DIAGNOSTIC SEROLOGIC IN INFECTIA HIV/SIDA

1990 Romania raporteaza 1094 cazuri de SIDA la copii, reprezentnd jumtate din totalul de cazuri de SIDA pediatric din Europa

ENCEFALOPATIE HIV

Infectie HIV in SNC

1. DIAGNOSTIC SEROLOGIC
TESTE DE TRIAJ- sensibilitate inalta ELISA TESTE RAPIDE TESTE DE CONFIRMARE- specificitate inalta WESTERN BLOT RADIOIMUNOPRECIPITAREA (RIPA) IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA

2. DETECTIA DIRECTA A VIRUSULUI SAU A PRODUSELOR VIRALE

IZOLARE VIRALA DETECTIA ANTIGENEMIEI p24 DETECTIA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL (ARN HIV PLASMATIC SAU ADN HIV PROVIRAL LIMFOCITAR)

TESTE DE TRIAJ

ELISA INDIRECTA

ETAPE 1. Incubare ser pacient 1h la 37C 2. Spalare 3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37C 4. Spalare 5. Incubare substrat 20 30 min la temp camerei

6. Citire la spectrofotometru DO probe, martori, cut off

Distribuirea probelor cu pipeta automata

Spalator automat

Spectrofotometru

ELISA de competitie

ETAPE
Incubare ser pacient si conjugat 1h la 37C Spalare Incubare substrat 20 30 min la temp camerei Citire la spectrofotometru DO probe, martori, cut off

TESTE DE CONFIRMARE
WESTERN BLOT

UTILIZARE
Detectia proteinelor virale Caracterizarea preparatelor de anticorpi mono- si policlonali Determinarea specificitatii raspunsului imun impotriva antigenelor virale

PRINCIPIU
Proteinele dintr-un lizat viral sunt separate electroforetic dupa greutatea moleculara prin SDS-PAGE (sodium dodecil sulfat) Transferate pe o membrana de nitroceluloza Detectie prin anticorpi marcati radioactiv (autoradiografie) sau enzimatic (COLORIMETRIC)

ELECTROFOREZA
Pe gel de poliacrilamida Apoi proteinele sunt transferate pe o membrana de nitroceluloza prin difuzie, electroforeza sau prin afinitate Fixarea se face prin simpla absortie pasiva, prin legaturi covalente pe membrana diazotata sau prin legare specifica pe membrana acoperita de anticorpi

Tehnica WESTERN BLOT

1. SDS-PAGE 2. BLOT (transfer)

3. DETECTIA ANTICORPILOR

WESTERN BLOT detectia Ac serici

Substrate Stop

color

gp160 gp120

Western blot in infectia HIV

Criteriul minim de pozitivitate
2 env + 1 gag

p66

p55 p51

gp41

p31 p24

p17 p10/11 p7/9

DIAGNOSTIC SEROLOGIC HIV

ELISA
NEGATIV= ABSENTA INFECTIEI HIV POZITIV IN DUPLICAT

WESTERN BLOT
NEGATIV

POZITIV= INFECTIE HIV

! Ferestra serologica
risc rezidual al transfuziei = 2/1 milion

INDETERMINAT
repeta la 6-8 saptamini alt test de confirmare

Ag p24- 1.48/1 milion ADN proviral1.48/1 milion ARN HIV 1.01/1 milion