Tehnici de laborator

Tehnici de parazitologie n examinarea fecalelor i a urinei

Sasu Maria-Iulia
Biologie, An II, Sgr. 4

Parazitologia, ramur a biologiei, studiaz paraziii at t mor!o!uncional, c t i pri"ind relaiile dintre ei i gazdele lor, #n scopul cunoaterii acestor interacini, a elaborrii metodelor i procedeelor de pre"enire i tratare a parazitozelor. $lementele parazitare pot !i #nt lnite #n% materiile !ecale, sali", &eta&, urin, s nge, tegument, pr, etc. $'amenul coproparazitologic identi!ic parazi(i cu localizare intestinal. )intre parazi(ii #nt lni(i la om, se numr% PROTOZOARE% *iardia lambria, Trichomonas intestinalis, $ntamoeba spp., Blastoc+stis hominis HELM !" % o ,ematode% Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, $nterobius "ermicularis, Strong+loides stercoralis o Trematode% -asciola hepatica o .estode% Taenia spp., /+menolepis nana, )iph+llobotrium latum. Simptomele date de in!estrile parazitare se mani!est prin diaree, malabsorb(ie, malnutri(ie, ostruc(ie intestinal, anemie, cauzate at t de secre(ia de to'ine, c t 0i de in"adarea sau aderarea la mucoasa intestin prin di!erite mecanisme. /elmin(ii pot obtura intestinul, pot determina s ngerri sau inter!aza cu absorb(ia intestinal a substan(elor nutriti"e. 1ar"ele 0i oule lor pot disemina #n zone e'traintestinale 0i pot induce in!lama(ie sau distruc(ii tisulare. $'ist parazi(i care triesc #n tractul intestinal al omului sau animalelor 0i nu pro"oac mani!estri clinice. 2entru ca rezultatul e'amenului s !ie precis 3cunosc ndu-se !aptul c unele elemente parazitare sunt eliminate intermitent4, se recomand 5 e'aminri succesi"e, la inter"al de 6 zile. )up tratarea parazitozelor, e'amenul se "a e!ectua dup un inter"al de timp "alabil #n !unc(ie de diagnostic, #n general pentru in!ec(ie cu protozoare 7 dup 5-4 sptm ni, iar dup in!ec(ii cu helmin(i dup 1-8 sptm ni. #iardia lam$ia, cunoscut ca 0i *. intestinalis sau *. duodenalis, e parazitul cel mai !rec"ent #nt lnit #n e'amenul coproparazitologic la om. 2rezint forme trofozoitice, "egetati"e 3tro!ozoit4, !orme acti"e, #n intestin i forme chistice, de rezisten, #n mediu. Se #nmul(e0te prin di"iziune binar. Transmiterea se !ace prin ingerarea chisturilor eliminate #n !ecale, ap i alimente contaminate. $ste un organism unicelular, !lagelat 3#i asigur mobilitatea4, #n intestin se ata0eaz de micro"ilii enterocitelor printr-un disc adezi". Se multiplic e'trem de rapid 0i consum din substan(ele nutriti"e necesare gazdei. 2oate acoperi supra!e(e #ntinse din intestin, ce pot constitui ade"rate bariere mecanice care reduc 0i mai mult supra!a(a de absorb(ie a nutrien(ilor 0i a "itaminelor. Alte specii% *iardia lamblia 3om, c ine4, *. canis 3om, c ine4, *. cati 3om, pisic4. )iagnosticul se stabile0te cel mai !rec"ent prin
8

e'amenul microscopic al materiilor !ecale 3depisteaz chisturi 0i uneori tro!ozoi(i4 0i prin testul imunoenzimatic 3identi!ic antigenul *iardia #n scaun4. Entamoe$a hi%tol&tica, amib patogen, se #nmul(e0te #n intestinul gros dar poate a"ea 0i localizri e'traintestinale. Boala e !rec"ent #n regiunile tropicale 0i subtropicale umede 3India, 9ietnam, Malaezia, etc.4: la noi se #nt lnesc cazuri sporadice. 2ro"oac simptome diareice, colic abdominal, alte tulburri digesti"e. ;n dizenteria amibian scaunele nu au miros sau au miros mucilaginos. Are !orme de tro!ozoit 0i de chist. Se transmite pe cale digesti". Se localizeaz #n intestin 0i datorit e!ectului citolitic 0i proteolitic al (esuturilor, determin leziuni gra"e. .el in!ectat prezint simptome de dizenterie. Amiba se poate rsp ndi pe cale hematogen la plmn, ficat, creier, unde pro"oac abcese amoebiene 3boli gra"e4. 2arazitul se identi!ic prin e'amen mor!ologic, coprocultur pe medii di!azice, metode imunologice de detectare a anticorpilor speci!ici pentru !ormele e'traintestinale de boal. $'amenul mor!ologic const #n e"iden(ierea parazitului sub !orma de tro!ozoit 3#n stadiu acut, diareic de boal4 sau chist: coproparazitologicul const #n preparat direct, pe probe de concentrare sau !rotiuri colorate, sau pe !ragmente bioptice intestinale recoltate prin colonoscopie. Entamoe$a coli este o amib care intr #n alctuirea !lorei intestinale normale, a" nd rol de men(inere a echilibrului #ntre popula(ii microbiene locale. ,u e in"azi" 0i nici hemato!ag. Are !orme tro!ozoice si chistice. )e"ine patogen #n condi(iile alterrii imunit(ii locale 3dup tratament prelungit cu antibiotic4, pro"oc nd colit cu tranzit intestinal accelerat, scaune mucoase, !r s nge sau puroi, deseori mani!estri cutanate de hipersensibilitate. .oproparazitologicul const #n identi!icarea tro!ozoi(ilor sau a mai mult de < chisturi parazitare pe c mpul microscopic. 'la%toc&%ti% homini% e considerat un protozoar cu ta'onomie contro"ersat, asemntor cu !ungi 0i cu #nmul(ire scizipar, prin spori 0i prin #nmugurire. 2rezint 4 !orme mor!ologice ma&ore% = !orma "acuolar 7 comensal, cel mai !rec"ent identi!icat, cu aspect de >rulment? = !orma amoeboidal 7 identic cu cea "acuolar, cu e'cep(ia !ormei neregulate datorat pseudopodelor: nucleii sunt pozi(iona(i central iar "acuolele sunt absente = !orma granular 7 considerat !orma oportunist: prezint 1-@ nuclei peri!erici iar citoplasma este ocupat de numeroase granule de dimensiuni "ariabile: = !orma chistic 7 contro"ersat mult timp: e'isten(a sa este #n prezent bine documentat, #ns pentru a o identi!ica sunt necesare tehnici speciale de laborator. $ un parazit cosmopolit, #nt lnit de obicei #n regiuni cu de!icien( igienic. .alea de transmitere e digesti" 0i se'ual-"eneric. 2ro"oaz tulburri de tranzit intestinal 0i alergodermii. .oprologicul identi!ic parazitul: con!orm

speciali0tilor decelarea a < elemente parazitare pe c mpul optic, !ace di!eren(a #ntre comensalism 0i patogenitate. A%cari% lum$ricoide% e un nematod 3"ierme cilindric4 speci!ic omului. 2rezint dimor!ism se'ual% !emela are 8<-51cm, iar masculul 1<-8<cm. -emela depune circa 8AA AAA ou zilnic #n intestin, oule a&unse pe sol odat cu !ecalele, de"in embrionate dup <-6 zile la temperatura de 8A-84 B. 0i umiditate 1AC. Se transmite pe cale digesti". Ddat ingerate, lar"a eclozeaz, migreaz #n !icat unde st 4-< zile, apoi migreaz superior, a&unge #n plm n, lar"a su!er 8 np rliri, rezult nd un element ciliat, care "a a&unge !ie #n !aringe, unde "a !i e'pectorat, !ie #n intestin. 1ar"a are ne"oie de @A-6< de zile pentru a a&unge #n stadiu de adult. ;n ciclul su parazitar pro"oac di!erite boli% pneumonie intersti(ial cu tuse, e'pectora(ie seroas, etc., alergii polimor!e, enterit ascaridozic cu di"erse simptome gra"e. 9iermele adult se identi!ic prin e'amen macroscopic sau microscopic pentru e"iden(ierea oulor. Trichuri% trichiura 3tricochoce!al4 e un nematod hemato!ag, speci!ic omului. Adultul trie0te #n cec 0i colon. Are apro'imati" 8-< cm. .orpul e dispropor(ionat. .alea de in!ectare e cea digesti". )etermin reac(ii in!lamatorii intestinale di!uze, uneori cu aspect granulamatos, similar celui descris #n boala .rohn, la copii determin o complica(ie se"er prin prolapsul rectal. 2rin coproparazitologic se identi!ic oule 0i, #n cazuri se"ere, prin "izualizarea "iermilor adul(i prin rectocolonoscopie. (trong&loide% %tercorali% e unul din cei mai e"olua(i parazi(i, speci!ic omului, are ciclu de "ia( e'trem de comple'. Simptomele sunt alergodermii, tulburri intestinale, mani!estri respiratorii, tulburri neuropsihice, mani!estri sistemice nespeci!ice 3stare sub!ebril4. /emoleucograma indic constant eozino!ile 1A-1<C. 1ar"ele se depisteaz #n !ecale, lichid duodenal, sput, la"a& bronhoal"eolar, #n cazuri se"ere 7 biopsii duodeno-&e&unale. )a%ciola hepatica e un trematod herma!rodit care se localizeaz la ni"elul cilor biliare, unde pro"oac e!ecte mecanice de irita(ie, hemoragii, ac(iuni to'ice, hipersensibilizare. ;n timpul etapei de dez"oltare a parazitului apar di"erse simptome. Se !ac e'amene coproparazitologice pentru identi!icarea oulor 0i e'amene imunoenzimatice. Taenia %pp !ace parte din clasa cestodelor, se caracterizeaz printr-un corp aplatizat 0i segmentat 3#n &ur de EAA-8AAA segmente denumite proglote4, de dimensiuni mari 0i un cap 3scole'4 care prezint organisme de !i'are la peretele intestinal 3"entuze 0iFsau carlige4. 2entru a-0i asigura dez"oltarea biologic ace0ti parazi(i au ne"oie de gazde intermediare. Taenia saginata este un "ierme plat cu dimensiuni mari 3E-18 m4, a" nd un numr de 1AAA-8AAA segmente, #n timp ce Taenia solium are lungimi cuprinse intre 8 si E m 0i prezint EAA-1AAA segmente. Dmul se in!esteaz prin consumul de carne de "itFporc insu!icient preparat termic, care con(ine !orme lar"are. ;n tubul digesti" se !i'eaz cu "entuzele de mucoasa intestinal. 1a adult proglotele terminale se elimin 0i
4

con(in ou. Simptomele determinate sunt digesti"e, similare cu cele de colon iritabil. Se identi!ic prin e'amen macroscopic 7 proglote, sau microscopic 7 ou. H&menolepi% nana e un "ierme plat, segmentat 3cca 8AA segmente4, de 84 cm, care trie0te #n intestin. Dmul purttor constituie sursa de in!ec(ie, "iermele ne-a" nd alt gazd #n cursul dez"oltrii. .alea de in!ectare e digesti". ;n in!ec(ii masi"e apar simptome de abdomen cronic dureros. Se diagnosticheaz prin coproparazitologic. *iph&llo$otrium latum 3botrioce!al4 e un cestod !ormat din 8AAA-4AAA proglote, lung de 1A-1@ m. Se !i'eaz #n intestin cu 8 "entuze. Scole'ul are !orm o"oidal-migdalat caracteristic. Are 8 gazde #n cursul dez"oltrii. 2arazitul nu distruge enterocitul 0i nu pro"oac malabsorb(ie, #n schimb consum selecti" "itamina B18 0i acid !olic. 2oate pro"oca simptome digesti"e asemntoare teniazei. ;n e'aminarea !ecalelor se identi!ic oule de botrioce!al.

Examenul coproparazitologic
$'amenul coproparazitologic o!er posibilitatea precizrii diagnosticului parazitozelor digesti"e sau ale glandelor ane'e, pun nd #n e"iden, !ie parazii ca atare 3protozoare, helmini, artropode4, !ie elemente parazitare 3!ragmente de helmini, ou, embro!ori, lar"e, chiti, oochiti, etc.4. $ste important recoltarea i pstrarea probei pentru a nu distruge elementele parazitare. Gecoltarea se !ace din mai multe emisiuni de !ecale 3#n 84 de ore4, amestecate. $ posibil ca animalul parazitat s nu elimine ou, lar"e #n !iecare !i ast!el e necesar ca e'amenul s se !ac #n mai multe zile la r nd. Gecoltarea se !ace #n urma eliminrii normale sau direct din rect. $'ista o tehnic special de recoltare indicat pentru depistarea oulor de o'iuri. Se cunoa0te !aptul c !emela depune ou #n timpul nop(ii #n &urul ori!iciului anal. Tehnica de recoltare #raham const #n recoltarea amprentei anale cu a&utorul unui celo!an adezi" pe una din !e(e: recoltarea se !ace diminea(a, #nainte de de!ecare. .elo!anul se lipe0te pe lam, se introduce o pictur de solu(ie 1ugol #ntre celo!an 0i lam 0i se e'amineaz la microscop. .onser"area se !ace la rece 31-4 B.4, precum i prin adaus de soluie de !ormol salin 3!ormol <-6C H clorur de sodiu EC4. $ important s cunoatem caracteristicele unui scaun normal, pentru a recunoate semnele unor !actori patologici. $'amenele parazitologice se pot !ace prin 8 metode% o +alitati,e 7 identi!ic prezena unui parazit o +antitati,e 7 apreciaz numrul elementelor parazitare. )e asemenea metodele de e'aminare pot !i%

<

o *irecte %au %imple 7 se rezum la depistarea elementelor parazite

ce se gsesc #nt mpltor #ntr-un mic !ragment al probei luate o *e concentrare %au de m$og-ire 7 urmrete concentrarea pe c mpul de e'aminare a c t mai multe elemente parazite 3chiar toate4 ce se gsesc #n proba respecti". $'amenul coproparazitologic presupune e'aminare macroscopic i microscopic. Examenul macroscopic nu trebuie negli&at niciodat. Se pot descoperi "iermi intregi sau !ragmente, #n special helmini de dimensiuni mari. Metoda de lucru e !oarte simpl, dar posibilitile sunt limitate. $'aminarea se !ace direct #n recipientul #n care s-a prele"at proba, cu ochiul liber sau cu lupa, a&ut ndu-ne cu o baghet de sticl sau o ans. Se noteaz% cantitatea consistena culoarea mirosul prezena corpilor strini resturi alimentare nedigerate 3esut con&uncti", grsimi, "egetale4 produse patologice 3puroi, mucus, sange4 elemente suspecte 3de a !i parazitare4. .antitatea de !ecale este #n !uncie de specie% psri 7 cca 8A-5A g: porc, c ine, oaie, capr 7 cca <A g: cabaline, bo"ine 7 cca 5AA-4AA g. .onsistena% - 7 scaun !ormat: S- 7 semi!ormat: M 7 moale: ) 7diareic 3necesar pentru corectarea datelor obinute prin e'amenul preparatului Stoll4. Gezultate% dintre paraziii "izibili macroscopic #n !ecale, putem obser"a% - specii mari 3de mai muli cm lungime4% .estode% tenii 3!ragment, proglote 1-8cm4, botrioce!al 3!ragment, proglote mai mici i mai late dec t lungi4: Ascarizi 31A-8A cm4 - specii mici de 1-5 mm lungime, dar "izibile cu ochiul liber% o'iuri 3$nterobius "ermicularis% !emela4, tricoce!al 3preponderenta tropicala4, Strong+olides stercoralis 3lar"e rabdi!orme4: Trichinella spiralis 3in primele zile de la in!estare4: -asciola hepatica 3ou4, etc. - Se pot obser"a 0i specii !r rol patogen la specia pe care o e'aminm. Examenul microscopic poate descoperi chiar i cele mai slabe elemente de parazitism. Tehnicile !olosite !olosesc principii de !izic sau chimie pentru a pune #n e"identa elementele cutate. .uprinde mai multe tipuri de metode de e'aminare 3tehnici4, printre care% - metoda direct 3preparate nati"e4 - metode de concentrare
@

- metode de colorare - metode de determinare a intensit(ii parazitare etc. Examenul micro%copic direct pe lam- .preparate nati,e/ Se e'amineaz #ntre lam 0i lamel o cantitate mic de materii !ecale 31.< 7 8 mg4, prele"at din di!erite pr(i ale probei, amestecat #n ser !iziologic sau solu(ie 1ugol. 2e o lam se pune o picatur de ser sau solu(ie 1ugol. .u a&utorul unei baghete se prele" o cantitate din proba de e'aminat 0i se amestec pe lam cu pictura de ser sau solu(ie 1ugol. Se acoper cu o lamel. 2reparatul trebuie e'aminat c t mai repede pentru a se e"ita uscarea. Se utilizeaz lamele de 1EF1E mm dimensiuni, ast!el #nc t marginile lor s !ie cuprinse #n interiorul marginilor lamei. Suspensia trebuie s !ie uni!orm, iar lamela a0ezat orizontal, nu inclinat. 2reparatul se e'amineaz #n #ntregime, deplas nd lama de la st nga la dreapta 0i de sus #n &os. $'aminarea se !ace cu obiecti" 1A' sau 8A', iar identi!icarea !iecrui element parazitar decelat se !ace cu obiecti"ul 4A': se utilizeaz oculare 1A'. 1a e'aminarea microscopic se pot depista di!erite specii de paraziti. *iardia lamblia 2oate apare sub dou !orme% tro!ozoit 0i chist. -orma "egetati" se #nt lne0te e'cep(ional, doar #n scaunele apoase, #n stadiul acut al bolii, mai ales la copii 3#n <-1AC din cazuri4. Tro!ozoitul este piri!orm de 1< Im lungimeF@-1A Im l(ime. Are corp cu simetrie bilateral cu 8 nuclei, 4 perechi de ble!aropla0ti 0i 4 perechi de !lageli, un disc adezi" 0i un a'ostil. .histul este o"alar are J-15 Im lungime F @Im l(ime. Are o membran e'tern !in, dubl, 4 nuclei 0i un mnunchi de !lageli. ,ucleii au o dispozi(ie "ariabil, !rec"ent sunt grupa(i la o e'tremitate a celulei. ;n a'ul chistului se obser" resturi !lagelare cu dispozi(ie sinuoas, #n !orm de S. ;n preparatul nati, efectuat n %olu0ie Lugol chisturile sunt e"idente !iind colorate #n brun. .u obiecti"ul de 4A ' se detecteaz detalii structurale 0i aspecte di!erite% a4 chisturi mari, o"al rotunde, colorate brun deschis: sunt chisturi tinere, recent !ormate, bine hidratate: dubla membran se obser" net, dar nucleii 0i mnunchii de !lageli sunt mai estompa(i: b4 chisturi de dimensiuni medii, o"ale, colorate brun inchis: dublul contur se distinge mai greu, dar interiorul chistului este net. c4 chisturi mici albastre sau palid cenu0ii: sunt rar ober"ate 38-5C4: nu au contur dublu 0i au interior omogen: sunt chisturi ne"iabile.

$ntamoeba histol+tica .histul matur este rotund, cu dimensiuni de 1A-8A Im 0i cu un numr constant de 4 nuclei: con(inutul chistului este relati" compact, !iind #nt lnite 1-4 baghete cu capete rotun&ite, denumite corpi sidero!ili sau cromatoizi. $ntamoeba coli .histul matur are dimensiuni "ariabile 31A-5A Im4, cu un perete gros, dublu-lamelar 0i un con(inut granular uni!orm ce #i con!er #n preparatele proaspete o colora(ie gri-cenu0ie: numrul nucleilor este constant de E, a0eza(i #n acela0i plan sau #n planuri di!erite. Blastoc+stis hominis -orma "acuolar 3considerat de unii drept chist4 este s!eric sau elipsoidal 0i are #n medie E-1A Im. 2oate prezenta o capsul proeminent: con(ine o "acuol mare central, clar, delimitat de o band sub(ire neregulat din citoplasm, la ni"elul creia se gsesc nucleii 0i granulele dispuse peri!eric. )e(ine #n general un nucleu, dar uneori poate a"ea 8-4 nuclei sau chiar mai mul(i. 1a !ormele binucleate, nucleii pot !i dispu0i la cei doi poli, iar la !ormele tetranucleate la peri!eria celulei. Ascaris lumbricoides Dul este o"al, de @<-EA ImF <A Im. 2rezint un #n"eli0 dublu% un #n"eli0 e'tern, gros, cu aspect mamelonat caracteristic 0i un #n"eli0 intern de natur chitinoas, neted, transparent, strati!icat. Dul neembrionat prezint #n interior celula-ou, #ncon&urat de masa "itelin, retractat, ls nd un spa(iu liber #ntre ea 0i #n"eli0urile e'terne. -orma 0i dimensiunile oului embrionat sunt asemntoare cu ale celui neembrionat, dar #n interiorul lui se dez"olt o lar" cilindric de 8<A Im, rsucit #n &urul su, #n !orma literei S, ocup nd #n #ntregime interiorul oului. Trichiuris trichiura 3Tricoce!alul4 Dul este o"al, brun, de <A F 88 Im. 2rezint un #n"eli0 e'tern gros 0i #n interior celula-ou #ncon&urat de masa "itelin. 1a cei doi poli e'ist dopuri albuminoase transparente, care con!er oului un aspect caracteristic de lm ie. Strong+loides stercoralis )eoarece oule eclozeaz imediat dup emisie 0i elibereaz lar"e #n lumenul intestinal, #n materiile !ecale se "or e"iden(ia doar lar"e. 1ar"ele rabditoide msoar 8<A-5AA Im, au un eso!ag >bicameral? 3o por(iune pro'imal cilindric de calibru redus 0i un segment distal globulos >#n bulb de ceap?4 0i o e'tremitate posterioar ascu(it.

-asciola hepatica Dule sunt neembrionate, cu dimensiuni de 14AF EA Im, culoare galben brun, prezent nd la e'terior o coa& sub(ire, de!ormabil, cu un opercul la un pol, iar #n interior celula ou #ncon&urat de masa "itelin. Taenia solium 0i Taenia saginata Dule sunt embrionate, rotund-o"alare, a" nd dimensiuni de 5A-<A Im. 2rezint o coroan peri!eric striat caracteristic, alctuit din trei membrane embrionare: con(in #n interior o substan( "itelin galben-maronie 0i un embrion he'acant, cu @ c rlige dispuse #n perechi. /+menolepis nana Dule sunt transparente, a" nd dimensiuni de 46F56 Im. 2rezint un embrion he'acant 3cu trei perechi de c rlige4 0i un #n"eli0 dublu alctuit dintr-o membran e'tern !ragil 0i o membran intern dens, cu dou proeminen(e care-i con!er aspect de lm ie 0i de la ni"elul crora pornesc 4-E !ilamente dispuse #ntre cele dou membrane ale oului. )iph+lobothrium latum Dule sunt neembrionate, au aspect o"al, culoare brun 0i dimensiuni de 6AF4< Im. 2rezint un #n"eli0 e'tern dedublat, cu un opercul la unul din poli 0i o mic proeminen( 3carena4 la polul opus: #n interior se gse0te celula-ou #ncon&urat de masa "itelin. Rezultate Kn rezultat poziti" indic prezen(a parazitului dar aceasta nu implic #ntotdeauna c parazitul este responsabil pentru simptomele pacientului. Kn singur e'amen negati" nu e'clude posibilitatea in!estrii parazitare. $'amenul pentru *iardia poate !i negati" #n stadiile precoce ale in!estrii, #n in!estri cronice 0i la pacien(ii care elimin ciclic parazitul. Gezultate !als negati"e pot s apar dac #n sptm na care precede testul, s-au administrat bariu, bismut, Metamucil, uleiuri minerale, Tetraciclin, medicamente antiamoebiene, antidiareice, antiacide. ;n toate aceste cazuri se recomanda determinarea de antigen *iardia #n !ecale.. Acest test nu este indicat pentru depistarea To'oplasmei gondii, To'ocarei canis, 2lasmodium spp sau Trichomonas deoarece aceste organisme nu apar #n materiile !ecale. Dule de $nterobius "ermicularis sunt rar #nt lnite #n materiile !ecale 3doar #n in!estrile masi"e4 datorit particularit(ilor ciclului e"oluti". Atunci c nd e'ist suspiciunea clinic se indic e!ectuarea amprentei anale. 2entru identi!icarea oochi0tilor sporozoarelor digesti"e 3.r+ptosporidium par"um 0i .+clospora ca+etanensis4 este necesar e!ectuarea de !roturi colorate cu colora(ii speciale 3Liehl-,eelsen modi!icat /endricMsen-2ohlentz4
J

Metode de concentrare1 de colorare i de determinare a inten%it-0ii parazitare Metoda 2illi% Tehnica: 5-<g !ecale se mo&areaz cu o solu(ie suprasaturat de ,a.l, amestecul se strecoar #ntr-un pahar Nillis ast!el #nc t s !ormeze la deschiderea paharului un menisc con"e' 0i se a0eaz lama. Se las #n repaus 8A-5A minute apoi se aplic lamela pe lam 0i se e'amineaz la microscop cu obiecti" 1A', 8A'. Indicaii: concentrarea sporochisturilor, oochisturilor, chisturilor de sporozoare, oncos!erelor, oulor de nematode. Metoda 2illi% modificatTehnica: ;n primul timp se e!ectueaz metoda Nillis. ;n timpul al doilea, se #ndeprteaz 8F5 din supernatant, iar peste sediment se adaug ap de robinet 0i se omogenizeaz. 1ichidul se trece #n tuburi de centri!ug 0i se centri!ugheaz la 1<AA rpm timp de 8-5 minute. Se #ndeprteaz supernatantul 0i din sediment se !ac preparate #ntre lam 0i lamel. Indicaii: Se depisteaz #n plus !a( de metoda Nillis !orma(iunile parazitare grele 7 ou de trematode, unele oncos!ere, ou de acantoce!ali. Metoda %edimentarii acti,e Tehnica: Se mo&areaz 5-<g !ecale cu ap de robinet apoi suspensia se strecoar #n tuburi de centri!ug. Se centri!ugheaz la 1<AA rpm timp de 8-5 minute. Se #ndeprteaz supernatantul 0i din sediment se !ac preparate #ntre lam 0i lamel. Se e'amineaz la microscop cu obiecti" 1A'. Indicaii: ou de trematode, oncos!ere, ou de acantoce!ali. Metoda McMa%ter Principiu: $lementele parazitare dispersate #ntr-o solu(ie suprasaturat de ,a.l, !loteaz pe supra!a(a camerelor de numrat, unde "or !i numarate 0i e'primate per gram de !ecale 3D2*4. Tehnica: ;n cilindrul cotat se introduce solu(ie suprasaturat de ,a.l p n la prima cota(ie a paharului McMaster, apoi cu o pens se adaug !ecalele, p n c nd ni"elul lichidului a&unge la cotatia a doua 3O 8g4. Se toarn con(inutul #ntrun mo&ar, se mo&areaz 0i se strecoar #ntr-un pahar. Se omogenizeaz bine, apoi cu o pipet se etaleaz dou camere ale lamei McMaster, ast!el #nc t s !ie umplute complet 0i s nu con(in bule de aer. 2entru !lotarea elementelor parazitare, lamele se a0eaz pe o supra!a( orizontal, unde se men(in circa < minute, dup care se trece la e!ectuarea numrrii la microscop. ,umrarea elementelor parazitare se !ace separat pentru !iecare specie, urmrind liniatura re(elei e'istente pe !iecare camer. ,umrul de ou se #nmul(e0te cu <A 0i se ob(ine ci!ra D2* 3ou per gram4. Indicaii: Aprecierea intensit(ii in!esta(iilor cu ou u0oare de nematode, oochisturi, chisturi de balantidium.

1A

Metoda Henri3%on Tehnica: Se #ntinde !rotiul din !ecale sau amprente din intestin, se usuc la temperatura camerei. Se !i'eaz !rotiul #n alcool metilic J@C timp de 8-< minute, se coloreaz cu carbol !u'in 8A-5A minute, se spal cu ap de robinet, di!eren(iere cu SD8/4 3concentra(ie A,8<-1AC4, timp de 8A-@A secunde, splare cu ap de robinet, recolorare cu "erde malachit <C, spalare, uscare. Se e'amineaz !rotiurile cu obiecti" 1AA', cu ulei de imersie. Indicaii: Identi!icarea lui .r+ptosporidium spp. .riptosporidiile sunt de 5-@ microni, ro0ii, pe !undalul "erde al !rotiului. Metoda 'lagg Tehnica: Se mo&areaz 1g !ecale cu 5 ml solu(ie !i'atoare 3alcool absolut, !ormol 5EC, glicerin, ap distilat4. Se !iltreaz #ntr-un tub de centri!ug peste care se adaug 1 ml eter etilic, se omogenizeaz. Se centri!ugheaz 1 minut la 1<AA rpm. )in sediment se adaug o pictur pe o lam peste care se adaug o pictur de solu(ie 1ugol. Indicaii: Identi!icarea !lagelatozelor digesti"e din genul *iardia. Metode lar,ohelminto%copice .depi%tarea i identificarea lar,elor/ Metoda 'aermann Tehnica: Se toarn ap u0or #nclzit #n aparatul Baermann 3sit, p lnie, !urtun, clem Morh4 peste proba de !ecale 3<-1Ag4, ast!el #nc t s acopere complet masa de !ecale. Se las #n repaus 84 ore, inter"al #n care lar"ele se desprind din masa de !ecale 0i sedimenteaz. Gecoltarea se !ace pe o lam recuper nd primele 8-5 picturi. $'aminarea se poate !ace !r a aplica lamela dac lichidul este clar sau cu lamela dac lichidul con(ine reziduri. Se e'amineaz cu obiecti" 1A'. Indicaii: strongilatoze pulmonare la rumegtoare 0i carni"ore. Metoda 4a5da $ste o metod ce se preteaz la e'amenul coproscopic, la speciile de animale ce elimin crotine% oi, capre, iepuri. Tehnica: Se a0eaz #ntr-o sticl de ceasornic 5-< crotine, peste care se adaug ap cldu( p n ce le acoper. Se las #n repaus 1<-8A minute, apoi cu o pens se #ndeprteaz cu gri&a crotinele. Se e'amineaz continutul direct din sticla de ceasornic cu obiecti" 1A'. Indicaii: ;n diagnosticul nematodozelor pulmonare 3dictiocauloz, protostrongilatoz, mulerioz4.

Examenul urinei n parazitologie

11

;n general e'amenul urinei pentru descoperirea elementelor parazitare are o importan( destul de redus. /elmintiozele cu localizri renale sunt pu(ine% schistosomiaz, ornithobilhartioz 0i diocto!imoz. )intre acestea, la noi #n (ar are importan( mai mare e'amenul pentru diocto!imoz produs de )ioctophime renale la c ine. Tehnica% Se !olosete centri!ugarea sau sedimentarea, !r a aduce "reo modi!icare urinei. )in sediment se !ac preparate ce se e'amineaz #ntre lam i lamel.

18