i P28600, ultimii doi variind dup intensitatea
fluorescenei n funcie de genotip. Restul 9 produse de amplificare cu acest primer au
prezentat un polimorfism estimat prin prezen/absen i inclusiv luminozitate.

85

P28: 5`-GACCGCTTGT-3`

830

800

730

700

600

500

480

400

310

300

270

130

F1 Mr, pb

830

800

Hibridul 273
L 203 x L 222
730

700

600

500

480

400

310

300

270

130

Hibridul 274
L 216 x L 203

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.4. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P28 la hibrizii
nalt productivi i formele parentale

Liniile homozigote patern i matern a hibridului 274 s-au caracterizat prin dou
(P28130; P28270) i respectiv una (P28300) benzi polimorfe, toate trei fiind cu fluorescen
slab. Linia patern a hibridului 273 este similar liniei materne a F1 274 (L 203). Cealalt
linie parental a acestui hibrid L 222 conine dou benzi polimorfe dintre care una
similar dup dimensiune cu linia patern P28270 a F1- 274 i una cu greutate molecular
medie 700 pb (fig. 6.4. i 6.5).
1500_
1000___
700_
500____
300__

100____

M, pb

Figura 6.5. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P28 la hibrizii nalt
productivi i formele parentale
M-martor; 1- L216; 2-H 274; 3-L203; 4-H 273; 5-L222

86

Hibrizii 274 i 273 conin ase i respectiv 4 locusuri polimorfe. Forma heterozigot
274 a motenit de la linia patern doi componeni polimorfi P28130 i P28270 iar restul patru
ampliconi unul cu greutate molecular mic - P28310 i trei cu greutate molecular medie:
P28700; P28800 i P28830 sunt specifici. Spre deosebire de primul hibrid analizat, H 273
conine doi ampliconi P28270 i P28700 prezeni i la linia matern i doi P28310 i P28400 care
lipsesc la ambele linii homozigote parentale.
O particularitate deosebit a acestor hibrizi este i faptul c ampliconul P28300 prezent
n profilul L 203 nu este motenit de nici unul dintre ei.
Studiul polimorfismului molecular prin intermediul secvenelor de ADN amplificate
arbitrar cu primerul P36 (5`-CCGAATTCGC-3`) a relevat prezena a 7 fragmente de
amplificare, cu lungimea de 450-950 pb (fig. 6.6 i 6.7).

Analiza RAPD a H 274 i a formelor parentale

a constatat ase benzi cu masa

molecular cuprins ntre 550 - 850 pb. Similar primerului analizat P28, trei ampliconi cu
aceeai greutate molecular, ns diferii dup coninut au fost comuni pentru formele
homo- i heterozigote. Forma parental 203 comun ambelor combinaii de ncruciare nu
conine ampliconi specifici. Celelalte dou forme parentale ale hibrizilor analizai se
deosebesc ntre ele att prin numrul benzilor polimorfe, ct i dup intensitatea
fluorescenei.

87

1500_
1000___
700_
500____
300__
200____

M, pb

Figura 6.7. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P36 la hibrizii nalt productivi i
formele parentale
M-martor; 1- L216; 2-H 274; 3-L203; 4-H 273; 5-L222

Linia patern a hibridului H 274 conine dou benzi polimorfe P36800 i P36900, ns
cea matern a hibridului H 273 o singur fracie P36900 (fig. 6.6 i 6.7). Spectrele
electroforetice ale

hibrizilor au nsumat ampliconii depistai la prini cu excepia

ampliconului P36800 care lipsete din profilul H 274. La acest hibrid s-a depistat un
amplicon absent la formele parentale - P36950. Hibridul H 273 de asemenea conine un
amplicon specific cu greutatea molecular de 450 pb.
Primerul 37 (5`-CTGACCAGCC -3`) a generat profile cu ase secvene
polinucleotidice dintre care dou comune pentru genotipurilor studiate: P37280 i P371300.
Aceti ampliconi se deosebesc ntre ei dup coninut.

P37280 s-a remarcat printr-o

fluorescen mai intens comparativ cu ampliconul cu greutate molecular mare - P371300.

Majoritatea benzilor polimorfe au fost de o intensitate medie a luminozitii (fig. 6.8 i 6.9).
Linia 203 s-a evideniat printr-o singur band polimorf (P37480) care este motenit i de
H 274. Linia patern a acestui hibrid conine doi ampliconi specifici P37560, i P37900 care de
asemenea sunt regsii n profilul genotipului heterozigot. H 274 se deosebete de ambele
linii parentale prin prezena produsului de amplificare P37600.

88

Electroforegramele produselor de amplificare ADN a hibridului 273 i formelor

parentale au pus n eviden cinci benzi cu masa molecular cuprins ntre 280-1300 pb.
Forma matern se deosebete de cea patern prin prezena a dou benzi polimorfe cu
greutate molecular medie: P37560 i P37900 cu o intensitate slab a luminozitii (fig. 6.9).
Spre deosebire de H274 forma heterozigot

H273 nu are benzi specifice, toi cinci

ampliconi sunt motenii de la prini.

1500_
1000___
700_
500____
300__
200____

M, pb

Figura 6.9. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P37 la hibrizii nalt productivi i
formele parentale
M-martor; 1- L216; 2-H 274; 3-L203; 4-H 273; 5-L222

89

Spectrele electroforetice obinute n rezultatul PCR cu primerul P44 au prezentat

un polimorfism mai pronunat determinat att de genotip homo- sau heterozigot, ct i de
modul de asociere n combinaii de ncruciare ale liniilor homozigote. Acest primer a
generat 12 componeni polinucleotidici cu dimensiuni de 100- 1000 pb variabili n coninut
(fig. 6.10 i 6.11).

P44: 5`-GGACCCCGCC -3`

1000

900

800

650

500

400

380

330

250

200

180

100

F1 Mr, pb

1000

900

Hibridul H 273
L 203 x L 222
800

650

500

400

380

330

250

200

180

100

Hibridul H 274
L 216 x L 203

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.10. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P44 la hibrizii
nalt productivi i formele parentale

Profilele RAPD ale primerului P44 au demonstrat trei produi de amplificare comuni
pentru formele parentale i hibrizii de prima generaie . Acetia sunt P44100, P44250 i P44650.
Genotipul heterozigot H 274 s-a caracterizat prin prezena a patru benzi polimorfe:
P44800 specific,

P44200, P44500

prezente i la formele homozigote,

i P441000 cu

dimensiunea de 1000 pb motenit de la linia de mam. Linia patern are dou benzi
polimorfe cu dimensiunea de 200 i 500 pb. Linia matern este mai heterogen, prezentnd
patru benzi polimorfe dintre care banda de 330 pb n lungime este specific, lipsind la tat i
la hibrid.
Linia matern a hibridului H 273 de asemenea conine patru benzi polimorfe, ns nici
una dintre ele nu este specific. Toate secvenele sunt prezente i n genotipul homozigot
patern (P44200, P44500 ) sau n cel heterozigot (P44380, P44400 ).

90

1500_
1000__
700_
500____
300__
200____
100_

M, pb

Figura 6.11. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P44 la hibrizii nalt
productivi i formele parentale
M-martor; 1- L216; 2-H 274; 3-L203; 4-H 273; 5-L222

Genotipul H 274 se caracterizeaz prin prezena a cinci compui polimorfi dintre care
doi sunt specifici cu dimensiunea de 180 pb i 900 pb.

6.3. Diversitatea genetic n cadrul hibrizilor omologai i formelor parentale

Analiza comparativ a spectrelor electroforetice a hibrizilor Vzglead i Epilog inclusiv
a formelor parentale ale acestora demonstreaz, c produsele de amplificare a ADN cu
primerul P28 s-au separat n ase i respectiv apte componeni electroforetici, dintre care
patru au fost polimorfi. Lungimea fragmentelor de amplificare a fost cuprins n limitele
270-730 pb (fig.6.12. i 6.13.).
Ampliconii P28480; P28500 i P28600 comuni pentru

genotipurile hibrizilor cu

productivitate nalt sunt prezeni i la aceste genotipuri heterozigote i homozigote, care de

asemenea variaz dup intensitatea luminozitii benzilor n cadrul unei combinaii de
ncruciare. n aspect comparativ formele parentale ale hibrizilor omologai se deosebesc de
cele ale hibrizilor H 274 i H 273 prin faptul, c toi aceti ampliconi sunt de o intensitate
mai mare a luminozitii la ambii hibrizi.

91

Forma matern a hibrizilor nu conine benzi specifice spre deosebire de formele

paterne care prezint un amplicon P28270 n cazul soiului Beregovoi i doi ampliconi P28700
i P28730 n cazul soiului Epilog (fig. 6.13.).
1500_
1000___
700_
500____
300__

100____

M, pb

Figura 6.13. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P28 la hibrizii nalt productivi
omologai i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- Vzglead; 3-L 371; 4-Epilog; 5-L222

Genotipul heterozigot Vzglead conine trei benzi polimorfe dintre care P28270 prezent
i la forma patern i doi ampliconi P28310 i P28700 care lipsesc la liniile parentale.
Hibridul Epilog are un profil similar cu cel al hibridului Vzglead. Acesta nu conine
ampliconul P28730 prezent la linia patern.
92

Primerul arbitrar P36 a produs 5 ampliconi: trei comuni i patru polimorfi cu masa
molecular cuprins ntre 450-950 bp (fig.6.14. i 6.15.). Electroforegramele produselor de
amplificare ADN ale hibridului Vzglead i formelor parentale au evideniat o band
specific cu greutatea molecular 450 bp la linia matern, lipsa componenilor specifici la
forma patern i prezena unui amplicon specific cu lungimea de 900 pb la hibrid.

P36: 5`-CCGAATTCGC-3`

950

900

800

720

670

550

450

950

F1 Mr, pb

Hibridul Epilog
Favorit x L371
900

800

720

670

550

450

Hibridul Vzglead
Beregovoi x L371

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.14. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P36 la

hibrizii nalt productivi omologai i formele parentale

La nivelul spectrelor electroforetice ale liniilor parentale a hibridului Epilog nu au

fost relevate deosebiri calitative.

ns, spre deosebire de hibridul Vzglead, genotipul

heterozigot Epilog a motenit toi componenii de la prini.

1500_
1000___
700_
500____
300__
100____

M, pb

Figura 6.15. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P36 la hibrizii nalt productivi
omologai i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- Vzglead; 3-L 371; 4-Epilog; 5-L222

93

Genotipurile de castravei studiate prin intermediul analizei PCR-RAPD cu primerul

P37 au fost caracterizate prin 5 locusuri, lungimea ampliconilor incluzndu-se n limita de
valori ale greutii moleculare 280-1300 pb. Spectrele ampliconilor RAPD ale ambelor
combinaii de ncruciare au constatat dou benzi nespecifice cu masa molecular 280
i1300 pb i trei benzi polimorfe P37480, P37560 i P37 900 (fig.6.16. i 6.17.).

P37: 5`-CTGACCAGCC -3`

1300

900

600

560

480

F1

280

Mr, pb

Hibridul Epilog
Favorit x L371
1300

900

600

560

480

280

Hibridul Vzglead
Beregovoi x L371

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.16. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P37 la hibrizii
nalt productivi omologai i formele parentale

Paternele produselor de amplificare ale hibrizilor sunt asemntoare, cu excepia

faptului, c hibridul Vzglead conine ampliconul P37900 iar hibridul Epilog - P37560 care
lipsesc la prini.
1500_
1000___
700_
500____
300__
100____

M, pb

Figura 6.17. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P37 la hibrizii nalt productivi
omologai i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- Vzglead; 3-L 371; 4-Epilog; 5-L222

94

ADN-ul acestor dou familii amplificat cu primerul RAPD P44 a prezentat apte
benzi. Spre deosebire de formele parentale a hibrizilor experimentali cu productivitate
nalt, n profilul obinut cu acest primer s-au depistat 5 benzi comune formelor homo- i
heterozigote, inclusiv ampliconul P44500 care a prezentat polimorfism de prezen/absena la
primele combinaii de ncruciare analizate (fig.6.18. i 6.19.).

1500_
1000___
700_
500____
300__
100____

M, pb

Figura 6.19. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P 44 la hibrizii nalt

productivi omologai i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- Vzglead; 3-L 371; 4-Epilog; 5-L222

Hibridul Vzglead are trei benzi polimorfe dintre care dou sunt prezente i la forma
matern. Spre deosebire de acesta hibridul Epilog nu conine aceti ampliconi.

95

6.4. Analiza polimorfismului genetic la hibrizii cu productivitate sczut

Analiza spectrelor RAPD la hibrizii H 6 i H 7 i a formelor parentale cu primerul
P28 a stabilit prezena diferenelor calitative i cantitative. Genotipul matern comun ambilor
hibrizi a fost caracterizat prin doi ampliconi polimorfi: P28270 i P28700. Formele paterne se
deosebesc de cea matern prin lipsa fraciilor P28700 n cazul hibridului H 6 i lipsa P28270
corelat cu prezena ampliconului P28730 n cazul hibridului H 7 (fig. 6.20. i 6.21.).
P28: 5`-GACCGCTTGT-3`

830

800

730

700

600

500

480

400

310

300

270

130

F1 Mr, pb

830

Hibridul H 7 i liniile parentale

Favorit x L222
800

730

700

600

500

480

400

310

300

270

130

Hibridul H 6 i liniile parentale

Beregovoi x L222

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.20. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P28 la hibrizii
cu productivitate sczut i formele parentale
1500_
1000___
700_
500____
300__
100____

M, pb 1
2
3
4
5
Figura 6.21. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P 28 la hibrizii cu
productivitate sczut i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- H6; 3-L 222; 4-H 7; 5- Favorit

Hibrizii H 6 i H 7 se caracterizeaz prin prezena a trei i doi ampliconi polimorfi. O

particularitate distinctiv n acest caz este faptul c P28270 este prezent la formele parentale
ale H 6 iar P28700 la cele ale hibridului H 7.
96

Hibrizii ntre ei se deosebesc la nivelul ampliconului cu dimensiunea de 310 pb care

este prezent la H6 i lipsete la H7, inclusiv i variaii cantitative ale ampliconilor
nespecifici (fig.6. 20).
Paternele ampliconilor obinute prin amplificarea cu primerul P36 sunt caracterizate
prin prezena a trei benzi nespecifice prezente la toate genotipurile analizate indiferent de
combinaia de ncruciare, o band polimorf la hibridul H6 cu greutatea molecular de 900
pb, care de altfel se conine i la linia matern i un amplicon specific P36450 n cazul
hibridului H7 (fig.6.22. i 6.23.).

P36: 5`-CCGAATTCGC-3`

950

900

800

720

670

550

450

Mr, pb

F1

950

Hibridul H 7 i liniile parentale

Favorit x L222
900

800

720

670

550

450

Hibridul H 6 i liniile
parentale
Beregovoi x L222

Ampliconi cu o intensitate a fluorescenei: mic

medie

mare

Figura 6.22. Reprezentare schematic a spectrului RAPD generat de primerul P36 la

hibrizii cu productivitate sczut i formele parentale

n majoritatea cazurilor profilul ADN a hibridului de prima generaie nsumeaz

fragmentele nregistrate la ambele linii homozigote.
1500_
1000___
700_
500____
300__
100____

M, pb 1
2
3
4
5
Figura 6.23. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P 36 la hibrizii cu
productivitate sczut i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- H6; 3-L 222; 4-H 7; 5- Favorit

97

La nivelul spectrelor ampliconilor obinui cu primerul P37 s-au constatat prezena a

dou benzi nespecifice i trei secvene de ADN polimorfe cu lungimea de 480pb, 560 i
900pb (fig. 6.24. i 6.25.).

Analiza hibrizilor H 6 i H 7 reprezint similaritate la nivel tuturor produselor de

amplificare, nsumnd ampliconii de la formele parentale.
1500_
1000___
700_
500____
300__
200____

M, pb

Figura 6.25. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P 37 la hibrizii cu

productivitate sczut i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- H6; 3-L 222; 4-H 7; 5- Favorit

Profilul RAPD generat de primerul 44 a demonstrat aceeai heterogenitate comparativ

cu ceilali primeri, observat la analiza hibrizilor cu productivitate nalt. Spre deosebire de
98

hibrizii experimentali cu productivitate nalt, ns similar celor omologai, n profilul

obinut cu acest primer s-au depistat 5 benzi comune formelor homo- i heterozigote,
inclusiv ampliconul P44500 care a prezentat polimorfism de prezen/absena la primele
combinaii de ncruciare analizate (fig.6.26. i 6.27.).

Hibridul H 6 are dou benzi polimorfe care lipsesc la ambii prini: P44330, P441000. Spre
deosebire de H 6 hibridul H 7 nu conine ampliconi specifici.
1500_
1000___
700_
500____
300__
200____
100_

M, pb

Figura 6.27. Profilul electroforetic RAPD generat de primerul P 44 la hibrizii cu

productivitate sczut i formele parentale
M-martor; 1- Beregovoi; 2- H 6; 3-L 222; 4-H 7; 5- Favorit

99

n cazul acestui hibrid s-au nregistrat doar benzi nespecifice, comune pentru toate
genotipurile luate n studiu. De asemenea, din profilul su lipsesc ampliconii cu dimensiunea
de 380 i 400 pb prezeni la linia matern. Aceti ampliconi nu se conin nici n spectrul
produselor RAPD a genotipului heterozigot H 6.

6.5. Aspecte comparative ale polimorfismului genetico-molecular la diverse

genotipuri de castravei
Analiza RAPD a doi hibrizi experimentali cu productivitate nalt n raport cu hibrizii
omologai i experimentali cu productivitate sczut, inclusiv formele parentale a permis s
constatm heterogenitatea materialului ameliorativ dup numrul de locusuri, dimensiune i
coninut. Produsele de amplificare generate de opt primeri-decameri au fost reprezentate de
ampliconi cu dimensiuni variabile de 100-1300 pb. Primerii P43, P46, P48, P49 au produs
pattern-uri cu 1-4 benzi similare pentru toate genotipurile homo- i heterozigote studiate,
spre deosebire de P28, P36, P37 i P44 care au demonstrat un polimorfism genetic n
funcie de primer i genotip. Screening-ul primerilor RAPD investigai a relevat

26

locusuri polimorfe cu o frecven diferit a prezenei n cadrul genotipurilor analizate (tab.

6.2).
Tabelul 6.2
Polimorfismul RAPD la diferite genotipuri de castravei
Primeri
P28

Nr. total de
ampliconi
12

P36

P37

P44

12

Ampliconi polimorfi Frecven (%)

Ampliconi
nespecifici
P28480
P28500
P28600
P36550
P36670
P36720
P37280
P371300
P44100
P44250
P44650

P281301,3
P282707,9
P283001,3

P283103,3
P284000,6
P287006,6

P364503,3
P368000,6

P369007,9
P369500,6

P374807,9
P375607,9
P441800,6
P4420011,3
P443303,9

P376000,6
P379007,3
P443802,0
P444002,6
P4450011,3

P287301,3
P288000,6
P288300,6

P448000,6
P449000,6
P4410005,3

Cei mai informativi au fost primerii P28 i P44, indicnd cel mai nalt polimorfism
molecular. Ampliconii: P28830; P28400; P28800; P36800; P36950; P37600; P44800; P44180 i P44900
au cea mai mic frecven (%) de a se ntlni n genom, sugernd asupra unui grad nalt de

100

specificitate genotipic.
Nivelul polimorfismului difer de la un genotip la altul, cel mai nalt grad al diversitii
genetice a fost nregistrat la hibrizii cu un heterozis superior, iar cel mai mic la hibrizii cu
productivitate sczut n special la H 7 (tab. 6.3.).
Tabelul 6.3.
Heterogenitatea genetic la diferite genotipuri de castravei
Genotip
F1

efect de heterosiz
superior
( H274 i H273)
P44200
P44500

P28130
P28270
P37560
P37900
P28300
P28310
P44330
P37480
P36900
P441000

+
P37600
P28700
P28800
P44800
P28830
P36950
P36800

Hibrizi cu:
productivitate nalt,
omologai
(Vzglead i Epilog)
Ampliconi

productivitate sczut
(H6 i H7)

P44200
P44500

P44200
P37480
P44500

P44200 P28270
P44500
P37560

P37480
P441000

P28270
P37560

P28700
P36900
P37900

P37560

P44200
P44500
P28700
P36900
P37900
P37480

P36450

P44330
P441000

P44380
P44400

P44380
P44400

P28270
P44380
P44400
P37560
P28700
P36900
P37900
P44200
P44500
P44180
P28310
P28400
P36450
P44900

P37480
P44330
P441000

P36450

P28700
P36900
P37900

P28270

P28310
P28700
P36900

P28310
P28270
P37560

P28310
P44330
P37480
P44500

P36450

P28300
P44330

P37900

P28730

P28730

* n analiz sunt inclui doar ampliconii polimorfi

Analiza comparativ a profilurilor RAPD la genotipurile homozigote a demonstrat c

formele parentale ale hibrizilor H 6 i H 7 au fost cele mai asemntoare din punct de
vedere genetic, diferene mai mari fiin observate la liniile parentale ale hibrizilor cu
productivitate nalt. n majoritatea cazurilor ampliconii PCR au fost motenii dup tipul
dominanei sau codominanei.

101

SINTEZA REZULTATELOR
Analiza comparativ a apte grupe de genotipuri de castravei cu diferite nivele de
productivitate a pus n eviden o variabilitate specific nalt a indicilor genetico-fiziologici,
studiai, relevnd un anumit grad al CCG i CCS asociat cu heterozisul. Superioritatea
hibrizilor de prima generaie a fost determinat preponderent de dezvoltarea somatic a
acestora reflectat prin acumularea biomasei, activitatea enzimatic sporit a catalazei,
demonstrnd o capacitate nalt de adaptare a plantelor i vigurozitatea acestora.
Abordarea polimorfismului din punct de vedere biochimic la nivelul componenilor
electroforetici

a relevat cel mai nalt grad de heterogenitate polipeptidic la hibrizii

experimentali H 273, H 274 i H 275 n raport cu cei omologai i cei cu productivitate

sczut. Numrul mare de fracii specifice (n 20,4% cazuri) i predominarea profilului
electroforetic al formelor hibride cu componeni de o intensitatea mai mare a colorantului
demonstreaz activitatea funcional a genomului ca rezultat al unor efecte de
complementaritate, integrare i compensatorii, determinate de interaciuni asociative
favorabile a genelor structurale i reglatoare, care asigur manifestarea fenomenului de
heterozis, fapt confirmat de numeroase date privind acest fenomen corelat cu diferii indici
ai proceselor metabolice i morfogenetice [4, 6,15, 18, 38, 40, 41]. De exemplu, se
consider c la ncruciarea a dou linii consangvinizate are loc n primul rnd, mbogirea
sistemelor enzimatice ca rezultat al nsumrii genelor codificatoare de izoenzime iar n al
doilea, formarea moleculelor hibride de enzime, in special a celor cu structur cuaternar, cu
o mai mare activitate enzimatic. Aceste efecte se obin n cazul unor combinaii favorabile
a genelor structurale i reglatoare n stare heterozigot [45, 47, 88]. De asemenea o
caracteristic important a organismului heterozigot reprezint complexitatea nalt a
proteinelor genetic polimorfe, care formeaz baza molecular a organizrii biostructurilor
macromoleculare ale citoplasmei i nucleului celulei [23, 25, 27, 35, 122, 123, 127].
O particularitate general distinctiv dintre hibrizii experimentali cu productivitate
nalt i sczut utilizai n acest studiu constituie gradul nalt al diferenelor dintre liniile
parentale precum i capacitatea combinativ general i specific nalt relevat prin lipsa
cazurilor n care componenii prezeni la ambii prini s nu fie depistai la genotipul
heterozigot. De asemenea pot fi menionate i numrul mare de componeni noi care apar la
acetia demonstrnd un nivel mai mare al plasticitii funcionale.
102

Aspecte similare ale heterogenitii polipeptidice au fost constatate i la nivelul

profilurilor RAPD. Formele parentale ale hibrizilor H 6 i H 7 cu productivitate sczut au
fost cele mai asemntoare din punct de vedere genetic, iar diferenele mai mari au fost
nregistrate la liniile parentale ale hibrizilor cu productivitate nalt. n majoritatea cazurilor
ampliconii PCR au fost motenii dup tipul dominanei sau codominanei.
Astfel, generaliznd rezultatele obinute n cadrul prezentei lucrri putem conchide, c
cel mai nalt efect de heterozis, constatat la hibrizii experimentali cu productivitate nalt
este determinat de ncruciarea liniilor, care se deosebesc dup structura regiunilor active
din genom i activitatea de sintez a fraciilor proteice. Posibil, ca diferenele calitative
constatate n spectrul electroforetic al proteinelor precum i cel al ampliconilor RAPD-PCR
reprezint una din condiiile de manifestare a aditivitii cu aciune modificatoare a genelor
i compensaie reciproc a locusurilor activi funcional, de efectul asocierii crora depinde
manifestarea efectului de heterozis.

103

CONCLUZII
1. Analiza comparativ a parametrilor morfofiziologici i biochimici la cei apte
hibrizi de Cucumis sativus L. permite separarea lor n grupe cu nivel diferit de manifestare a
heterozisului, care coreleaz cu productivitatea acestora n condiii de ser i n cmp i
care este nalt semnificativ pentru indicii ce determin creterea intens a organelor
vegetale, fapt care relev ponderea major a heterozisului somatic n manifestarea vigorii
hibride.
2. S-a constatat, c linia L 203 prezint cel mai mare spectru de efecte favorabile ale
capacitii

de

combinare

general

specific

dup

majoritatea

caracterelor

morfofiziologice i biochimice, fiind urmat de L 371, iar linia L 222 i soiurile Beregovoi
i Favorit au nregistrat valori negative sau mult mai joase ale CCG i CCS.
3. Analiza SDS-PAGE a proteinelor uor solubile a stabilit un polimorfism proteic
variat n funcie de genotip i relev prezena a 30 benzi polipeptidice, dintre care 18 au fost
polimorfe iar 12 polipeptide nespecifice.
4. Profilul fraciilor polimorfe n cazul hibrizilor experimentali cu productivitate nalt
se deosebete esenial (20,4% polipeptide specifice n F1) de cel constatat la hibrizii
omologai (5,6% polipeptide specifice n F1) i cu productivitate sczut (0 % polipeptide
specifice n F1), rezultate, care relev interaciunea aditiv i dominant a genelor i indic
asupra posibilitilor de apariie a transgresiilor pozitive n generaiile urmtoare.
5. Analiza spectrelor electroforetice ale ampliconilor RAPD-PCR la 12 genotipuri de
castravei cu opt primeri arbitrari a permis s

constatm o heterogenitate nalt a

materialului ameliorativ, care reflect structura genotipic a liniilor i hibrizilor inclui n

cercetare. Cel mai nalt grad al diversitii genetice a fost pus n eviden la H 273, iar cel
mai mic la H 7.
6. Patru primeri arbitrari au pus n eviden

1-4 ampliconi identici pentru toate

genotipurile, iar ali patru au manifestat un nalt grad de polimorfism. Primerul P28 i P44
relev cel mai nalt polimorfism molecular. Ampliconii: P28830; P28400; P28800; P36800;
P36950; P37600; P44800; P44180 i P44900 au cea mai mic frecven de prezen n genomul
castraveilor, sugernd asupra unui grad nalt de specificitate genotipic.

104

RECOMANDRI PRACTICE
Materialele prezentate scot n eviden polimorfismul genetic al materialului
ameliorativ prin analiza caracterelor la nivel morfologic, biochimic i molecular, rezultate
ce pot fi valorificate n ameliorarea plantelor de cultur, ntruct ofer posibiliti de
prognoz a efectului de heterozis la o etap incipient de cretere a plantelor.
Liniile L 203 i L 371 au pus n eviden valori superioare ale capacitii combinative
dup majoritatea indicilor cercetai i sunt recomandate amelioratorilor pentru includerea lor
n procesul de ameliorare la heterozis.
Tot odat, lucrarea n ansamblul ei constituie un suport metodologic i tiinific n
predarea cursurilor de Genetic i Ameliorare a plantelor, precum i a cursurilor speciale,
pentru o explicaie mai detaliat a fenomenului de heterozis i poate fi utilizat n instruirea
studenilor.

105

BIBLIOGRAFIE
1. ALTUKHOV Yu.P. Allozyme heterozygosity, sexual muturation rate and longevity. Rus.
J. Genetics, 1998, vol. 34, Nr. 7, p. 751760.
2. BAKER R.J. Issues in diallel analysis. Crop Sci., 1978, vol. 18, p. 533536.
3. BALOCH, M.J., A.R. Lakho and H.U. Bhutto. Line-tester analysis for estimating genetic
components of some quantitative traits in (Gossypium hirsutum L.). Sindh. J. Plant Sci.,
1999, vol. 1, Nr.1, p. 28-34.
4. BALOCH, M.J., H.U. Bhutto, and A.R. Lakho. Combining ability estimates of highly
adapted tester lines crossed with pollinator inbreds of cotton (Gossypium hirsutum L.).
Pak. J. Sci. Ind. Res., 1997, vol. 40, Nr. 5, p. 95-98.
5. BERVILLE A. L'heteros is: approaches physiologiques et perspectives. Agron. trop.,
1977, vol.32, Nr. 2, p. 171-176.
6. BETR N F.J., RIBAUT J.M., BECK D., GONZALEZ DE LEN D. Genetic Diversity,
Specific Combining Ability, and Heterosis. In Tropical Maize under Stress and Nonstress
Environments, Crop Science, 2003, vol. 43, p. 797-806.
7. BRADFORD M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein doze biding. Analyt. Biochim., 1976,
vol.72, p.248-254.
8. CHEN J.F., STAUB J.E., JIANG J. A reevaluation of karyotype in cucumber (Cucumis
sativus L.). Euphytica, 1998, vol. 45, p. 301-305.
9. CHEN J.F., STAUB J.E., TASHIRO Y. Regeneration of interspecific hybrids between
Cucumis sativus L. x C. hystrix Chakr. By direct embryo culture, Cucurbit Genetics
Cooperative Rpt. (Technical Bulletin), 1996, vol. 19, p. 34-35.
10. CHEN J.F., STAUB J.E., TASHIRO Y., YOSUKE T., ISSHIKI S., MIYAZAKI S.
Sucessful interspecific hydridization between Cucumis sativus L. and C. hystrix Chakr.
Euphytica, 1997, vol. 96, p. 413-419.
11. CHEN J.F., LUO X.D., STAUB J.E., QIAN C.T., ZHUANG F.Y., REN G. An
Allotriploid Derived from a Amphidiploid - Diploid Mating in Cucumis I: Production,
Micropropagation and Verification. Euphytica. 2003, vol. 131, p. 235-241.

106

12. CHUNG S.M., GORDON V.S., STAUB J.E. Sequencing of cucumber (Cucumis sativus
L.) chloroplast genomes identifies differences between chilling tolerant and susceptible
cucumber lines. Genome, 2007, vol. 50, p. 215-225.
13. CLOCZOWSKI Z. Breeding of oil sunflower in Poland. Proc. 5th Intern. Sunflower Conf.
Clemont-Ferand, France, 1972, p. 258-261.
14. COYLE, G.G., and C.W. Smith. Combining ability for within-boll yield components in
cotton, (Gossypium hirsutum L.). Crop Sci., 1997. vol. 37, Nr. 4, p. 1118-1122.
15. DIJKHUIZEN A., STAUB J.E. QTL conditioning yield and fruit quality traits in
cucumber (Cucumis sativus L.). Cucurbit Genetics Cooperative Rpt. (Technical Bulletin),
1999, vol. 22, p. 8-10.
16. DIJKHUIZEN A., KENNARD W.C., HAVEY M.J., STAUB J.E. RFLP variability and
genetic relationships in cultivated cucumber. Euphytica, 1996, vol. 90, p. 79-89.
17. DUCA M., SAVCA E., PORT A. Fiziologia vegetal. Tehnici speciale de laborator.
Chiinu, 2001, 173 p.
18. EL-SHAWAF I.I.S., BAKER L.R. Combining ability and genetic variances of GXHF1
hybrids for parthenocarpic yield in gynoecious pickling cucumber for once over
mechanical harvest. J Amer Soc Hort Sci., 1981, vol. 106, p. 365-370.
19. EL-SHAWAF I.I.S., BAKER L.R. Inheritance of parthenocarpic yield in gynoecious
pickling cucumber for once over mechanical harvest by diallel analysis of six gynoecious
lines. J Amer Soc Hort Sci., 1981, vol. 106, p. 359-365.
20. FALCONER D.S. "Introduction to Quantitative Genetics. Longman, London", 1981. 245
p.
21. FATIH, A.M.B., M.A. Khan. Genetic analysis of spacing response in (Gossypium
hirsutum L.) crosses. The Pak. Cottons, 1972, vol. 16, Nr. 1, p. 95-l 04.
22. FAN Z., ROBBINS M.D., STAUB J.E. Population development by phenotypic selection
with subsequent marker-assisted selection for line extraction in cucumber (Cucumis
sativus L.) Theor. Appl. Genet., 2006, vol. 112, p. 843-855.
23. FAZIO G, STAUB J.E., CHUNG S.M. Development and characterization of PCR markers
in cucumber (Cucumis sativus L.). J. Am. Soc. Hort. Sci., 2002, vol. 127, p. 545-557.

107

24. FAZIO G., STAUB J. E. Response to phenotypic selection for multiple lateral branching
in cucumber (Cucumis sativus L.). Cucurbit Genetics Cooperative Rpt. (Technical
Research Report), 2000, vol. 23, p. 8-11.
25. FAZIO G., CHUNG S.M., STAUB J.E. Comparative analysis of response to phenotypic
and marker-assisted selection for multiple lateral branching in cucumber (Cucumis sativus
L.). Theor. Appl. Genet., 2003, vol. 107, p. 875-883.
26. FAZIO G., STAUB J.E., STEVENS M.R. Genetic mapping and QTL analysis of
horticultural traits in cucumber (Cucumis sativus L.) using recombinant inbred lines.
Theor. Appl. Genet., 2003, vol. 107, p. 864-874.
27. FREDRICK L.R., STAUB J.E. Combining ability analyses of fruit yield and quality in
near- homozygous lines derived from cucumber. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 1989, vol. 114,
p. 332-338.
28. GEIGER H.H., MIEDANER T. Hybrid rye and heterosis. Genetics and Exploitation of
Heterosis in Crops. Eds Coors J.G. et al. ASA-CSSA-SSSA, USA, 1999, p. 439-450.
29. Genetica. Indicaii metodice pentru lucrrile de laborator. Chiinu, 2003, 73 p.
30. GHADERI A., LOWER R.L. Heterosis and inbreeding depression for yield in populations
derived from six crosses of cucumber. J Amer Soc Hort Sci., 1979, vol. 104, p. 564-567.
31. GLOBERSON D., GENIZI A., STAUB J.E. Inheritance of seed weight in Cucumis
sativus (L.) var. sativus and var. hardwickii (Royle) Kiturma. Theor. Appl. Genet., 1987,
vol. 74, p. 522-526.
32. GRAL H. Heterosis and Combining Ability in Spring Triticale (x Triticosecale, Wittm.).
Plant Breed. Seed Sci., 1999, vol. 43, p. 25-34.
33. HAYMAN, B.l. 1954a. The theory and analysis of diallel crosses. Genetics, vol. 39 p.
789-809.
34. HAYMAN, B.l. 1954b. The analysis of variance of diallel cross. Biometrics, vol. 10 p.
235-245.
35. KENNARD W.C., POETTER K., DIJKHUIZEN A., MEGLIC V., STAUB J., HAVEY
M. Linkages among RFLP, RAPD, isozyme, disease resistance and morphological
markers in narrow and wide crosses of cucumber. Theor. Appl. Genet., 1994, vol. 89, p.
42-48.

108

36. KIHARA H. Nucleo-cytoplasmic hybrids and nucleo-cytoplasmic heterosis. Seiken Ziho,

1979, p. 5-13.
37. KNERR L.D., STAUB J.E. Inheritance and linkage relationships of isozyme loci in
cucumber (Cucumis sativus L .). Theor. Appl. Genet., 1992, vol. 84, p. 217-224.
38. KUPPER R.S., STAUB J.E. Combining ability between lines of Cucumis sativus L. and
Cucumis sativus var. hardwickii (R.) Alef. Euphytica, 1988, vol. 38, p.197-220.
39. LIU J., STAUB J. E. Relationships among putative botanical varieties in cucumber.
Cucurbit Genetics Cooperative Rpt. (Technical Bulletin). 1998, vol. 21, p. 1-5.
40. LPEZ-SES A.I., STAUB J.E., GOMEZ-GUILLAMON M.L. Combining ability
analysis of yield components in cucumber. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 2002, vol. 127, p.
931-937.
41. LOWER R.L., NIENHUIS J., MILLER C.H. Gene action and heterosis for yield and
vegetative characteristics in a cross between a gynoecious pickling cucumber inbred and a
Cucumis sativus var. hardwickii line. J Amer Soc Hort Sci, 1982, vol. 107, p. 75-78.
42. MAC KEY J. Seed dormancy in nature and agriculture. Cereal Res. Commun., 1976,
vol.4, Nr. 2, p.83-91.
43. MARANI, A. 1964. Heterosis and combining ability for plant height and developmental
data in a diallel cross of two species of cotton. Crop. Sci., vol. 4, Nr. 2, p. 265-268.
44. MC DANIEL R.G., SARKASSIAN I.V. Mitochondrial heterosis in maize. Genetics,
1973, vol. 59, Nr.4, p. 465-475.
45. MEGLIC V., STAUB J. E. Inheritance and linkage relationships of allozyme and
morphological loci in cucumber (Cucumis sativus L.). Theor. Appl. Genet., 1996, vol. 92,
p. 865-872.
46. MILLER J.F., HAMMOND J.J., ROATH W.W. Comparison of imbred vs. Singlecross
testers and estimation of genetic effects in sunflower. Crop Science, 1980, vol. 20, p. 703706.
47. MITTON J.B., GRANT M.C. Associations among protein heterozygosity, growth rate and
developmental homeostasis. Annu. Rev. Ecol. Syst., 1984, vol. 15, p. 479-499.
48. MLIKI A., STAUB J.E., SUN Z., GHORBEL A. Genetic diversity in African cucumber
(Cucumis sativus L.) provides potential for germplasm enhancement. Genet. Res. Crop
Evol., 2003, vol. 50, p. 461-468.
109

49. NARAYANAN K.K., VIRMANI S.S. Biotechnological application in the exploitation of

heterosis in rice. J. Rice biotechnology quarterly. KSU, Manhattan KS 66506. June.1996,
vol. 27, p. 26.
50. NAVAZIO J.P., STAUB J.E. Effects of soil moisture, cultivar, and post-harvest handling
on pillowy fruit disorder in cucumber. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 1994, vol. 119, p.12341242.
51. OMRAN, A.O., A.B. El-Ganayani and H. Jalal. Heterosis and combining ability in crosses
between (Gossypium hirsutum L.) and (Gossypium barbadense L.) cotton. Grow. Rev.,
1974, vol. 51, Nr 3, p. 192-209.
52. PALII A. Genetica. Chiinu, 1998, 352 p.
53. PETERSON C.E., STAUB J.E., PALMER M. Wisconsin 5207, a multiple disease
resistant population. HortScience, 1986, vol. 21, p. 335-336.
54. POPESCU O.V. Electroforeza proteinelor n geluri de poliacrilamid. Bucureti, Ed.
Tehnica, 1990, 266 p.
55. REVA V., CIOBANU V., MULLER-URI F. Strategia i tactica izolrii i purificrii
proteinelor. Chiinu, 2001, 184p.
56. ROBBINS M.D., STAUB J.E. Strategies for selection of multiple quantitatively inherited
yield components in cucumber. Proceedings of the 8th Eucarpia Conference,
Cucurbitaceae 2004: Progress in cucurbit genetics and breeding research. Olomouc, The
Czech Republic, 2004, p.401-410.
57. ROBERT W. Allard History of Plant Population Genetics. Ann. Rev. Genetics, 1999,
vol.33, p. 1-27.
58. SAMBROOK J., Russel D.W. Molecular cloning: a laboratory manual, V. II, 3th edition,
New-York, 2001.
59. SERQUEN F.C., STAUB J.E. Under estimation of detection of QTLs when using
dominant gene markers: The case of RAPDs in cucumber. Cucurbit Genetics Cooperative
Rpt. (Technical Research Report), 1996, vol. 19, p. 13-16.
60. SERQUEN F.C., BACHER J., STAUB J.E. Mapping and QTL analysis of a narrow cross
in cucumber (Cucumis sativus L.) using random amplified polymorphic DNA markers.
Molecular Breeding, 1997, vol. 3, p. 257-268.
61. SIMINEL V. Ameliorarea general a plantelor de cmp. Chiinu, 1998, 280 p.
110

62. SKORIC D. Correlation among the most important characters of sunflower in F1

generation. Proc. 6th Intern. Sunflower Conf., Bucarest, Romania, 1974, p. 271-283.
63. SMITH O.S., SMITH J.S.C., BOWEN S.L., TENBORG R.A., WALL S.J. Similarities
among a group of elite maize inbreds as measured by pedigree, F1 grain yield, grain yield,
heterosis, and RFLPs. Theor. Appl. Genet., 1990, vol. 80, p. 833-840.
64. SONGKLANAKARIN J., JOGLOY S. et al. Nodule parameters and agronomic traits in
peanut. Sci. Technol., 2005, vol. 27, Nr. 2, p. 215.
65. SRIVASTAVA H.K. Intergenomic interaction heterosis and improvement of crop yield.
Advances in agronomy, 1981, vol. 34, p. 117-185.
66. STAUB J. E. Marker-assisted selection for multiple traits in cucumber. Proceedings of the
3rd Congress of the Genetics Society of Slovenia, Bled, Slovenia, May 30-June 3, 2003, p.
29-33.
67. STAUB J.E., CRUBAUGH L. Selection of multiple lateral determinate cucumber
genotypes. Cucurbit Genetics Cooperative Rpt. (Technical Research Report), 1995, vol.18,
p. 5-6.
68. STAUB J.E., HOREJSI T. Theoretical expectations of the potential use of genetic markers
in marker-assisted selection. In: Proceeding Cucurbitaceae 98 Evaluation and
enhancement of cucurbit germplasm, 1998, p. 342-349.
69. STAUB J.E., GABERT A., WEHNER T.C. Plant variety protection: A consideration of
genetic difference. HortScience, .1996, vol. 31, p.1086-1091
70. STAUB J.E., SERQUEN F.C., HOREJSI T., CHEN J.F. Genetic diversity in cucumber
(Cucumis sativus L.): IV. An evaluation of Chinese germplasm. Genet. Res. Crop Evol.,
1999, vol. 46, p. 297-310.
71. STAUB J.E., SERQUEN F., GUPTA M. Genetic markers, map construction and their
application in plant breeding. HortScience, 1996, vol. 31, p. 729-741.
72. STAUB J.E., BACHER J., CRUBAUGH L. Problems associated with the selection of
determinate cucumber (Cucumis sativus L.) plant types in a multiple lateral background.
Cucurbit Genetics Cooperative Rpt. (Technical Research Report), 1995, vol.18, p. 7-9.
73. STAUB J.E., SUN Z., CHUNG S.M., LOWER R.L. Evidence for colinearity among
genetic linkage maps in cucumber. HortScience, 2007, vol. 42, p. 20-27.

111

74. STAUB J. Genetic distance and plant variety protection. Cucurbitaceae '94: Evaluation
and enhancement of cucurbit germplasm, (Proceedings), 1994, p. 118-123.
75. STAUB J.E., KRASOWSKA A. Screening of the U.S. germplasm collection for heat
stress tolerance. Cucurbit Genetics Cooperative Rpt., 1990, vol.13, p. 4-7.
76. STAUB J.E., KNERR L.D., WESTON L.A. Evaluations and correlated responses for
resistance to Chloramben herbicide in cucumber. HortScience, 1991, vol. 26, p. 905-908.
77. STAUB J.E., PETERSON C.E. Comparisons between bacterial wilt resistance and
susceptible gynoecious inbred cucumber lines, and F1 progeny for yield and fruit quality.
HortScience, 1986, vol. 21, p.1428-1430.
78. STAUB J.E., CRUBAUGH L.K. Use of silver thiosulfare as a potential tool for testing
gynoecious sex stability in cucumber (Cucumis sativus L.). Cucurbit Genetics Cooperative
Report 1987, vol. 10, p.18-20.
79. STAUB J.E., GRUMET R. Selection for multiple disease resistance reduces cucumber
yield potential. Euphytica, 1993, vol. 67, p. 205-213.
80. STAUB J.E., KUPPER R.S. Electrophoretic comparison of six species of Cucumis.
Cucurbit Genetics Cooperative Report, 1984, vol. 7, p. 27-30.
81. STAUB J.E., KUPPER R.S. Results of the use of Cucumis sativus var. hardwickii
germplasm following backcrossing with Cucumis sativus var. sativus. HortScience, 1985,
vol. 20, p. 436-438.
82. STAUB J.E., MEGLIC V. Molecular genetic markers and their legal relevance for
cultigen discrimination: A case study in cucumber, HortTechnology, 1993, vol. 3, p. 291300.
83. STAUB J.E. Crossover: Concepts and Application in Genetics, Evolution and Breeding:
An interactive computer- aided laboratory manual, University of Wisconsin Press,
Madison, 1994, 357 p.
84. STAUB J.E. Malate dehydrogenase variation in African Cucumis species: A testable
genetic hypothesis. Cucurbit Genetics Cooperative Report, 1986, vol. 9, p. 18-23.
85. STAUB J.E. Preliminary yield evaluation of inbred lines derived from Cucumis sativus
var. hardwickii (Royle) Kitamura. Cucurbit Genetics Cooperative Report, 1985, vol. 8, p.
18-21.

112

86. STAUB J.E., BALGOOYEN B., TOLLA G.E. Quality and yield of cucumber hybrids
using gynoecious and bisexual pollen parents. HortScience, 1986, vol. 21, p.510-512.
87. STAUB J.E., KANE R., BRAUNSCHWEIG A.M. Differences in net apparent
photosynthetic rates and chlorophyll content among and between Cucumis anguria var.
anguria and var. longipes Meeuse. Cucurbit Genetics Cooperative Report (Technical
Research Report), 1986, vol. 9, p. 24-26.
88. STAUB J.E., KUPPER R.S., WEHNER T.C. Preliminary evaluation of isozyme
polymorphisms in Cucumis. Cucurbit Genetics Cooperative Report, (Technical Research
Report), 1983, vol. 6, p. 32-34.
89. STAUB J.E., KUPPER R.S., SCHUMAN D., WEHNER T.C., MAY B. Electrophoretic
variation and enzyme storage stability in cucumber. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 1985, vol.
110, p. 426-431.
90. STEEL, R.G.D. and J.H. Torrie. "Principles and Procedures of Statistics, a Biological
Approach". Second Edition, McGraw Hill lnc New York, Toronto, London, 1980, 234 p.
91. SUN Z., LOWER R.L., CHUNG S.M, STAUB J.E. Identification and Comparative
Analysis of Quantitative Trait Loci (QTL) Associated with Parthenocarpy in Processing
Cucumber. Plt. Breed, 2006, vol.125, p. 281-287.
92. WHITE, T.G. Diallel analysis of quantitatively inherited characters in (Gossypium
hirsutum L). CropSci. 1966, vol. 6. Nr. 3, p. 253-255.
93. WHITE, T.G., and R.J. Kohel. A diallel analysis of agronomic characters in selected lines
of cotton. Crop Sci. 1964, vol.4 Nr. 3 p. 254-257.
94. WILDE P. Multi-stage selection for combining ability among pollen parent lines in hybrid
rye breeding. Vortr. Pflanzenzuchtg, 1996, vol. 35, p. 15-25.
95. WITKOWICZ J., URBACZYK-WOCHNIAK E., PRZYBECKI Z. AFLP marker
polymorphism in cucumber (Cucumis sativus L.) near isogenic lines differing in sex
expression. Cellular & Molecular Biology Letters, 2003, vol. 8, Nr. 2, p. 375-381.
96. ZHUANG F.Y, CHEN J.F., STAUB J.E., QIAN C. T. Taxonomic relationships of a rare
Cucumis species (C. hystrix Chakr.) and its interspecific hybrid with cucumber.
HortScience, 2006, vol. 41, p. 571-574.
97. ZHUANG F.Y., CHEN J.F., STAUB J.E., QIAN C.T. Assessment of genetic relationships
in Cucumis species by SSR and RADP analysis. Plt. Breed, 2004, vol. 123, p. 167-172.

113

98. ZOUROS E., FOLTZ D.W. The Use of allelic isozyme variation for the study of heterosis.
Isozymes. N.Y.: Liss, 1987, vol. 13, p. 1-59.
99. .. -.
. . . . -. . ., 1-5
1997, . 83-84.
100. - .., .. . , 1982.
128.
101. .. Helianthus annus L.-
. : ,
.. , 1976, .75-76.
102. ..
. . , 1974, .40, .39-48.
103. .., . . 11S . , 1989, . 25, 7, .1248-1255.
104. ..
. . . . . . ., 1979.
105. .. : . ., 1968, .128-157.
106. ..
. . , ., 1973, . 35, . 47-51.
107. .., .. . -
. , 1976, .156-167.
108. ..; .. ()-
. ,
1986, . 33, . 4, . 769-777.
109. .. . ., 1977. 359.
110. .., .. , ., , 1987,
352.
111. .. . ., , 1985. 350.

114

112. .., .., ..

-. .
, 1990, . 34, 8, . 758-762.
113. .., .., ..

. i i. . i. , 1997, 3, . 37-40.
114. .. . . .
, 1978, . 47-70.
115. .. .
. ., 1997, . 183-187.
116. .., .. . ., , 1987. 414.
117. .. . ., 1973, .7-21.
118. .. .
, . , ., , 1990, . 7, 160.
119. ..
: . . - .-. : - . -
. ., 2002, 33.
120. . . .
, 1974, . 10, 4, c. 165-179.
121. .., .., .., ..
,
. , 2000, . 34, 2, . 91-104.
122. .. . . . .-.
.. . ., , 1983, 320.
123. .. .
. .-. , 1974, . 1-10.
124. .. . .: ,
, 1982, . 163-177.
125. .. . , 1995. 177.

115

126. ..
. .: . .,
1974, . 242-269.
127. .., .., ..
. . .. ,
1976, . 5-77.
128. .., .., ..
. , 1970, 7, c. 16-18.
129. .. - ,
. ., , 1993. 447.
130. .., .., ..

. .: . ., , 1974, 124.
131.

..

""

. , 1984, . 9, . 99-104.
132.

A.

, ., 1959.
133. .., ..

. , 1980, 77.
134.

..,

..,

.,

..

. . , 1996, .
43, 6, . 926-936.
135. , .. (Pisum
sativum L.) / .. , .. , ..
//

. : . 2001.c. 128-133.
136.

..,

..

..

116

. . ., . . . .-. . .,
1-5 1997, . 211.
137. .. . ., , 1989. 464.
138. ..
.
, , : .1983, .32-38.
139. .. .
, .: - , 2000. 208 c.
140. .., ..
. : , 1965. 345.
141. . . :
. . ., 1974, . 35, 5, c.666-678.
142. ..
. , 1986, . 22, 2, c.229-242.
143. .., .. .
(), ., 1966, c.210-222.
144. .., .., ..
. : , 1974. 184 .
145. .., .. //
, 1980, . 59-85.
146. .
, 1976. 239.
147. .., ..
. , 1994, .
41, 1, .92-96.
148. .. . ., 1972, 32c.
149. .., ..; .. :
.: , 1990, 119.
150. .. . , 1981, 83.

117

ABSTRACT
OZDEMIR Dogan Polimorfismul genetic n aspectul heterozisului la Cucumis sativus L.
Tez de doctor n biologie, Chiinu, 2008, 105 p., 23 tab., 59 fig., 150 surse bibliografice.
Cuvinte cheie: capacitate combinativ, Cucumis sativus L., heterozis, polimorfizm proteic,
RAPD-PCR.
Numeroase realizri ale biochimitilor i fiziologilor din ntreaga lume pun n eviden
diverse aspecte funcionale ale heterozisului la plante prin prisma cercetrii fotosintezei,
respiraiei, activitii enzimelor i substanelor biologic active, proceselor de schimb energetic,
acumularea substanelor nutritive i productivitatea, ns multe ntrebri rmn a fi elucidate
insuficient.
n lucrare sunt expuse rezultatele experimentale, obinute la analiza a apte grupe de
genotipuri de castravei cu diferite nivele de productivitate - trei hibrizi ( 273, 274,
275) cu productivitate nalt i doi hibrizii (H6 i H7) - cu productivitate redus. n
calitate de control au servit hibrizii omologai Vzglead i Epilog.
Cercetarea simultan a acestor grupe de genotipuri, care includ apte hibrizi F1 i formele
lor parentale (linii homozigote sau soiuri) a permis de a elucida o variabilitate specific nalt,
corelat cu procesele metabolice dominante n manifestarea vigorii hibride, precum i a pune n
eviden anumii indici genetico-fiziologici i indici CCG i CCS,

care se asociaz cu

heterozisul.
S-a constatat, c superioritatea hibrizilor de prima generaie la castravei este
determinat preponderent de dezvoltarea somatic sporit a acestora, adic de heterozisul
somatic. S-a stabilit c productivitatea nalt, care relev un nalt grad de heterozis, este
determinat de capacitatea mai mare de a acumula masa verde i masa uscat i de o
activitate sporit a catalazei, rezultate care pun n eviden capacitatea sporit de adaptare a
plantelor i vigurozitatea acestora.
n baza analizei electroforetice a proteinelor i analizei RAPD-PCR a fost identificat
un polimorfism nalt pentru genotipurile cercetate, care pune n eviden particulariti
specifice la grupele de hibrizi cu productivitate diferit. Liniile L 203 i L371 au relevat cele
mai superioare valori ale capacitii de combinare dup majoritatea indicilor cercetai i
sunt recomandate amelioratorilor pentru includerea lor n procesul de selecie la heterozis.

118

ABSTRACT
OZDEMIR Dogan The genetic polymorphism in aspect of heterosis at Cucumis sativus L.
PhD thesis in Biology, Chisinau, 2008, 105 p., 23 tab., 59 fig., 150 references.
Key words: combining ability, Cucumis sativus L, heterozis, protein polymorphism, RAPDPCR.
The functional aspects of heterosis at plants, as photosynthesis, respiration, enzyme
activity, biological active compounds, energetic metabolism, accumulation of nourishing
compounds and fruited have been studied in detail by biochemists and physiologists, but
many questions still remained unaccountable.
In this work there were assembled and analyzed experimental data that characterize
some hybrid combinations of Cucumis sativus L. with different productivity and their
parental forms on the effect of heterosis after different morphological and physiological
parameters which allowed assessing the genetic polymorphism of cucumbers and
determining some molecular genetic aspects of heterosis.
There were utilized five initial maternal forms of cucumber, three paternal lines
(where Beregovoi and Favorit sorts was departmented) and seven hybrids of first
generation (F1), where three of them ( 273, 274, 275) were with high productivity
and H6 and H7 hybrids with low productivity. As control served first generation
hybrids Vzglead and Epilog.
There was shown the variability of different morphological and physiological
characters being revealed the dependence between root system volume and catalase
activity the parameters that influence plant productivity. It was established the
dependence between heterosis and genetic characteristics of parental forms, along with
their combinative capacity. There were established the qualitative and quantitative
peculiarities of total proteins and analyzed genetic polymorphism of homo- and
heterozygote genotypes of Cucumis sativus L., which correlated with productivity and
heterosis.

119



(Cucumis sativus L.)
, , 2008, 105 ., 23 ., 59 .,
150 . .
: , , ,
Cucumis sativus L., RAPD-PCR

, , ,
, ,
, .
,
Cucumis sativus L.

,
- .
,
( )
(F1), ( 273, 274, 275)
, 6 7 - .
.


, .

.

(RAPD-PCR) - Cucumis sativus L,
.

120