Lp 10: Diagnosticul de laborator al infeciilor respiratorii virale

Obiective:
1. Prezentarea diagnosticului de laborator n grip;
2. Prezentarea diagnosticul serologic n pneumonii atipice primare.
Diagnosticul de laborator n grip
O mica introducere: importanta diagnosticului direct (variabilitatea antigenica, cunoasterea
tulpinilor circulante, stabilirea formulei vaccinale la nivel mondial)
Diagnostic direct:
Produs patologic: tampon faringian, nasal sau spltur nasal. Sensibilitatea
diagnosticului crete dac recoltarea este ct mai precoce (primele 3 4 zile de
boal) i dac probele sunt examinate imediat, sau conservate la 4 C.
Metode rapide (permit diferenierea tipurilor):

Detecie antigenelor prin ELISA sau IF;

Detecia ARN viral prin PCR.

Metode clasice (permit caracterizarea subtipurilor i a

tulpinilor circulante, n scop epidemiologic sau al preparrii de vaccinuri):

izolarea pe ou embrionate;

izolarea pe culturi de celule.

RH (reacia de hemaglutinare):
- evideniaz prezena virusului n produsul patologic, graie capacitii virusului de
a aglutina hematii;
- titreaz cantitatea de virus hemaglutinant.
Necesar:
- suspensie hematii de coco;
- antigen gripal:
o pentru stabilirea apariiei i multiplicrii virusului se va folosi lichid amniotic
i alantoidian din ou embrionate;
o pentru titrarea antigenelor hemaglutinante se folosesc antigene standard,
preparate pe oul embrionat.
Interpretarea reaciei:
- reacie negativ = hematiile sedimenteaz sub forma unui disc rou cu margini perfect
regulate;
- reacie pozitiv = depozit granulos / depunere a hematiilor sub form de umbrel cu
margini neregulate; supernatantul este incolor.
Introducere: limitele diagnosticului direct prin metode clasice (avantajele lui pentru tulpini
complet noi) si de aici necesitatea diagnsoticului indirect.
Diagnostic serologic:

- reacia Hirst.

ELISA (Ac specifici de tip)

RIH (reacia de inhibare a hemaglutinrii)

Principiu RIH: unele virusuri posed capacitatea de a aglutina hematii (RH). Reacia este
mpiedicat de prezena Ac prezeni n serul de testat (post-infecie sau post-vaccinare), n
prezena antigenului omolog.
RIH:
- ofer posibilitatea identificrii unui virus hemaglutinant (diagnostic direct);
- permite stabilirea diagnosticului unei viroze, prin evidenierea anticorpilor specifici
inhibitori ai hemaglutinrii n serurile testate (seruri perechi: acut si de convalescent);
dezavantajul legat de timp (scop epidemiologic si mai putinpentru pacienti)
- permite aprecierea eficientei vaccinarii si studierea Ac-lor anamnestici, dupa trecerea
prin infectie, pentru populatii largi (serograme) seroarheologie (istoria circulatiei
virusurilor gripale, de-a lungul timpul, prin determinarea Ac-lor in seruri obtinute de
la varstnici)
Necesar:
- seruri pacient (serul I i serul II, recoltate la 10-14 zile interval);
- antigene hemaglutinante;
- hematii.
Martori RIH:
martor hematii;
martor antigen (titrat anterior reaciei prin RH);
martori seruri de referin.
Interpretare: - reacie pozitiv (sedimentarea hematiilor -buton);
- reacie negativ (hemaglutinare).
1/7

1/14

1/28

1/56

1/112 1/224 1/448

Ser II +

Ser I Ser II -

Ser I +
Ser II +

A/Beijing/262/95 (A/H1N1) 2000

Ser I

A/Sydney / 15 / 97 (A/H3N2) (1999)

B/Shandong

Diagnostic: infectie cu virusul gripal A/H1N1 (dinamica semnificativa)

Diagnosticul serologic n pneumonii atipice primare
Pneumonie atipic primar / pneumonie interstiial:
- pneumonie care evolueaz cu leziuni inflamatorii n interstiiul pulmonar;
- este atipic deoarece nu induce semnele stetacustice i radiologice
descrise clasic (tipic) n pneumonia lobar;
- este primar pentru c este determinat de microorganisme primar
patogene.
2

Ageni etiologici: virusuri (gripal A, B; VRS, adenovirusuri, virusuri paragripale, etc),

Mycoplasma pneumoniae, rickettsii, chlamydii.
RFC (reacia de fixare a complementului)
Principiu: 2 complexe Ag Ac i disput aceeai cantitate de complement (C):
o Primul complex = Ag de referin i Ac prezeni n ser;
o Al doilea complex = Cuplul hemolitic sau sistemul indicator al reaciei (hematii
de oaie i ser anti-hematii de oaie).
Complexul Ag Ac format n prima reacie, fixeaz C, astfel nct a doua reacie
nu mai are loc iar hematiile rmn intacte (buton). Dac prima reacie nu are loc
(Ac specifici abseni), complementul rmne la dispoziia cuplului hemolitic i
determin hemoliz.
Reacie pozitiv = lipsa hemolizei (sedimentarea hematiilor - buton).
Reacie negativ = hemoliz.
Pacient A. G., 14 ani, prezint la internare frisoane, cefalee, tuse uscat. Ulterior apar dureri
musculare generalizate, stare de ru, anorexie, astenie. Rezultatele diagnosticului serologic sunt:
Agent etiologic
Virus gripal A
Virus gripal B
Virus Paragripal 3
Adenovirus
Virus respirator sincitial
Mycoplasma
Chlamydia
Coxiella

Titru Ac ser I
< 1/8
< 1/8
< 1/8
1/16
< 1/8
< 1/8
< 1/8
< 1/8

Titru Ac ser II
1/32
< 1/8
< 1/8
1/16
< 1/8
< 1/8
< 1/8
< 1/8

Diagnostic etiologic: infectie cu virus gripal A (seroconversie);

pentru adenovirus Ac anamnestici
Pacient R. S., sugar de 4 luni, prezint dispnee, febr, cianoz, secreii nazale care sunt antrenate
spre cile respiratorii inferioare. Ipotez diagnostic clinic: broniolit. Serodiagnosticul este
urmtorul:
Agent etiologic
Virus gripal A
Virus gripal B
Virus Paragripal 3

Titru Ac ser I
< 1/8
1/16
< 1/8

Titru Ac ser II
< 1/8
1/128
< 1/8
3

Adenovirus
Virus respirator sincitial
Mycoplasma
Chlamydia
Coxiella

< 1/8
1/16
< 1/8
< 1/8
< 1/8

< 1/8
1/16
< 1/8
< 1/8
< 1/8

Diagnostic etiologic: infectie cu virus gripal B (dinamica semnificativa)

Pentru VRS Ac anamnestici (pot fi si de la mama; intervalul de timp dintre 2 prelevari, prea
mic, nu a permis o scadere semnificativa)
Tehnici actuale de diagnostic a pneumoniilor atipice primare:
- ELISA (IgM, IgG)
- IF
- tehnici moleculare.