Biotehnologii de depoluare i remediere a solului

BIOTEHNOLOGII DE DEPOLUARE I REMEDIERE A SOLULUI LUCIAN GAVRIL Universitatea din B acu, Facultatea de Inginerie, Departamentul de Inginerie Chimic i Alimentar, Calea Mre 157, 600115 Bacu, Fax: 0234 580 170, email: lgavrila@ub.ro

1. Introducere La sfritul celui de-al doilea rzboi mondial, existena unei industrii n continu expansi une era esenial pentru restaurarea i mbuntirea standardelor de via i pentru stimula ivitii economice n Europa. Preul pltit pentru aceast industrializare excesiv, nti n de Vest (Planul Marshall), dar mai apoi i n Est, l-a reprezentat o poluare atmosf eric excesiv, producerea unor impresionante cantiti de deeuri solide, precum i generar ea unor debite din ce n ce mai mari de ape reziduale. Dat fiind faptul c poluanii a tmosferici erau rapid diluai i dispersai, iar deeurile solide puteau fi depozitate n relativ siguran n zone bine delimitate, nu s-a considerat iniial c aceti poluani pot luena n mod semnificativ calitatea factorilor de mediu (ap, aer, sol), aa cum de exe mplu calitatea apelor de suprafa i de adncime este influenat de poluanii existeni reziduale. La ora actual, depoluarea, decontaminarea, remedierea i reintroducerea n circuitul normal a solurilor respectiv transformarea aa-numitelor brown-fields n g eenfields este una dintre sarcinile majore avute n vedere pe multiple planuri: leg islativ, tehnic, economic, social etc. Datorit numrului practic nelimitat de polua ni i a diferitelor structuri de soluri, nu exist o metod general valabil pentru remed ierea solurilor. Alegerea unei tehnologii de remediere este o activitate complex, care presupune luarea n considerare a numeroi factori: tipul poluanilor, cantitate a de poluani, dinamica poluanilor, caracteristicile hidrogeologice ale solului, fa ctorii climaterici. Nu n ultimul rnd conteaz i aspectele economice, respectiv costur ile remedierii. n cadrul acestui capitol vor fi abordate problemele referitoare l a biotehnologiile aplicabile n procesele de depoluare, decontaminare i remediere a solului. 1

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului

2. Biodegradarea poluanilor Poluanii aflai n sol sunt supui unor procese de transformare biogeochimice. Aceste p rocese afecteaz structura poluantului printr-un proces chimic care decurge ntr-un mediu geologic i poate fi realizat de ctre un organism biologic. Biodegradarea est e definit ca fiind reacia catalizat biologic care are drept efect reducerea complex itii unui compus chimic. Un compus biodegradabil poate fi transformat sub influena microorganismelor ntr-un alt compus, cu structur mai simpl, dar care nu este neaprat mai puin toxic dect compusul de provenien. Un compus poate fi recalcitrant, dac aces ta nu poate fi biodegradat sub nici o form. Un compus este persistent atunci cnd e l este biodegradabil, dar numai n anumite condiii, care favorizeaz biodegradarea. M ineralizarea `nseamn\ conversia complet a unui compus organic n produii de degradar e final: CO2 i H2O. Se numete biodegradare primar transformarea singular a unui compu s; biodegradarea parial este transformarea mai avansat dect biodegradarea primar, fr a se ajunge totui la mineralizare.

2.1. Bazele metabolismului microbian n cazul poluanilor de natur organic, transformarea microbian decurge datorit faptului c microorganismele pot utiliza aceti compui pentru cretere i reproducere. Poluantul o rganic are un dublu rol: de surs de carbon, piatra de temelie a oricrei construcii celulare, [i de furnizor de electroni, pe care microorganismele i pot extrage pen tru a obine energie. Microorganismele i procur energia cataliznd reacii redox care dec urg cu degajare de energie. Poluantul, donor de electroni, este oxidat n timp ce un acceptor de electroni este redus. Donorul i acceptorul de electroni sunt esenia li pentru creterea celulelor, fiind cunoscute de regul sub denumirea de substrat p rimar. Majoritatea microorganismelor utilizeaz ca acceptor de electroni oxigenul molecular (O2). n acest caz putem vorbi despre degradarea aerob, n care O2 este fol osit pentru a oxida o parte din carbonul din poluant la dioxid de carbon (CO2), restul de carbon fiind folosit pentru producerea de mas celular nou. n proces O2 est e redus, formnd ap. Astfel produsele principale ale degradrii aerobe sunt CO2, H2O i o populaie crescut de microorganisme. Exist ns microorganisme care utilizeaz ali acce tori de electroni, putnd supravieui n lipsa O2. Aceste microorganisme realizeaz degr adarea anaerob a poluanilor, utiliznd pe post de acceptori de electroni ioni de azo tat (NO3-), sulfat (SO42-), fier (Fe3+), mangan (Mn4+), sau chiar CO2. Pe lng masa celular nou format, regsim ca produse ale degradrii anaerobe azot molecular (N2), h idrogen 2

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului sulfurat (H2S), metale n form redus (Fe2+, Mn2+) sau metan (CH4), n funcie de accepto rul de electroni utilizat. Unele microorganisme pot folosi ca donor de electroni i substane anorganice: ioni amoniu (NH4+), azotit (NO2-), metale n form redus (Fe2+, Mn2+), H2S. Cnd aceti compui anorganici sunt oxidai (respectiv la NO2-, NO3-, Fe3+, Mn4+, SO42-), se produce energie pentru creterea celulelor, electronii fiind pre luai de un acceptor de electroni (uzual O2). n majoritatea cazurilor, aceste micro organisme utilizeaz ca surs de carbon dioxidul de carbon din atmosfer, realiznd astf el fixarea CO2. O form aparte de metabolism, care poate juca un rol important n me diile lipsite de O2 este fermentaia. Acest proces nu necesit un acceptor extern de electroni, poluantul jcnd att rol de donor, ct i de acceptor de electroni. Printr-o succesiune de transferuri interne de electroni catalizate de ctre microorganisme , poluantul este transformat n produi de fermentaie inofensivi: acetai, propionai, et anol, hidrogen, dioxid de carbon. Aceti produi de fermentaie pot fi biodegradai de ct re alte bacterii pn la produii finali: CO2, CH4, H2O. Uneori microorganismele pot p roduce transformarea poluanilor, chiar dac acest proces nu aduce dect un beneficiu minor celulei. O astfel de biotransformare este cunoscut sub denumirea generic de utilizare secundar, un caz particular al acesteia reprezentndu-l co-metabolismul. n co-metabolism transformarea poluantului este urmarea unei reacii accidentale cat alizate de enzimele implicate n metabolismul normal al celulelor. De exemplu, n pr ocesul de oxidare a metanului, unele bacterii pot degrada solveni clorurai pe care , de regul, sunt incapabile s-i distrug. n procesul de oxidare a metanului, microorg anismele produc enzime care distrug solventul clorurat, chiar dac acesta nu supor t dezvoltarea microbian. Metanul este donorul primar de electroni, fiind sursa de hran primar a microorganismului, n timp ce solventul clorurat este un substrat secu ndar. O alt form a metabolismului microbian o reprezint dehalogenarea reductoare. Ac easta este important pentru distrugerea poluanilor organici halogenai, n spe a solveni or clorurai. n dehalogenarea reductoare, microorganismele catalizeaz o reacie prin ca re atomul de halogen din molecula poluantului este nlocuit cu un atom de hidrogen . Pentru a putea avea loc reacia, este necesar prezena unui donor de electroni, alt ul dect poluantul, care s furnizeze perechea de electroni necesar reducerii. Potenia li donori sunt hidrogenul i compuii organici cu mas molecular mic (lactat, acetat, me tanol, glucoz). Indiferent de mecanismul prin care microorganismele produc degrad area poluanilor, compoziia celular a acestora este relativ constant: 50% C; 14% N; 3 % P; 2% K; 1% S; cte 0,5% Ca, Mg, Cl; 0,2% Fe. Dac oricare din aceste elemente est e deficitar n raport cu carbonul din poluantul organic, competiia pentru nutrieni nt re microorganisme poate limita creterea global a masei celulare i poate ncetini ndeprt area poluantului. 3

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului

2.2. Poluani Poluanii existeni n sol sunt fie de natur organic, fie de natur anorganic. S-a constat t existena, att n medii naturale ct i n medii poluate, a peste 1600 de compui organici de origine natural sau antropic. Dintre acetia, prezint interes pentru poluarea sol ului i subsolului produsele obinute prin rafinarea petrolului, combustibilii, solv enii organici clorurai sau neclorurai, degresanii, compuii organici utilizai ca materi i prime n diverse tehnologii. O clasificare simplificat a potenialilor compui poluani este prezentat n figura 1. Substane chimice antropogene Organice Anorganice Hidrocarburi nehalogenate Hidrocarburi halogenate Altele Metale grele Metale alcaline i alcalinopmntoase Altele Nevolatile Nevolatile Volatile Volatile Oxigenate Solubile Insolubile Solubile Solubile Biodegradabile Biodegradabile Insolubile R ecalcitrante Recalcitrante Insolubile Insolubile Figura 1. Clasificarea simplificat a compuilor poluani din sol

2.3. Degradarea aerob a compuilor organici Marea majoritate a compuilor organici naturali sau antropici se degradeaz n condiii aerobe, cu O2 ca acceptor terminal de electroni. Atta timp ct oxigenul este dispon ibil, acesta este acceptorul de electroni favorit al proceselor de degradare mic robian care au loc n natur. Cele mai importante clase de poluani organici sunt compo nentele ieiului i produsele petrochimice halogenate. Aceti compui se degradeaz rapid i complet n condiii aerobe. Pentru studierea capacitii microorganismelor aerobe de a d egrada 4

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului astfel de compui exist numeroase cercet\ri care folosesc n calitate de molecule mod el hidrocarburi alifatice, aromatice i derivai halogenai ai acestora. Microrganisme le capabile de degradarea poluanilor organici din zonele contaminate sunt bacteri ile chemo-organotrofice, care au capacitatea de a utiliza un imens numr de compui naturali i de sintez drept surs de carbon i ca donori de electroni (tabelul 1). Dei m ulte bacterii pot metaboliza poluanii organici, o singur specie nu posed capacitate a enzimatic de a degrada toi sau mcar o mare parte din poluanii existeni n sol. Bacter iile realizeaz biodegradarea poluanilor att prin mecanism de cretere, ct i prin co-met abolism. Comunitile microbiene mixte au potenialul de biodegradabilitate cel mai pu ternic, ntruct pentru degradarea amestecurilor complexe de poluani este necesar info rmaia genetic a mai multor organisme. Tabel 1. Bacterii predominante n solurile poluate cu hidrocarburi aromatice i alif atice, hidrocarburi aromatice policiclice i derivai halogenai Bacterii Gram-negative Bacterii Gram pozitive Pseudomonas Acinetobacter Alcaligenes Flavobacterium/Cytophaga Xanthomonas Nocardia Mycobacterium Corynebacterium Arthrobacter Bacillus

n cazul biodegradrii alcanilor sau cicloalcanilor prin mecanismul de cretere, ntr-o prim etap are loc atacul oxigenului molecular asupra unei legturi CH printr-o reacie catalizat de o monooxigenaz sau dioxigenaz, n funcie de natura substratului i de enzim a posedat de microrganism. n-Alcanii cu caten lung (C10 C24) sunt rapid degradai pn l acizi grai care sunt metabolizai (figura 2). n-Alcanii cu caten scurt (C5 C9) sunt toxici pentru majoritatea microorganismelor, ns ei se evapor rapid din solurile con taminate cu petrol. Cicloalcanii, aflai ntr-o proporie mai redus n iei, sunt relativ r zisteni la biodegradare. Absena unei grupri metilice ngreuiaz atacul primar al oxigen ului, pe cnd o caten lateral faciliteaz biodegradarea. ntruct sunt puine microorganism care pot utiliza cicloalcanii ca surs unic de carbon, cel mai adesea biodegradare a acestora are loc prin co-metabolism (figura 3). n cazul compuilor aromatici, fie c este vorba de hidrocarburi (benzen, toluen, etilbenzen, xileni, naftalin), feno li i clorofenoli, aminoacizi, chinone i hidrochinone, acetia pot fi transformai pe c ale enzimatic n intermediari naturali de biodegradare: 1,2 dihidroxibenzen (piroca techin\) sau acid 3,4 dihidroxibenzoic (acid protocatechic) - figura 4. Acetia su nt descompui ulterior, n mai multe etape, fie pn la acetil-CoA i succinat, fie pn la a etaldehid i piruvat. 5

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului CH3-(CH2)n-CH2-CH3 1 CH3-(CH2)n-CH2-CH2OH NAD+ NADH OH CH3-(CH2)n-CH-CH3 NAD+ NADH ciclohexan O2 ciclohexan monooxigenaz H2O OH 2 O CH3-(CH2)n-CH2-CHO NAD+ NADH CH3-(CH2)n-C-CH3 NAD+ NADH 3 H 2O ciclohexanol NAD+ ciclohexanol dehidrogenaz NADH O O2 H2O O CH3-(CH2)n-CH2-COOH CH3-(CH2)n-O-C-CH3 HOOC-(CH2)n-CH2-COOH O2 ciclohexanon ciclohexanon monooxigenaz CH3-(CH2)n-1-CH2OH CH3-(CH2)n-1-COOH oxidare 1 Acetil-CoA 2 3 Metabolism interme diar H2O O O O CH3-C-OH H2O -caprolacton -caprolacton hidrolaz COOH COOH n-alcan monooxigenaza alcool dehidrogenaza aldehida dehidrogenaza mecanism princ ipal mecanism secundar acid adipic oxidare Acetil-CoA Figura 2. Mecanismele biodegradrii aerobe a n-alcanilor benzen

Figura 3. Mecanismul biodegradrii aerobe a cicloalcanilor COOH benzoat OH COOH m - nitrobenzoat fenol NO2 CH3 toluen OH pirocatechina COOH OH (CH2)n CH3 alchilfenol OH NH2 anilina acid OH protocatechic OH COOH p - hidroxibenzoat COOH fenantren COOH OH o -ftalat Figura 4. Degradarea diver[ilor compu[i aromatici naturali [i sintetici la piroc atechin\ [i acid protocatechic 6

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului n general benzenul i derivaii acestuia au o stabilitate termodinamic mai mare dect co mpuii alifatici. Oxidarea benzenului are loc prin hidroxilare catalizat de o dioxi genaz. Diolul format se transform apoi n pirocatechin\. Hidroxilarea urmat de dehidr ogenare se ntlnesc i n cazul biodegradrii altor hidrocarburi aromatice, cum ar fi hid rocarburile aromatice policiclice (HAP) cu 3 i 4 cicluri. Existena unui substituen t n nucleul benzenic permite fie atacul la catena lateral, fie oxidarea nucleului aromatic prin mecanisme alternative. Bacteriile metanotrofe pot utiliza metanul sau al]i compu[i C1 drept unic\ surs\ de carbon [i energie, oxidnd metanul la CO2 via metanol, formaldehid\ [i formiat, intermediarul asimilat fiind formaldehida . Prima etap\ de oxidare a CH4 este catalizat\ de metan monooxigenaz\ (MMO), o e nzim\ nespecific\ apt\ s\ oxideze [i al]i compu[i: alcani, arene, tricloreten\ ( TCE). ~n figura 5 este reprezentat mecanismul de degradare aerob\ a TCE prin cometabolism. CH4 NADH, O2 Oxidarea metanului metabolism CH3OH HCHO HCOOH CO2 NADH sinteza NADH CCl2=CHCl MMO O Cl2C CHCl CO2 , Cl , H2O NADH, O2 Epoxidarea tricloretenei co-metabolism Figura 5. Mecanismul de degradare co-metabolic\ a TCE de c\tre bacteriile metano trofe Ulterior s-a constatat c\ multe alte grupuri de bacterii aerobe care sunt apte s \ oxideze propanul, etena, toluenul, fenolul, amoniacul, pot co-metaboliza compu [i organici halogena]i. Utilizarea `n practic\ a unui sistem de biodegradare aer ob\ cometabolic\ a deriva]ilor halogena]i este `nc\ dificil\: co-metabolitul tre buie s\ fie prezent `ntotdeauna pentru sus]inerea reac]iilor, `ns\ excesul de me tan [i concentra]ii ridicate de oxigen inhib\ oxidarea compu[ilor clorura]i. Mai mult dect att, exist\ studii care arat\ c\ produ[ii de degradare ai TCE sunt toxi ci pentru anumite metanotrofe, iar percloretena (PCE) inhib\ degradarea TCE. Alt \ limitare o constituie faptul c\ metanotrofele nu pot degrada PCE sau compu[i p oliclorura]i cu un num\r mai mare de atomi de clor `n molecul\. O alt\ categorie de organisme capabile s\ degradeze poluan]ii organici sunt fungiile, existente `n cele mai diverse medii (ape dulci, ape marine, sol, resturi de plante [i anim ale, organisme vii etc.). Mucegaiurile [i drojdiile pot fi considerate drept mic rofungii. 7

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Este bine cunoscut\ capacitatea drojdiilor de a degrada hidrocarburile alifatice existente `n ]i]ei [i `n produsele petroliere. Cel mai u[or se degradeaz\ n-alc anii C10C24, `n prezen]a drojdiilor Candida lipolytica, C. tropicalis, Rhodoturu la rubra [i Aureobasidion (Trichosporon), sau a mucegaiurilor Cunninghamella bla kesleeana, Aspergillus niger [i Penicillium frequentans. Ca [i pentru bacterii, frac]iunile C5 C9 sunt toxice [i pentru fungii. Deoarece alcanii superiori sunt practic insolubili `n ap\, fungiile produc biosurfactan]i care disperseaz\ subst ratul `ntr-o emulsie de tip ulei-`nap\, fapt care duce la cre[terea ariei interf aciale [i de aici la cre[terea biodisponibilit\]ii hidrocarburilor. ~n microfung ii alcanii sunt oxida]i enzimatic `n prezen]a unei monooxigenaze pn\ la alcoolii primari corespunz\tori: RCH2CH3 + O2 + NAD(P)H2 RCH2CH2OH + NAD(P) + H2O Ulterior ace [tia sunt oxida]i la aldehide [i apoi la acizi gra[i prin intermediul dehidrogen azelor legate de nucleotide piridinice. Acizii gra[i produ[i sunt `ntotdeauna me taboliza]i prin oxidare ajungndu-se `n final la CO2. Spre deosebire de bacterii, fungiile nu pot utiliza izoalcanii sau cicloalcanii ca surs\ unic\ de carbon. Tabel 2. Specii de drojdii i mucegaiuri care folosesc compuii aromatici drept subs trat de cretere Specia Drojdii Substratul de cretere fenol, o-crezol, p-crezol, acid benzoic fenol, pirocatechin, acid benzoic fenol, stiren, acid benzoic, acetofenon fenol, m-crezol, acid benzo ic fenol, p-crezol, acid benzoic, acid salicilic acid 2,4-dicloro-fenoxi acetic, acid benzoic, acid salicilic, acizi monoclorobenzoici fenol, p-crezol, 4-etilfe nol, acid fenilacetic fenol, rezorcin fenol, p-crezol, rezorcin, floroglucin, aniso l, alcool benzilic, acid benzoic, acid salicilic, acid galic, acid fenilacetic, 1-feniletanol acetofenon fenol, floroglucin, monofluorofenoli Aureobasidium pullulans Candida maltosa Exophiala jeanselmei Rhodotorula glutini s Trichosporon cutaneum Mucegaiuri Aspergillus niger Aspergillus fumigatus Fusarium flocciferum Penicillium frequen tans Penicillium simplicissimum Dei unele drojdii i mucegaiuri pot utiliza compuii aromatici drept substrat de crete re (tabelul 2), mult mai important este proprietatea acestora de a-i degrada prin co-metabolism. Enzimele de hidroxilare i cele de rupere a inelului aromatic ale 8

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului microfungiilor sunt relativ nespecifice, ele transformnd de regul i compui nrudii, inc lusiv derivai halogenai i nitroderivai. De asemenea, microfungiile pot transforma co -metabolic numeroi poluani aromatici, inclusiv hidrocarburi aromatice policiclice (HAP), bifenili, dibenzofurani, nitroaromatice, pesticide, plastifiani. Transformr ile tipice sunt glicozilarea, hidroxilarea i ruperea inelului aromatic, metoxilar ea, reducerea grupelor nitro la grupe amino. Este important de menionat c i macrofu ngiile (ciupercile) pot contribui la degradarea aerob a poluanilor organici. O par te dintre acestea, cele mai reprezentative fiind Trametes versicolor, Phanerocha ete chrysosporium, Pleurotus ostreatus, Nematoloma frowardii, Agaricus bisporus, Agrocybe praecox, Stropharia coronilla, au dezvoltat un sistem enzimatic eficie nt de degradare i mineralizare a ligninei. Degradarea ligninei se realizeaz\ prin ac]iunea sinergetic\ a unor oxidoreductaze, enzimele ligninolitice. Aceste enzi me ac]ioneaz\ printr-un mecanism de depolimerizare prin radicali liberi cu react ivitate ridicat\, mecanism care se preteaz\ [i pentru degradarea unor poluan]i o rganici recalcitran]i [i toxici, cum ar fi dibenzodioxinele policlorurate, diben zofuranii, compu[ii aromatici clorura]i, compu[ii nitroaromatici (explozivii) sa u compu[ii aromatici cangerigeni din clasa HAP. De[i cercet\ri recente au ar\tat c\ este posibil\, la nivel de laborator, utilizarea macrofungiilor pentru biode gradarea anumitor poluan]i (HAP, TNT, policlorofenoli), poten]ialul competitiv r edus al acestora `n sol face ca utilizarea lor s\ fie `nc\ restrns\. Totu[i, s-au testat cu succes macrofungii ca Stropharia rugosoannulata, care se dezvolt\ `n por]iunile superioare ale solului [i `n stratul de humus, pentru decontaminarea unor soluri poluate cu TNT sau HAP. 2.4. Degradarea anaerob a compuilor organici Procesele de degradare anaerob au fost considerate dintotdeauna mai puin eficiente dect cele de degradare aerob, mai ales din punct de vedere cinetic. Bacteriile an aerobe obin mult mai puin energie prin conversia substratului dect cele aerobe, i n co nsecin produc mult mai puin biomas. Un mol de glucoz degradat aerob la 6 moli de CO2 p roduce 2870 kJ, n timp ce acelai mol de glucoz degradat anaerob la 3 moli de CO2 i 3 moli de CH4 produce numai 390 kJ, energie care trebuie mprit la cel puin trei grupur i diferite de bacterii, care realizeaz metabolizarea. Degradarea materiei organic e n absena oxigenului poate fi cuplat cu reducerea unor acceptori de electroni alte rnativi ntr-o ordine care depinde de valorile potenialelor redox ale sistemelor re spective (tabelul 3). Reducerea cestor acceptori cu electroni provenii din materi a organic (potenialul redox mediu pentru transformarea global: glucoz 6CO2 este de 0, 434 mV) va conduce la diferite cantiti de energie, nfluennd astfel biochimismul biode gradrii anaerobe. 9

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Tabel 3. Potenialul redox al sistemelor implicate n degradarea anaerob a compuilor o rganici Sistemul O2/H2O NO3-/NO2MnO2/Mn2+ FeOOH/Fe2+ SO42-/HSCO2/CH4 Potenial redox, mV +810 (la pH = 7) +430 +400 +150 -218 -244 Produs final H2O NO2 , NH3, N2 MnCO3 FeCO3 S2CH4

Cu toate dezavantajele degradrii anaerobe, prezena oxigenului nu este ntotdeauna av antajoas n procesele de degradare. Oxigenazele introduc grupri hidroxil n nucleele a romatice; n continuare oxigenul poate conduce la formarea radicalilor fenolici ca re iniiaz o polimerizare i policondensare necontrolat pn la compui similari derivailo umici din sol, foarte dificil de degradat, fie aerob, fie anaerob. Hidrocarburil e alifatice saturate sunt relativ stabile n condiii anaerobe. Bacteriile sulfat re ductoare i cele nitrificatoare pot asimila hidrocarburi cu caten lung (C12 C20) sau medie (C6 C16), ns procesul decurge foarte lent. Pentru degradarea anaerob a compuil or aromatici mononucleari sunt cunoscute cel puin trei ci: prin benzoil-CoA (cea m ai important - figura 6), prin rezorcin i prin fluoroglucin. n toate cele trei cazuri se formeaz ntr-o etap reductoare un compus 1,3 dioxo, care permite ulterior un atac nucleofil la unul din atomii de carboni cetonici ai nucleului, conducnd la ruper ea acestuia. n funcie de substratul aromatic, n final se ajunge fie la un rest pime lic (C7 dicarboxilic) legat de coenzima A, fie la un rest caproic (C6 monocarbox ilic) parial oxidat care prin oxidare trece n acetat. Compuii aromatici care nu pos ed o grupare carboxilic (fenol, anilin etc.) sunt mai nti carboxilai la un rest p-hidr oxi sau p-amino benzoic, care ulterior este activat cu coenzima A. Dac n ceea ce p rivete degradarea anaerob a benzenului sunt puine date iar biochimia activrii proces ului nu este nc elucidat complet, se cunoate mecanismul degradrii anaerobe a toluenul ui, etilbenzenului, crezolilor, de ctre bacterii reductoare de nitrai, respectiv de sulfai. Derivaii halogenai pot fi dehalogenai prin trei mecanisme de baz: oxidativ, hidrolitic i reductor. Mecanismul cel mai comun al bacteriilor anaerobe este cel d e eliminare reductoare a halogenului, pus n eviden pentru prima dat n 1982. De regul, eclorurarea reductoare este preferat n cazul compuilor cu grad ridicat de halogenare . Potenialul redox al procesului este semnificativ (+250 ... +580 mV), iar atacul nucleofil la carbonul halogenat este mai probabil dect o reacie oxidativ. Schema g lobal a dehalogenrii reducatoare este redat n figura 7: electronii provenii 10

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului COOH CH3 CH2 OH CH2 COOH OH NH2 CHO CHO OH COOH OH NH2 CO-SCoA OH COOH Cl CO-SCoA CH2 CH3 COOH COOH HOOC C=O CO-SCoA NH2 CO-SCoA COOH OH 2[H] O=C-S-CoA O=C-S-CoA O 3 CH3-COO + CO2 + Co-A-SH Figura 6. Degradarea anaerob a compuilor aromatici mononucleari prin benzoil-CoA de la hidrogen molecular, formiat sau ali compui organici mai compleci sunt transfe rai substratului halogenat care elibereaz restul organic ntr-o form redus, alturi de c lorur. n proces sunt implicate cuplurile redox Co+/Co3+ din coenzime, respectiv Fe 2+/Fe3+ de pe suprafaa mineralelor cu coninut de fier. 2[H] R-Cl R-H + Cl- + H+ Figura 7. Dehalogenarea reductoare a unui derivat organoclorurat Eficiena biodegradrii anaerobe a derivailor organoclorurai depinde att de gradul de c lorurare al compusului, ct i de tipul de acceptor de electroni, respectiv de tipul bacteriilor implicate n degradare (tabelul 4). Dintre compuii nitroaromatici, ca poluant prezint importan deosebit 2,4,6 trinitrotoluenul (TNT), prezent n solul ampla samentelor vechilor fabrici i depozite de muniii. Efectul atrgtor de electroni al gr upelor nitro face dificil degradarea oxidativ a acestui compus. Bacterii strict an aerobe cum sunt bacteriile reductoare de 11

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului sulfai transform TNT n TAT (triaminotoluen), parial utilizat ca surs de azot de ctre b acterii, restul probabil polimeriznd n prezena urmelor de oxigen. Tabel 3. Eficiena degradrii unor compui organici clorurai n diverse condiii anaerobe Compusul percloreten cloroform 1,1,1-tricloroetan tetraclorur de carbon Eficiena degradrii (%) pentru bacterii Denitrificatoare Sulfat reductoare Metanogen e 0 13 86 0 0 95 30 72 > 99 > 99 > 99 > 99 2.5. Degradarea mixt a poluanilor organici persisteni Poluanii organici sunt cu att mai recalcitrani cu ct gradul de halogenare este mai r idicat. Substituiile la nucleul aromatic cu halogeni, grupri nitro sau sulfonice c onduc la creterea rezistenei sistemului la atacul electrofil prin oxigenaz al bacte riilor aerobe. Dintre compuii rezisteni la aceste atacuri fac parte i policlorobife nolii (PCB), dioxinele clorurate, unele pesticide (DDT, lindan). n cazul acestor poluani, degradarea se face prin cooperarea ntre bacteriile aerobe i cele anaerobe. ntr-o prim etap are loc dehalogenarea reductoare n condiii anaerobe a poluantului pri mar. Procesul reduce gradul de halogenare i face posibil mineralizarea ulterioar n c ondiii aerobe. Astfel, de exemplu, are loc degradarea PCB (figura 8).

2.6. Mecanismul imobilizrii poluanilor organici i anorganici Pe lng degradarea poluanilor, microorganismele pot realiza imobilizarea poluanilor, astfel nct acetia s poat fi fixai n anumite zone ale solului. Exist trei modaliti d in care poluanii pot fi imobilizai de ctre microorganisme: - Biomasa microbian poate adsorbi moleculele organice hidrofobe. O cretere suficient a biomasei n zona de mi graie a poluanilor poate ncetini sau chiar stopa micarea poluanilor. Conceptul poart d enumirea de biocortin. - Microorganismele pot produce specii reduse sau oxidate c are provoac precipitarea metalelor. De exemplu, oxidarea Fe2+ la Fe3+ conduce la precipitarea celui din urm sub form de Fe(OH)3 solid; reducerea ionilor SO42- la s ulfuri (S2-) provoac precipitarea Fe2+ sau Hg2+ ca sulfuri; reducerea Cr6+ solubi l i toxic la Cr3+ conduce la precipitarea acestuia din urm ca oxid, sulfur sau fosf at; reducerea uraniului solubil U6+ la U4+ care precipit sub form de UO2. - Microo rganismele pot biodegrada compuii organo-metalici solubili, astfel nct metalul din complex s precipite i s fie imobilizat. 12

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Cln PROCES ANAEROB bifenil policlorurat Cln DECLORURARE REDUCTOARE bifenili mono- i diclorurai H O2 H 2[H] Cl Cl Cl Cl OH OH OH OH OH PROCESE AEROBE O2 COOH O H 2O acizi monoclorbenzoici COOH COOH COOH Cl Cl Cl H 2O ClCOOH ruperea inelului O2 H OOC OH OH O2 COOH OH Cl Cl HO OH DECLORURARE HIDROLITIC spontan O C=O COOH spontan CO2 OH ClOH Cl ClO C=O COOH DECLORURARE DUP RUPEREA INELULUI AROMATIC DECLORURARE OXIGENOLITIC Figura 8. Degradarea policlorobifenolilor printr-o secven de procese anaerobe i aer obe 13

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului

3. Tehnologii de decontaminare [i remediere a solurilor poluate n cazul locaiilor contaminate cu poluani sunt aplicate fie proceduri de securizare, fie proceduri de remediere. n timp ce remedierea asigur distrugerea sau reducerea cantitativ i calitativ a poluanilor, securizarea are drept scop ridicarea de barier e pentru mpiedicarea mprtierii poluanilor pe arii mai largi. Deoarece sursa de poluar e rmne, iar barierele ridicate sunt supuse degradrii i mbtrnirii, securizarea este doa o msur temporar, tot remedierea rmnnd procedura de aplicat. Metodele de remediere se pot clasifica n funcie de locul de aplicare al acestora i n funcie de tipul proceselo r implicate. Astfel, n primul caz deosebim procese ex situ i in situ, iar n al doil ea caz deosebim procese termice, fizico-chimice i biologice. Procesele ex situ ne cesit excavarea solului contaminat urmat de tratarea acestuia fie pe loc (remedier e on-site), fie ntr-o instalaie extern de tratarea solului (remediere off-site). Tr atamentul in situ se realizeaz fr a fi necesar excavarea solului, direct n situl cont aminat. Procesele termice de remediere se bazeaz pe transferul poluanilor din matr icea solului n faza gazoas prin aport de energie termic. Poluanii sunt eliberai din s ol prin vaporizare i apoi sunt incinerai, gazele reziduale fiind ulterior purifica te. Procesele fizico-chimice sunt, n general procese de extracie i/sau de clasare u med. Principiul procedeelor de splare ex-situ a solurilor const n concentrarea polua nilor ntr-o fraciune rezidual ct mai redus, apa fiind agentul de extracie cel mai frec ent utilizat. Pentru transferul contaminanilor din sol ctre extractant, dou mecanis me sunt importante: (i) crearea unor fore de forfecare puternice, induse prin pom pare, amestecare, vibrare sau prin utilizarea unor jeturi de ap de nalt presiune, c are s rup aglomeraiile de particule poluate i nepoluate i s disperseze contaminanii n za de extracie; (ii) dizolvarea contaminanilor de ctre componenii fazei extractant. Extracia in situ const n percolarea unui agent extractant apos prin solul contamina t. Percolarea se poate realiza prin anuri de suprafa, drenuri orizontale sau puuri ve rticale de adncime. Contaminanii solubili din sol se dizolv n lichidul percolant car e este pompat i tratat ulterior la faa locului. Procesele biologice se bazeaz pe aci unea microorganismelor care au capacitatea de a transforma poluanii organici n pri ncipal n CO2, ap i biomas, sau de a imobiliza poluanii prin legare n fraciunea humic olului. Degradarea se realizeaz, de regul, n condiii aerobe sau, mai rar n condiii ana erobe. Pentru eficientizarea procesului este esenial optimizarea condiiilor de dezv oltare a microorganismelor (aport de oxigen, pH, coninut de ap etc.). Stimularea a ctivitii biologice se poate realiza prin omogenizarea solului, aerare activ, umidif icare sau uscare, nclzire, adugare de nutrieni sau substraturi, inoculare cu microor ganisme. Procesele biologice necesit un aport de energie mult mai redus dect cele termice sau fizico-chimice, dar necesit\ perioade de tratare mai ndelungate. 14

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului 4. Bioremedierea in situ Principalul avantaj al procedeelor de remediere in situ este acela c\ solul poat e fi tratat f\r\ a fi necesare excavarea [i transportul, reducndu-se astfel semni ficativ costurile trat\rii. Oricum, aceast\ modalitate de remediere necesit\ per ioade mai `ndelungate, iar uniformitatea trat\rii este mai pu]in sigur\, dat\ fi ind variabilitatea caracteristicilor solurilor [i acviferelor. ~n plus, este mai dificil de controlat eficacitatea procesului. Tehnicile de bioremediere sunt te hnici destructive orientate c\tre stimularea `nmul]irii microorganismelor prin u tilizarea contaminan]ilor drept surse de hran\ [i energie. Crearea de condi]ii f avorabile de dezvoltare microorganismelor implic\, de regul\, asigurarea unor an umite combina]ii de oxigen, nutrien]i [i umiditate, precum [i un control al temp eraturii [i pH-ului. Uneori, pentru `mbun\t\]irea procesului, se adaug\ microorg anisme adaptate pentru degradarea anumitor contaminan]i. Utilizarea proceselor b iologice de remediere se realizeaz\ de regul\ cu costuri sc\zute. Contaminan]ii sunt distru[i [i rareori este necesar\ o tratare suplimentar\ a reziduurilor. Un ele dezavantaje apar `n cazul unor contaminan]i specifici. De exemplu, biodegrad area HAP conduce la r\mnerea `n sol a HAP cu mase moleculare mari, recalcitrante [i poten]ial cancerigene. Compu[ii polihalogena]i sunt greu biodegradabili, iar unii dintre ei sunt transforma]i prin biodegradare `n produ[i secundari [i mai t oxici (de exemplu, transformarea tricloretenei `n clorur\ de vinil). Ace[ti prod u[i secundari pot fi mobiliza]i de c\tre apele subterane, dac\ nu sunt folosite tehnici de control adecvate. Bioremedierea in situ necesit\ o caracterizare am\n un]it\ a solului, acviferului [i contaminan]ilor. Uneori poate fi necesar\ extra c]ia [i tratarea apei freatice, apa freatic\ cu grad redus de contaminare putnd f i recirculat\ prin zona tratat\ pentru a-i furniza acesteia umiditatea necesar\. 4.1. Factori care influeneaz bioremedierea in situ De[i nu to]i compu[ii organici se preteaz\ la biodegradare, bioremedierea in sit u a fost aplicat\ cu succes pentru remedierea solurilor, n\molurilor [i apelor s ubterane contaminate cu hidrocarburi din petrol, solven]i, pesticide, conservan] i pentru lemn [i alte produse organice. Compu[ii anorganici nu pot fi distru[i p rin bioremediere, dar pot fi extra[i din sol sau imobiliza]i prin procese de fit oremediere. Principalii parametrii care influen]eaz\ viteza cu care microorganis mele degradeaz\ contaminan]ii sunt: natura [i concentra]ia contaminan]ilor, apor tul de oxigen [i nutrien]i, umiditatea, temperatura, pH-ul, inocularea supliment ar\ a solului [i co-metabolismul. Tehnicile de bioremediere in situ sunt sensibi le la anumi]i parametri ai solului. De exemplu, prezen]a compu[ilor argilo[i sau humici provoac\ varia]ii `n 15

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului performan]ele procesului. Pentru a stabili eficien]a bioremedierii `n anumite co ndi]ii date este necesar\ efectuarea unor studii de tratabilitate. Concentraia ox igenului n sol poate fi mrit prin evitarea saturrii solului cu ap, evitarea compactrii solului, evitarea existenei unor poteniale redox ridicate sau a unor concentraii r eduse de materiale degradabile. Pentru a asigura furnizarea oxigenului cu o rat s uficient meninerii condiiilor aerobe, se poate utiliza injecia forat de aer sau de per oxid de hidrogen (H2O2). Utilizarea H2O2 este limitat ntruct la concentraii ridicate (peste 100 ppm , sau 1000 ppm cu o aclimatizare propice) este toxic pentru micro organisme. n plus, peroxidul de hidrogen tinde s se descompun rapid n ap i oxigen n pr zena anumitor componeni ai solului. Apa servete ca mediu de transport pentru nutrie ni i contaminanii organici care ptrund n celula microbian, precum i pentru resturile m tabolice care prsesc celula. Un exces de ap poate duna ntruct poate inhiba circulaia o igenului prin sol, evident doar n cazul n care nu sunt dorite condiii anaerobe. n li psa nutrienilor de cretere a celulelor (azot, fosfor, potasiu, sulf, magneziu, cal ciu, mangan, fier, zinc, cupru, alte elemente n urme), activitatea microbian este limitat. Azotul i fosforul sunt probabil nutrienii deficitari n mediul contaminat, e i fiind adugai de regul ntr-o form asimilabil: sruri de amoniu i fosfai. Fosfaii po ca colmatarea solului ca rezultat al precipitrii fosfailor de fier i de calciu stab ili care umplu porii din sol i din acvifere. Valoarea pH-ului influeneaz solubilita tea i, n consecin, disponibilitatea multor constitueni ai solului care pot afecta act ivitatea biologic. Multe metale potenial toxice pentru microorganisme sunt insolub ile la valori pH ridicate; ca urmare, creterea pH-ului sistemului de tratare util izat poate reduce riscul otrvirii microorganismelor. Temperatura afecteaz activita tea microbian: scderea temperaturii conduce la scderea vitezei de biodegradare; ast fel bioremedierea n zonele cu climat nordic poate fi ineficient n anumite perioade ale anului. Microorganismele rmn ns viabile i la temperaturi sub 0 C, relundu-i activ tea odat cu nclzirea solului. nclzirea zonei supuse bioremedierii, prin injecie de aer cald, poate accelera procesul de remediere. Cretere temperaturii peste un anumit prag poate fi nociv, provocnd sterilizarea solului. Creterea temperaturii influenea z i alte fenomene conexe bioremedierii, cum ar fi reducerea nebiologic a cantitii de contaminani, n special prin vaporizare. De regul, solubilitatea contaminanilor crete cu temperatura, dei solubilitatea unor hidrocarburi este mai ridicat la temperatur i joase. n plus, creterea temperaturii micoreaz solubilitatea oxigenului. Studiile d e tratabilitate sau de fezabilitate a bioremedierii se utilizeaz pentru a se veri fica dac bioremedierea este aplicabil ntr-o situaie dat. Complexitatea studiului depi nde de natura contaminanilor i de caracteristicile sitului. Pentru situri contamin ate cu hidrocarburi obinuite din petrol (benzin, de exemplu) este de regul 16

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului suficient examinarea probelor reprezentative n ceea ce privete prezena i nivelul popu laiilor indigene de microorganisme, nivelul nutrienilor, prezena substanelor toxice pentru microrganisme, precum i analizarea unor caracteristici ale solului, cum ar fi: pH-ul, porozitatea, umiditatea. Pentru a verifica eficiena bioremedierii sun t necesare caracterizri statistice privind situaia n situri nainte i dup tratamentu at. 4.2. Atenuarea natural\ monitorizat\ (ANM) Atenuarea natural se bazeaz pe procese naturale de decontaminare sau atenuare a po lurii n sol i ape subterane. ~n mod natural, `n subsol pot avea loc urm\toarele pro cese prin care concentra]ia poluan]ilor s-ar putea diminua sub limita admisibil\ : dilu]ia, volatilizarea, adsorb]ia, transformarea chimic\ [i biodegradarea. Dei atenuarea natural decurge n majoritatea siturilor poluate, este necesar existena uno r condiii corespunztoare pentru depoluare, altfel aceasta va fi incomplet sau insuf icient de rapid. Este necesar testarea sau monitorizarea acestor condiii pentru a v erifica fezabilitatea atenurii naturale. ANM se preteaz cel mai bine pentru utiliz are n zonele n care sursa de poluare a fost ndeprtat. ANM nu este sinonim\ cu neluarea nici unei m\suri, de[i aceasta este percep]ia cea mai frecvent\. ~n compara]ie c u alte tehnologii de remediere, ANM prezint\ o serie de avantaje ca: (i) generar ea sau transferul redus de de[euri; (ii) impactul redus asupra siturilor (nu se intervine cu structuri construite); (iii) aplicabilitate total\ sau par]ial\ `nt r-un anumit sit, `n func]ie de condi]iile concrete [i de obiectivul remedierii; (iv) posibilitatea utiliz\rii `mpreun\ sau dup\ alte m\suri active de remediere; (v) costuri globale mai reduse dect `n cazul remedierii active. Poluan]ii suscep tibili la eliminare prin ANM sunt compu[ii organici volatili [i semivolatili (CO V, COSV) precum [i hidrocarburile existente `n combustibili, anumite categorii d e pesticide, precum [i unele metale grele (Cr, de ex.) dac\ exist\ condi]ii de i mobilizare a acestora prin modificarea st\rii de oxidare. Printre dezavantajele ANM pot fi men]ionate: (i) necesitatea colect\rii datelor utilizate ca parametri i de intrare `n modelarea procesului; (ii) posibilitatea ca produ[ii intermediar i de degradare sa fie mai mobili sau mai toxici dect contaminantul ini]ial; (iii) posibilitatea migr\rii contaminan]ilor `naintea degrad\rii lor; (iv) posibilita tea imobiliz\rii unor poluan]i (Hg, de ex.) f\r\ a putea realiza degradarea lor; (v) monitorizarea pe termen lung, cu costurile aferente; (vi) durata mai mare a ANM comparativ cu m\surile active de remediere; (vii) posibilitatea modific\rii `n timp a condi]iilor hidrologice [i geochimice, care ar putea duce la refacere a mobilit\]ii poluan]ilor `n prealabil imobiliza]i; (viii) reticen]a opiniei pub lice la astfel de m\suri pasive de depoluare. 17

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului 4.3. Bioremedierea `mbun\t\]it\ (BI) Este un proces `n care microorganisme indigene sau inoculate (bacterii, fungii e tc.) metabolizeaz\ poluan]ii organici din sol sau ape subterane, cu formare de p rodu[i stabili, nepoluan]i. Pentru `mbun\t\]irea procesului, sau pentru desorb]i a poluan]ilor din materialele subterane se pot ad\uga nutrien]i, oxigen, alte am endamente. BI poate implica utilizarea de culturi microbiene special cultivate p entru degradarea anumitor poluan]i sau grupe de poluan]i, sau pentru a rezista ` n condi]ii deosebit de severe de mediu. Uneori microorganismele din situl supus remedierii sunt colectate, cultivate separat [i apoi reintroduse `n sit ca mijlo c de m\rire rapid\ a popula]iei microbiene `n situl respectiv. Alteori, de[i mai rar, se pot ad\uga alte tipuri de microorganisme `n diferite etape ale procesul ui de remediere, ca urmare a modific\rii compozi]iei poluan]ilor pe m\sur\ ce pr ocesul de bioremediere evolueaz\. ~n cazul `n care degradarea poluan]ilor este u n proces aerob, BI se poate realiza prin percolarea sau injec]ia `n sol de ap\ f reatic\ sau ap\ necontaminat\ cu con]inut de nutrien]i [i saturat\ cu oxigen diz olvat. ~n locul oxigenului dizolvat se poate folosi o alt\ surs\ de oxigen, de e x. H2O2. ~n cazul solurilor contaminate `n stratul superficial, pu]urile de inje c]ie sunt `nlocuite cu galerii de infiltra]ie sau cu sisteme de irigare la supra fa]\. Deoarece temperaturile sc\zute `ncetinesc bioremedierea, solul poate fi ac operit cu diverse dispozitive de `nc\lzire sau men]inere a temperaturii, pentru accelerarea procesului. Dac\ prin degradare anaerob\ rezult\ intermediari sau pr odu[i mai periculo[i dect poluan]ii ini]iali (ex.: degradarea anaerob\ a triclore tenei la clorur\ de vinil), se recomand\ crearea ulterioar\ de condi]ii aerobe p entru neutralizarea acestora. BI a fost aplicat\ cu succes pentru remedierea sol urilor, n\molurilor [i apelor subterane contaminate cu hidrocarburi din petrol, solven]i, pesticide, conservan]i pentru lemn, alte substan]e organice. Studii pi lot au ar\tat eficien]a procesului la degradarea anaerob\ a TNT din solurile con taminate cu reziduuri de muni]ii, mai ales dup\ ce sursa a fost `ndep\rtat\ iar concentra]ia poluantului `n sol este sc\zut\. Poluan]ii frecvent `ndep\rta]i pri n aceast\ tehnic\ sunt HAP, COSV nehalogena]i [i frac]iunile benzen-toluen-etibe nzen-xileni (BTEX) din siturile poluate cu conservan]i ai lemnului (creuzot) sau de pe amplasamentele unor rafin\rii. BI prezint\ [i o serie de limit\ri, cum ar fi: (i) ineficien]a `n cazul `n care matricea solului nu permite contactul `ntr e poluan]i [i microorganisme; (ii) circula]ia solu]iilor apoase prin sol poate c onduce la cre[terea mobilit\]ii poluan]ilor; (iii) colonizarea preferen]ial\ a m icroorganismelor poate produce `nfundarea pu]urilor de injec]ie a apei/nutrien]i lor; (iv) curgerile preferen]iale pot reduce considerabil contactul fluidelor in jectate cu poluan]ii procesul nu este recomandat pentru solurile argiloase, pute rnic stratificate sau eterogene; (v) concentra]ii ridicate de metale grele, comp u[i cu grad ridicat de clorurare, alcani cu caten\ lung\, s\ruri anorganice sunt toxice pentru 18

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului microorganisme; (vi) sc\derea vitezei procesului la sc\derea temperaturii; (vii) necesitatea trat\rii la suprafa]\ a apei freatice extrase (stripare cu aer sau tratare cu c\rbune activ) `nainte de re-injectare `n sol sau depozitare. BI poat e fi considerat\ o tehnologie pe termen lung, cur\]irea unui sit putnd dura `ntre 6 luni [i 5 ani, `n func]ie [i de specificul local. Costurile aferente tehnolog iei variaz\ `ntre 30 100 USD/m3 de sol tratat.

4.4. Bioaerarea Bioaerarea este un procedeu prin care biodegradarea aerob in situ este stimulat pr in aport suplimentar de oxigen ctre bacteriile solului. Spre deosebire de procede ul de extracie a vaporilor din sol, bioaerarea utilizeaz debite sczute de aer, att ct s susin activitatea microbiologic. Uzual oxigenul este adugat n sol prin injecie dire t de aer n situl contaminat. Injectarea de aer se poate realiza n puuri verticale sa u n canale orizontale (figura 9). Pe lng accelerarea degradrii, bioaerarea are i un e fect secundar, acela de a deplasa poluanii volatili prin solul activat. Procedeul se aplic, de regul, n zona nesaturat a solului (zona vadoas) i se preteaz tuturor com uilor care pot fi biodegradai aerob. 1 1 3 2 2 4 zona nesaturat\ (zona vadoas\) poluant pnza freatic\ a b Figura 9. Schema de principiu a bioaerrii: a injecie vertical; b injecie orizontal; compresor; 2 rezervor de combustibil (surs de poluare); 3 - puuri verticale; 4 co nducte orizontale de injecie Pentru realizarea corespunztoare a procesului trebuie ca aerul s fie capabil de a traversa solul ntr-o cantitate suficient pentru meninerea condiiilor aerobe, ceea ce nseamn un coninut de minimum 2% O2 n sol i n sol s fie prezente ntr-o 19

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului concentraie corespunztoare populaii bacteriene apte pentru degradarea poluanilor org anici minim 105 UFC/g sol, optim 107 - 108 UFC/g sol. Sunt necesare teste preala bile pentru determinarea permeabilitii solului la aer, precum i teste de respiraie i n situ. Principalii factori care limiteaz bioaerarea sunt: (i) condiii hidrogeolog ice improprii (pnza freatic foarte apropiat de suprafa, lentile de sol saturat, perme abilitate redus a solului); (ii) umiditatea extrem de sczut a solului (la sub 2% ma sice umiditate, activitatea microbian este inhibat); (iii) umiditatea prea ridicat a solului (reduce permeabilitatea aerului i scade rata de transfer a oxigenului); (iv) temperaturile sczute. Pe lng schema tehnologic tipic redat n fig. 9, exist i a osibiliti tehnice de a realiza bioaerarea: n circuit nchis, sau prin deshidratare su b presiune (figura 10). n cazul aplicrii circuitului nchis se maximizeaz cantitatea de poluant biodegradat, prin recircularea oxigenului care nu este consumat n total itate la o singur trecere. Solul din zona vadoas devine un bioreactor cu recircula rea fazei gazoase, n care doar 10% din debitul de aer recirculat trebuie nlocuit c u aer proaspt. n cazul deshidratrii sub presiune, aerul este injectat sub presiune chiar deasupra nivelului pnzei freatice. n zona respectiv are loc deshidratarea sol ului, pnza freatic se deformeaz, iar zona contaminat este expus aciunii oxigenului din aer. Se accelereaz astfel degradarea poluanilor din capilare, mbuntindu-se totodat ca itatea apei subterane, fr a mai fi necesar remedierea direct a acesteia. 4 1 Aer de injec]ie 2 3 2 zona vadoas\ zona vadoas\ zona de presiune zona contaminat\ poluant capilare pnza freatic\ pnza freatic\ a b Figura 10. Tehnici alternative de bioaerare: a - n circuit nchis; b - prin deshidr atare sub presiune; 1 - compresor; 2 - puuri de extracie a aerului; 3 - puuri de in jecie a aerului; 4 evacuare parial n atmosfer 20

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Pn n prezent bioaerarea a fost utilizat cu succes la remedierea unor soluri contamin ate cu produse petroliere, solveni neclorurai, anumite pesticide, conservani pentru lemn etc. Cele mai rapide rezultate se obin la degradarea componentelor cele mai toxice, solubile i mobile din componena carburanilor: benzen, toluen, etilbenzen, xileni. n mai puin de un an, cantitatea acestora din sol se reduce cu peste 90%. D egradarea majoritii compuilor clorurai se poate realiza numai prin utilizarea unor c o-metabolii (injectnd metan n sol, de ex.), sau prin existena unui ciclu anaerob. Bi oaerarea este o tehnologie aplicabil pe termen mediu spre lung. Rezultate vizibil e se obin n luni pn la ani. Exist cercetri referitoare la extinderea bioaerrii la solu ile cu permeabilitate sczut, prin injecie de oxigen n loc de aer; n zone cu clim rece, prin nclzirea solului; la bioremedierea compuilor recalcitrani (HAP, pesticide), pr in ozonizarea aerului injectat n sol. Costurile bioaer\rii scad la cre[terea volu mului de sol tratat: la 600 m3 sol, costurile sunt de 928 970 USD/m3, `n timp ce la 13000 m3 de sol costurile scad la 79 109 USD/m3.

4.5. Fitoremedierea Sub denumirea general\ de fitoremediere sunt cuprinse acele procese care utilize az\ plantele pentru `ndep\rtarea, transferul, stabilizarea [i distrugerea contam inan]ilor din sol, ap\, sedimente. Metodele de fitoremediere ofer\ un poten]ial semnificativ pentru anumite aplica]ii [i permit remedierea unor situri mult mai mari dect ar fi posibil `n cazul utiliz\rii unor tehnologii tradi]ionale de remed iere. Un num\r mare de specii de plante (peste 400 la ora actual\), `ncepnd cu fe rigile pteridofite [i terminnd cu angiosperme ca floarea-soarelui sau plopul, pot fi utilizate pentru `ndep\rtarea poluan]ilor prin intermediul mai multor mecani sme. Mecanismele fitoremedierii includ biodegradarea intensificat n rizosfer (rizod egradarea), fitoextracia (fitoacumularea), fitodegradarea i fitostabilizarea. Rizo degradarea are loc n poriunea de sol care nconjoar rdcinile plantelor. Substanele natu ale eliberate de rdcinile plantelor servesc drept substrat pentru microrganismele prezente n rizosfer, accelernd astfel degradarea contaminanilor. Rdcinile plantelor af eaz solul, lasnd loc pentru transportul apei i aerare. Acest proces tinde s mping apa ctre zona de suprafa i s deshidrateze zonele saturate mai joase. Fitoextracia este pro cesul prin care rdcinile plantelor absorb mpreun cu apa i nutrienii i contaminanii di ol (metalele, n special). Contaminanii nu sunt distrui, dar se acumuleaz n rdcinile, t lpinile i frunzele plantelor, care pot fi recoltate n vederea ndeprtrii i distrugerii contaminanilor. Procesul de extrac]ie depinde de abilitatea plantelor de a cre[te `n soluri cu concentra]ii ridicate de metale [i de capacitatea acestora de a ex trage din sol metalele `n condi]iile climaterice specifice 21

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului solului respectiv. Pentru fitoextrac]ie se pot folosi fie plante cu capacitate n atural\ excep]ional\ de a acumula metale, a[a numi]ii hiperacumulatori, fie plan te care produc cantit\]i ridicate de biomas\ (porumb, orz, maz\re, ov\z, orez, m u[tar indian) asistate chimic cu adaosuri de substan]e care `mbun\t\]esc capacit atea de extrac]ie a metalelor. Adaosurile de acid citric, acid oxalic, acid gali c, acid vanilic, chelatizan]i clasici ca etilendiaminotetraacetat - EDTA [i diet ilentriaminopentaacetat - DTPA sau chelatizan]i biodegradabili ca etilendiaminod isuccinat EDDS, metilglicindiacetat MGDA `mbun\t\]esc substan]ial extrac]ia din sol a Zn, Cd, Cu [i Ni. Aceste adaosuri prezint\ `ns\ riscul de a mobiliza metal ele `n apele subterane. Num\rul hiperacumulatorilor `n regnul vegetal este redus : circa 400 de specii de plante vasculare, marea majoritate prezentnd o afinitate deosebit\ pentru Ni. Prin defini]ie, hiperacumulatorii trebuie s\ acumuleze cel pu]in 100 mg/g Cd sau As, 1000 mg/g Co, Cu, Cr, Ni sau Pb, 10000 mg/g Mn sau Ni . Anumite specii de ferigi prezint\ o capacitate deosebit\ de acumulare pentru A s pn\ la 23000 mg/kg `n l\starii speciei Pteris vitata. Hri[ca obi[nuit\ (Fagopyr um esculentum Moench) poate acumula `n tulpini pn\ la 4200 mg/kg Pb, fiind prima specie hiperacumulatoare de Pb care are [i o productivitate ridicat\ `n biomas\. Alte plante cu poten]ial pentru fitoextrac]ie sunt cele din genul Brassica: Bra ssica juncea (mu[tarul indian) pentru Cd, Cr(VI), 137Cs, Cu, Ni, Pb, U, Zn, Bras sica napus (napul) pentru Pb, Se, Zn, Brassica oleracea (varza ornamental\) pent ru 137Cs, Ni, As, Tl. Extrac]ia Hg biodisponibil din sol se poate realiza cu orz , gru, lupin galben (Lupinus luteus), iarba cinelui (Cynodon dactylon). Fitodegrad area este procesul de metabolizare a contaminanilor n esuturile vegetale. Plantele produc enzime (dehalogenaze, oxigenaze) care favorizeaz degradarea catalitic a con taminanilor ajuni n esutul vegetal. Este studiat posibilitatea degradrii concomitente a compuilor aromatici i a compuilor alifatici clorurai prin aceast metod. Fitostabiliz area este procesul bazat pe capacitatea anumitor plante de a produce compui chimi ci care pot lega, la interfaa rdcin - sol, ntr-o form inactiv, cantiti importante de ui toxici (ndeosebi metale grele), mpiedicnd astfel rspndirea lor n apele subterane sa n alte medii. Uzual, solul supus fitostabiliz\rii este arat, tratat cu diverse a mendamente pentru fixarea rapid\ a metalelor (var, `ngr\[aminte fosfatice, oxihi droxizi de Fe sau Mn, minerale argiloase etc.), dup\ care este `ns\mn]at cu plant e cunoscute ca slabi translocatori ai metalelor, astfel `nct acestea s\ nu ajung\ `n p\r]ile plantei care pot fi consumate de animale. Iarba vntului (Agrostis ten uis) [i p\iu[ul ro[u (Festuca rubra) sunt folosite `n aplica]ii comerciale pentr u fitostabilizarea solurilor contaminate cu Pb, Zn sau Cu. Rizofiltrarea este si milar fitoacumulrii, cu observaia c se aplic doar efluenilor lichizi. Plantele sunt cr escute fr sol i sunt transportate n ariile contaminate. Pe msur ce rdcinile se sature u contaminani, se recolteaz i se depoziteaz. 22

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Fitovolatilizarea este procesul prin care plantele absorb apa contaminat cu compui organici pe care i elimin apoi n atmosfer prin intermediul frunzelor. {i unele metale (Hg, As, Se) pot fi eliminate sub form\ de compu[i gazo[i, dar toxicitat ea acestora pune la `ndoial\ eficacitatea acestei metode. Plante de tutun (Nicot iana tabacum) modificate genetic au fost utilizate pentru sorb]ia mercurului [i a metilmercurului din sol, urmat\ de eliberarea acestora `n atmosfer\ ca oxid de mercur. Influena hidraulic este procesul prin care arborii n special faciliteaz pro cesele de remediere, influennd micarea apei din pnza freatic. Arborii acioneaz ca pomp naturale atunci cnd rdcinile lor ajung sub oglinda apei freatice, stabilind o reea dens de rdcini care preiau cantiti importante de ap. Spre exemplu, o specie de plop (P opulus deltoides) ajuns\ la maturitate poate absorbi pn la 1,3 m3 de ap zilnic. n co ncluzie se poate defini fitoremedierea ca procesul de utilizare in situ a plante lor vii pentru tratarea solurilor, nmolurilor i apelor subterane, prin ndeprtarea, d egradarea sau imobilizarea poluanilor existeni. Tehnicile de fitoremediere sunt po trivite pentru ariile n care contaminarea este de nivel sczut pn la moderat, suficie nt de aproape de suprafa, i ntr-o zon puin adnc. Cu aceste limitri, fitoremedirea po i aplicat pentru diferitelor categorii de poluani: metale, pesticide, solveni, expl ozivi, iei brut, HAP, diferii compui organici, scurgeri de la depozitarea deeurilor m enajere. Specia vegetal\ frecvent utilizat\ `n proiectele de fitoremediere este deocamdat\ plopul. Acest arbore cre[te rapid, poate supravie]ui `n condi]ii clim aterice variate, iar `n compara]ie cu alte specii poate extrage cantit\]i mari d e ap\ din acvifere sau din sol, extr\gnd astfel [i poluan]ii solubiliza]i din med iul contaminat. Fitoremedierea este o tehnologie nou, nc n faz de dezvoltare, aplicaii le sale practice fiind relativ recente. Primele cercetri s-au fcut la nceputul anil or 1990, o serie de tehnici fiind aplicate cu rezultate rezonabile n unele situri poluate. Dintre dezavantajele fitoremedierii se pot meniona: (i) limitarea adncim ii zonei tratate n funcie de plantele utilizate - n majoritatea cazurilor procedeul este aplicabil pentru poluani aflai aproape de suprafa; (ii) concentraii ridicate de materiale periculoase pot fi toxice pentru plante; (iii) prezint aceleai limitri p rivind transferul de mas ca i celelalte tehnologii de bioremediere; (iv) poate ave a caracter sezonier, depinznd de locaia geografic a ariei supuse bioremedierii; (v) poate transfera poluanii ntre diverse medii (din sol n aer, de ex.); nu este efici ent pentru contaminanii puternic adsorbii, cum ar fi PCB; (vi) toxicitatea i biodisp onibilitatea produilor de biodegradare nu este ntotdeauna cunoscut; (vii) produii de biodegradare pot fi mobilizai n apa freatic sau se pot bioacumula n regnul animal, prin intermediul lanului trofic; (viii) fiind nc n faz demonstrativ, este relativ nefa miliar forurilor legislative. 23

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului Costurile fitoremedierii sunt sc\zute: pentru extragerea poluan]ilor dintr-un st rat de sol de 50 cm adncime costurile variaz\ `ntre 30 50 USD/m3 (aproximativ 150 000 250000 USD/ha). Un hectar de sol contaminat tot la 50 cm, dar tratat ex situ prin biodegradare `n straturi excavate cost\ `ntre 0,99 [i 4,2 milioane USD. 5. Bioremedierea ex situ Principala caracterisic\ a tehnologiilor de bioremediere ex situ este aceea c\ s olul este mutat din amplasamentul s\u ini]ial, fie `ntr-o instala]ie adecvat\, f ie `n alt\ parte a aceluia[i sit. Principalele avantaje ale tehnologiilor ex sit u sunt optimizarea condi]iilor de lucru, un mai bun control al procesului, o mon itorizare mai simpl\ [i mai precis\. ~n plus, ad\ugarea de microorganisme specia lizate `n biodegradarea anumitor contaminan]i este mai u[or de realizat [i mai s igur\. Aceste tehnologii sunt preferate `n cazul polu\rilor localizate, `n zonel e `n care concentra]ia poluan]ilor este relativ ridicat\, iar adncimea la care se g\sesc nu este prea mare. Pricipalele dezavantaje sunt costurile suplimentare l egate de excavare [i transport, riscurile r\spndirii poluan]ilor prin aceste mane vre sau poluarea secundar\ generat\ de mutarea solului. ~n plus, este necesar un spa]iu suplimentar pentru tratare. Costurile, `n general, sunt mai ridicate dect `n cazul bioremedierii in situ. 5.1. Bioremedierea `n movile statice (BMS) Bioremedierea `n movile statice este o tehnologie `n care solul excavat este ame stecat cu diverse amendamente [i a[ezat pe o zon\ de tratare prev\zut\ cu un sis tem de colectare a scurgerilor [i posibilit\]i de aerare. Se utilizeaz\ pentru r educerea concentra]iei produ[ilor petrolieri din sol prin biodegradarea acestora . Pentru `mbun\t\]irea biodegrad\rii se regleaz\ umiditatea, c\ldura, con]inutul de nutrien]i [i oxigen, pH-ul. Zona de tratare este acoperit\ sau inclus\ `ntrun strat impermeabil pentru minimizarea riscului scurgerii contaminan]ilor `n so lul nepoluat. Scurgerile colectate pot fi de asemenea tratate `ntr-un bioreactor `nainte de recirculare. La ora actual\ exist\ diverse variante comerciale ale p rocedeului, `n care re]ete speciale de nutrien]i [i aditivi sunt `ncorporate `n sol pentru stimularea biodegrad\rii. Aceste re]ete sunt de regul\ elaborate `n f unc]ie de condi]iile specifice ale sitului tratat. Movilele de sol au un sistem de aerare `ngropat, prin care circula]ia aerului se realizeaz\ prin depresiune ( vacuum) sau suprapresiune. ~n\l]imea movilelor poate atinge pn\ la 7 m, dar `n\l] imea recomandat\ este de maximum 2 3 m. Movilele pot fi acoperite cu folii de pl astic pentru controlul evapor\rii apei [i volatiliz\rii compu[ilor organici, pre cum [i pentru favorizarea `nc\lzirii solare. Dac\ `n sol exist\ 24

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului COV care trec `n fluxul de aer, aerul care p\r\se[te solul poate fi tratat pentr u `ndep\rtarea sau distrugerea COV `nainte de desc\rcarea `n atmosfer\. BMS este o tehnologie aplicabil\ pe termen scurt: s\pt\mni p\n\ la cteva luni. Tehnologia se preteaz\ bine la distrugerea COV monohalogena]i precum [i a hidrocarburilor d in combustibili. Poate fi aplicat\ [i la tratarea anumitor COV halogena]i, COSV, pesticide, cu o eficien]\ variabil\. Printre dezavantajele BMS se pot men]iona: (i) necesitatea excav\rii solului; (ii) procesele `n faz\ solid\ au o eficien]\ discutabil\ `n cazul deriva]ilor halogena]i [i pot fi ineficiente `n cazul rezi duurilor provenite de la utilizarea explozivilor; (iii) la aceea[i dimensiune a [arjei, timpul necesar decontamin\rii complete este mai ridicat dect `n cazul bio remedierii `n faz\ de noroi; (iv) procesul fiind static, tratarea este mai pu]in uniform\ dect `n cazul proceselor care implic\ o amestecare periodic\ a fazei so lide. Costurile trat\rii depind de tipul contaminantului, necesitatea pre- sau p osttrat\rii, necesitatea unor echipamente pentru controlul emisiilor atmosferice . BMS este o tehnologie relativ simpl\, cu un necesar redus de personal de opera re [i `ntre]inere. Costurile tipice sunt de 130 260 USD/m3 de sol tratat. 5.2. Compostarea Compostarea este un proces biologic controlat prin intermediul c\ruia o serie de contaminan]i organici sunt transforma]i aerob sau anaerob de c\tre microorganis me `n produse netoxice. Solul contaminat excavat este amestecat cu agen]i de afna re [i amendamente organice (rumegu[, fn, gunoi de grajd, resturi vegetale etc.). Alegerea corect\ a amendamentelor asigur\ o porozitate adecvat\, precum [i un ec hilibru carbon-azot care s\ asigure condi]ii termofile (54 65 C) de dezvoltare a microorganismelor. O eficien]\ maxim\ a degrad\rii se ob]ine prin aerare (`ntoar cerea zilnic\ a movilelor de compost), irigare (dac\ este necesar) [i o monitori zare atent\ a temperaturii [i a con]inutului de umiditate. ~n timpul compost\rii pot avea loc emisii `n atmosfer\ dac\ `n solul contaminat sunt prezen]i COV sau COSV, caz `n care sunt necesare echipamente pentru controlul emisiilor. Exist\ trei variante tehnologice de realizare a compost\rii: - compostarea `n movile st atice aerate: compostul este cl\dit `n movile [i aerat prin intermediul unor suf lante sau al unor pompe de vid; - compostarea `n reactoare cu agitare mecanic\: compostul este introdus `ntr-un vas de reac]ie `n care este amestecat [i aerat; - compostarea `n movile lungi: compostul este cl\dit `n movile lungi, fiind peri odic amestecat cu echipamente mobile. Aceasta este considerat\ ca fiind cea mai ieftin\ alternativ\ de compostare. Compostarea se poate aplica solurilor [i sedi mentelor contaminate cu compu[i organici biodegradabili. Studii pe instala]ii pi lot [i `n teren au ar\tat c\ prin compostare 25

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului aerob\ termofil\ este posibil\ reducerea concentra]iei trinitrotoluenului, picra tului de amoniu, a HAP pn\ la nivele acceptabile. ~n 40 de zile de operare, con]i nutul de TNT din sol poate fi redus cu 99,7%, mare parte a degrad\rii avnd loc `n primele 20 de zile de tratare. Ca dezavantaje se pot men]iona: (i) necesitatea unui spa]iu substan]ial pentru compostare; (ii) apari]ia emisiilor de COV la exc avarea solului; (iii) cre[terea volumului materialului solid `n urma compost\rii , ca urmare a adaosurilor de amendamente; (iv) imposibilitatea reducerii con]inu tului de metale grele. Costurile compost\rii sunt func]ie de volumul de sol trat at, frac]ia de sol din compost, disponibilitatea amendamentelor, tipul contamina ntului, varianta tehnologic\ de compostare aleas\. La un volum de sol de circa 1 5000 m3 contaminat cu explozivi, costurile de tratare sunt de 249 USD/m3 la comp ostarea `n movile lungi, 308 USD/m3 la compostarea `n movile statice aerate [i 3 80 USD/m3 la compostarea `n reactoare cu agitare mecanic\. 5.3. Biodegradarea `n straturi preparate (BSP) Biodegradarea `n straturi preparate (landfarming) este o tehnologie de bioremedi ere a solurilor, sedimentelor sau n\molurilor contaminate prin excavare, a[ezare `n straturi amplasate pe un suport impermeabil. Periodic straturile sunt r\stur nate sau lucrate pentru aerare. De cele mai multe ori, condi]iile din strat sunt controlate pentru optimizarea vitezei de degradare a poluan]ilor. Se practic\ c ontrolul umidit\]ii (prin irigare sau pulverizare de ap\), aer\rii (prin lucrare a solului cu o frecven]\ prestabilit\ are loc amestecarea [i aerarea), pH-ului ( prin neutralizare cu piatr\ de var sf\rmat\ sau cu var agricol), amendamentelor ( prin ad\ugare de afn\tori, nutrien]i etc.). Mediul contaminat este tratat `n stra turi cu grosimea de pn\ la 40 45 cm. Cnd este atins nivelul de tratare dorit, stra tul tratat este `ndep\rtat, cl\dindu-se altul nou. Se recomand\ `ns\ doar `ndep\ rtarea vrfului stratului tratat, noul strat cl\dinduse prin ad\ugare de material contaminat [i amestecare cu materialul r\mas. ~n felul acesta materialul contami nat proasp\t ad\ugat este inoculat cu culturi microbiene active, reducndu-se astf el durata trat\rii. O variant\ a BSP este tratarea solului (TS sau land treatmen t), cnd solurile, sedimentele sau n\molurile contaminate sunt afnate cu dispozitiv e mecanice mobile [i l\sate s\ interac]ioneze cu solul pe care sunt amplasate. I nterac]iunea dinamic\ dintre de[euri, sol, clim\ [i activitatea microbian\ condu ce la degradarea, transformarea [i imobilizarea constituen]ilor poluan]i. Ca [i `n cazul BSP, este necesar controlul umidit\]ii, aer\rii, pH-ului, adaosului de amendamente. ~n plus sunt necesare m\suri suplimentare de siguran]\ pentru evita rea contamin\rii apelor freatice [i de suprafa]\, a aerului, sau prin intermediu l lan]ului trofic. 26

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului BSP [i TS sunt tehnologii cu aplicabilitate pe termen mediu [i lung. Ele au fost demonstrate cu succes `n tratarea hidrocarburilor petroliere grele (motorine, n \moluri petroliere), reziduurilor de cocsare, a conservan]ilor pentru lemn (pent aclorfenol, creuzot) [i a anumitor pesticide. Hidrocarburile cu mas\ molecular\ mic\ se evapor\ [i se transfer\ `n atmosfer\ `nainte de a putea fi degradate pri n aceste tehnologii. Ca dezavantaje ale acestor tehnologii se pot men]iona: (i) necesitatea unor spa]ii largi; (ii) controlul precar al anumitor factori (precip ita]ii, temperatur\) care afecteaz\ biodegradarea; (iii) imposibilitatea degrad\ rii poluan]ilor anorganici; (iv) necesitatea pretrat\rii COV care altfel s-ar vo latiliza `n atmosfer\ provocnd poluarea acesteia; (v) necesitatea controlului pra fului emanat `n timpul lucr\rii solului; (vi) necesitatea construirii [i suprave gherea func]ion\rii unor dispozitive de captare a apelor meteorice; (vii) anumit e de[euri sunt restric]ionate la aplicarea pe sol (anumite n\moluri petroliere, de ex.), ele neputnd fi tratate prin aceste tehnologii. Aplicarea acestor tehnolo gii implic\ att costuri anterioare aplic\rii [i independente de volumul tratat (2 5000 50000 USD pentru studii de laborator, pn\ la 100000 USD pentru studii pe pil ot [i experiment\ri `n teren), precum [i costuri de exploatare, care nu dep\[esc 100 USD/m3. 5.4. Bioremedierea `n faz\ de noroi (BFN) Principiul tehnologiei de bioremediere `n faz\ de noroi const\ `n realizarea une i suspensii consistente (noroi) alc\tuit\ din sol, sedimente sau n\mol, ap\ [i a l]i aditivi. Noroiul este amestecat pentru men]inerea `n suspensie a solidelor [ i pentru a permite contactul microrganismelor cu contaminan]ii din sol. Dup\ rea lizarea biodegrad\rii, noroiul este deshidratat, faza solid\ rezultat\ fiind adu s\ pe amplasamentul original sau utilizat\ `n alte scopuri. BFN necesit\ tratare a controlat\ a solului excavat `ntr-un bioreactor. ~n prealabil din sol se separ \ pietrele [i molozul, dup\ care se dilueaz\ cu ap\ la o concentra]ie depinznd de concentra]ia poluan]ilor, viteza biodegrad\rii [i de natura fizic\ a solului. ~ n unele variante se practic\ o presp\lare a solului `n vederea concentr\rii cont aminan]ilor. Nisipul curat poate fi `ndep\rtat, r\mnnd pentru alimentarea bioreact orului doar particulele fine de sol contaminat [i apele de sp\lare. Noroaiele ti pice con]in 10 30% masice de faz\ solid\. Suspensia se trece `ntr-un bioreactor cu agitare unde se adaug\ nutrien]i [i oxigen. Dac\ este necesar, se face o core c]ie de pH prin ad\ugare de acizi sau baze. Se pot ad\uga [i culturi microbiene `n cazul `n care specia adecvat\ nu este prezent\ `n solul de tratat. La termina rea biodegrad\rii, suspensia de sol se supune deshidrat\rii, utilizndu-se `n aces t scop decantoare, filtre sub presiune sau la vid, paturi usc\toare de nisip sau centrifuge. BFN este o tehnologie pe termen scurt c\tre mediu. Timpul de sta]io nare `n bioreactor este func]ie de natura poluan]ilor, concentra]ia lor [i de gr adul de 27

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului `ndep\rtare dorit. Uzual sunt necesare 5 zile pentru distrugerea pentaclorfenolu lui, 13 zile pentru remedierea solului contaminat cu pesticide [i 60 de zile pen tru decontaminarea n\molului de rafin\rie. Pna `n prezent, BFN a fost aplicat\ cu succes la remedierea solurilor, n\molurilor [i sedimentelor contaminate cu expl ozivi, produse petroliere, produse petrochimice, solven]i, pesticide, conservan] i pentru lemn [i alte substan]e organice. Bioreactoarele sunt preferate fa]\ de tehnicile de remediere in situ `n cazul solurilor greu permeabile, a solurilor e terogene, `n cazul `n care apele freatice care `nconjoar\ zona poluat\ sunt greu de captat, sau atunci cnd tratarea trebuie realizat\ rapid. BFN se utilizeaz\ `n special pentru tratarea COV [i COSV nehalogena]i din soluri excavate sau din se dimente dragate, precum [i pentru tratarea solurilor contaminate din poligoanele de artilerie. Bioreactoarele `n care se adaug\ co-metaboli]i [i microorganisme special adaptate pot fi utilizate pentru tratarea COV [i COSV halogena]i, pestic idelor [i PCB. Bioreactoare secven]iale anaerob/aerob se pot utiliza pentru trat area PCB, COSV halogena]i, pesticidelor [i reziduurilor explozivilor de artileri e. Exist\ [i unit\]i mobile de tratare, care pot fi deplasate rapid `n diverse z one. Factorii care limiteaz\ aplicabilitatea [i eficien]a BFN sunt: (i) necesita tea excav\rii, excep]ie f\cnd tratarea `n lagune; (ii) clasarea materialelor `nai nte de introducere `n reactor poate fi dificil\ [i costisitoare; (iii) solurile neomogene sau argiloase pot crea probleme serioase de manipulare; (iv) deshidrat area particulelor fine rezultate `n urma trat\rii poate fi costisitoare; (v) est e necesar\ g\sirea unei metode acceptabile de utilizare a apelor uzate nerecicla te `n proces. Costul trat\rii prin procedeul BFN variaz\ `ntre 130 200 USD/m3, r espectiv `ntre 160 210 USD/m3 `n cazul `n care gazele rezultate din bioreactor t rebuiesc ulterior tratate datorit\ prezen]ei compu[ilor volatili. Bibliografie 1. 2. 3. 4. Aeckersberg F., Rainey F.A., Widdel F. - Arch. Microbiol. 1998, 170, 361. Alexander M. - Biodegradation and Bioremediation, Academic Press, San Dieg o, 1994. Al-Garni S.M. - Water SA 2005, 31, 345, disponibil la: http://www.wrc.o rg.za. Al-Najar H., Schulz R., Rmheld V. - Phytoremediation of Thallium Contamina ted Soils by Brassicaceae, `n: Environmental Chemistry: Green Chemistry and Poll utants in Ecosystems (Ed. Lichtfouse E., Schwarzbauer J., Robert D.), Springer V erlag, Berlin, Heidelberg, 2005, 187. Cheremisinoff N.P. - Biotechnology for Was te and Wastewater Treatment, Noyes Publications, Westwood, 1996. Cookson J.T. Bioremediation Engineering: Design and Application, McGraw-Hill, New York, 1994. do Nascimento C.W.A. - Sci. Agric. (Piracicaba, Braz.) 2006, 63, 276. do Nascim ento C.W.A., Xing B. - Sci. Agric. (Piracicaba, Braz.) 2006, 63, 299. 28 5. 6. 7. 8.

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului 9. Doble M., Kruthiventi A.K., Gaikar V.G. - Biotransformations and Bioprocesses , Marcel Dekker, New York, 2004. 10. Douay F., Pruvot C., Dubourguier H.C., Frano is M., Sterckeman T., Ciesielski H. Comportement physico-chimique et transfert d es mtaux lourds vers lhydrosphere et la biosphere autour des deux usines mtallurgiq ues du nord de la France, `n: Actes du deuxieme Colloque Franco-Roumain de Chimi e Applique COFrRoCA-2002 (Ed. Gavril\ L., F`naru A., Grandclaudon P.), Alma Mater Bac\u, Tehnica-Info Chi[in\u, 2002, 321. 11. Dubourguier H.C., Kahru A., Douay F. - Potentialits des traitments biologiques de sols pollus issus de cokeries, `n: Actes du deuxieme Colloque Franco-Roumain de Chimie Applique COFrRoCA-2002 (Ed. Gavril\ L., F`naru A., Grandclaudon P.), Alma Mater Bac\u, Tehnica-Info Chi[in\u , 2002, 4. 12. Ducic T., Polle A. - Braz. J. Plant Physiol. 2005, 17, 103. 13. E hlers G.A., Rose P.D. Water SA 2006, 32, 243, disponibil la: http://www.wrc.org. za. 14. Elsner M., Schwarzenbach R.P., Haderlein S.B. - Environ. Sci. Technol. 2 004, 38, 799. 15. Evans G.M., Furlong J.C. - Environmental Biotechnology: Theory and Application, John Wiley & Sons Ltd., Chichester, 2003. 16. Fritsche W., Hof richter M. - Aerobic degradation of recalcitrant organic compounds by microorgan isms, n: Environmental Biotechnology. Concepts and Applications (Ed. Jrdening H.-J ., Winter J.), Wiley-VCH Verlag, Weinheim, 2005, 203. 17. Fritsche W., Hofrichte r M. - Aerobic Degradation by Microorganisms, n: Biotechnology (Ed. Rehm H.-J., R eed G.), Vol. 11b, Wiley-VCH Verlag, Weinheim, 2000. 18. Gonzaga M.I.S., Santos J.A.G., Ma L.Q. - Sci. Agric. (Piracicaba, Braz.) 2006, 63, 90. 19. Graedel T.E. - Chemical Compounds in the Atmosphere, Academic Press, New York, 1978. 20. Gra to P.L., Prasad M.N.V., Cardoso P.F., Lea P.J., Azevedo R.A. - Braz. J. Plant Phy siol. 2005, 17, 53. 21. Hofrichter M. - Enzyme Microbiol. Technol. 2002, 30, 454 . 22. Kstner M. - Degradation of aromatic and polyaromatic compounds, n: Biotechno logy (Ed. Rehm H.-J., Reed G.), Vol. 11b, Wiley-VCH Verlag, Weinheim, 2000. 23. Leeson A., Hinchee R.E. - Principles and Practice of Bioventing, vol. I, II, Bat telle Memorial Institute, Columbus, 1996. 24. Maillard J., Schumacher W., Vazque z F., Regeard C., Hagen W.R., Holliger C. - Appl. Environ. Microbiol. 2003, 69, 4628. 25. Manji S., Ishihara A. - Appl. Microbiol. Biotechnol. 2003, 63, 438. 26 . Neumann A., Siebert A., Trescher T., Reinhardt S., Wohlfarth G., Diekert G. Arch. Microbiol. 2002, 177, 420. 27. Palumbo A.V., Eng W., Boerman P.A., Strandb erg G.W., Donaldson T.L., Herber S.E. Effects of diverse organic contaminants on trichloroethylene degradation by methanotrophic bacteria and methane-utilizing consortia, `n: On Site Bioreclamation Processes for Xenobiotic and Hydrocarbon T reatment (Ed. Hinchee R.E., Offenbuttel R.F.), Butterworth-Heinemann, Stoneham, 1991. 28. Patra J., Lenka M., Panda B.B. New Phytol. 1994, 128, 165. 29

Biotehnologii de depoluare i remediere a solului 29. Prasad M.N.V., de Oliveira Freitas H.M. - Electronic Journal of Biotechnolog y 2003, 6, 3, disponibil la http://www.ejbiotechnology.info/content/vol6/issue3/ full/6. 30. Rodriguez L., Lopez-Bellido F.J., Carnicer A., Recreo F., Tallos A., Monteagudo J.M. Mercury Recovery from Soils by Phytoremediation, `n: Environmen tal Chemistry: Green Chemistry and Pollutants in Ecosystems (Ed. Lichtfouse E., Schwarzbauer J., Robert D.), Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, 2005, 197. 31. Schink B. - Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1997, 61, 262. 32. Schink B. - Principle s of anaerobic degradation of organic compounds, n: Environmental Biotechnology. Concepts and Applications (Ed. Jrdening H.-J., Winter, J.), Wiley-VCH Verlag, Wei nheim, 2005, 229. 33. Semprini L., Roberts P.V., Hopkins G.D., McCarty P.L. - Gr oundwater 1990, 28, 715. 34. Steffen K., Hatakka A., Hofrichter M. - Appl. Envir on. Microbiol. 2003, 69, 3957. 35. Suthersan S.S. - Remediation Engineering: Des ign Concepts, CRC Press, 1999. 36. Tsien H.C., Bousseau A., Hanson R.S., Wackeff L.P. - Appl. Environ. Microbiol. 1989, 55, 3155. 37. Vallero D.A. - Environment al Contaminants: Assessment and Control, Elsevier, 2004. 38. Wolski E.A., Murial do S.E., Gonzles J.F. - Water SA 2006, 32, 1, disponibil la: http://www.wrc.org.z a. 39. Zehnder A.J.B., Stumm W. - Geochemistry and biogeochemistry of anaerobic habitats, n: Biology of Anaerobic Microorganisms (Ed. Zehnder A.J.B.), Wiley, New York, 1988. 40. * * * - In Situ Bioremediation: When Does it Work?, National Ac ademy Press, Washington, 1993. 41. * * * - Engineered Approaches to In Situ Bior emediation of Chlorinated Solvents: Fundamentals and Field Applications, US Envi ronmental Protection Agency, EPA-542-R00-008, 2000. 42. * * * - Principles and P ractices of Enhanced Anaerobic Bioremediation of Chlorinated Solvents, Parsons C o., 022/738863/28.doc, 2004. 30