1.3.

Concepia actual despre citologie

Citologia este o ramur a tiinelor biologice, care studiaz
structurile funcionale i fenomenele biologice generale comune tuturor
celulelor, evideniind legile generale de desfurare a proceselor vitale la
nivelul celular i molecular de organizare. Manifestndu-se ca o tiin
integrativ, ea folosete noiuni de morfologie, biochimie molecular i
celular, fiziolgie celular i genetic molecular. Ultimul deceniu se
remarc prin intensificarea studierii nivelului molecular al proceselor
celulare. Celula este considerat ,astfel, un microcosmos, n care
structurile i funciile interacioneaz armonios, fiind determinate i reglate
genetic, nct s se realizeze o eficacitate ma!im.
"ezvoltarea biologiei celulare i moleculare se datoreaz pe de o
parte perfecionrii tehnicilor de studiere a celulei, iar pe de alt parte
progreselor teoretice #conceptuale$.
1.4.1.Tehnicile de studiere a celulei.
%unt reprezentate de tehnici de microscopie #optic sau electronic$
i de tehnici de cercetare # fizice, biochimice, debiologie celular i
molecular , etc$.
1.4.1. Tehnicile de microscopie optic i electronic

Microscopia optic folosete fotonii pentru realizarea
imaginilor, asigurnd mriri de &'((-)((( de ori #n mod obinuit de &*((
ori$, cu o putere de rezoluie de (,+ micrometrii #,m$.#-ig.&.&$

&
Fig.1.1 Formarea imaginii n microscopul optic
&.%ursa de lumin. +."ispozitiv de uniformizare i dozare a
luminii.).Condensor.*./reparat.'.0entil obictiv.1.2magine format n obiectiv.3.0entil
ocular.4.2magine final.

Microscopia n contrast de faz, permite e!aminarea celulelor vii.
Utilizeaz5 microscoape cu interferen, pentru aprecierea cantitativ a
masei unor componente tisulare. - microscoape cu interferen
difereniat, pentru studierea suprafeei celulelor.

Microscopia de fluorescen evideniaz moleculele cu
fluorescen natural # vitamina 6, catecolaminele$ sau fluorescena
indus. %e folosete n imunohistochimie pentru detectarea reaciei
antigen-anticorp.
Microscopia cu ultraviolete folosete lumina ultraviolet pentru
detectarea unor amino acizi sau a acizilor nucleici.
Microscopia cu lumin polarizat pentru studierea formaiunilor
cristaline.

Microscopul confocal
/ermite obinerea de imagini tridimensionale ale structurilor din
preparatele histologice.
Principiul de funcionare este asemntor cu cel al microscopului de
fluorescen. Sursa de lumin este reprezentat de un laser a crei raz trece printr-
o diafragm cu deschidere punctiform, dup care este reflectat de o oglind
mobil spre lentila obiectiv. Preparatul este situat la nivelul distanei focale a
+
obiectivului. In urma aciunii razei laser asupra preparatului, acesta emite un
fascicul de lumin (eventual fluorescent) care este colectat de lentila obiectiv i
diri!at spre diafragma punctiform a detectorului , situat confocal ( "n focarul
lentilei obiectiv, opus focarului "n care este situat preparatul), rezult#nd o imagine
final, care este captat de un detector (similar ocularului).
$azele luminoase emise de formaiuni situate "n alte planuri nu vor fi captate
de detector, "nc#t se obine o imagine foarte%curat%, neestompat de imagini ale
obiectelor situate pro&imal sau distal fa de planul focal. Prin deplasarea "n plan
vertical a focarului lentilei obiectiv, se pot obine imagini ale unor planuri succesive,
ca profunzime, realiz#nd %seciuni optice%, fr a fi nevoie de o resecionare a
preparatului. Imaginile planurilor succesive sunt stocate "n memoria unui computer,
care le %ansambleaz% obin#nd o imagine tridimensional a preparatului e&aminat.
Microscopul confocal permite e!aminatorului s obin 7tomografia7
unei structuri histologice, fiind folosit pentru studirea citoscheletului, a
dispunerii cromozomilor n nucleu,etc. "ac este dotat cu lumin
flurescent se pot obine imagini confocale fluorescente. Microscopul
electronic se bazeaz pe utilizarea flu!urilor de electroni
pentru realizarea imaginilor, permind obinerea unor
grosismente teoretice mai puternice de &(.((( de ori
dect n microscopia optic. %e a8unge la o putere de
rezoluie egal cu (,& nanometri #nm$.9!ist dou tipuri
principale de microscoape electronice5 - microscopul
electronic de transmisie i microscopul electronic de
balea8 #scanning$.#-ig.&.+$
Fig.1.2 Formarea imaginii n microscopul electronic
&-Catod. +-6nod. )-0entila #bobina$condensator.*-/reparatul. '-0entila #bobina$
obiectiv. 1-2maginea primar. 3-0entila #bobina$ de proiecie. 4-2magine final.
Microscopul electronic de transmisie #:ransmission electron
microscope - :9M$ poate fi5 - convenional #C:9M$, cnd diferena de
potenial a8unge pn la &((.((( voli. sau - de nalt volta8 #;<9M$, cnd
diferena de potenial a8unga la 4((.((( voli.
Componentele eseniale ale unui microscop electronic de
transmisie sunt5
)

Catodul sau sursa de electroni, reprezentat de un filament de
tungsten nclzit.
Anodul, care relizeaz diferena de potenial.

Un sistem de electromagnei, care acioneaz ca nite lentile
condensator, lentile-obiectiv i lentile de proiecie.

Un suport pentru preparat sau portobiect, reprezentat de o gril
metalic fin pe care se fi!eaz seciunea de esut, inclus n mas
plastic.

Un ecran pe care se capteaz imaginea.

Un dispozitiv de fotografiere a imaginii.
/uterea de rezoluie este de + 6ngstromi#$, n practic a8ungndu-
se la &,+ nanometri.
Fig.1.3 Formarea imaginii la microscopul de !alea" #scanning$
&-Catod. +-6nod. )-0entil #bobin$ condensator. *-=obin de scanare. '-/reparat. '>-"etector de
electroni. 1-6mplificator electronic. 3-9cran de proiecie.4-2magine final.
Ca fi%atori se folosesc glutaralaldehida, pentru constiutieni proteici
i tetrao&idul de osmiu pentru lipide i fosfolipide.
%e realizeaz seciuni de ordinul nanometrilor cu a8utorul unor
ultramicrotoame, nzestrate cu cuite de diamant.
*
Ultraseciunile sunt incluse n mase plastice i ntise pe grile de
cupru. /entru realizarea contrastului ntre diferite ultrastructuri se folosesc
substane precum citratul de plumb i acetatul de uranil.
0a e!aminare se observ c structurile cu densitate mare
disperseaz #mprtie$ electronii, aprnd de culoare nchis, n timp ce
structurile cu densitate mic, care permit trecerea electronilor far a-i
devia apar clare.
?n cazul microscoapelor electronice de nalt &olta" ( HVEM $'
diferena de potenial atinge un milion de voli. 9lectronii pot ptrunde prin
celule ntregi sau preparate de civa microni #cca. + microni$. %e obine o
imagine detaliat a organizrii tridimensionale, permindu-se
vizualizarea te!turii celulare interne i a unor detalii de structur, cum arfi
de e!emplu elemntele citoscheletului.
Microscopul electronic de scanning (Scanning electron
microscope ' S() ) se carcterizeaz prin faptul c electronii nu trec prin
preparatul studiat, ci mtur #terg$ suprafaa acestuia, nct se va obine
o imagine tridimensional a accidentelor de suprafa. /uterea de
rezoluie este de cca. &(( 6ngstromi.
*#nd electronii folosii de +() sau S() bombardeaz preparatul se produc
radiaii , cu lungimi de und caracteristice elementelor lovite de electroni. Prin
analiza acestor raze , cu aparate adecvate se pot obine estimri calitative i
cantitative foarte e&acte asupra elementelor cu numrul atomic mai mare de -..

1.4.2.Tehnici fi(ice .!iochimice'de !iologie celular i
molecular
Tehnici fi(ice)
- /racionarea celulei prin centrifugare difereniat permite obinerea
n stare pur a unor componente celulare, precum comple!ul @olgi,
aparatul mitotic, ribozomi, etc.
0 contribuie deosebit la perfecionare acestei tehnici a adus-o 1.(m.Palade
care a pus la punct centrifugarea "n gel de sucroz.
- *riofracturarea permite despicarea membranelor celulare
ngheate, la nivelul planului median al bistratului lipidic.
- 2utoradiografia localizeaz materialul radioactiv din esut.
- 3istoradiografia realizeaz o microradiografie cu raze A a unui
preparat histologic.
- 4ifracia razelor ,, care a permis descifrarea structurii spaiale a
proteinelor i a acizilor nucleici.
'
- 4ifracia i dispersia de neutroni, prin care s-a descifrat
organizarea molecular a cromatinei.
- $ezonana magnetic nuclear de "nalt rezoluie, ce se utilizeaz
pentru studierea interaciunilor moleculare n membranele biologice.
- $ezonana magnetic "n impulsuri, folosit la studiul permeabilitii
membranelor pentru ap i ioni.
- $ezonana electronic de spin, ce folosete ca marBeri specifici
substane cu electroni impari care se ataeaz i evideniaz molecule de
6"C, de proteine,etc.
- Spectrofluorometria,ce permite studierea vscozitii
membranelor, difuziunea, rotaia proteinelor.
Tehnici !iochimice
?n biologia molecular se utilizeaz5
(lectroforeza "n gel de poliacrilamid, pentru studiiul proteinelor i
acizilor nucleici.
- )arcrile bazate pe fotoafinitate a unor pri din moleculelele
integrate n structuri celulare.
- $econstituiri de structuri i funcii celulare din componentele
purificate.
- Imunocitochimia evideniaz reaciile dintre antigen i anticorp.
Tehnici comple%e de !iologie celular i molecular
%unt reprezentate de5
- +ehnica 245-ului recombinat.
- Producerea de anticorpi monoclonali cu a8utorul hibridoamelor, ce
a permis descifrarea mecanismelor care regleaz e!primarea genei.
- Sinteza artificial a genelor.
- )anipulri de gene, etc.
1.*. +rogrese conceptuale.
/rogresele teoretice sau conceptuale au permis mbogirea,
dezvoltarea i aprofundarea cunotiinelor de biologie celular i
molecular. %unt reprezentate de5
- 2naliza i sinteza informaiilor obinute de morfologia
celular, biochimia i biofizica celular, fiziologia celular, Dgenetica
molecular, imunologia celular i molecular, virusologie,etc. ?n acest
concept se manifest dou tendine opuse5 una de acentuare a sintezei i
alta de e!tindere a sferei de sintez.
- )olecularizarea informaiilor , care const n descifrarea
structurilor i funciilor pn la nivel molecular. 6cest fapt a dus la
schimbarea denumirii acestei ramuri a tiinelor biologice din 7citologie
general7 n 7biologie celular7 i apoi n 7biologie celular i
molecular7.
1
- Integrarea informaiilor obinute prin toate metodele i de la
toate nivelele ntr-un tot unitar, nct biologia celular i molecular
studiaz n mod comple! i complet aspectele morfofuncionale ale
celululelor, observabile la microscopul optic, ultrastructurile relevate de
microscopul electronic, organizarea i fiziologia molecular, realiznd o
imagine e!haustiv a nivelului celular de organizare a materiei vii.
2. C,-.-/ C/ 010T,M 213-341C
/rin sistem !iologic se nelege un ansamblu de elemente
#componente$ interconectate ntr-o formaiune comple!, relativ stabil,
formaiune care se comport ca un ntreg, cu proprieti i funcii distincte
cantitativ i calitativ de proprietile elementelor componente.
9!ist sisteme lipsite de via #abiotice$, precum particulele
subatomice, atomii, moleculele i sisteme dotate cu via # biotice $cum ar
fi celulele, esuturile, organele, organismul, populaia, biocenoza i
biosfera.
Celula (cellula) este primul sistem biologic care manifest cea mai
important caracteristic a materiei vii - capacitatea de auto reproducere.
-ormele de 7via molecular7, identificate pn n prezent, ca 7prionii7
#microorganisme patogene, formate din particule proteice, far acizi
nucleici$ i virusurile #microorganisme ce conin acizi nucleici i proteine$
sunt capabile s se reproduc numai n interiorul celulei.
Celula, ca sistem, prezint urmtoarele caracteristici5
D9ste un sistem deschis, pentru c are n permanen schimburi
de energie i substan cu mediul e!tracelular.
D 6re un caracter istoric, aprnd la un anumit moment al evuluiei
materiei vii i putnd s dispar, atunci cnd materia vie i va produce o
alt form mai eficient de organizare dect celula.
D 6re caracter informaional, deoarece recepioneaz, acumuleaz,
prelucreaz i transmite informaii cu a8utorul codului genetic.
D /rezint trei categorii de programe, legate de capacitile sale
structurale i funcionale5 a- programul 7 pentru sine7, ce asigur
autoconservarea celulei # de e!pl. n culturile de celule$. b- programe ale
sistemelor componente, ca de e!emplu programele organitelor sau ale
comple!elor moleculare. i c- programe superioare care asigur e!istena
sistemelor superioare # esut, organ, organism$.
D 9chilibrul dinamic, ce se manifest printr-o 7pendulare7 continu,
fa de o stare morfofuncional optim, stabil.
D 6utoreglarea sau 7feed bacB7-ul, prin care i controleaz
procesele interne, n funcie de relaiile cu mediul prin mecanisme de tip
cibernetic.
3
D ;eterogenitatea intern este nsuirea de a fi alctuit din
elemente componente mai mult sau mai puin diferite # de e!pl.
mitocondrii, ribozomi, microfilamente, microtubului,etc.$
D 2ntegralitatea, prin care celula ca sistem, nu se reduce la suma
nsuirilor elementelor componente, ci prezint nsuiri noi #structurale i
funcionale$ pe care nu le au aceste elemente considerate izolat. 6ceast
nuire permite desfurarea funciilor biologice fundamentale5
metabolismul, reproducerea, adaptarea, meninerea strii de stabilitatea
difereniat,etc.
/e baza acestor caracteristici, concepia actual despre celul o
definete ca fiind5 unitatea elementar a lumii &ii' produs al e&oluiei'
cu structur comple%' n relaie de autonomie i echili!ru dinamic
cu mediul ncon"urtor' a&5nd ca proprieti eseniale meta!olismul'
autoreproducerea' creterea i de(&oltarea.
2.1. /rhetipurile celulare
9!ist dou arhetipuri #arhetip E model primar, dup @.9./alade$
celulare5 procariotele #procariot Eprenucleat, fr nucleu distinct$ i
eucariotele #euBariotE cu nucleu distinct$.
2.1.1. +rocariotele
%unt reprezentate, n principal, de bacterii i de algele albastre verzi
#denumite i cianobacterii$.
9le sunt mai mici #&-&( ,m$ dect celulele eucariote i lipsite de
membrane intracelulare.
Frganitele celulare sunt puine # numai ribozomi$ sau absente.
Cucleul nu apare distinct, genomul #totalitatea genelor$ nefiind
separat de citoplasm.
/rezint un cromozom unic, dispus n citoplasm i reprezentat de
un 6C" circular necon8ugat cu proteine. 6GC-ul i proteinele sunt
sintetizate n acelai compartiment, n citoplasm.
Cu au aparat mitotic, deoarece se nmulesc prin sciziparitate.
?i realizeaz locomoia prin flageli simpli.
6u metabolism aerob sau anaerob.
%unt delimitate de o membran plasmatic, ce trimite prelungiri
endocelulare, denumite mezozomi, dublat la e!terior de un perete
celular.
Cu prezint citoschelet, nu au cureni citoplasmatici, iar endocitoza
i e!ocitoza sunt absente.
"e obicei sunt monocelulare.
2.1.2.,ucariotele
%unt reprezentate de protiste, fungi, plante i animale.
6u dimesiuni mai mari #'-&(( ,m$ dect procariotele.
4
/rezint un sistem complicat de membrane intracelulare, care
delimiteaz unele componenete intracelulare #nucleul$ i unele organite
#mitocondriile, reticulul endoplasmic,comple!ul @olgi,etc$.
6u un nucleu distinct, n care este situat genomul, ce cuprinde mai
muli cromozomi. Molecula de 6C" este foarte lung i con8ugat cu
proteine.
6GC-ul este sintetizat i procesat n nucleu, n timp ce proteinele
sunt sintetizate n citoplasm.
6u citoschelet compus din proteine filamentoase, cureni
citoplasmatici i desfoar procese de endocitoz i e!ocitoz.
/rezint aparat mitotic.%e divid prin mitoz i meioz.
2.2 Morfologia general a celulelor eucariote
!imensiunile celulelor eucariote sunt e!trem de variate. 9le se
e!prim n urmtoarele uniti de msur5 micrometrul, nanometrul i
angstromul.
.nitile de msur folosite n morfologia microscopic
"enumire %imbol <aloare
Micrometrul # E
micronul $
,m # , $ & ,m E(,((& mm E &(
H1
m
Canometrul nm & nm E (,((& ,m E &(
-I
m
6ngstrom 6 &6E(.&nmE&(
-*
umE&(
-&(
m
0imita practic de rezoluie a ochiului uman este de cca. (,& mm, a
microscopului optic de (,+,m, iar a celui electronic de + angstromi# $.
/entru fiecare categorie de celule, dimensiunile sunt relati&
constante, indiferent de specie sau mrimea organului. "iferenele de
greutate a aceluiai organ la specii diferite sunt generate de numrul de
celule pe care l conin i nu de volumul celulelor.
4e e&emplu, nefrocitele i celulele musculare cardiace au dimensiuni
apropiate la hominide, ecvine i canide.

-imitele de re(oluie in morfologie
6. Cu ochiul
liber
(,& milimetri #mm$ Fvocitul de pasre
Fvocitul uman
6moeba
=. Cu
microscopul
optic
(,+ micrometri sau
microni
#J sau Jm$
Celule,
;ematii,
Ceuroni
Cuclei
I
Mitocondrii
=acterii, etc
C. cu
microscopul
electronic
+ 6ngstromi #6$
sau
(,+ nanometri #nm$
Gibozomi,
<irusuri,
Frganite celulaere
Macromolecule
molecule
6 Prin rezoluie se "nelege distana minim dintre dou puncte "n care acestea pot fi percepute ca
imagini seperate
Fig.2.1.7iagrama unitilor de lungime
4imensiunile medii ale diametrului celulelor se "ncadreaz "ntre -7-87 9m,
dar "n organismul animalelor e&ist i celule mai mici, precum: neuronii din stratul
molecular al scoarei cerebrale ( de cca.;-; 9m), eritrocitele (<-= 9m), precum i
celule ce a!ung la dimesiuni foarte mari, un e&emplu constituindu-l ovulul ce atinge
un diametru de -<7-.77 9m la mamifere, 8,< cm la psri i -7 cm la stru. 5euronii
motori din coarnele ventrale ale mduvei spinrii au un corp ce atinge un diametru
de .77 9m, iar dac se iau "n considerare i prelungirile a!ung la o lungime de ---,<
m sau mai mult, "n funcie de talia animalului. /ibra muscular striat are un
diametru de ordinul micronilor, dar lungimea este foarte variat, de la - la -. cm.
Volumul celulelor variaz n limite foarte largi de la +(( la&'(((
micrometri cubi #,m
3
$, menndu-se constant pentru un anumit tip de
celul, independent de mrimea organului, aspect cunoscut sub
denumirea de 7legea constanei volumului7.
&(
<rsta i funcia determin variaii n mrimea celulelor. %e observ
o reducere a volumului celular n cursul embriogenezei timpurii, n cursul
mbtrnirii i o cretere volumetric n timpul dezvoltrii postnatale. %e
stabilete un raport nucleoKcitoplasmatic optim, un raport al suprafeei
celulei fa de volum i un raport ntre metabolism i volumul celulei.
Masa #greutatea$ unei celule este de apro!imativ &(
-&+
g, iar cea a
unui ovocit uman de &(
-4
g.
Fig.2.2. Forma celulelor
&-Fvula. +-;ematie de mamifer. )-9ritrocit de pasre. *-Ceutrofil de mamifer. '-
%permatozoid. 1-Celule poliedrice.3-Celule pavimentoase. 4-Celule cubice. I-0eiocit. &(-Ceuron
piramidal. &&-Ceuron piriform. &+-Celul mezenchimal. &)--ibroblast.&*-Melanocit,&'-6dipocit alb.
&1-;istiocit. &3-Celul prismatic cu platou striat. &4-Celul caliciform.
"orma celulelor, inial sferic se modific n cursul diferenierii i
maturrii celulelor. -orma celulelor este controlat att de factori e!terni
ca presiunea i vscozitatea mediului, ct i de factori interni ca
activitatea funcional, vrsta, vscozitatea citoplasmei, structura intern
i caracteristicile suprafeei.#-ig.+.+ $
-orma celulelor se adapteaz la funcie, respectndu-se o lege
general a biologiei, conform creia se obine ma!imum de randament
funcional cu minimum de cheltuieli materiale i energetice.6stfel,celulele
contractile sunt fuziforme sau cilindrice, iar celulele specializate n
conductibilitate prezint numeroase prelungiri.
#umrul celulelor este e!trem de mare, a8ungnd la ordinul de
milioane de miliarde #18
14
$.
*elulele sanguine reprezint populaia cea mai numeroas, reprezentat de
mai multe zeci de miliarde. 5umrul hepatocitelor i al neuronilor este de circa -77
de miliarde, iar cel al nevrogliilor este de apro&imativ -7 ori mai mare dec#t numrul
neuronilor.
&&
!urata vieii celulei sau ciclul celular reprezint intervalul de la
apariia unei celule pn i termin propria sa diviziune.
>ariaz de la -7-.7 minute p#n la -7
?
minute. *elulele bacteriene triesc
c#teva zeci de minute, celulele epiteliale --. zile, hematiile -.= zile, iar unele celule
musculare i nervoase toat viaa individului.
@a om, "n fiecare secund au loc peste ; milioane de diviziuni celulare, "ntr-o
zi au loc cca. 8<7 bilioane diviziuni, iar "ntr-un an -7
-;
diviziuni, numr egal practic cu
numrul total al celulelor ce alctuiesc corpul omului adult.
2.3. Compartimentarea celulelor eucariote
Celula eucariot prezint trei componenete principale5 membrana,
nucleul i citoplasma.#-ig.+.)$
Mem!rana poate fi situtat la periferie, realiznd pe de o parte
delimitarea celulei de mediul e!tracelular, sau poate fi dispus n
citoplasm, unde formeaz un sistem de membrane intracelulare cu o
suprafa deosebit de activ biologic, de &(-+( ori mai mare dect cea a
membranei periferice.
Fig.2.3. 0chema unei celule eucariote
ideale
&-Membrana celular.+-Cucleul. )-
Citoplasm. *-0izozom primar. '-
/oliribozomi liberi. 1-Geticul endoplasmic
rugos. 3-Geticul endoplasmic neted. 4-
Comple! @olgi.
I-Microfilamente. &(-Microtubuli. &&-
Centrioli. &+-Corpuscul bazal. &)-
Microvili. &*-Cil. &'- -agozom. &1-
/ero!izom. &3-Caveol acoperit. &I-
Cucleoli. +(-eterocromatin. +&-
Cistern perinuclear. ++-/or
nuclear. +)-Mitocondrie. +*-Corp rezidual.
+'-@ranule de secreie. +1-/ictur de
lipide. +3-@ranule de glicogen. +4-
/seudopode.
Membranele intracelulare, endomembranele sau citomembranele
difer ntre ele prin structur, compoziie chimic i funcie.
9le mpart celula n dou compartimente5 compartimentul
matriceal sau plasmatic 7/7 i compartimentul intracisternal sau 797.
9!ist i un compartiment secundar sau de tip 7C7, reprezentat de
matricea mitocondrial i a cloroplastelor.
:otodat endomembranele delimiteaz nucleul i unele organite
celulare #lizozomii, reticulul endoplasmic,comple!ul @olgi$. 9!ist i
organite nedelimitate de membrane #ribozomii,centriolii, corpusculii
bazali, microfilamentele, filamentele intermediare i microtubulii$.
&+
&)