CURS 6 - Imunoglobulinele

Imunoglobulinele (anticorpii)

Ig sunt glicoproteine prezente n plasm, lichidele extracelulare, i secreii i sunt molecule dotate cu proprieti de Ac, adic au capacitatea de a se combina specific i sunt responsabile de recunoaterea Ag inductor (declanator) al RI. Ac - sunt implicai n finalizarea RIU - sunt implicai n iniierea RIC (funcie de opsonine)

Structura de principiu a Ac indiferent de clas, Ac sunt constituii din asocierea a 2 perechi de lanuri

forma monomeric e format din asocierea unei perechi de lanuri grele (DH) i una de lanuri uoare (DL)

1. DH - lungi, constituite din numr mare de aa => au greutate molecular foarte mare - se asociaz ntre ele prin puni disulfurice 2. DL - scurte, constituite din numr mic de aa => au greutate molecular mic - ele sunt asociate la lanurile DH prin puni disulfurice Dei sunt diferite ntre ele, cele 2 perechi de lanuri au caracteristici comune: sunt paralele ntre ele (NU e un paralelism liniar, ci unul helicoidal sau spiralar; fiecare lan se nfoar n jurul celui cu care se asociaz prin puni disulfurice. DL execut o hemispir 180 o n jurul DH la care se asociaz; DH se spiraleaz reciproc unul n jurul celuilalt. Aceast asociere face ca ele s aib o configuraie globuloas) sunt unidirecionate (orientate cu capetele N-terminale n aceeai direcie) n alctuirea acestor lanuri intr 2 categorii de secvene: a.) secvenele variabile ale lanurilor grele i uoare, constituite din primii 110 aa, la capetele N-terminale (V). Sunt poziionate n oglind => se asociaz ntre ele i constituie cte o mic cavitate ce poart denumirea de situs combinativ pentru Ag (SCAg), n care e recunoscut cte 1 determinant antigenic conformaional, situat la exteriorul Ag nativ. Cele 2 situsuri sunt identice din p.d.v. structural => prin ambele situsuri e recunoscut ntotdeauna un singur Ag conformaional => Ac sunt structuri de recunoatere monospecifice. b.) secvenele constante sunt poziionate ctre captul C-terminale al lanurilor. Ele sunt responsabile de unele efecte biologice ale Ac (activarea cascadei complementului pe calea clasic, fixarea Ac pe suprafaa micro i macrofagelor, pasajul transplacentar al Ac de la mam la ft). Cele ale lanurilor uoare au aproape aceeai structur n cadrul tuturor claselor de Ig = secvene publice. Cele ale lanurilor grele au aceeai structur doar n cadrul unei singure clase (un singur izotip) => 5 clase de Ig.

IgG Ac prototipici Caracteristici generale se afl n concetraiile cele mai mari n raport cu celelalte clase (variaz ntre 1000-1500 mg/dl). Ei formeaz 75% din totalul Ac din organism

sunt Ac distribuii n cote egale ntre sectorul intravascular i cel extravascular (n lichidele interstiiale, respectiv intratisular)

sunt Ac cu durata de via cea mai mare (variind ntre 3-4 sptmni). Excepie fac IgG3, care au o durat de via scurt (5-7 zile) Structura sunt Ac forme monomere lanurile grele (DH) - sunt formate din aproximativ 450 aa - sunt lungi sau foarte lungi (pn la 130 ) - au GM mare, 45-46 kda - excepie IgG3, care au lanuri grele formate din mult mai muli aa i au GM mai mare - NU sunt lanuri liniare, ci sunt organizate n bucle sau domenii, fiecare domeniu fiind alctuit din aproximativ 110 aa, domenii ce apar ca urmare a existenei unor puni disulfurice intracatenare - pe fiecare lan DH exist 4 domenii cu particulariti structurale i funcionale diferite - primul domeniu e situat mereu pe exterior - apoi domeniul 2 e poziionat spre interior - apoi lanul greu trece de partea opus i avem domeniile 3 i 4 - domeniile N-terminale sunt constituite din secvene de aa variabile sau hipervariabile = VH - celelalte domenii sunt toate constante = CH1, CH2, CH3 - poriunea situat ntre CH1 i CH2 = zon balama. Ea e important pentru c reprezint poriunea din lanurile grele dotat cu cea maximum de flexibilitate, favoriznd net contactul Ac cu determinani Ag conformaionali de la suprafaa Ag nativ. n zona de balama lanurile grele se asociaz ntre eleprin puni disulfurice; n funcie de numrul acestora i repartiia lor distingem 4 subclase sau 4 izotipuri de Ac de tip IgG:

IgGIV exist 2 puni disulfurice, situate fiecare de o parte i de alta a punctului de intersecie - n funcie de numrul de puni disulfurice, se condiioneaz, printre altele, i durata de via a acestor Ac. Obinuit, ntre durata de via i numrul de puni disulfurice exist o relaie de invers proporionalitate. Pe msur ce numrul de puni e mai mare pot suferi atacul enzimelor sau radicalilor liberi de O eliberai de factorii proceselor inflamatorii. - lanurile uoare (DL) - alctuite din aproximativ 215 aa - au o lungime de aproximativ 60 de - GM aproximativ 20-22 kda - organizate n bucle sau domenii, 2 pe fiecare lan uor - primul domeniu e situat n interiorul moleculei - cel de-al doilea e orientat spre exterior, lanurile uoare se spiraleaz n jurul celor grele - domeniul N-terminal e constituit din aa variabili i hipervariabili = VL - cellalt domeniu e constant sau aproape constant = CL - se cunosc 2 tipuri de lanuri uoare: K 2/3 din totalul lanurilor uoare 1/3 din totalul lanurilor uoare 2 fragmente: Fab (de legare a Ag) Fc (constant, cristalizabil) Funciile i structura Fab al IgG rol foarte important n recunoaterea Ag

IgGI exist 2 puni disulfurice, situate ntre punctul de intersecie i CH2 IgGII exist 4 puni disulfurice, situate 2 cte 2 de o parte i de alta a punctului de intersecie IgGIII exist 15 puni disulfurice, situate ntre punctul de intersecie i CH2

prin el pot recunoate orice tip de Ag nativ (Ag solubil, jucnd rol important n eliminarea lor sub form de complexe imune de ctre micro sau macrofage)

prin el pot recunoate Ag corpusculare (IgG funcioneaz ca opsonine i favorizeaz endocitarea Ag de ctre macrofage) recunoaterea antigenic e realizat prin situsul combinativ pt Ag (SCAg) Structura i funcia SCAg o cavitate de dimensiuni reduse (30-10-6 ) rezultat n urma plicaturrii VH-VL, care permite att acomodarea Ag, ct i angajarea de legturi cu acesta prin potrivire de form sau complementaritate plicaturarea ce st la baza SCAg e rezultatul existenei unor puni disulfurice intradomeniu n cadrul fiecrui domeniu exist 3 puni ce creeaz 3 plicaturi

n cadrul SCAg distingem 2 categorii de secvene: secvenele de aa ce particip la realizarea recunoaterii Ag (ele sunt constituite din 8-15 aa i sunt situate la nivelul vrfului intern al plicaturii. Ele realizeaz contactul cu Ag prin potrivire de form (complementaritate) = regiuni determinante ale complementaritii CDR adic CDR1, CDR2, CDR3) secvenele Fr (framework region) nu sunt implicate direct n stabilirea contactului cu Ag, ele sunt pereii cavitii

Laura & Daniel

CURS 6 - Imunoglobulinele
cele mai importante in funcia Ac sunt regiunile CDR cele 6 CDR formeaz paratopul (substructura din SCAg care este direct responsabil de angajarea unor legturi specifice cu Ag inductor) caracteristica fundamental a paratopului e specificitatea legturii Ag-Ac. Ea ine de: natura aa care intr n constituia CDR, numrul aa prezeni n CDR i poziionarea n spaiu a plicaturilor (a celor 6 CDR), dependent de zona Fr

plicaturarea VH, VL poate avea 2 efecte distincte: - favorizeaz net recunoaterea Ag - poate n unele situaii s transforme SCAg n determinani Ag conformaionali, pentru c prin asocierea CDR se pot constitui secvene de aa ce pot fi ori rar ntlnite n organism, ori chiar unice, nemaintlnite n organism. Ele se pot comporta ca structuri antigenice = idiotopi = componenta Ag a oricrui SCAg idiotopii pot fi interni, externi sau micti totalitatea idiotopilor = idiotip (specificitatea Ag a oricrui SCAg) => SCAg poate avea 2 caliti aparent contrarii - el e o structur de recunoatere Ag - poate fi o structur Ag n sine. Idiotopii sunt structuri intens imunogene => RI fa de un Ag NU e unic, ci un rspuns repetitiv, ntreinut de cateva ori. Rspunsul se repet pn cnd se formeaz Ac antiidiotip, numii copia intern a Ag. Copia intern a antigenului RIU are ca rezultat Ac care prezint SCAg complementare Ag inductor e posibil ca aceti Ac s prezinte n SCAg idiotopi. Ei se vor comporta ca noi structuri Ag rezultnd declanarea unui alt RIU specific, caracterizat prin generarea de Ac specifici, ce prezint un SCAg complementar al generaiai anterioare. Ac nou formai sunt Ac antiidiotip. SCAg al Ac antiidiotip seamn conformaional cu conformaia spaial a Ag inductor = imaginea intern a Ag (ea limiteaz RIU) Funciile i structura Fc al IgG CH2 - rol n declanarea cascadei complementului pe calea clasic - realizeaz funcia printr-o secven de aproximativ 600 aa capabili s angajeze legturi cu o component a complementului (C1q) => se declaneaz cale clasic. Nu are loc spontan, ci doar dup ce Ag a fost recunoscut ca Ag specific - ca urmare a recunoaterii Ag apar modificri conformaionale n lanul H, care se transmit din aproape n aproape n sens ortodromic (N-C) care contribuie la exteriorizarea secvenei de aa capabil s lege componenta C1q a complementului CH3 - rol n fixarea Ac de membrana macro i microfagelor - Ac sunt importani n medierea fagocitrii (sunt Ag corpusculare) - fixarea IgG pe micro i macrofage se face NU prin contact direct, ci prin receptori: FcR - exist 3 categorii de receptori FcRI CD 64 FcRII CD 32 FcRIII CD 16 FcR1 - receptori de nalt afinitate pt IgG (fixeaz cu aviditate IgG, dar selectiv. Ei fixeaz n special IgG1 i IgG3, mai puin IgG2 i deloc IgG4 - distribuii pe membrana macrofagelor, suprafaa neutrofilelor i pe celulele K (Killer) - 2 componente: una receptorial (glicoprotein transmembranar ce prezint n segmentul extracelular 2 bucle, segment intracitoplasmatic foarte scurt) i o component de transducie a semnalului activator (2 lanuri identice ntre ele cu lanuri receptoriale foarte lungi = lanuri (segmente intracitoplasmatice foarte lungi) - el e capabil s fixeze Ag corpusculare opsonizate prin IgG. Fixarea se face prin legturi din domeniul N-terminal al componentei receptoriale i domeniul CH3 al IgG => semnale activatoare ce se transmit ctre poriunea intracitoplasmatic NUMAI prin lanurile - funcia lui: Macrofage fagocitare/endocitare a Ag corpusculare opsonizate prin IgG NK captarea Ag corpusculare opsonizate prin IgG. Endocitarea nu e posibil de obicei (diametrul redus al celulelor NK) rezultnd activarea lor i n final eliberarea unor mediatori distructivi: enzime, radicali liberi de O, perforine. Distrug Ag corpusculare extracelular i fragmentele pot fi endocitate (procesul = ADCC citotoxicitate celular anticorp dependent) FcR2 - joas afinitate pentru IgG, neselectiv - pe suprafaa monocitelor, macrofagelor, pe membrana granulocitelor i la - o singur component care ndeplinete funcia de receptor i transductor - glicoprotein transmembranar care n poriunea extracelular prezint 2 - funcie: pe macrofage endocitarea Ag corpusculare opsonizate prin IgG pe granulocite mediaz ADCC nivelul sinciiotrofoblastului bucle (domenii) i dispune de un segment

intracitoplasmatic foarte lung

n sinciiotrofoblast joac rol important n pasajul transmembranar al IgG de la mam la ft - joas afinitate pentru IgG - NUMAI pe suprafaa celulelor K i NK - receptor definitoriu: celulele k i NK = celule CD16+ - 2 componente distincte: receptor (structur Ig like), transductor - receptorul are cte 2 domenii extracitoplasmatice i un segment - transductor: lanuri lungi - funcie: mediaz ADCC Particulariti funcionale ale subclaselor de IgG FcR3 IgG1 IgG2 IgG3 concentraie de 100mg/dl sunt mai buni activatori de complement dect IgG2 clas minoritar, 30mg/dl sunt slabi activatori de complement subclas major, 900mg/dl sunt buni activatori de complement sunt Ac responsabili de imunizarea pasiv a nou-nscutului (trec uor prin placent)

intracitoplasmatic foarte lung

IgG4

concentraii mici, 50mg/dl NU sunt activatori de complement Ac de tip IgG sunt caracteristici pentru RIU secundare (apar dup cel de-al doilea contact cu acelai antigen) IgM Caractere generale concentraii de 120-130mg/dl durat de via scurt (7-10 zile) sunt forme pentamerice, formai din 5 monomeri asociai printr-o pies de jonciune cu GM de 900 kda. Lanurile grele de IgM sunt mai lungi. Ele conin 5 domenii (1 variabil i 4 constante) Funcii o prim linie de aprare antibacterian i antiviral acioneaz ca Ac aglutinani

Clasificarea RIU 1. Primare 2. Secundare

dintre toate categoriile de Ac sunt cei mai activatori de complement pentru c dispun de 2 domenii activatoare de complement (CH 2 i CH3) i sunt forme pentamerice, nu monomerice ca IgG (dispun de 20 de situsuri activatoare de complement i NU doar de 2) sunt caracteristice pentru RIU primare

1. Primare

se formeaz Ac NUMAI IgM pentru c la primul contact cu Ag la cooperarea cu APC particip doar LT Hp, care produc i elibereaz IL-2 care NU activeaz mecanismul de SWITCH (comutare concentraia de IgM e moderat crescut pentru c la primul contact cu Ag particip clone limfocitare TH i B neexpansionate durata hiper IgM e limitat n timp pentru c Ac IgM au durat scurt de via (conin un numr mare de puni disulfurice) i pentru c la primul contact cu Ag NU exist nc clone T/B cu memorie 2. Secundare

izotipic)

se formeaz Ac NUMAI IgG pentru c la al n-lea contact (contacte repetitive) cu acelai Ag la cooperarea cu APC particip LT H2 care produc IL-4 care e capabil s activeze mecanismul de SWITCH, producia de IgM fiind inhibat

Laura & Daniel

CURS 6 - Imunoglobulinele
concentraiile de IgG sunt mari sau foarte mari pentru c la contacte repetitive cu acelai Ag particip clone T sau B deja expansionate ca urmare a contactelor Ag precedente durata hiper IgG e prelungit n timp (3 4 sptmni) pentru c IgG au o durat de via lung i pentru c particip clone T/B cu memorie imunologoic

Laura & Daniel