REACII ANTIGEN-ANTICORP

REACIA DE AGLUTINARE
Reacie Ag-Ac de agregare n care antigenul este reprezentat de celule bacteriene
sau fragmente de celule bacteriene n suspensie (antigen particulat).
=> reele tridimensionale agregate vizibile

1. AGLUTINAREA PE LAM

Scop

identificarea rapid pe baza proprietilor antigenice a unor tulpini

izolate din produsul patologic
Tehnica
ser imun (Ac) + colonie bacterian grunji fini
ser fiziologic + colonie bacterian susp.omogen

2. AGLUTINAREA N TUBURI
- n diluii crescnde de ser se adaug aceeai cantitate de antigen standard
- titrul reaciei este reprezentat de diluia cea mai mare de ser la care se mai
observ aglutinarea.
- reacie cantitativ
Scop
identificarea unui microorganism (Ag)
diagnosticul serologic al unei infecii pentru evidenierea Ac din serul
de bolnav fa de un Ag standard.
Tipuri
* Aglutinarea O somatic - polar
Ag O= endotoxina- perete bacteriilor G- natura glico-lipido-polipeptidic
- termostabil
- alcoolorezistent
- distrus de formol

* Aglutinarea O
- grunji fini, nu disociaz la agitare
- apare mai lent
- incubare 2h la 52C baie marin
- 20h la temp. Camerei
- alipire cap la cap a bacteriilor
(aglutinare polar)
* Aglutinarea H - flagelar
Ag H - prezent la bacteriile mobile
- natur proteic
- termolabil
- distrus de alcool
- rezistent la formol
* Aglutinarea H
- flocoane ce formeaz un sediment
abundent lax ce dispare la agitare
- apare mai rapid
- incubare 2h la 52C n baie marin
- bacteriile se unesc prin flageli
EXEMPLE:
R. WIDAL S.typhi, S.paratyphi A,B

R. WRIGHT bruceloze
R. WEIL-FELIX tifos exantematic
AGLUTINAREA PASIV
Reacie Ag-Ac n care Ag este reprezentat de o soluie molecular. n urma fixrii
pe un suport particulat acesta devine aglutinabil n prezena serului imun.
Scop: Identificarea unui Ag ct i pentru cercetarea anticorpilor corespunztori
folosind un Ag cunoscut.
PARTICULE
- INERTE: latex, colodiu, bentonit
- HEMATII DE OM grp. O
-HEMAGLUTINARE PASIV
- HEMATII DE ANIMAL
-HEMAGLUTINARE PASIV
Antigenul:
- Polizaharidic adsorbit pe hematii native
- Proteic adsorbit pe hematii tanate
(tratate cu acid tanic)
EXEMPLE:
Ag adsorbit pe particule de latex:
- evidenierea Factorului Reumatoid (FR)
- detectarea Ag de Haemophylus, pneumococ, meningococ n LCR, ser, SF
- cercetarea Ac anti-ADN n dg. LES
Ag adsorbit pe hematii:
- dg. Tiroiditei Hashimoto
- dg. Poliartritei reumatoide
(r. Waaler- Rose)
INHIBAREA
HEMAGLUTINRII PASIVE
Scop: Diagnosticul imunologic al sarcinii.
Tehnic:
I. (urin + ser imun anti-gonadotrofin)
II. () + suspensie de hematii tanate
(sensibilizate la gonadotrofin)
Gonadotrofin (+) => hematii n suspensie
Gonadotrofin (-) => hematii aglutinate

REACIA DE PRECIPITARE
Reacie Ag-Ac de agregare, n care antigenul este reprezentat de macromolecule n
soluie coloidal.

 Punerea n contact a Ag corespunztor duce la formarea unor complexe Ag-Ac care

precipit atunci cnd elementele ce particip n reacie se gsesc n proporia
optim.

Exemple:

*Precipitarea inelar
*Reacia de floculare
*Precipitarea n gel
- simpl difuzie
- dubl difuzie
- difuzia n cmp electric
#imunelectroforeza
#contraimunelectroforeza
REACIA DE PRECIPITARE INELAR

Scop:

- N MEDICINA LEGAL - identificarea originii petelor de snge

- N DG. BOLILOR INFECIOASE
- r. Ascolidg.infeciei crbunoase
- r. Vincent-Bellotdg.meningitei cerebrospinale
- identif. de gr. a streptococilor (gr.Lancefield)
proporie optim ag-acp
tuburi capilare pentru a evita amestecul
interfa de contact apare inelul
rar folosit n prezent

PRECIPITAREA N GEL
Reacie Ag-Ac care utilizeaz gel de agar sau agaroza ca mediu n care unul sau
ambele elemente care intr n reacie(Ag/Ac) difuzeaz, diametrul moleculelor de
Ag i Ac fiind mai mic dect diametrul porilor gelului.
Principiu: Vizualizarea unei zone opace de precipitare la ntlnirea n proporie
optim a celor dou elemente (Ag/Ac).
Scop:
- evidenierea fraciunilor antigenice multiple dintr-un amestec antigenic.
- este o reacie de mare sensibilitate i specificitate.
- utilizeaz cantiti mici de reactani.
REACIA MANCINI
- determinarea cantitativ a unor fraciuni proteice (IgM, IgG, IgA sau C3,
transferina)
- imunogram
- nglobarea acp n mediul de difuzie
- difuzie radial
DUBLA DIFUZIE
- pe o plac de sticl se toarn agaroz
- se fac godeuri dup solidificare
- ser imun n godeul central
- diferite ag n celelalte godeuri
- incubare n camer umed cteva zile
- test + linii de precipitare

VDRL

Teste care pun in evidenta anticorpi nespecifici (teste nontreponemice):pt. screening

VDRL Venereal Disease Research Laboratory
si
RPR Rapid Plasma Reagin test.
Testele non-treponemice sunt :
- rapide, usor de efectuat
- au un cost redus
prezinta o sensibilitate foarte buna, in special in stadiul precoce al
infectiei.
Dezavantaj este ca se asociaza cu o rata importanta de rezultate fals
pozitive, in special la gravide.

Pregatire pacient jeun (pe nemancate).

Specimen recoltat sange venos.
Recipient de recoltare vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel
separator.

METODA CLASICA :

- VDRL: lipozomii aflati in suspensie produc o reactie de floculare

vizibila in prezenta reaginelor din serul pacientului.
Rezultatele pot fi exprimate calitativ sau semicantitativ : titrurile VDRL.
VDRL/RPR:
- negativ (-)
- pozitiv (de la + la ++++)
Daca se efectueaza un test semicantitativ, se va comunica impreuna cu
intensitatea reactiei si titrul corespunzator ultimei dilutii care a indicat un rezultat
pozitiv.
- negativ (-)
- pozitiv (de la + la ++++)
Daca se efectueaza un test semicantitativ, se va comunica impreuna cu
intensitatea reactiei si titrul corespunzator ultimei dilutii care a indicat un rezultat
pozitiv.
Reactii de aglutinare pasiva-utilizare :
Latex-aglutinare:
- TPHA (Treponema pallidum hemagglutination) diagnosticul de
certitudine al sifilisului

TPHA :
Eritrocite aviare legate de ~ ag de T. Pallidum (Nichols strain)
Se leaga de Ac specific prezent in serul pacientului
Reactie +
hemaglutinare
Lichid de culoare rosiatica in tot godeul
Reactie - =
eritrocitele se depoziteaza la baza godeului
buton rosu compact

Reactia de fixare a Complementului : RFC

Complementul:
- Principalul sistem de amplificare a reactiilor ag.-ac.
- Liza bacteriilor sensibilizate de anticorpi = bacterioliza (fenomenul de vibrioliza
a lui Pfeiffer)

- Efect bactericid (bacterii Gram negative)

- Fenomenul de imunohemoliza
Complementul se fixeaza doar pe sistemul imun (ag.-ac.) format 2 sisteme atg.atc:
ag. si ac. de testat (unul e cunoscut si altul e necunoscut)
Hematii de oaie si ac. omolog
Intre cele 2 sisteme oscileaza complementul
INTERPRETARE :
Fixarea C pe primul sistem (RFC pozitiv) NU produce modificari in
amestecul de reactie, care ramane tulbure
Fixarea C pe cel de-al doilea sistem (RFC negativ) produce liza hematiilor,
amestecul de reactie devine limpede
RFC-Tehnici :
Tehnica Wassermann (reactia Bordet-Wasserman=RBW)- dg. sifilisului (! Reactii
fals pozitive)
Tehnica Ida-Bengston - dg. leptospirozei, rickettsiozelor, infectiilor cu Chlamydia
(titrul atc.)
Tehnica Breadstreet Taylor- dg. Infectiilor virale, infectiilor cu Mycoplasma, febra
Q.
METODE DE DIAGNOSTIC
DIAGNOSTIC DIRECT
- Ag necunoscut
- Ac cunoscut
DIAGNOSTIC INDIRECT
- Ag cunoscut
- Ac necunoscut
REACII Ag-Ac CE UTILIZEAZ REACTANI MARCAI
R. DE IMUNOFLUORESCEN (IF)
RADIOIMUNOTESTAREA (RIA)
ELISA

ELISA
PRINCIPIUL
Antigenul (Ag) sau anticorpul (Ac) se cupleaz cu enzime cu o mare
activitate (peroxidaza din hrean, fosfataza alcalin) rezultnd complexe care rein
att activitatea imunologic ct i cea enzimatic.
Complexul imun va fi detectat prin aprecierea activitii enzimei fa de un
substrat specific.

Direct Elisa
METOD
-Ag cunoscut
-Ac marcat enzimatic
AVANTAJE
- metod rapid
- etape puine
- eroare sczut

Indirect Elisa
utilizat n diagnosticul HIV
DENSITATEA OPTIC (la 450nm)
negativ sub 0,300
neteterminabil (0,300-0,499) !!!REPET TESTUL!!!
pozitiv peste 0,500
o ATENIE! Dac testul este pozitiv trebuie confirmat prin testul
Western Blot.
o Test fals+ (Ac anti HLA)
o Test fals (incubare)

Sandwich Elisa
-

Folosit pentru detectatrea Ag n produsul patologic

Godeul este cptuit cu Ac specific
Se adaug Ag
Godeul se spal pentru a ndeprta Ag n exces
Se adaug Ac marcat enzimatic
Se spal godeul pentru a ndeprta excesul de Ac marcat
Se msoar intensitatea culorii

Competitiv Elisa