Curs 7

2. Tehnici electrochimice de analiz

Avantajele tehnicilor electroanalitice

Permit detecia i determinarea speciilor ionice i nu a coninutului total
Rspund la activitatea ionic i nu la concentraie
Electrozii ion selectivi i dezvoltarea instrumentaiei n voltametrie au permis
lrgirea ariei de utilizare a metodelor
Tehnicile electroanalitice sunt capabile s furnizeze limite de detecie foarte
sczute
Nu sunt scumpe
Tehnicile electroanalitice pot furniza o serie de informaii despre sistemele
investigate:
Stoechiometrie i viteza de transfer de sarcin
Viteza de transfer de mas
Gradul de adsorbie sau chemosorbie
Constante de echilibru ale reaciilor chimice

Analii: Cationi: H+, Na+, K+, Ca2+, Li+, Anioni: Cl-, HCO3-, Gaze (CO2, O2 ), Molecule

2.1. Poteniometria direct

(Metod la curent faradaic zero)
Principiu:
msurarea potenialului electric dezvoltat la electrod ntr-o soluie de
electrolit la curent zero. Relaia dintre potenial i concentraia unor ioni
din soluie este redat de ECUAIA lui NERNST.

Electrod de referin (Ag/AgCl, calomel saturat)

Electrod indicator
Electrozi cu membran ion-selectiv
Electrozi cu membran selectiv pentru molecule

Electrozi de referin

Electrozi indicatori

Insensibili la soluia de
msurare
Comportament reversibil
S nu prezinte histerezis
termic

Rspuns rapid, selectiv

i reproductibil la
concentraia unei specii
Urmeaz relaia Nernst
potenial-concentraie
Ecelul=Eindicator-Ereferin

Electrozi de referin

Electrod Hg/Hg2Cl2

Electrod Ag/AgCl

Pt , Hg ( l ) / Hg 2Cl2 ( s ) , KCl ( xmol / l ) Ag / AgCl( s ) , KCl (3.5mol / l )

0
[ ]
E Hg Cl / Hg = E Hg
Cl 0.059 log Cl
2

0
E AgCl / Ag = E AgCl
0.059 log[Cl ]
/ Ag

Electrozi indicatori (de lucru)

Electrozi cu membran ion selectiv

Proprieti ale membranei ion selective,
necesare sensibilitii i selectivitii fa de
ioni:
Solubilitate sczut
Conductibilitate electric
Selectivitate fa de analit
Materiale: sticl, substane cristaline, polimeri

Electrozi cu membran ion selectiv

(EMIS)
Eref (Ag/AgCl)

Electrolit de
referin intern

(-)
Em

M+

(+)
M+ Soluie de
analizat

MIS

Schimbul ionic are loc pe ambele

fee ale membranei ion selective
O fa a membranei se ncarc
pozitiv, cealalt negativ, n
funcie de concentraia ionilor pe
membran
Em- Potenialul membranei n
funcie de concentraia ionilor
din electrolit care particip la
schimbul ionic

ELECTRODUL CU MEMBRAN DE STICL

Electrod sensibil la H+ (Electrod de pH)

Electrod sensibil la cationi (K+, Na+, NH4+, Li+)

Selectivitatea depinde
membranei de sticl.

de

compoziia

structura

Electrodul cu membran de sticl

sensibil la pH
Structura sticlei

Reea tridimensional de
grupri SiO44 In golurile reelei se afl ioni
Na+, Li+, Ca2+.
Cea mai utilizat sticl are
compoziia aproximativ:
22% Na2O, 6% CaO, 72% SiO2

H+ asigur conductibilitatea la
interfaa cu soluia
Na+ asigur conductibilitatea n
interiorul membranei
Ca2+ nu transport curentul (sunt
imobili)

In soluii apoase, la suprafaa membranei au

loc reacii de schimb ionic:

H++Na+Gl- ' H+Gl- + Na+

Msurarea pH-ului
influena calitii sticlei

Eelectrod sticl = k- 0.059 pH

Sensibilitatea electrodului
E/pH= 0.059

electrod sticl

mV

= k- 0.059 pH

!! Membrana
electrodului trebuie
meninut n stare
hidratat pentru ca
electrodul de sticl
s fie pregtit
pentru msurri
(electrodul se
menine imersat n
ap distilat sau
soluie de KCl)

Celula pH-metric
Electrod de referin extern (anod)
Electrod de sticl indicator (catod)
Se msoar diferena de potenial dintre electrodul de referin extern i electrodul
de referin intern de AgCl/Ag din interiorul electrodul de sticl

Msurarea pH-ului
Electrod cu
membran de sticl
de pH

Ag/AgCl

Electrod combinat de
pH
Spre pHmetru
Orificiu de
umplere
Ag/AgCl

Sol ref int

Sol ref int

jonciune
Ag/AgCl

Membrana
de sticl

Sol ref a
electrodului
de sticl

Coeficientul de selectivitate al electrodului de

sticl
Ecuaia Nikolsky
E=k+0.059 log (aH++kH+,Na+aNa+)

k H , Na
+

- coeficient de selectivitate al electrodului

Electrodul de pH poate fi modificat n privina compoziiei

membranei de sticl pentru a deveni sensibil la cationi (K+,
Na+, NH4+, Li+)

Electrozi sensibili la cationi cu

membran polimer
Mecanism de rspuns la:
Schimbtori de ioni disociabili (ex. Ca2+)
Purttori neutri (ex. K+)

Electrozi cu membran lichid cu

schimbtori de ioni pentru Ca2+

Cu schimbtori de ioni, pentru Ca2+

S.I. lichid (dodecilfosfat) dizolvat ntrun solvent nemiscibil cu apa, imobilizat

ntr-o membran hidrofob
L.D. ~ 10-5 M
Domeniu de pH: 5.5-11

Ca [(RO)2PO2]2
Faza organic

Ca2+
+ 2 [(RO)2P2]Faza apoas
Faza organic

Eind = K + 0.059/2 lg aCa2+

Configuraia electrodului cu
membran lichid pentru ioni de Ca

Electrozi cu membran pentru Cl

Schimbtori de anioni disociabili sruri cuaternare de amoniu

lipofile- determinarea Cl- n snge total, ser, plasm

Selectivitatea pentru aceti EMIS este controlat prin extracia ionului

n faza organic a membranei i este funcie de caracterul lipofil al
ionului.

Selectivitate pentru Cl-:

Aplicabilitate: la probe cu concentraii nesemnificative de anioni mai

lipofili dect Cl- (interferene pozitive din partea salicilatului sau
tiocianatului)

Expunere ndelungat la heparin scade selectivitatea electrodului

pentru Cl- datorit extragerii anionului hepainat n membran
(dezvoltare ulterioar pentru determinarea heparinei)

R->ClO4- >I- >NO3- >Br- >Cl->F-

Tem: Determinarea Cl- - Testul sudorii pentru

fibroza chistic

Electrozi cu membran cu purttori

neutri

Cu ionofori neutri, pentru K+

Valinomicina- macromolecul ciclic format

din aminoacizi i esteri

Fixeaz selectiv K+

Electrozi miniaturizai pentru msurri in

vitro

Mult mai sensibili la K+ dect la Na+

Valinomicin

Structuri de ionofori utilizai la

fabricarea EMIS polimerice

Tietz, Fundamentals of Clinical

Chemistry, Saunders Elsevir, 2008

Tem:

?? Efectul de excludere a electrolitului

Rezultate de fals hiponatremie la seruri lipemice

Cutare: influence of water content on electrolyte determination

in plasma
Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics
https://books.google.ro/books?isbn=1455759422

Ccc

Electrod pentru CO2

Spre pHmetru

Sonde de gaze (Eref+Eind)

Membran de PTFE
permeabil la gaze
Permite moleculelor mici s
o traverseze i s se dizolve
n soluia intern

Ag/AgCl
Sol intern
NaHCO3 NaCl
Sol ref int a
electrodului
de sticl

Electrod de
sticl
Membran
de sticl

Membran
permeabil
la gaze

Film subire
de soluie
intern

Sond sensibil la CO2

*CO
2

mpreun cu O2 i pH exprim gradul de oxigenare i statusul acido-bazic

Electrozi cu enzime
Enzime imobilizate n membrane permeabile pentru gaze
Produii reaciei catalizate enzimatic sunt molecule
(gazoase) mici (H+, NH3, CO2)
Sonda msoar modificarea concentraiei gazului n soluia
intern
Electrozii sunt
Selectivi
Scumpi
Utilizai in vivo
Condiii de utilizare limitate de pH, temperatur
Exemple:

Electrozi pentru glucoz, colesterol, uree

Electrozi cu enzime

=7
( NH 2 ) 2 CO + 2 H 2O ureeaza
pH

CO32 + 2 NH 4+

pH =89
NH 4+ + OH
NH 3 + H 2 O

Exemple:

Electrozi pentru glucoz, colesterol, uree

2.2. Amperometria

Electrod
amperometric
pentru msurarea
O2

(A) Pt- (B) Ag/AgCl-electrod (C) electrolit KCl (D)

membrana Teflon (E) inel de cauciuc (F) sursa
tensiune (G) galvanometru

Electrod Clark

Funcionarea electrodului de O2

Amperometria aplicarea msurrilor voltametrice la potenial

fix pentru a detecta schimbri ale curentului n funcie de
concentraia speciilor electroactive

Senzorul de O2
electrod indicator (Pt, Au) i electrod de referin (Ag/AgCl)
se aplic un potenial adecvat pt. a determina r. de reducere a
O2 care difuzeaz prin membran genernd curent
o soluie de electrolit sau un gel se afl n electrod pentru a
asigura contactul electric ntre electrodul de referin i cel
indicator
membrana permite ptrunderea gazului, nu i a ionilor din
soluie

Tehnici de separare
Spectrometria de mas (ICP-MS)
Electroforeza
Metode cromatografice
Ultracentrifugare

Electroforeza
Utilizat pentru separarea i determinarea fraciunilor proteice pe baza
diferenelor ntre vitezele de migraie ale particulelor ncrcate sub influena unui
cmp electric continuu
-Natura sarcinii electrice va determina direcia de migraiune iar mrimea sarcinii
electrice va determina viteza de migraiune
Electroforeza zonal (pe suport solid)
Suport: Hrtie, membrane acetat de celuloz, geluri agar-agar (agaroz,
agaropectin), amidon, poliacrilamid
Principiu: Probele sunt depuse sub form de spot (e. 0.5 cm diametru) pe un
suport inert, de ex. hrtie saturat cu tampon bazic, care permite ulterior detecia
zonelor separate.
Operaii generale:
Separare
Colorare, fixare, uscare
Msurare: densitometrare, reflectan
Ser de control
Electroforeza n mediu apos (dezvoltat de Tiselius)

Factori
care
infl.
vmigraie

Cmp
electric

Prob

Sarcin

Mrime
part.

Forma
Part.

Mediu
suport

Tampon

Temp.

Comp.

Conc.

pH

Adsorbie

Electroosmoz

Sitare
molecular

Electroforeza proteinelor

Focalizare izoelectric
Metod electroforetic ce permite separarea
proteinelor pe baza pI
Separarea se realizeaz prin aplicarea unei
diferene de potenial unui gel care conine
un gradient de pH
Este necesar un suport solid ( ex. gel
agaroz sau poliacrilamid)

O soluie de amfolit

pH 9

este incorporat ntr-un

gel

ss
ss
ss
ss
ss
pH 3
Prin aplicarea
unui cmp
electric n gel se
stabilete un
gradient de pH
stabil

Se adaug
soluia de
proteine i se
reaplic
diferena de
potenial

Dup tratarea cu
reactiv de culoare,
proteinele apar
distribuite pe
gradientul de pH
n funcie de
valorile pI

Sarcina
net

Punct
izoelectric pI

La un anumit pH, n fiecare

protein apare neutralizarea
sarcinilor electrice
(zero sarcin net)

pH

cccccccccccccccccccc
La

pH cobort cele mai multe

proteine sunt ncrcate pozitiv
(cationi); la pH ridicat sunt anioni;

cccccccccccccccccccc
Ionii migreaz spre electrodul de
semn opus
cccccccccccccccccccc

cccccccccccccccccc
Migrarea

se oprete la pI unde
solubilitatea proteinelor este minim

cccccccccccccccccccc

Principiul Coulter-numrarea
celulelor

particulele mpinse printr-un orificiu (apertur), n prezena curentului

continuu, produc o modificare a impedanei, proporional cu
dimensiunea particulei care traverseaz orificiul.

CC

spre pompa de vid

Metod independent
de forma, culoarea i
densitatea particulei.
tub cu apertur

celule

apertur

electrolit 0.9 % NaCl

A se consulta: http://www.beckman.com/particle/the-coulter-principle

Intrebri

Descriei pe scurt principiul de funcionare a electrodului cu

membran sensibil la ionii de calciu i avantajul metodei.

Descriei pe scurt principiul de funcionare a electrodului cu

membran sensibil la ionii de potasiu i avantajul metodei.

Explicai ce nseamn efectul de excludere a electrolitului.

Explicai cum se realizeaz separarea proteinelor prin electroforez i

discutai valoarea pH-ului de lucru fa de punctul izoelectric al
proteinelor.

Electrozi cu enzime: principiu de funcionare, avantaje, exemple.

Ce este focalizarea izoelectric?