Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor Laborator Igiena

E LO OR R EV VA AL LU UA AR RE EA AE EF FIIC CIIE EN N E EII D DE EZ ZIIN NF FE EC CT TA AN N IIL

Dezinfecia este procesul prin care sunt distruse cele mai multe, sau toate microorganismele patogene (n proporie de 99,99%), cu excepia sporilor bacterieni, de pe obiecte din material inert. Dezinfecia se aplic n cazurile n care curenia nu elimin riscurile de rspndire a contaminrii cu microorganisme, iar sterilizarea nu este necesar. n orice activitate de dezinfecie trebuie s se aplice msurile de protecie a muncii pentru a preveni accidentele i intoxicaiile. Norma tehnica din 06/03/2003 Publicat n Monitorul Oficial, Partea I nr. 194bis din 26/03/2003 n procesul de dezinfecie sunt utilizate produse de dezinfecie cu activitate de omorre a microorganismelor pentru a distruge germenii de alterare a produselor alimentare sau germenii periculoi pentru consumatori de pe suprafee. Rezultatele obinute n urma dezinfeciei sunt limitate la germenii prezeni n momentul executrii operaiunii, din aceasta cauza fiind necesar o frecven regulat de realizare a acesteia. n general, pentru igienizare n industria alimentar, dezinfectanii trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: s nu fie toxici pentru om n dozele folosite; s nu confere gust sau miros strin produselor alimentare; s nu aib aciune coroziv; s fie stabili n ap i s fie eficieni, indiferent de calitatea apei; s posede un spectru larg de aciune asupra microorganismelor; s se caracterizeze printr-o bun capacitate de ptrundere; s fie ieftini. Dezinfectanii pot avea aciune: levuricid; fungicid; bactericid; microbicid.

Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor Laborator Igiena

T O4 Te es stta ar re ea aa ac ciiu un niiii ffu un ng giic ciid de ea aC Cu uS SO 4 4

Varul, cu toate c este un dezinfectant, i menine aceast aciune numai n mediu uscat, n timp ce n mediul umed, i pierde efectul antimicrobian. Pe acest considerent, unii prefer n loc de vruire trimestrial, o vruire efectuat o dat pe an, cu var stins proaspt, n care se adaug una dintre substanele urmtoare: sulfat feros 3%, sulfat de cupru 3-5%, cloramin 2%, hidroxid de sodiu 2%, pentaclorfenolat de sodiu 0,1%. n cadrul lucrrii de laborator, se va testa influena sulfatului de cupru asupra tulpinii de Cladosporium izolat de pe perei umezi, utilizndu-se urmtoarea schem de lucru:

Fig.1.1 Aciunea sulfatului de cupru asupra lui Cladosporium

2

Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor Laborator Igiena

T an nii u uttiilliiz za aii n ntta ar r Te es stta ar re ea ae effiic ciie en ne eii u un no or rd de ez ziin nffe ec ctta n iin nd du us sttr riia aa alliim me en ii n n lla ab bo or ra atto oa ar re e
PRINCIPIUL METODEI Un disc cu diametru cunoscut este imersat n dezinfectant i este depus pe suprafaa unui mediu de cultur agarizat, preinoculat cu o bacterie de referin. Concomitent se produc dou fenomene: difuzarea dezinfectantului i creterea bacteriei. Dezinfectantul difuzat n mediu va influena vizibil dezvoltarea bacteriilor, aspect materializat prin apariia n jurul discurilor, a unor zone clare datorit absenei creterii bacteriilor, denumite ZONE DE INHIBIIE A CRETERII. Metoda este indicat pentru laboratoarele care testeaz un numr relativ mic de tulpini bacteriene cu cretere rapid la 35-37C, fr diferene semnificative, de la tulpin la tulpin, a ratei de cretere (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococcus, Enterococcus). Scopul metodei este acela de a distruge sau cel puin de a mpiedica multiplicarea unui agent patogen. Dintre multiplele metode i procedee existente se recomand metoda difuzimetric. Aceasta este mai uor de executat, mai economic i asigur o reproductibilitate de aproximativ 90% daca se respect strict toate condiiile de lucru. MODUL DE LUCRU Mediul de rspndire repartizat n eprubete sterile, fluidificat i temperat este inoculat cu un volum cunoscut din suspensia de bacterii de referin i repartizat uniform n plci Petri. Se depun discurile cu substane dezinfectante la distana de minimum 15 mm de marginea plcii i de 30 mm ntre centrele a dou discuri vecine. Dup repartizarea discurilor, plcile se termostateaz imediat, la 37C, timp de 16 18 ore (Fig. 2.1).

Fig. 2.1 Schema de lucru a testului Kirby Bauer

3

Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor Laborator Igiena

CITIREA SI INTERPRETAREA REZULTATELOR n primul rnd aspectul Zonei de Inhibiie trebuie s fie clar i cu contur net. n situaia n care se observa chiar i o singura colonie n interiorul zonei de inhibiie, se va considera rezistent la acel dezinfectant, indiferent de diametrul zonei de inhibiie (fig. 2.2).

Figura 2.2 Citirea i interpretarea metodei difuzimetrice Dup trecerea perioadei de termostatare se msoar cu rigla gradat n mm diametrul zonelor de inhibiie complet n lumina reflectata pe fond negru mat. n caz de urgenta plcile pot fi citite la 5-6 ore de incubare, cu condiia verificrii diametrelor zonelor de inhibiie dup 16-18 ore. n cazul mediilor transparente, msurarea se face pe spatele plcilor, iar n cazul mediilor cu snge pe suprafaa agarului din cauza opacitii. Coloniile mari din zona de inhibiie trebuie identificate i retestate. Acestea pot fi constituite din variante rezistente sau contaminani (inocul mixt). Metoda poate fi aplicat pentru a testa eficiena unui dezinfectant asupra mai multor tulpini sau sensibilitatea unei tulpini la mai muli dezinfectani. Rezultatele se pot interpreta dup cum urmeaz: Diametrul zonei de inhibiie peste 6 mm tulpina se considera sensibil la dezinfectantul respectiv

Diametrul zonei de inhibiie cuprins intre 2-5 mm tulpina se considera cu sensibilitate intermediar la dezinfectantul respectiv

Diametrul 1 mm sau absent microorganismul testat se considera Rezistent la acel dezinfectant

Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor Laborator Igiena

ANEXA

Evaluarea eficienei dezinfectanilor prin metoda difuzimetric

Sensibilitatea la dezinfectani a bacteriei E. coli

Sensibilitatea la dezinfectani a bacteriei S. aureus

5