CULTIVAREA PE CULTURI DE CELULE Metoda cultivrii pe CC a fost pus la punct nc din 1 1!

de ctre "tein#ard$ Israeli %i La&'ert pentru virusul vaccinal %i de ctre Livaditi pentru v ra'ic %i polio&ielitic( Pro)resele n do&eniu au fost consecin*a unor descoperiri n do&eniu+ tu'urile nv,rtite$ te#nic culturilor n &onostrat$ o'*inerea de celule din or)ane %i *esuturi foarte variate$ nor&ale sau canceroase( -'*inerea de CC continui %i ac*iunea citopato)en a unor virusuri au fcut ca te#nica s devin cea &ai curent &etod de dia)nostic( Pregtirea sticlriei pentru CC De%i n ulti&ii ani s.au introdus n la'orator flacoane pentru CC de unic utili/are$ nu toate recipientele folosite n virusolo)ie pot fi de acest tip( De aceea este i&portant de discutat su'iectul le)at de pre)tirea acestor &ateriale care tre'uie fa'ricate din sticl neutr$ care presupune tratri speciale( "u'esti&area i&portan*ei su'iectului poate co&pro&ite ntre) dia)nosticul( Cur*area sticlriei se face prin &en*inerea acesteia 01.!1 &in ntr.o solu*ie de 2131 ful)i de spun la 21C sau cu solu*ii de deter)en*i$ splat ri)uros %i cltit de dou ori cu AD( Dup pre)tire o'*nut a &aterialelor sticlria se sterili/ea/ la pupinel 4unii autori contraindic aceast sterili/are unde &ecanis&ul de sterili/are$ prin o5idare$ presupune eli'erarea unor produ%i to5ici$ cu efect posi'il virulicid( Ur&e &ini&e de deter)ent sau spun sunt deose'it de nocive pentru CC( "erin)ile de tip Luer se sterili/ea/ la pupinel( Dopurile de cauciuc vor fi din cauciuc natural al'$ niciodat colorat$ deoarece acesta un efect to5ic asupra CC( 6olosirea dopurilor noi+ &ai nt,i se fier' ti&p de 1.0 ore$ n sol de 7a-8 n901 'dup care se spl ndelun) cu ap de ro'inet( "e fier' din nou$ ti&p de 11 &in

ntr.o solu*ie de 8Cl :3 dup care se cltesc din nou cu ap de ro'inet %i n final cu AD( Dopurile &ai vec#i 4ini*ial %i ele tratate n aceea%i &anier; vor fi folosite doar dup o preala'il splare care presupune fier'erea n AD$ cltire a'undent cu AD6 <cel pu*in de 2 ori;( Dopurile astfel pre)tite se sterili/ea/ la autoclav$ aran=ate n cutii Petri iar c,nd sunt preluate pentru a fi utili/ate se lucrea/ su' protec*ie de UV sau$ &ai 'ine$ la #ota de si)uran* &icro'iolo)ic( Soluii utilizate n virusologie "ol Rin)er Intr.un 'alon cotat sau cilindru )radat de 1111 &l$ se introduc 011 &l A>D$ dup care se di/olv$ n ordine+ 7aCl 4 );$ ?Cl 41(:0 ); CaCl0 41(02);( "e co&pletea/ cu A>D p,n la 1111 &l dup care solu*ia se reparti/ea/ n 'aloane Erlen&e@er( "e inc#id cu dopuri de vat cu tifon %i se autoclavea/ :2 &in la 1( at&( Dup autoclavare$ dopurile de vat se nlocuiesc 4cu )ri=; cu dopuri de cauciuc sterile( "olu*ia se pstrea/ la fri)ider$ la :C( "olu*ia T@rode Antr.un 'alon cotat sau cilindru de 1111 &l se introduc !11 &l A>D %i se solv$ n ordine$ ur&toarele su'stan*e pure$ pro analisi+ ?Cl 401);$ CaCl0 an#idru 401 );$ M)Cl0B 80-$ clorur de &a)ne/iu cristali/at 411 ); %i fosfat &onosodic 47a80P080-; 42 );( "e co&pletea/ cu A>D p,n la 1111&l( Aceasta ca repre/enta solu*ia &a&( 7U se sterili/ea/ dar se pstrea/ o'li)ator la fri)ider$ la C :C( Pentru a prepara 1111 &l solu*ie T@rode$ se folosesc 11 &l din sol &a&$ se co&pletea/ cu 1 &l A>D %i se adau) 7aCl 4<); %i )luco/ 41); ( Dup ce aceste su'stan*e se di/olv co&plet$ se adau) 'icar'onat de sodiu 47a8C-!; 41); iar dup di/olvarea lui$ se adau) 01 &l din solu*ia indicatoare de ro%u fenol 1(13( "olu*ia final astfel preparat se sterili/ea/ prin filtru "iet/ su' presiune po/itiv$

niciodat cu' presiune ne)ativ care ar duce la alcalini/are e5cesiv$ prin pierderea 'io5idului de car'on( Dup filtrare$ recipientele sterile n care solu*ia a fost reparti/at se nc#id cu dopuri de cauciuc steril al' %i se pstrea/ la C :C$ fiind vala'ile 09! luni( "olu*ia indicatoare de ro%u fenol "e o'*ine triturnd ntr.un &o=ar 1(1 ) ro%u fenol pul'ere cu 0(<0 &l 7a-8 n911( Dup ce colorantul s.a di/olvat co&plet$ se adau) c*iva &l A>D$ dup care ntr. un 'alon cotat se co&pletea/ cu A>D pn la 111 &l( Dac dispune& de ro%u fenol #idrosolu'il$ solvarea se face direct n AD( "olu*ia se introduce ntr.un 'alon Erlen&e@er de 111 &l$ care se nc#ide cu un dop de vat %i tifon nvelit n celofan sau coal i&per&ea'il de alu&iniu %i se autocleavea/ ti&p de !1 &in la 1 at&s( Dup autoclavare$ dopurile de vat se nlocuiesc cu dopuri sterile de cauciuc natural( "olu*ia se pstrea/ la C :C( "olu*ia 8anDs "e prepar o sulu*ie concentrat de 115 din Clorur de sodiu 47aCl;EE( <) Clorur de potasiu 4?Cl;EE : "ulfat de M) 4M)"-:F80-;E 0 6osfat &onopotasic 4?80P-:;E 1(B ) 41(2 an#idru; 6osfat disodic 47a08P-:080-;E 1(B ) Ro%u fenol #idrosolu'il EEEE(( 1(0 ) Gluco/ EEEEEEEEEE(( 11) ADEEEEEEEEEEEEE <11 &l "eparat se prepar Clorur de calciu 4CaCl;EE 1(: ) ADEEEEEEEEEE( 011 &l

Dup solvire total se a&estec cele 0 solu*ii( Dinaceast solu*ie $ pentru prepararea solu*iei de lucru se ia o parte plus A>D( "e sterili/ea/ prin autoclavare 01 &in la 1(< at&( "olu*ia Earle+ se prepar ini*ial 0 solu*ii A$ concentrat de 115$ %i >$ concentrat de 015( "olu*ia A pr*i