Microbiologie

Baze teoretice

Cursul 1 Ecologie i protecia mediului Anul II 2010-2011

Ce este Microbiologia ?
Microbiologia tiina al crei obiect de studiu l reprezint organismele microscopice = microorganismele (den. veche fiind microbi) Existena microorganismelor a fost descoperit n anul 1675 de ctre Antonie van Leeuwenhoek, care a folosit un microscop extrem de simplu, asemnator unei lupe, pentru observarea unor alge unicelulare, levuri i bacterii animalicule (= animale mici)
2

Principala schema de clasificare a organismelor vii

PROKARYOTA
- EUBACTERIA - ARCHAEBACTERIA

EUKARYOTA
- FUNGI - PLANTAE - ANIMALIA
3

Care sunt principalele grupuri de microorganisme ?

PROKARYOTA
- EUBACTERIA - ARCHAEBACTERIA

EUKARYOTA
- FUNGI
- Mucegaiuri - Levuri (Drojdii) - Alge unicelulare - Protozoare unicelulare - Micete (Ciuperci) ASCOMYCETES si BASIDIOMYCETES
4

Alte sisteme biologice relevante pentru microbiologie

Virusurile - entiti biologice acelulare, alctuite din componentele eseniale ale organismelor vii - acizi nucleici i proteine, dar lipsite de atributele specifice organizrii celulare - structuri biomoleculare simple, alctuite dintr-un singur nucleic acid (ADN ori ARN) i proteine; - parazitism intracelular obligat i absolut Viroizii numai ARN nud; parazii obligai; Prionii proteine infecioase, lipsite de acid nucleic o paradigm biologic. Exemplu: proteina ce cauzeaz encefalopatia spongiform bovin ("Mad Cow Disease"). 5

Principalele subdiviziuni ale Microbiologiei - Virologie studiaz virusurile, virionii & prionii - Bacteriologie studiaz eu- & archaebacteriile - Micologie studiaz fungii, respectiv, mucegaiurile, ciupercile, levurile (drojdiile), microprotozoarele i microalgele

Alte discipline derivate din microbiologie

1 - Discipline care studiaz biologia i sistematica microorgnismelor Exemple: taxonomia bacterian, citologia bacterian, fiziologia bacterian, biochimia bacterian, genetica bacterian 2 Alte discipline care studiaz microorganismele utile intereselor umane Exemple: microbiologie medical, imunologie, microbiologie agricol, microbiologie industrial, 7 microbiologie sanitar, i microbiologia ecosistemic !

Caracteristici generale definitorii ale Microorganismelor (1)

Microorganismele: alctuiesc un grup vast i eterogen ca morfologie, fiziologie i activitate biologic au drept caractere comune: - dimensiunile microscopice (< 100 m) - organizarea preponderent unicelular - structura intern relativ simpl, cu un nucleu nedifereniat O bacterie tipic are dimensiuni de 1-5 m Virusurile au molecule mici, cu dimensiuni ntre 20-200 nm) 8

Caracteristici generale definitorii ale Microorganismelor (2)

Diversitatea speciilor de microorganisme este mult mai mare dect cea a organismelor mult mai dezvoltate d.p.d.v. evolutiv, genetic sau biochimic Simplitatea structural a microorganismelor nu diminueaz capacitatea lor de adaptare la variaiile perturbatoare ale factorilor de mediu Avnd dimensiuni foarte reduse, raportul dintre volum i suprafa este mult subunitar Suprafaa mrit asigur contactul direct mult mai eficient pentru transferul de substane nutritive din i 9 spre mediul extern al microorganismelor

Metode primare utilizate pentru studierea microorganismelor

1. Examinarea microscopic direct metod fundam. 2. Cultivarea sub form de culturi pure 3. Teste biochimice - incluznd analiza enzimelor, caracterizarea genetic 4. Inocularea animalelor de laborator - pentru studierea specificitii de gazd i a etiologiei anumitor maladii 5. Metode imunologice bazate pe interaciunile de tip antigen-anticorp specifice modului de reacie a sistemului imun al mamiferelor fa de contaminarea cu microorganisme. 6. Metode de caracterizare genetic (tehnici de biologie molecular, incluznd hibridizarea, amplificarea de tip PCR i secvenializarea ADN). 10

Metode de microscopie
1. Microscopia optic bazat pe o surs de lumin, un
condensator fotonic i dou tipuri de lentile, care formeaz obiectivele i ocularul prin care se studiaz att preparate microscopice din celule microbiene vii, cat i preparate fixate prin coloraii adecvate 2. Microscopia n contrast de faz prin care se studiaz componentele unor celule microbiene vii, fr coloraii specifice 3. Microscopia electronic utilizeaz un flux de electroni de nalt energie (60,000 Voli), cu lungimi de und de 0.005 nm, i o rezoluie foarte nalt de 0.2 nm. a) Microscopia electronic de transmisie Transmission Electron Microscopy (TEM) b) Microscopia electronic prin scanare Scanning Electron Microscopy 4. Microscopia de for atomic cu scanarea probei pentru studierea caracteristicilor suprafeelor celulare, la o foarte nalt rezoluie 11

Cultivarea in vitro a microorganismelor

Se realizeaz prin inocularea culturilor pure ale microorganismelor pe medii nutritive specifice, utiliznd tehnici aseptice Mediile de cretere pt. microorganisme conin o surs de carbon organic redus (excepie fac autotrofele), elemente minerale, vitamine i ap. Toate bacteriile necesit elementele: C,H,O,P,K,N,S,Ca,Fe,Mg (macronutrimente) i Zn, Cu, Mn, Mo, Ni, B, Co & Na (micronutrimente). Mediile pot fi definite minimale sau nedefinite, respectiv, complete i dup preparare necesit sterilizare. Sterilizarea poate fi efectuat prin abur sub presiune, iradiere gamma, ultra-filtrare (materiale termolabile), substane chimice (cu etilenoxid) sau sterilizare uscat 12 (150C,1-4 h) pentru ustensile din metal i sticl

Tehnici aseptice de lucru

Se utilizeaz pentru: 1 - transferarea mediilor nutritive n vasele de cultivare sau n containere, toate sterilizate n prealabil 2 inocularea vaselor de cultivare cu celule bacteriene sau fungice. Trei condiii eseniale trebuie respectate: 1) suprafaa i spaiul de lucru trebuie curate cu agenie de aseptizare, nainte i dup inoculare; 2) instrumentele de transfer i cele pentru deschiderea containerelor trebuie sterilizate n mod direct, nainte i dup transferul microorganismelor; 3) transferul microorganismelor trebuie s se efectueze rapid i eficient; metodele moderne de transfer utilizeaz hote cu aer steril n flux laminar 13

Izolarea culturilor pure

Utilizeaz: - metoda necantitativ - streak-plate method - metoda cantitativ de dispersarea probei de inoculum n placa Petri, dup efectuarea seriilor de diluii ale probei de analiz - spreadplate method, - metoda turnrii n placa Petri prin diluare n agar fluid - pour plate method - micromanipularea.
14

Meninerea i conservarea culturilor pure de microorganisme Necesit minimizarea riscului de contaminare, distrugere sau inducerea unor mutatii. Metodele utilizate pot include: efectuarea de subculturi periodice refrigerarea subculturilor periodice conservarea acestora sub o pelicul de ulei mineral conservarea n azot lichid liofilizarea timp nedefinit
15