CAPITOLUL I

INTRODUCERE N BIOLOGIA
MOLECULAR

Biologia Molecular:
studiul proceselor biologice la nivel molecular
ramur a biologiei care se ocup cu studierea proceselor
biologice la nivel molecular prin evaluarea ADN, ARN, a
proteinelor i a altor biomolecule implicate n controlul i
modularea informaiei genetice utiliznd metode i tehnici
avansate de separare, manipulare i imagistic
 COMPONENTELE STRUCTURALE ALE ACIZILOR NUCLEICI

Acizii nucleici sunt macromolecule, care au fost pentru prima dat izolai din nucleii
celulelor. Mai trziu s-a evideniat, existena acizilor nucleici att n nucleu ct i n
citoplasma celulelor.
Acizi nucleici pot fi:
a) ADN (acid deoxiribonucleic) localizat n principal n nucleul celulelor dac acesta este
individualizat, cum este cazul eucariotelor;
b) ARN (acid ribonucleic), prezent n principal n citoplasma celulelor dar i n nucleu.
Interesul studierii acizilor nucleici:
ADN i ARN au rol esenial n sinteza proteinelor.
ADN conine programul sintezei proteinelor, fiind responsabil de dictarea ordinii n
care aminoacizii se leag ntre ei pentru a da natere unei proteine.
ADN este un element permanent al celulei, informaiile coninute n structura sa sunt
transmise descendenilorADN este suportul ereditii.
Majoritatea tipurilor de acizii ribonucleici, ARNr, ARNt i ARNm, sunt moleculele
implicate n realizarea sintezei proteice.
Molecula de ADN este cea mai mare din organism, avnd o dimensiune variind de la
103-105 pb, la virusuri, la 108-109 pb, la mamifere.
 structural, acizii nucleici sunt macromolecule polinucleotidice foarte mari, formate din
repetiia unor subuniti numite nucleotide.
Nucleotidele sunt formate dintr-un rest de acid fosforic, un rest de pentoz
(riboz sau deoxi-riboz) i un rest de baz purinic sau pirimidinic.

Bazele azotate
n structura nucleotidelor i a polimerilor lor intr dou baze purinice i trei baze
pirimidinice majore precum i baze modificate enzimatic dup sinteza acestora
asociate cu semnale chimice de protecie i control.
Baze majore
Sunt derivai ceto- sau amino- ai pirimidinei i ai purinei (imidazolpirimidin)
Numele utilizate curent nu sunt corelate cu denumirile sistemice folosite n
chimia organic. Anumite denumiri evoc sursa unde bazele azotate au fost
descoperite: guanina de la guano (excremente de pasre), timin de la
evidenierea sa n timusul de vac.
 Baze pirimidinice: pirimidina; citozina (2-ceto-4-amino-pirimidina); uracilul (2,4-
diceto-pirimidina); timina (2,4-diceto-5-metil-pirimidina);
Baze purinice: purina (imidazolpirimidin); adenina (6-amino-purina); guanina (2-
amino-6-ceto-purina).
n structura ADN intr: Citozina, Timina, Adenina i Guanina
n structura ARN intr: Citozina, Uracilul, Adenina i Guanina
 Baze modificate sau substituite

Modificarea bazelor azotate din structura ADN prin metilare

la animale 5-metil-citozina din ADN este un semnal negativ de reglare a expresiei
genelor. Gruparea metil favorizeaz conformaia inactiv a ADN n form condensat
i mpiedic fixarea factorilor de transcripie, deci copierea inf. n ARN
la bacterii moleculele de citozin metilate din ADN au cel puin dou roluri:
a) constituie un sistem de distincie i de
protecie a ADN bacterian fa de ADN non-
self. Celula activeaz de fapt enzime de
restricie (endonucleaze) pentru a distruge
ADN viral/fag nemetilat, cel puin n cazul
primei infectri. Acest sistem de aprare este
cunoscut sub numele de restricie-metilare;
b) sunt elemente ale sistemului de corectare a
eventualelor greeli de replicare (etichetare).
5-hidroxi-metil-citozina la bacterii i bazele
purinice N-metilate la mamifere sunt implicate
n reglarea timpului de njumtire al ARN
 Degradarea bazelor purinice prin reacii
de deaminare
bazele purinice care nu sunt reciclate sunt degradate
la acid uric trecnd prin formele deaminate hipoxantin
i xantin. Acidul uric, foarte puin solubil, este produsul
de excreie al acestor baze la primate
la plante, alcaloizii sunt derivai metilai ai xantinei
avnd proprieti farmacologice: cafeina (stimulant),
teobromina i teofilina (stimulatori cardiaci, relaxani ai
musculaturii netede i vasodilatatorii).
 Proprietile bazelor azotate
Conjugarea dublelor legturi din structura heterociclurilor
i) stabilizarea puternic a moleculei;
ii) structurile sunt aproape plane (pirimidinele sunt plane i purinele uor pliate);
iii) moleculele exist sub diferite forme tautomere (amino-imino i ceto-enol), n
funcie de pH. La pH fiziologic, sunt favorizate formele amino i ceto;
iv) absorban la 260 nm (dozarea i controlul puritii derivailor)

Comportarea acido-bazic
Purinele i pirimidinele sunt baze slabe ale cror molecule nu au sarcin ionic la pH
7,0. Comportamentul la titrare este complex deoarece posed multiple situsuri
poteniale donoare sau acceptoare de protoni cu localizare diferit n funcie de forma
tautomer implicat.
Solubilitatea
Datorit nucleelor condensate hidrofobe, la pH i temperatur fiziologic bazele
purinice sunt aproape insolubile. La valori de pH acide sau bazice dizolvarea lor n
mediu apos este favorizat de ionizare;
Interacia hidrofob
n soluii apoase, apare interacia hidrofob dintre nucleele
bazelor azotate care se realizeaz prin fore Van der Waals,
conducnd la suprapunerea planurilor acestora. Aceast
tendin reprezint fenomenul de stivuire sau stacking al
bazelor azotate.
Suprapunerea parial a inelelor reprezint o asociere tipic
a bazelor n structuri cristaline i n dubla elice a AN.
stivuirea inelelor din
Bazele se stivuiesc ntr-o ordine preferenial: pur-pur>pur- cristalul de 9-metil-
pir>pir-pir adenin
Stivuirea bazelor este un factor
primordial n stabilizarea structurii
spaiale a acizilor nucleici. Are drept
consecin scderea absorbiei n UV
a unui acid nucleic fa de o soluie
echivalent de nucleotide libere,
urmat n acelai timp de deplasarea
spectrului cu civa nm (efect
hipocrom).
Capacitatea de a forma legturi de hidrogen cu bazele complementare:
Gruprile polare fixe, carbonil i amino, i atomii de azot ai ciclurilor sunt adecvate
pentru stabilirea legturilor de hidrogen ntre baze, de tip O---H i N---H.
mperecherea necovalent dintre baze, este un fenomen cheie pentru formarea
structurii secundare a acizilor nucleici i pentru duplicarea, copierea i exprimarea
materialului genetic.
Formele tautomere, n care se gsesc partenerii bazelor, au o importan foarte mare
deoarece condiioneaz posibilitatea formrii acestor legturi.
Transformarea chimic a bazelor
Radiaiile UV:
Iradierea UV deschide dublele
legturi din structura a dou baze
suprapuse i determin formarea de
legturi covalente C-C ntre acestea.
Dimerizarea pirimidinelor (timinelor),
este un factor care estimeaz
capacitatea de carcinogenez a
acestor radiaii;
Ageni chimici
a) acidul azotos (HNO2) i compuii
organici i minerali derivai de la
acesta: nitrozamine, nitrii i nitrai ca
i acidul sulfuros (HSO3-) au aciune
de deaminare.
n industria alimentar regsim aceti compui n categoria conservanilor utilizai
pentru a mpiedica dezvoltarea bacteriilor.
b) mediul industrial este surs de substane toxice alchilante care determin metilarea
diferitelor baze (guanina este cea mai uor de metilat);
c) speciile reactive de oxigen - peroxizii, radicalii liberi, oxigenul singlet - sunt favorizate
prin expunere la lumin i determin modificri oxidative la nivelul bazelor
Nucleozide= baz azotat+riboz/deoxiriboz
Riboza intr n structura acizilor ribonucleici iar 2-deoxiriboza intr n structura acizilor
deoxiribonucleici.
Ambele pentoze fac parte din serie steric D, prezint ciclizare semiacetalic furanozic
i anomerie
Legtura cu baza este de tip N-glicozidic fiind stabilit ntre carbonul 1 al pentozei i
azotul N1 al pirimidinelor i N9 al purinelor (se realizeaz numerotarea bazei i apoi se
rencepe prin numerotarea ribozei, dnd numerelor apelativul prim)
Ca regul general trebuie s reinem sufixul -idin pentru nucleozidele pirimidinice
i -ozin pentru nucleozidele purinice.
Legtura N-glicozidic, rezist la tratament alcalin.
Reacia sa cu acizii depinde de baza azotat: nucleozidele purinice hidrolizeaz uor, n
timp ce pentru a degrada nucleozidele pirimidinice este necesar aciunea prelungit a
unui acid concentrat. Se estimeaz c ntr-o zi, ntr-o celul de mamifere, numai unul din
105 nucleotidele purinice i pierde baza.
n cazul nucleozidelor, nucleotidelor i acizilor nucleici legtura glicozidic C1-N permite
rotaia bazei azotate n jurul legturii i situarea sa n dou poziii diametral opuse n
raport cu pentoza.
Pentru conformaia syn (mpreun), planul bazelor este orientat de aceeai parte cu
riboza, n timp ce pentru conformaia anti (contrar), orientarea este contrar.
n cazul nucleozidelor pirimidinice singura conformaie natural admis este anti
deoarece carbonul din poziia 2 purttor de grupare carbonilic determin apariia unor
fore de respingere cu oxigenul ciclului ribozic.
 Nucleotide
esteri fosfati ai nucleozidelor

ADN i ARN, sunt polimeri nucleozidici 5-monofosfat.

n reaciile de sintez ale AN, nucleozidele 5-trifosfat (NTP)
sunt substrate care particip la formarea legturilor 3,5-
fosfodiester cu eliberarea unei molecule de pirofosfat la
fiecare condensare, energia necesar formrii legturii
covalente fiind furnizat de hidroliza legturii anhidridice.
Tipuri de nucleotide
a) fosfatul esterific una sau mai multe grupri hidroxil legate la atomii de carbon din
ciclul pentozei: nucleozid mono- i difosfat (nucleozid 3-monofosfat, nucleozid 5-
monofosfat, nucleozid 3,5-difosfat, etc).
b) gruparea fosfat poate ea nsi s fie angajat n condensri anhidridice :
i) cu alte molecule de acid fosforic (nucleozid 5-difosfat, nucleozid 5-trifosfat);
ii) cu un nucleotid cu structur de nucleozid 5-monofosfat, 5-difosfat sau 3,5-
difosfat (NAD+, NADP+, FAD, coenzima A)

AMP
c) Gruparea fosfat ce esterific o grupare hidroxil legat la un atom de carbon
din ciclul pentozei poate forma o a doua legtur ester cu o alt grupare hidroxil
aparinnd aceleiai pentoze conducnd la formarea unei nucleotide ciclice
(nucleozid 3,5-monofosfat ciclic).

Acizii nucleici sunt polimeri de nucleozide 5-monofosfat. Celelalte nucleotide

intervin n biosinteza acestora i n alte tipuri de reacii fiind pri componente
ale coenzimelor, avnd rol de mesageri secundari, efectori allosterici sau
participnd la regenerarea NTP.
Funcile biologice ale
nucleotidelor
 Rol NTP n metabolismul energetic
NTP au un nalt potenial energetic, legturile de tip anhidrid acid au o
entalpie liber de hidroliz superioar legturilor ester-fosfat (de ordinul a 30
kJ/mol).
ATP este molecula selecionat evolutiv de ctre organisme pentru a constitui
rezerva temporar i sursa de energie utilizabil de ctre materia vie, cu toate
c n cteva reacii metabolice intervin i CTP, GTP i TTP.
ATP este generat n celule prin fosforilare oxidativ i fosforilare la nivel de
substrat.
De hidroliza ATP depind:
- realizarea unor aciuni fizice cum sunt contracia muscular i transportul activ
al ionilor i moleculelor prin membran;
- reaciile biochimice care sunt termodinamic imposibile fr cuplare energetic
(fosforilarea substraturilor, regenerarea altor NTP: GTP, UTP, CTP)

ATP aza, Mg 2
ATP H 2 O ADP Pi G ' 30,5 kJ/mol
Prima etap a glicolizei (proces prin care are loc catabolizarea glucozei) n care se
formeaz glucozo-6-fosfat, este o reacie endergonic i nu s-ar putea produce fr
cuplarea cu reacia de hidroliz a ATP, care este puternic exergonic:

ATP H 2 O ADP Pi G ' 30,5 kJ/mol

Glucoza Pi Glucozo 6 fosfat H 2 O G ' 13,8 kJ/mol

Glucoza ATP Glucozo 6 fosfat ADP G ' 16,7 kJ/mol

Componente ale coenzimelor: intr n structura NAD+, NADP+, FAD i

CoA care sunt constitueni celulari foarte importani cu rol critic n multe reacii
metabolice.
 Uniti monomere ale acizilor nucleici
Acizii nucleici, ADN i ARN, sunt polimeri nucleozidici 5-monofosfat. n
reaciile de sintez ale acizilor nucleici, nucleozidele 5-trifosfat sunt
substrate care particip la formarea legturilor 3,5-fosfodiester cu eliberarea
unei molecule de pirofosfat la fiecare condensare, energia necesar formrii
legturii covalente fiind furnizat de hidroliza legturii anhidridice.
 Mediatori fiziologici
Mesagerii secundari: Mesager secundar este o molecul care asigur aciunea
intracelular a unui semnal extracelular (un hormon sau un alt mediator i constituie
primul mesager care se fixeaz la suprafaa celular).
AMPc se formeaz din ATP la nivelul adenilil ciclazei pe faa
intracelular a mb n urma fixrii moleculei semnal. Sinteza
AMPc se stopeaz, cnd aciunea extern nceteaz, prin
hidroliza uneia dintre legturile ester, produsul fiind 5-AMP.
AMPc
controleaz
glicogenoliza i
glicogenogeneza
mediat de
epinefrin i
glucagon.
GTP este implicat n
prelucrarea post-
transcripional a
ARNm (adugarea
capului),
transmiterea semnalului ctre
proteinele G (GTP binding protein),
i formarea microtubulilor.
 Intermediari activai
Nucleotidele au rol de transportori (carriers) ai
intermediarilor activai ntr-o serie de reacii metabolice.
Compusul UDP-glucoz este un intermediar cheie n
sinteza glicogenului i glicoproteinelor.
Compuii GDP-manoz, GDP-fucoz, UDP-galactoz, i
CMP-acid sialic sunt intermediari cheie n reaciile n care
monomerii glucidici sunt transferai pentru sinteza
glicoproteinelor.
CTP este implicat n metabolismul fosfolipidelor n
generarea CDP-colinei, CDP-etanolaminei i CDP-
diacilglicerolilor.
S-adenozilmetionina (SAM) este un donor de grupri metil n reaciile responsabile de
metilarea glucidelor, a bazelor azotate din structura ARN i ADN, i n formarea unor
compui cum sunt fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina i carnitinei din lizin, etc.
3-fosfoadenozin 5-fosfosulfat (PAPS) este folosit ca donor de grupri sulfat pentru
sulfatarea biomoleculelor de tipul proteoglicanilor i sulfatidelor.

Efectori alosterici: o serie de etape metabolice reglatoare sunt controlate prin

intermediul concentraiilor intracelulare ale nucleotidelor.
NUCLEOTIDE SINTETICE UTILIZATE N MEDICIN
Purinele, pirimidinele, nucleozidele i
nucleotidele cu heterociclul sau cu partea
glucidic modificat sunt utilizate n clinica
medical. Aceti analogi pot inhiba enzimele
implicate n sinteza AN sau incorporarea lor n
structura AN destabilizeaz mperecherea
bazelor azotate.
n tratarea cancerului sunt utilizai 5-fluoro-sau
5-iodouracilul, 6-tioguanina, 6-mercaptopurina,
8-azaguanina i 6-azauridina care sunt
incorporate n ADN naintea diviziunii celulare.
Analogul purinei, allopurinolul este utilizat n
hiperuricemie i gut, inhibnd biosinteza
purinelor i enzima xantin oxidaza.
Azatioprinul, care este catabolizat la
6-mercaptopurin este utilizat n cazul
transplantului de organe, pentru a suprima
respingerea imunologic.
POLINUCLEOTIDE
Acizii nucleici sunt polimeri neramificai ai
monofosfat nucleotidelor, care pot fi liniari
sau circulari. Demonstrat de Levene n
1925 i confirmat dup 1950 de ctre Todd,
nlnuirea covalent a nucleotidelor este
de tip ester. Gruparea 5-fosfat a unui
mononucleotid este esterificat de o alt
grupare OH, formnd o legtur
fosfodiester. n general, cea de a doua
grupare OH este cea din poziia 3 a
pentozei celui de al doilea nucleotid.
Scheletul AN este format din resturi de
pentoz nlnuite prin legturi 35
fosfodiesterice.
Fosfodiesterazele catalizeaz rapid
hidroliza legturilor 3,5-fosfodiesterice.
Hidroliza spontan a legturii 3,5-
fosfodiesterice este un proces extrem de
lent, ceea ce explic faptul c ADN persist
perioade lungi de timp, fiind gsit i ADN
fosil.
ARN este mai puin stabil dect ADN, deoarece gruparea OH din poziia 2'- a
ribozei funcioneaz ca o grupare nucleofil atacnd legtura 3,5-
fosfodiesteric.
Depolimerizarea AN (hidroliza legturilor 3,5-fosfodiesterice) se poate realiza
prin hidroliz de diferite tipuri (acid, bazic, enzimatic) fiind folosit n tehnicile
de biologie molecular
Nucleotidele sunt acizi polifuncionali
Purinele, pirimidinele i nucleozidele nu
sunt ncrcate electric la pH fiziologic. n
schimb, gruparea fosfat primar (pK~1) i
gruparea fosfat secundar (pK~6.2) ale
nucleotidelor sunt ncrcate negativ la pH
fiziologic i n mediu alcalin.
Nucleozidele pot funciona ca donori sau
acceptori de protoni n medii cu valori ale
pH cu dou uniti sub i peste pH
fiziologic.
AN i fragmentele lor datorit scheletului
pentozo-fosfat ncrcat negativ pot fi
separate n cmp electric prin
electroforez n funcie de numrul de
nucleotide din componea lor.
 CAPITOLUL II
STRUCTURA I FUNCIA
ACIZILOR NUCLEICI
 STRUCTURA PRIMAR A ACIZILOR NUCLEICI (AN)
se refer la secvena nlnuirii monomerilor nucleozid 5-fosfat (NMP), la
legturile dintre acetia i mrimea polimerilor obinui.
cele dou tipuri de acizi nucleici se deosebesc prin dou caracteristici calitative:
1) prezena unei pentoze diferite (riboz sau deoxiriboz); tipul de glucid d
numele celor dou tipuri de acizi nucleici deoarece nu exist structuri naturale
mixte ADN/ARN n afar de hibrizii care apar tranzitoriu n timpul replicrii i
transcripiei; Prezena hidroxilului n poziia 2 a ribozei determin:
a) imposibilitatea catenelor de ARN de a forma structuri dublu catenare pe
distane mari;
b) o reactivitate particular a ARN, gruparea hidroxil din poziia 2 a ribozei
are caracter nucleofil cataliznd hidroliza legturii 3,5-fosfodiesterice;
c) centre suplimentare de interaciune prin legturi de hidrogen.
2) diferene privind cele patru baze care intr n constituia ADN i ARN, una
dintre pirimidine fiind diferit. O distincie mai nuanat este dat de bazele i
nucleotidele minore. ADN se caracterizeaz prin egaliti i raporturi
purine/pirimidine specifice pe care nu le regsim n ARN.
Faptul c acizii nucleici sunt polimeri fosfodiesterici ai NMP are urmtoarele
consecine directe:
a) asemeni polipeptidelor, catena este orientat (vectorizat). Sensul
convenional 5-3 a fost adoptat pentru lectura i scrierea (de la stnga la dreapta)
polinucleotidelor ca i pentru reprezentrile prescurtate i simbolice.
b) bazele fixate regulat n funcie de o secven specific speciei
moleculare, sunt purtate de un schelet covalent pentoz-fosfat.

Cnd toate legturile sunt 3,5-

fosfodiesterice o notaie mai
compact a fragmentului
reprezentat alturat este:
pApTpCpA. Aceast
reprezentare indic faptul c doar
gruparea hidroxil din poziia 5'- a
fragmentului (captul din stnga)
este fosforilat pe cnd cea din
poziia 3'- este liber (captul din
dreapta). Scrierea compact de tipul ATCA prin
convenie are captul din stnga 5-fosforilat iar
cel din dreapta 3-liber.
 Mrimea polimerilor nucleici
AN sunt cele mai mari macromoleculele naturale.
Mrimea acizilor nucleici se exprim prin trei caracteristici (tipuri de uniti):
lungime;
mas molecular n Daltoni (Da);
numr de nucleotide sau de baze ale acestora pentru monocatene (b) i n
perechi de baze (pb) dac molecula este constituit din dou catene asociate.
Multiplul cel mai folosit este cel de kilobaze sau kilo-perechi de baze (1000 b
sau 1000 pb).
Masa molecular medie a unei perechi de baze este de 660 Da, iar distana
ntre platourile a dou baze este de 0,34 nm n conformitate cu caracteristicile
geometrice ale dublei catene de ADN. Aceste caracteristici dau o echivalen
foarte util n practic: 2x1,06 MDa se pot aproxima cu 3 000 pb i cu 1 m.

Numrul nucleotidelor din structura ARN variaz de la mai multe zeci de baze la
mai multe mii de baze.
ARN ribozomal (ARNr) variaz de la 100 - 5 000 b
ARN de transfer (ARNt) variaz de la 75 - 90 b
ARN mesager (ARNm) are un numr variabil de baze, n funcie de lungimea
secvenei genei copiat
Mrimea ADN variaz n funcie de regn i specie de la 5 000 la mai mult de un
milion de perechi de baze.

Procariotele
grup de organisme care nu au membran nuclear (fr nucleu)
Mycoplasma, unul din cele mai mici procariote are genomul de 106 pb
Bacteriile au genomul ncepnd cu 2x106 pb fiind reprezentat de un cromozom format
din ADN dublucatenar circular

Eucariotele
grup de organisme ce prezint membran perinuclear, deci au nucleu
eucariotele unicelulare au genomul apropiat de cel al unor bacterii mari
drojdiile au un genom de circa 1,3x107pb
nematodele, precum C. elegans au genomul de 8x107pb
amfibienii au genomul ncepnd de la 109-1011pb
mamiferele au genomul n jur de 5x109 pb (H. Sapiens 3,3x109)

Din aceste date se observ c nu exist o bun corelaie ntre mrimea genomului i
complexitatea organismului i se numete C-value paradox, fiind datorat secvenelor
repetitive din genom.
 MODELUL WATSON-CRICK: ADN B

Prin studierea radiografiilor obinute prin difracie cu raze X a macromoleculelor de ADN,

n 1953, Waston i Crick au dedus structura tridimensional a ADN dublu catenar, au
intuit mecanismul replicrii ADN i au propus urmtorul model structural:

- secvenele de baze azotate poart informaia

genetic
-cele dou catene polinucleotidice helicoidale
sunt antiparalele (una este orientat 53 iar
cealalt 35), fiind rsucite spre dreapta (n
sensul acelor de ceasornic) n jurul unei axe
comune;
-bazele azotate sunt orientate spre interiorul
helixului n timp ce resturile fosfat i cele de
deoxiriboz se afl ctre exterior. Planurile
bazelor azotate sunt perpendiculare pe axa
helical iar ale deoxiribozei se afl aproape la 90
fa de cel al bazelor;
- diametrul helixului este de 20 A.
- bazele vecine sunt separate printr-o distan
de 3,4 A (proiecie pe axa) i rotite cu 36 .
Astfel, structura helical are 10 resturi
nucleotidice per tur, iar fiecare tur are o
proiecie pe ax de 34 A.
- cele dou catene sunt complementare fiind
meninute prin puni de hidrogen ntre perechile
de baze complementare A=T i GC.
- prezint dou fose, una major de 12 A i una
minor de 6 A lime care au rol n interaciile
specifice dintre proteine ce recunosc anumite
secvene de ADN i care sunt implicate n
reglarea genelor.
- Catena 53 se numete catena codificatoare
(coding strand) ce poart informaia genetic
fiind identic ca secven cu cea a transcriptului
ARN (cu excepia TU). Catena 35 se numete template sau caten
necodificatoare i este copiat n ARN n procesul de
transcripie.
Modul de mperechere al bazelor azotate din dublul helix ADN a fost susinut i de
descoperirile lul Chargaff (1950) care a studiat compoziia n baze a ADN i a
constatat:
concentraiile molare ale adeninei i timinei sunt egale precum i ale guaninei i
citozinei:
A T i G C
concentraia molar a purinelor este egal cu cea a pirimidinelor:

A G T C
raportul R (procentul G+C) variaz ntre specii dar este constant n celulele
unui organism precum i n cadrul speciilor.

R
G C
G C A T
 DENATURARE I TEMPERATUR DE TOPIRE (MELTING) Tm
catenele complementare ale unui duplex ADN pot fi separate prin nclzirea unei
soluii de ADN (ruperea punilor de hidrogen) sau prin adugare de acizi sau baze
(ionizarea bazelor azotate).
prin creterea progresiv a temperaturii se formeaz bucle deschise la nivelul
perechilor A T a cror diametru crete progresiv cu temperatura.
la temperaturi de peste 70C catenele se separ fizic i adopt o conformaie
random-coil, proces numit denaturare.
absorbana la 260 nm crete cu temp.
Tm reprezint temperatura la care
jumtate din structura duplexului ADN
este distrus i depinde de procentul de
perechi de baze G-C.
rcirea lent a soluiei de ADN la pH i
trii ionice fiziologice conduce la
refacerea structurii originale prin
reformarea carect a punilor de
hidrogen, proces numit renaturare.
rcirea brusc conduce la formarea
unor legturi de hidrogen aleatoare, ADN
nu mai revine la structura iniial.
Fragmentele ADN ce difer prin
lungime/ secvena de nucleotide
sunt caracterizate de Tm diferite.
Fragmentele bogate n perechi de
baze G-C sunt caracterizate de Tm
mai mari.
Este un parametru utilizat n tehnica
Real Time RT-PCR pentru a
validarea specificitii reaciei PCR.
Factori chimici ce influeneaz Tm:
- creterea concentraia cationilor
monovaleni induce creterea Tm
- aldehida formic destabilizeaz
punile de hidrogen dintre perechile
de baze scznd Tm. Utilizat n
tehnicile de recombinare i
secveniere.
 HIBRIDIZAREA
fenomenul de denaturare-renaturare a stat la baza tehnicii de hibridizare ce poate fi in
situ (FISH) sau la nivelul unui suport (Southern i Northern blot ) precum i a PCR.
formarea heteroduplexurilor poate avea loc att ntre fragmente ADN ct i ntre
fragmente ADN-ARN cu structur primar complementar sugernd mecanismul
replicrii i transcripiei ADN.
cu ajutorul acestei
tehnici s-a demonstrat c
ADN celulelor eucariote
conin secvene repetitive
prin det. vitezei de
hibridizare s-a stabilit
omologia ADN dintre
diferite specii.
Termenul de anelare
descrie legarea unei sonde
sau a unui primer la un
fragment ADNmc pe baza
complemetaritii pb n
reacia PCR. Un primer
este o secven scurt de
nucleotide (20-35 b).
 TIPURI DE NUCLEASE

Nucleasele sunt enzime capabile s

hidrolizeze legturile 35 fosfodiesterice
din cadrul scheletului pentozo-fosfat al AN.
Nucleasele care recunosc specific i taie
ADN se numesc deoxiribonucleaze
(DNases) iar cele ce recunosc i
hidrolizeaz specific ARN se numesc
ribonucleaze (RNases).

Enzimele capabile s cliveze legturi 3,5 fosfodiesterice din interiorul

AN cu formare de capete 3'-OH i 5'-P terminale se numesc
endonucleaze. Unele pot tia doar o caten (topo I) iar altele pot
hidroliza ambele catene (giraza, topo IV). Endonucleazele care recunosc
specific i taie o anumit secven de nucleotide se numesc enzime de
restricie/modificare i sunt utilizate n tehnicile de biologie molecular.
Exonucleazele hidrolizeaz legturile 3,5 fosfodiesterice prezete la
capetele lanurilor de AN. ADN polimerazele bacteriene pot avea funcie
att 3'5 ct i 5'3 exonucleazic fiind implicate n corectarea
erorilor din timpul replicrii.
Formele topologice ale ADN

ADN poate exista ntr-o form relaxat sau

superncolcit
Superncolcirea este implicat n iniierea
replicrii, transcripiei, reparrii i recombinrii.
reglat activ de topoizomerazele de tipul I i II,
care sunt diferite la procariote i eucariote
(procariotele au Topo I i giraz iar eucariotele au
Topo I i II)

Implicaii terapeutice:
Giraza (tipul II) este inta quinonelor
(ciprofloxacin, acid oxolinic) i a aminocumarinelor
(novobiocin) antibacteriene inhibnd replicare.
Daunorubicina, doxorubicina, etoposidele inhib
Topoisomeraza II iar topotecanul inhib
Topoizomerazele I i sunt utilizate n chemoterapie.
Bacteriile, unii bacteriofagi sau virusuri
au ADN-ul circular. Circularizarea ADN
nu distruge polaritatea moleculei ci doar
elimin capetele libere 3-OH i 5-P.
Superncolcirile pot fi introdu-se cnd:
- un ADN circular este rsucit/torsionat n
jurul propriei axe;
- un fragment ADNdc cu cele dou
capete fixe (binding proteins) este
rsucit.
Acest proces care necesit energie pune
molecula sub stres, i cu ct numrul de
supersuciri este mai mare, cu att mai mare
este stresul sau torsiunea moleculei.
Consecinele superncolcirilor depind de modul
n care axa ADN este rsucit n jurul su: n
acelai sens cu cele dou catene ale duplexului
ADN (n sensul acelor de ceasornic) sau n sens
opus.
- Rsucirea n acelai sens produce
superncolciri pozitive (cele dou catene sunt
rsucite mult mai strns una n jurul celeilalte,
conducnd la creterea nr. de pb/tur helix)
- Rsucirea n sens invers produce
superncolciri negative (cele dou catene sunt
rsucite mai puin strns una n jurul celeilalte,
conducnd la scderea nr. de pb/tur de helix).
Efectul final al superncolcirii negative este de a
genera o regiune n care cele dou catene ale
ADN-ului s-au separat i formal sunt zero,
perechi de baze pe tur de helix.
Manipularea topologic a ADN-ului este un
aspect central al tuturor proceselor funcionale
n care este implicat ADN: recombinare,
replicare, transcriere, precum i a organizrii
structurii sale de ordin superior.
Toate activitile in vivo sau in vitro care
implic ADNdc au la baz separarea celor
dou catene ale dublului helix. Separarea
celor dou catene impune rotirea uneia n jurul
celeilalte n spaiu

n cazul unui fragment cu capete fixe,

separarea celor dou catene pe o anumit
poriune este compensat de apariia
superncolcirilor n aval.
Relaxarea ADN ce prezint superncolciri (-
sau +) se poate face prin introducerea unei
crestturi tranzitorii n interiorul unei catene
prin hidroliza unei legturi fosfodiesterice ce
va permite catenei cu un capt liber s se
roteasc n jurul catenei intacte.
O molecul de ADN circular sau cu capete fixe este
caracterizat de numrul de legare (linking number) L.
L este numrul de cte ori o caten trece pe deasupra
celeilalte n spaiu. Pentru un ADN circular este un numr
ntreg. Valoarea lui L este invariabil, indiferent dac
molecula circular este rsucit sau distorsionat, ct timp
legturile fosfodiesterice sunt intacte.

Moleculele de ADN circulare cu secvene identice pot diferi prin L (reflect o

diferen n nr. de superncolciri). Moleculele de ADN care difer doar prin nr.
L se numesc topoizomeri.
L-linking number reprezint suma a dou componente: twisting number (T) i
writhing number (W). n cazul unui ADN circular sau cu capete fixe: L=T+W;
Twisting number (T) este o proprietate intrinsec a dublului helix i reprezint
rsucirea unei catene n jurul celeilalte. Altfel spus este egal cu numrul
complet de ture ale dublului helix, fiind determinat de nr. de pb per tur de
ADN. Pentru un ADN circular n form relaxat T= nr. total de pb/ nr.de pb per
tur. Exemplu: n cazul unui B-ADN circular cu 2000 pb, T=2000/10=200
Writhing number (W) reprezint rotirea axei duplexului n spaiu sau numrul
de superncolciri. n cazul unei molecule de ADN relaxat, W = 0 i L=T.
Un duplex ADN liniar cu capetele fixate n form
relaxat are L=T+W=200 (T=200 W=0).
Desfurarea a 2 ture de dublu helix este
compensat de introducerea n aval de
fragmentul desfurat a 2 superncolciri pozitive
(T=198 i W=2, L=198+2=200).
n cazul unui ADNdc circular sau cu capetele
fixate rsucirile se repartizeaz ntre T i W,
astfel nct o modificare n structura dublului
helix se compenseaz printr-o schimbare n
nr de superncolciri n spaiu.

n cazul ADNdc circular sau cu capetele fixe, L

se poate modifica doar prin clivarea unei
catene sau a ambelor catene ADN, permind
rotirea liber a acestora una n jurul celeilalte,
finalizndu-se cu sudarea crestturii. Enzimele
care pot ndeplini aceste funcii modific L cu
un nr ntreg.
O scdere a nr L corespunde cu introducerea
unor superncolciri negative/despiralizari i
invers.
Topoizomerazele pot relaxa ADN
Topoizomerazele modific nr L prin hidroliza legturilor
fosfodiesterice din cadrul catenelor ADN modificnd
conformaia dublului helix n spaiu, resudnd n final
catenele.
Tipul I de topoizomeraze, acioneaz prin clivarea unei
singure catene, modificnd L cu o unitate pe cnd tipul
II (Topo II i VI de la eucariote i topo IV i giraza ale
procariotelor) taie ambele catene ale duplexului ADN,
modificnd L cu dou uniti.
naintea iniierii replicrii sau transcripiei, cele dou
catene ale ADN trebuie s se despart.
n cazul transcripiei, micarea ARN polimerazei de-a
lungul duplexului ADN, creaz n aval de ea
superncolciri pozitive i n spatele ei superncolciri
negative. Dac superncolcirile pozitive nu sunt
detensionate vor mpiedica micarea ARN
polimerazei i stoparea sintezei ARN.
La finalul replicrii unui ADN dc circular rezult dou molecule de ADNdc circulare
ca dou zale care trebuie separate pentru finalizarea diviziunii i segredarea celor
dou celule fiice.
Topoizomerazele sunt implicate n rezolvarea problemelor
aprute n urma replicrii i transcripie;
- giraza convertete superncolcirile pozitive generate n
faa ADN sau ARN polimerazelor n superncolciri
negative.
- topoizomerazele de tip I n general ndeprteaz
superncolcirile negative lsate n urma aciunii girazei.

Formarea unui complex covalent ADN-Topo I conserv

energia liber a legturii fosfodiester din ADN printr-o
legtur de acelai tip (fosfodiester) dintre captul 5-fosfat
rmas liber i OH tirozinei din structura enzimei. Astfel
clivarea i resudarea catenei ADN se face fr consum de
ATP.
Separarea celor dou duplexuri circulare ADN de la
sfritul procesului de replicare are loc la procariote sub
influena Topo IV cu consum de ATP prin clivarea celor
dou catene ADN.
 TIPURI DE NUCLEASE

Nucleasele sunt enzime capabile s

hidrolizeze legturile 35 fosfodiesterice
din cadrul scheletului pentozo-fosfat al AN.
Nucleasele care recunosc specific i taie
ADN se numesc deoxiribonucleaze
(DNases) iar cele ce recunosc i
hidrolizeaz specific ARN se numesc
ribonucleaze (RNases).

Enzimele capabile s cliveze legturi 3,5 fosfodiesterice din interiorul

AN cu formare de capete 3'-OH i 5'-P terminale se numesc
endonucleaze. Unele pot tia doar o caten (topo I) iar altele pot
hidroliza ambele catene (giraza, topo IV). Endonucleazele care recunosc
specific i taie o anumit secven de nucleotide se numesc enzime de
restricie/modificare i sunt utilizate n tehnicile de biologie molecular.
Exonucleazele hidrolizeaz legturile 3,5 fosfodiesterice prezete la
capetele lanurilor de AN. ADN polimerazele bacteriene pot avea funcie
att 3'5 ct i 5'3 exonucleazic fiind implicate n corectarea
erorilor din timpul replicrii.
 TIPURI DE ARN
Structura ARN
ARN- polianion format din nucleotide purinice i pirimidinice
legate ntre ele prin legturi 3,5-fosfodiesterice ca n cazul ADN
- conine riboz n loc de 2-deoxiriboz i uracil n locul
timinei, timina fiind prezent doar n cazuri rare (ARNt). Apar
baze modificate derivate att de la bazele purinice ct i de la
cele pirimidinice
- n general are o structur monocatenar dar prezint pe
anumite poriuni structur secundar de ac de pr sau hairpin
datorit complementaritii dintre baze a fragmentelor
antiparalele (cu polaritate diferit)
- mperecherile standard (A-U i G-C) sunt mbogite n
cazul ARN cu alte mperecheri Watson-Crick (cuplul G-U) dar i
de mperecheri ne-standard de tip A-I, U-I i C-I foarte frecvente
n cazul moleculelor ARNt. De reinut c afinitatea relativ a
perechilor G-C, A-U i G-U este 1 000, 100, 1
- datorit faptului c ARN are o structur monocatenar
fiind complementar doar cu una din cele dou catene ale ADN
(matri), concentraiile molare ale adeninei i uracilului nu sunt
neaprat egale precum nici cele ale guaninei i citozinei
-Majoritatea tipurilor de ARN sunt implicate n unele aspecte ale sintezei proteice
- ARN mesager (ARNm) transfer informaia genetic din structura unei gene
codificat sub form de ADN la locul sintezei proteice
- ARN ribozomal (ARNr) contribuie la formarea i funcionarea ribozomilor (locul
sintezei proteice)
- ARN de transfer (ARNt) molecul adaptor pentru translatarea informaiei coninut
n ARNm ntr-o secven specific a unei polipeptide
- Ribozime sunt molecule de ARN care prezint o activitate catalitic intrinsec
implicate n procesare, de exemplu a transcriptului primar al genei la molecula
matur de ARNm
- Majoritatea ARN sintetizat avnd ca matri ADN n celulele eucariote este
degradat n nucleu i pn la aceast or nu se cunoate dac ar avea un rol
structural sau informaional
- Small nuclear RNA (ARNsn) sunt molecule mici de ARN de 20-300 nucleotide
prezente la eucariote implicate n procesarea ARN
- ARN-virusuri (retrovirusuri) precum HIV prezint informaia genetic sub form de
ARN care este copiat ntr-o molecul de ADNdc cu ajutorul unei
reverstranscriptaze (o ADN polimeraz ARN dependent). ADNdc dup sintez se
integreaz n cromozomul gazdei
ARN mesager
-cea mai heterogen clas de ARN n ceea ce privete mrimea i stabilitatea
moleculelor. Conceptul de mesager a fost formulat pentru prima dat de F. Jacob i J.
Monod n 1961 pentru care au primit premiul Nobel pentru fiziologie i medicin n 1965.
-reprezint copii ale genelor ADN ce conin secvena proteinei care va trebui sintetizat
n limbaj genetic ternar (aminoacizii sunt codificai de triplete de nucleotide numite
codoni). ARNm se sintetizeaz n procesul de transcripie al ADN.
- la procariote ARNm
este o molecul
policistronic (fiind
copia unui operon ce
codific informaia
unui cluster de
gene).
- la eucariote ARNm
este monocistronic
(codific doar o
gen) fiind format
din exoni i introni.
- utilizarea ARN mesager permite celulei s separe stocarea de utilizarea
informaiei. n timp ce genele rmn izolate n nucleu, unde sunt pari integrante ale
moleculelor enorme de ADN, informaia acestora poate fi comunicat unei molecule
de ARN mobil, mult mai mic i capabil s treac n citoplasm. La acest nivel,
molecula servete drept model pentru a dirija incorporarea aminoacizilor ntr-o
ordine specific, codificat de secvena nucleotidelor n ADN.
- folosirea ARNm permite celulei s i amplifice puternic activitatea. O molecul
de ADN poate servi drept model pentru producerea unui numr mare de molecule
de ARN care, toate vor reprezenta matrie pentru producerea unui numr i mai
mare de catene polipeptidice, o molecul de ARNm putnd s fie translatat de mai
multe ori.
-n nucleul eucariotelor, n urma procesului de transcripie, moleculele de ARN
nuclear heterogen (ARNnh) formeaz o colecie de transcripi pentru numeroase
gene nucleare: i) transcripi primari, mrimea lor este identic cu cea a genei; ii)
molecule parial maturate care sunt lipsite de un numr variabil de introni.
- moleculele de ARNm citoplasmatic sunt produsul unei astfel de colecii complexe
de precursori care au suferit un complex proces de maturare.
-precursorii ARNm de la eucariote sunt procesai n nucleu nainte de transportul ARNm
n citoplasm. Acest proces const n: i) adugarea structurii cap; ii) poliadenilare n
poziia 3; iii) nlturarea intronilor i sudarea exonilor (splicing).
-durata de via a moleculelor de ARN mesager este scurt. La bacterii durata de via a
unui ARNm este de numai cteva minute. La eucariote aceste molecule sunt mai stabile
durata de via variind de la cteva minute la cteva zile. ARNm se rennoiete foarte
repede, aceste molecule fiind permanent produse i degradate. Cu toate acestea,
aceeai molecul de ARNm poate fi citit de mai multe ori la nivelul ribozomilor.
7-metilguanozin trifosfat
2-O-metil-adenozin

- ARNm matur prezint la captul 5 terminal un

cap i anume un rest de 7-metilguanozin
trifosfat legat la 2-O-metil-adenozin. Aceast
structur este implicat n recunoaterea ARNm
de ctre ribozomi la locul sintezei proteice i n
prevenirea scindrii ARNm de ctre 5-
exonucleaze. Translaia ARNm n catena
plipeptidic ncepe dup secvena cap. La captul
3 hidroxi-terminal, ARNm matur prezint o coad
poliA, a crei lungime variaz de la 20-250 de
nucleotide AMP. Coada poliA se pare c
protejeaz ARNm de atacul 3-exonucleazelor.
Unele specii de ARNm precum cele ale histonelor
nu prezint o coad poliA.
- din punct de vedere cantitativ
ARNm nu reprezint dect cteva
procente (5%) din totalul
moleculelor de ARN din celul.
- etapa de descifrare, pas cu pas,
a mesajului purtat de ARNm de
ctre ribozomi, pentru traducerea
acestuia n caten polipeptidic,
este reglat de motive n form
de agraf (ac de pr) sau, n
anumite cazuri, de pseudo-noduri
teriare.

- informaia genetic copiat n structura ARNm, n urma procesului de transcripie,

este tradus n structura proteinelor prin intermediul codului genetic care
realizeaz traducerea mesajului dintr-un cod format din nlnuirea repetitiv i
aleatoare a trei nucleotide n altul, reprezentat de alternana a 20 de aminoacizi.
Fiecare aminoacid este codificat de una sau mai multe secvene de trei baze,
numite codoni, din structura ARNm.
Codul genetic aste format din 64 de combinaii posibile (codoni) dintre care 61
specific aminoacizi i trei (UAA, UGA i UAG) semnalizeaz ncheierea
traducerii (STOP). Codonul de iniiere, AUG codific formil-metionin la
procariote i metionin la eucariote.

Codul genetic este degenerat deoarece

majoritatea aminoacizilor sunt codificai de
mai muli codoni. Codul genetic standard este
comun pentru procariote i eucariote. Mici
diferene au fost evideniate n cazul codului
genetic al mitocondrilor.

Codul genetic standard

Codonul AUG care codific pentru metionin
este cel mai comun codon start.
Trei dintre codoni UAA, UGA i UAG
funcioneaz drept codoni STOP.
Se poate observa degenerescena codului
genetic deoarece numai metionina i
triptofanul sunt codificai de un singur codon,
restul aminoacizilor fiind codificai de doi la ase
codoni.
ARN de transfer (ARNt)
- au rolul de a adapta fiecrui codon, prezent n structura ARNm, aminoacidul
corespunztor.
- exist cel puin 20 de tipuri de ARNt, corespunztoare celor 20 de AA
- sunt molecule polinucleotidice mici de 75-90 de resturi nucleotidice a cror
funcionalitate se bazeaz pe existena a dou situsuri strict specifice:
i) captul 3 care asigur fixarea unuia din cei 20 de aminoacizi, ntr-o form activat;
ii) captul anticodon, structur complementar codonului din structura ARNm
- o molecul de ARNt are o serie de caracteristici datorate structurii sale primare:
a) conine nucleotide atipice, neobinuite, prin natura bazelor pe care le conine
(hipoxantina al crei nucleotid corespunztor este IMP, dehidrouridina i pseudouridina)
b) prezena timinei, o baz specific ADN i a altor baze metilate.
- aceste baze nu sunt incorporate n momentul sintezei ARN, ele sunt obinute prin
modificarea secundar a uneia dintre cele patru baze, A, U, C, G, ntlnite n mod
normal n structura primar a ARN. Astfel, hipoxantina provine din deaminarea guaninei
din GMP i TMP provine prin metilarea UMP. Aceste modificri se numesc post-
transcripionale.
 Structura secundar ARNt - frunz
de trifoi
- structura se compune din patru brae
elicoidale:
1) extremitatea 3 ACC (constituit din trei
nucleotide AMP, CMP i CMP) reprezint
tija care constituie braul acceptor al
aminoacidului care se leag covalent la
hidroxilul liber din poziia 3;
2) braul purttor al anticodonului este o
structur sub form de agraf a crei bucl
format din apte nucleotide poart
anticodonul. Numim anticodon grupul de trei
nucleotide care este situat la nivelul unei
bucle a ARNt i are capacitatea de a se
mperechea prin legturi de hidrogen cu
3) braele D i TC i datoreaz
codonul purtat de ARNm ntr-o manier
denumirile i simbolurile faptului c
antiparalel i complementar. n cazul
buclele lor conin baze modificate
codonului i anticodonului este absolut
rare: pentru braul D este
necesar precizarea sensului de scriere a
dehidrouridina iar pentru TC,
secvenei. Astfel, anticodonul 3 UAC 5 va
este pseudouridina poziionat
lega codonul 5 AUG 3
ntre timin i citozin i notat
4) bucl suplimentar, care reprezint
regiunea cea mai variabil a moleculelor de
ARNt. n funcie de structura, la acest nivel
distingem: i) moleculele de ARNt de clas 1,
cele mai bine reprezentate i care prezint un
bra suplimentar scurt de 3 la 5 nucleotide; ii)
moleculele ARNt de clas 2 care posed un
bra suplimentar lung de 13 la 21 nucleotide
dintre care 5 sunt complementare.
mperecherea secundar a bazelor determin
formarea de elice constante. Dac parcurgem
structura din direcia 5 ctre 3 numrul de
perechi de baze din care acestea sunt formate
este 7, 3 (sau 4), 5 i 5. mperecherile bazelor
sunt de tip Watson-Crick ct i de alte tipuri.
Sistemul de numerotare de la 5 la 3 (de la stnga la dreapta) a fost utilizat pentru
prima dat n cazul structurii ARNt de 76 nucleotide i a fost adoptat prin convenie
pentru reprezentarea normal a unei molecule ARNt.
Diferene ntre structurile secundare ale diferitelor molecule pot s apar la nivelul
buclei braului D dar acestea nu depesc ns 4 baze.
Compararea secvenelor moleculelor de ARNt evideniaz conservarea n poziii
invariabile a unor baze pirimidinice sau purinice.
 ARN ribozomal. Ribozomii
- Sediul sintezei proteice i sunt agregate multi-moleculare necovalente, mari i
compacte de proteine i ARN. Sunt formai din dou subuniti diferite, ca mrime i
compoziie, care n cazul micorrii concentraiei de ioni de Mg 2+ se separ
reversibil.
- Ribozomii procariotelor sunt de 70S i sunt formai din dou componente: o
subunitate mare (50S) i o subunitate mic (30S). S este prescurtarea pentru
unitatea Svedberg care reprezint msura vitezei de sedimentare prin
ultracentrifugare. Coeficientul de sedimentare depinde nu numai de masa dar i de
rigiditatea particulei. Astfel, se explic de ce asamblarea subunitilor 50S i 30S
poate da particule caracterizate printr-o constant de sedimentare de 70S.
- Fiecare dintre aceste subuniti sunt formate dintr-un amestec de proteine, denumite
proteine ribozomale i ARN ribozomal (ARNr).
Subunitatea 30S conine: i) o molecul ARNr 16S de 1 542 nucleotide; ii) 21 de
proteine diferite, prezente ntr-un singur exemplar. Proteinele au fost denumite de la
S1 la S21. n cazul proteinelor ribozomale, S are semnificaia small i desemneaz
proteinele care intr n constituia subunitii mici. Ansamblul ARNr mpreun cu
proteinele ribozomale are o mas de aproximativ 900 kDa.
Subunitatea 50S conine: i) o molecul ARNr 5S de 120 nucleotide; ii) o molecul
ARNr 23S de 2 904 nucleotide; iii) 34 proteine ribozomale denumite L1 la L31. Treizeci
dintre aceste proteine se gsesc ntr-un singur exemplar iar una dintre proteine n
patru exemplare. Ansamblul proteine-ARN al subunitii mari are aproximativ 1,6
milioane Da.
n momentul asamblrii subunitii mici cu cea mare se formeaz ntre cele dou o
fos la nivelul creia va trece ARNm n timpul traducerii sale n proteine.
La eucariote ribozomii sunt mai mari de 80S, cele dou subuniti fiind de 40S i
respectiv 60S.
Compoziia acestora este diferit n ceea ce privete tipurile de ARNr i numrul
proteinelor din care acetia sunt constituii.
Subunitatea mic 40S conine o molecul de ARNr 18S i 33 de proteine ribozomale
Subunitatea mare 60S conine trei molecule ARNr (5S, 5,8S i 28S) i 50 proteine
ribozomale.
Diferenele structurale ntre ribozomii eucariotelor i procariotelor sunt importante
deoarece antibioticele care acioneaz la nivelul ribozomilor, pot s aib o aciune
specific asupra ribozomilor bacterieni fr a afecta ribozomii organismului gazd
 Rolul moleculelor ARNr

- structural, intr n compoziia ribozomilor

- faciliteaz fixarea celorlalte specii de ARN (ARNt i ARNm) la nivelul
ribozomilor;
- la procariote au rol de recunoatere, pe structura ARNm, a situsului de
iniiere a traducerii (AUG) prin hibridizarea unei secvene situat la captul
3 al ARNr 16 S cu o secven scurt, numit Shine-Dalgarno, aflat la
cteva nucleotide n amonte de AUG de la nivelul ARNm;
- la eucariote nu se cunoate nc cu precizie dac una dintre moleculele de
ARNr recunoate o secven situat n apropierea AUG dar, este absolut
necesar recunoaterea extremitii 5cap a ARNm nainte de nceperea
citirii informaiei.
 ARN cu rol catalitic
- dogma c numai proteinele au activitate enzimatic a fost total infirmat
- T. Cech, n 1981 studiind molecula ARNr 26S de la protozoarul termofil Tetrahymena a
demonstrat c acest ARN este derivat dintr-un precursor ARN brut obinut n urma
transcrierii care sufer un proces de maturare (splicing) prin nlturarea unui intron
de 400 baze. Reacia de maturare (nlturarea intronului) este catalizat de nsi
molecula de ARN iar intronul eliberat devine un catalizator activ n procesul de
maturare a altor molecule de ARN.
- n 1983, s-a demonstrat c ribonucleaza P, enzim implicat n maturarea unui
precursor ARNt la bacterii are o structur neobinuit fiind compus dintr-o protein
i o molecul de ARN. Activitatea enzimatic era datorat moleculei de ARN iar
partea proteic are numai rol de structurare conformaional a ribonucleazei.
Ribozime - molecule de ARN dotate cu activitate enzimatic care poate fi direcionat
ctre substrate separate sau ctre propria molecul (auto-splicing sau auto-maturare)
Tipuri de ribozime:
a) Enzima ribonucleaza P, ribonucleoprotein format dintr-o molecul de ARN cu
activitate catalitic legat la o protein
b) Introni care fie posed capacitatea de a-i realiza propria maturare din pre-ARNm
n care sunt coninui fie conin faze de lectur care pot fi traduse n proteine/enzime
precum maturaze i endonucleaze.
d) Moleculele mici de ARN din clasa
viroizilor i virusoizilor care au
capacitatea de a realiza reacii de auto-
clivare. Cu toate c aceste reacii sunt
intramoleculare, molecula poate fi
mprit ntr-o parte enzimatic i o
parte substrat ale cror funcii sunt
independente
c) Molecule de ARN mici snRNA - small
nuclear RNA care particip la reaciile
de nlturarea a intronilor i sudare a
exonilor (splicing). n procesul de
splicing sunt implicate cinci molecule
mici bogate n uracil (U1, U2, U4, U5, i
U6) cu dimensiuni cuprinse ntre 107 la
210 nucleotide. Asocierea secvenial a
acestora cu un numr de ase la zece
proteine formeaz snRNP (small
nuclear ribonucleoprotein particles) care
mpreun cu pre-ARNm constituie
complexul ribonucleoproteic numit
spliceozom
 iARN iau natere n prezen enzimei ARN de interferen (iARN)
Dicer (ribonucleaza III) care catalizeaz
hidroliza ARN dublu catenar la produi
de numai 21-25 pb.
n urma aciunii enzimei Dicer are loc
formarea complexului RISC (RNA
inducing silencing complex) ce va
conine ARN monocatenar i care va
recunoate o secven complementar
din ARNm.
Duplexul ARNi-ARNm RISC sunt
degradate la nivelul corpilor P, oprind
translaia proteinei codificat de ARNm.
Aciune ARNi reprezint un rspuns la
detectarea n celul a ARN viral sau a
transpozomilor.
iARN e utilizat n tehnici de biologie
molecular sau n scop terapeutic
pentru a bloca specific sinteza unei
anumite proteine ("knock-down" )