Cromatografia radial

Cromatografia este o metod de analiz care se bazeaz pe separarea n zone spaiale distinct a componenilor unui amestec la trecerea acestuia printr-un mediu n care componenii se deplaseaz cu viteze diferite. Termenul de cromatografie provine de la cuvntul grecesc chroma care nseamn culoare. n cromatografie se disting dou faze: faza staionar (faza fix) i faza mobil (eluentul). Faza staionar este reprezentat de materialul prin care circul proba i care asigur separarea componenilor din amestec iar faza mobil este fluidul (lichid sau gazos) care transport proba la suprafaa fazei staionare.

Separarea diferitelor substane dintr-un amestec constituie una dintre cele mai importante probleme ale chimiei analitice. Metoda cromatografic se bazeaz pe repetarea echilibrului de repartiie a componentelor unui amestec ntre o faz mobil i una staionar. Datorit diferenelor n repartiie are loc deplasarea, cu vitez diferit, a componentelor purtate de faza mobil de-a lungul fazei staionare. n funcie de natura fazelor se disting urmtoarele tipuri de cromatografie: Faza mobil Faza staionar Denumirea tipului de cromatografie Lichid Lichid Gaz Gaz Lichid Solid Solid Lichid Lichid-lichid (LL) Lichid-solid (LS) Gaz-solid (GS) Gaz-lichid (GL) n general, metodele de separare cromatografice se mpart n dou categorii: n prima intr cele care se bazeaz pe interaciunea diferit a componenilor cu faza staionar (repartiie, adsorbie, schimb ionic i afinitate), iar n a doua cele care se bazeaz pe mrimea diferit a componenilor (excluziunea steric). Schema de
Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

principiu a unui cromatograf (LL sau LS) este reprezentat mai jos. El se compune din: surs de eluent, dispozitiv de introducere al probei, coloan i un detector la care se adaug urmtoarele anexe: sursa de eluent, dispozitiv de msurare i reglare a debitului, dispozitiv de introducere a probei, instrument de nregistrare a semnalului furnizat de detector. Principiul cromatografiei este urmtorul: eluentul trece prin dispozitivul de introducere a probei, preia proba de analizat i o introduce n coloana cromatografic. Coloana cromatografic este sediul procesului de separare. Din cauza interaciunii moleculelor cu faza staionar, componentele din amestecul de analizat rmn n urma eluentului, n funcie de diferenele care exist ntre constantele echilibrului de repartiie ntre cele dou faze.

Clasificarea metodelor cromatografice Dup mecanismul de separare, metodele cromatografice pot fi mprite astfel: cromatografie de adsorbie, cromatografie de partiie, cromatografie de schimb ionic, cromatografie de excludere molecular i cromatografie de afinitate. Dac se ine seama de starea de agregare a celor dou faze, metodele cromatografiece sunt clasificate n: metode cromatografice de tip solid-lichid, lichid-lichid, lichid-gaz. Cromatografia de adsorbie se bazeaz pe adsorbia difereniat a componenilor unui amestec pe un suport adsorbant i deplasarea acestora, sub aciunea fazei mobile, cu viteze invers proporionale cu tria forelor de adsorbie. ntre suportul adsorbant i substanele care se deplaseaz peste faza staionar se stabilesc interacii intermoleculare de tipul: dipol-dipol, van der Waals, legturi de hydrogen care conduc la o adsorbie fizic, reversibil. n cazul n care s-ar forma legturi chimice, procesul s-ar numi chemoasorbie; deoarece chemoasorbia este un process ireversibil nu prezint interes pentru cromatografie.
Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

CROMATOGRAFIA PE HRTIE Cromatografia pe hrtie utilizeaz ca support pentru separarea componenilor unui amestec o hrtie de filtru special, fabricat din puf de bumbac care conine 2000- 3600 de resturi de -glucoz, cu un numr mare de legturi de hidrogen ntre catenele poliglucidice. Mecanismul separrii componenilor se bazeaz pe coeficienii de repartiie diferii ai acestora ntre dou faze nemiscibile sau parial miscibile: faza staionar reprezentat de lichidul polar care mbib hrtia de filtru i faza mobil reprezentat de solventul organic care se deplaseaz dea lungul porilor hrtiei de filtru. Componenii cu solubilitate mai mare n faza staionar se vor deplasa cu vitez sczut, n timp ce componenii cu solubilitate mai mare n solventul organic vor prezenta o vitez de migrare mai mare. n funcie de direcia de deplasare a solventului i componenilor pe hrtia de filtru se disting urmtoarele tipuri de cromatografie pe hrtie: 1.Cromatografia ascendent- deplasarea se face de jos n sus; 2.Cromatografia descendent- deplasarea se efectueaz de sus n jos; 3.Cromatografia circular - deplasarea se efectueaz din centrul hrtiei spre exterior (radial).

Tipuri de cromatografie pe hrtie

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

Cromatografia ascendenta

Cromatografia descendenta

Cromatografia circulara

Cromatografia radial este o tehnic utilizat pentru a separa amestecul de compui. Aceasta tehnica este compusa dintr-o faz staionar care este n mod normal un gel de siliciu, oxid de aluminiu sau celuloz imobilizat ntr-o plac circular. O faz lichid, care este solventul care se mic in compusul de faza staionar. Cromatografia radial folosete fora centrifug pentru a afia solventul i compusul de la centru spre captul plcii de separare in functie de compoziia amestecului de compui.

Cum se construieste un disc propriu pentru cromatografia radiala : 1. Scoatei faza staionar veche de pe placa radial folosita, colectati faza staionara veche ntr-o sticl de deeuri etichetata (nu inhalati praful).

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

2. Splai i curai placa radiala folosind sapun si lasati sa se usuce n cuptor.

3. Lasati sa se usuce la temperatura camerei.

4. Cantariti materialele pentru a face amestecul pentru o noua forma de faz staionar, folosind tabelul urmtor:

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

5. Se amestec materialele ntr-un pahar i se agit amestecul. NOT: Urmtorii pai trebuie s fie finalizati n termen de 5 minute pentru ca amestecul va ncepe s se stabileasc n termen de 5-10 min.

6. Se rotete placa ncet prin tija central i se toarn amestecul ntr-un flux continuu n care se suprapun cercuri apropiate de discuk metalic central. Pstrai vasul n apropierea rotorului pentru a minimiza formarea de picturi separate ale amestecului. Agitaia uoar va ncuraja amestecurile groase s curg. Atingei gura paharului pe discul de metal pentru a elimina ultima pictur agat.

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

7. Prindeti centrul barei de bolta i ridicai rotorul aproximativ 1 cm,apoi lasati discul sa cada, lovind o suprafata. Nu oprii n timpul caderii. Se repet de aproximativ 5 ori. Caderea lichefiaz amestecul ajuta la eliberarea bulelor de aer, iar gravitatea permite rspndirea amestecului i netezirea acestuia.

8. Acoperii rotorul cu un castron sau o cutie de carton pentru o or i apoi se pune rotorul n cuptor peste noapte.

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5

9. Eliminati excesul de gel de siliciu de pe placa radial pentru cromatografie cu un cuit drept (1, 2 sau 4 mm) n funcie de cantitatea de materiale utilizate. Placa este gata de utilizare.

Cromatografia radiala, Turbatu Flavius, BIM, anul I , grupa 5