3/21/2013

Curs de Biofizic
3
Metode de studiu n Biofizic
Prof. dr. Cipriana TEFNESCU ef lucr. dr. Irena GRIEROSU

Clasificare:

I. METODE GENERALE II. METODE SPECIFICE

3/21/2013

I. METODE GENERALE:

A) Observaia tiinific B) Experimentul tiinific

tiina este o u i cercetarea este cheia acesteia.

- Anton Pann

Observaia tiinific

Natura rspunde doar celui pregtit s o aud.

3/21/2013

Serendipitate

Cuvnt la mod, ndeosebi n SUA. Origine interesant. Ilustreaz afirmaia lui Pasteur: ansa, ntmplarea ajut numai spiritele pregtite. Serendipitatea este un hazard fericit.

From gunpowder to Viagra, many of the greatest eureka moments in human history were chance discoveries that led to world-changing inventions and ideas. Let this book take you on a tour of the scientific and technological advancements where leaps of faith, unexpected inspiration, and sudden shifts of understanding brought about overnight changes in our perception of the world. Sudden flashes of genius have shaped our lives for seven thousand years, from the discovery of penicillin to the invention of the microwave oven. Celebrating the accidental Einsteins whose moments of inspiration changed the world, this book covers the work of familiar figures such as Isaac Newton and Louis Pasteur, but also reveals unsung heroes like the inventors of safety glass and the radio.

3/21/2013

Hippocrate: observaia tiinific

Hippocrate a fost fondatorul colii medicale Kos i numele lui este strns legat de prima perioad a medicinii tiinifice. Diagnosticul lui se bazeaz pe sistemul de raionament logic, pe observaie clinic atent, pe o abordare uman a pacientului, pe logic.

Hippocrate:
Printele medicinii Jurmntul lui Hippocrate Bazele cercetrii tiinifice: observaia Fia medical - Foaia de observatie, continu s fie cel mai important document al pacientului (primele observaii clinice - Hippocrate). Tratamentul pe baze tiinifice.

3/21/2013

Observaia tiinific
intenional: scop metodic: metod organizat, cercetare sistematic valoare cognitiv depinde de calitile cercettorului fr intervenia cercettorului - poate fi: 1. direct (bazat pe percepia senzorial) 2. indirect (intermediat de un instrument - stetoscopul)

Experimentul tiinific aceleai caracteristici, dar cu intervenia cercettorului

poate fi:

1. in vivo (pe modele animale) 2. in vitro (pe celule, culturi de celule)

nu poate fi aplicat pe om.

Lexprience est une observation provoque dans le but de faire natre une ide. Claude Bernard

3/21/2013

II. Metodele specifice biofizicii

Clasificare bazat pe 3 criterii:
I. Principiul fizic/biofizic al metodei (prezentat extensiv) II. n relaie cu modul de utilizare:

metode de separare metode analitice (de analiz)

III. n relaie cu complexitatea biosistemului : atomi, molecule celule esuturi organe, sisteme fiziologice.

De ce metode de separare pentru medic?

Analiza unei anumite proteine dintr-un esut complex necesit separarea acesteia.
Schema unei celule animale tipice, care arat componentele subcelulare. Organite: (1) nucleoli (2) nucleu (3) ribozom (4) vezicul (5) reticulul endoplasmatic (ER) (6) aparatul Golgi (7) citoscheletul (8) reticulum endoplasmatic (9) mitocondrii ( 10) vacuole (11) citoplasma (12) lizozom (13) centriol.

Proteom - ansamblul de proteine produse de genom (aproximativ 60.000 de proteine la om).

3/21/2013

Separarea-purificarea proteinelor
Scop Studiul proprietilor unei proteine Determinarea secventei de aminoacizi Determinarea structurii tridimensionale Dificultate Celulele conin, de obicei mai mult de 1000 tipuri diferite de proteine. Fiecare proteina are abundena medie mai puin de 1 / 1000 Soluie Diferenele biochimice i ale proprietilor fizicochimice ale proteinelor: solubilitate, dimensiuni, punct izoelectric, hidrofobicitate, afinitate pentru anumii liganzi.

I.

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

L.P.! 1. Metode electrokinetice : Electroforeza i immunoelectroforeza

3/21/2013

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

2. Metode cromatografice: (adsorbie, partiie, schimb de ioni, afinitate) 3. Centrifugare i ultracentrifugare 4. Metoda de liofilizare
L.P.!

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

5. Metode kinetice:

Viscozimetrie Osmometrie Msurarea tensiunii superficiale

L.P.! L.P.! L.P.!

3/21/2013

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

6. Metode optice:

Fotocolorimetrie Turbidimetrie Nefelometrie Fluorimetrie Polarimetrie Refractometrie Flam-fotometrie

L.P.!

L.P.! L.P.!

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

7. Metode electrice:

Polarografie pH-metrie Conductometrie

L.P.!

8. Difracie cu raze X

3/21/2013

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

9. Microscopia optic: Microscopul optic

L.P.! L.P.!

Microscopul cu contrast de faz Microscopul cu fluorescen Ultramicroscopul Microscopul polarizant Microscopul cu imersie
L.P.! L.P.!

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

10. Microscopul electronic, microanaliza nuclear i alte tehnici n relaie.

10

3/21/2013

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

11. Metode de spectrometrie optic :

spectrometrie ultraviolet-vizibil spectrometrie Raman L.P.! Spectrometrie RMN spectrometrie de mas

L.P.! 14. Metode radio-izotopice 15. Metode pentru studiul semnalului L.P.! bioelectric (metoda patch-clamp - canale ionice i l.p.)

11

3/21/2013

12