NUCLEUL

1.STRUCTURA INVELISULUI NUCLEAR

 Celulele eucariote spre deosebire de procariote prezinta un nucleu separat de citoplasma printr-un
invelis nuclear
 Adaposteste genomul celular, nucleul este capabil sa depoziteze informatia genetica si sa fie centrul
de control al activitatii celulare
 In nucleu au loc: replicarea ADN, transcriptia prelucrarea ARN iar stadiul final al expresiei genelor are
loc in citoplasma
 Invelisul nuclear este o structura complexa fiind alcatuit din: 2 membrane nucleare;o lamina nucleara
SI complexul porilor nucleari
 Cele 2 membrane concentrice ce inconjoara nucleul sunt membrana externa si interna
 Membrana externa se coninua cu RE, astfel spatiul dintre membranele nucleare comunica direct cu
lumenul RE
 Membranele nucleare sunt asociate cu enzime ale RE
 Membrana nucleara externa prezinta prezinta ribozomi atasati
 Cele 2 membrane actioneaza ca o bariera ce separa continutul nucleului de citoplasma
 Membranele nucleare sunt bistraturi fosfolipidice, pemeabile numai pentru molecule mici nepolare
 Membranele nucleare externa si interna se unesc lanivelul porilor nucleari si formeaza singurele canale
prin care circula molecule mici polare si macromoleculele
 Lamina nucleara situata sub membrana nucleara interna , este o retea fibroasa care formeaza suportul
structural al nucleului
 Este alcatuita din 4 proteine fibroase:laminele A,B1,B2,C
 Laminele se asociaza formand filamente
 Laminele se leaga la proteinele membranare integrale care contribuie la organizarea in retea a
filamentelor de lamina si mediaza legarea lor la membrana nucleara interna
 Lamina mai prezinta si situsuri de legare a cromatinei, in interiorul nucleului cromatina este organizata
in bucle mari de ADN

2.Complexul porului nuclear

 La ME are aspectul unui octogon simetric organizat in jurul unui cnal central
 Complexul porului nuclear este alcatuit dintr-un asamblu 8 spite dispuse in jurului canalului central
 Spitele sunt conectate la 2 inele situate pe suprafetele nucleare si respectiv citoplasmatica
 Iar asamblul spite-inele este ancorat in invelisul nuclear la locurile de contact intre membranele
nucleare interna siexterna
 De la cele 2 inele pornesc filamente proteice care pe fata nucleara formeaza o structura de cos
 Canalul central delimitat de ansamblul spite-inele are un diametru de circa 40nm
 Permite pasajul unor macromolecule prin invelisul membranar
 Canalul central contine o structura numita doul central
 Analiza structurala detaliata a aratat ca ansamblul spite-inele delimiteaza pe langa canalul central,opt
canale mai mici intre spite, cu un diametru de maxim de 10nm, servesc pentru difuzia moleculelor mici
  Porul este un complex structural cu un diametrul de 125nm si o masa moleculara de circa 125 milioane
daltoni,controland circulatia moleculelor dintre nucleu si citoplasma
 Rolul pe de-o parte ARN sintetizat in nucleu trebuie sa fie exportat in citoplasma unde are loc sinteza
proteica
 Pe de alta parte factorii de transcriptie trebuie transportati de la locurile de sinteza din citoplasma in
nucleu
 Prin aceste canale selective se transporta in nucleu si ARN in citoplasma
 In functie de talia lor, moleculele pot traversa complexul porului nuclear prin doua mecanisme
 Moleculele mai mici de 2o kd trec rapid prin invelisul nuclear din citoplasma in nucleu si invers, aceste
molecule difuzeaza pasiv prin canale deschise din complexul porului nuclear
 Moleculele care trec liber intre nucleu si citoplasma, diametrul canalelor deschise este de circa 10nm
 Majoritatea proteinelor si ARN suntprea mari pentru a trece prin aceste canale de aceea nu pot circula
liber intre nucleu si citoplasma, aceste macromolecule trec prin complexul porului nuclear datorita
unui proces activ, care proteinele specifice si ARN sunt recunoscute si trensportate selectiv intr-o
singura directie, moleculele sunt transportate prin canale specializate din complexul porului
membranar, care in prezenta unui stimul adecvat se deschis atingand pana la 25nm in diametru, care
permit trecerea subunitatilor ribozomale

3.TRANSPORTUL SELECTIV AL PROTEINELOR IN NUCLEU

 Proteinele transportate in nucleu, mentionam histonele, ADN polimeraze, factori de transcriptie,

factorii de clivare, controleaza structura si functiile genomului
 Aceste proteine sunt dirijate spre nucleu prin secvente de aminoacizi numite semnale de localizare
nucleara NLS
 Smith si colaboratorii au studiat si caracterizat primul semanal de localizare nucleara folosind ca model
antigenul proteic viral SV 40T
 Ulterior s-a constatat ca NLS al antigenului T este o secventa de 7 aminoacizi:Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-
Val
 Uneori semnalul de localizare nucleara este format din 2 elemente, ca in cazul nucleoplasmei
 Aceasta NLS este bipartita avand o secventa Lys-Arg, urmata de 10 aminoacizi care o separa de a doua
secventa Lys-Lys-Lys-Lys
 Pentru intrarea in nucleu sunt necesare ambele secvente iar cei 10 aminoacizi dintre cele doua
secvente pot fi mutanti fara sa afecteze localizarea nucleara a nucleoplasminei=
 Importul proteic prin complexul porului nuclear se desfasoara in doua etape:
 in prima etapa – in lipsa ATP - proteinele care contin semnale de localizare nucleara se leaga la
complexul porului nuclear dar nu trec prin por, NLS sunt recunoscute de un receptor proteic
intracitoplasmatic numit importina
 A doua etapa- necita ATP si GTP – dupa disocierea de importina beta, importina alfa si proteina sa
substrat este translocata prin porul nuclear
 Pentru translocare este necesara o mica proteina care leaga GTP numita Ran, care initiaza disocierea
subunitatilor importinei
  Unele proteine raman in nucleu dupa importul din citoplasma, altele proteine numite navetiste se
plimba constant de la nucleu si invers,din aceasta categorie deosebim proteine care functioneaza ca
transportori pentru alte molecule de exemplu ARN
 Activitatile unor proteine nucleare sunt controlate prin diferite mecanisme, intr-un astfel de mecanism
de reglare, factorii de transcriptie se asociaza cu proteine citoplasmatice care mascheaza semnalele de
localizare nucleara,aceste semnale nu mai sunt recunoscute si raman in citoplasma
 Un ex factorul de transciptie NF-KB , cel care activeaza transcriptia lanturilor usoare ale
imunoglobulinei K din limfocitele B
 in celulele nestimulate ,NF-KB se gaseste in citosol sub forma unui complex inactivat de o proteina
inhibitoare IKB
 Legarea IKB mascheaza semnalul de localizare nucleara al NF-KB impiedicand transportul NF-KB in
nucleu
 In celulele stimulate IKB este fosforilata si degradata prin proteoliza mediata de ubiquitina permitand
intoarcerea NF-KB in nucleu si transcriptia genelor tinta
 Importul nuclear al altor factori de transcriptie este reglat direct prin fosforilarea lor fara asocierea cu
proteine inhibitoare
 Exemplu, factorul de transcriptie SW 15 al drojdiei de bere este importat in nucleu numai intr-un
anumit stadiu al ciclului celular
 SW 15 este retinut in citoplasma prin fosforilarea resturilor de serina adiacente la semnalul sau de
localizare nucleara NLS, astfel este impiedicata intrareaa in nucleu
 Defosforilarea controlata a acestor situsuri activeaa SW 15 intr-un anumit stadiu al ciclului celular ,
permitandu-i translocarea in nucleu

4.TRANSPORTUL ARN IN CITOPLASMA

 Exportul ARNm, ARNt, ARNr din nucleu in citoplasma este o etapa fundamentala
 Exportul ARNm prin complexele porilor nucleari este un proces energo-dependent care necesita Ran
 Acizii ribonucleici sunt transportati prin invelisul nuclear sub forma complexelor ARN-proteina
 Transportul se face prin complexe ribonucleoproteice, semnale care dirijeaza exportul nuclear pot fi
localizate pe proteina legata la ARN sau pe ARN
 Pre-ARN si ARNm se asociaza in timpul prelucrarii in nucleu si in citoplasma, cu un set de cel putin 20
de proteine formand ribonucleoproteinele nucleare heterogene(hnRNP)
 Cel putin una din aceste proteine hnRNP este o proteina navetista care contine un semnal de export
nuclear cei permite sa functioneze ca transportor pentru ARNm , in citoplasma
 ARNr este asamblat cu proteinele ribozomale in nucleu ,iar subunitatile ribozomale sunt transportate
in citoplasma cu ajutorul unor semnale prezente pe protrinele ribozomale
 Proteinele specifice sau semnale care mediaza exportul ARNt nu au fost inca identificate
 ARN nuclear de talie mica sau snARN, functioneaza in interiorul nucleului si nu in citoplasma ca
ARNm,ARNt, ARNr - participand la prelucrarea ARN
 Acesti ARN initial sunt transportati in citoplasma unde se asociaza cu proteinele formand snRNP
functionale care apoi se reintorc in nucleu